一種小口徑原位組織工程血管及構建方法

2023-06-14 19:40:56

一種小口徑原位組織工程血管及構建方法
【專利摘要】本發明公開了一種小口徑原位組織工程血管及構建方法，方法為：(1)將吡啶、對硝基苯基氯甲酸酯加入聚己內酯二氯甲烷溶液中，反應，沉澱，乾燥；(2)將聚乙二醇二胺二氯甲烷溶液加入到步驟(1)獲得的沉澱物二氯甲烷溶液中，反應，沉澱，乾燥後得到聚己內酯聚乙二醇二胺嵌段共聚物；(3)採用靜電紡絲技術，以聚己內酯聚乙二醇二胺嵌段共聚物與聚三亞基碳酸酯的混合溶液，製備管型支架材料；(4)將管型支架材料浸入含EDC/NHS的肝素溶液，進行肝素化修飾，得到一種小口徑原位組織工程血管。本發明的原位組織工程血管，具有與天然脈管相似的力學性能及良好的血液相容性；在體內逐步降解的同時允許自體細胞的長入；成品易於保存。
【專利說明】一種小口徑原位組織工程血管及構建方法【技術領域】
[0001]本發明屬於生物材料與組織工程領域，涉及一種小口徑原位組織工程血管及構建方法。
【背景技術】
[0002]心血管疾病是威脅人類健康的嚴重疾病。心血管疾病的治療方法主要包括藥物治療、介入治療和外科手術治療三大類。當人體局部血管發生嚴重病變，不能保證血液的正常供應且不適於藥物治療和介入治療時，則需進行外科血管移植治療。在軍事醫學中，血管戰創傷，尤其是四肢血管的戰創傷是部隊戰時和平時的常見傷情，受傷原因主要包括炸傷、槍傷、機器致傷、車禍傷及刀傷等，受傷類型主要有血管完全或部分斷裂、創傷性動脈瘤、創傷性動靜脈瘻等，因此也常常需要外科血管移植治療。
[0003]目前，臨床上應用的血管移植物主要是自體血管，例如在冠脈搭橋術中用大隱靜脈或胸廓內動脈替代冠狀動脈。雖然自體血管手術效果較好，但常常因來源有限而面臨無血管可用的問題。因此，人們不得不把目光集中到人工血管替代物上。目前臨床上可得到的人工血管替代物多限於可膨性聚四氟乙烯(e-PTFE)或聚對苯二甲酸乙二醇酯(PET)JP滌綸製成的人工合成血管。這些血管替代物用於中等直徑(6-10mm，ID)和大直徑的(>10mm, ID)血管是比較成功的，但當用於小口徑血管(< 6mm，ID)，易造成血栓形成和內膜增生，其有效性受到嚴重限制，遠不能滿足臨床需要。
[0004]在體外模擬構 建機體組織或器官，為器官缺損者提供移植替代物一直是人類追求的偉大理想之一，人們把這門科學稱為「組織工程」。組織工程血管(TEBVs)是指模擬正常血管壁的細胞和細胞外基質(ECM)成分，製備、重建或再生血管。TEBVs的構建方法多種多樣，但歸納起來，主要是兩種策略，即「有支架構建法」和「無支架構建法」。有支架構建法是將種子細胞種植在管型支架材料上，在體外仿生生物反應器中得到功能性的活組織，然後植入體內。有支架構建法不但工藝複雜，成品難以保存，而且由於受到種子細胞來源、支架材料等多種因素的限制，真正實現臨床應用還有很長的路要走。無支架構建法的特點是不採用外來支架材料，利用「宿主」自身細胞和其產生的細胞外基質，在仿生生物反應器中直接構建TEBVs。這種TEBVs由於不使用外源性細胞和支架材料，植入後不產生免疫排斥反應，因而有望於應用臨床，但其製備過程更加複雜，整個生產過程需要4個月以上，不利於實現產業化和商品化。
[0005]隨著生物可降解材料和組織工程支架製備工藝的不斷發展，人們提出了原位組織工程血管的概念。但尚未有原位組織工程血管及製備方法報導。

【發明內容】

[0006]本發明的目的是克服現有技術的不足，提供一種小口徑原位組織工程血管。
[0007]本發明的第二個目的是提供一種小口徑原位組織工程血管的及構建方法。
[0008]本發明的技術方案概述如下:[0009]一種小口徑原位組織工程血管的構建方法，包括如下步驟:
[0010](I)在O~4°C，攪拌條件下，將吡啶、對硝基苯基氯甲酸酯加入質量體積濃度為8%~10%的聚己內酯二氯甲烷溶液中，室溫下反應2~4h，反應混合物放入O~4°C乙醚中沉澱，沉澱物真空乾燥；所述吡啶、對硝基苯基氯甲酸酯、聚己內酯的質量比為1:1~
1.5: 3000，所述聚己內酯的分子量為40,000~100,000 ;
[0011](2)以二氯甲烷為溶劑，分別配製質量體積濃度為50%~70%的聚乙二醇二胺溶液和質量體積濃度為6%~8%的步驟(1)獲得的沉澱物溶液，在攪拌條件下，按體積比為
1: 20~30的比例，將聚乙二醇二胺溶液一滴滴地加入到沉澱物溶液中，室溫下反應12~24h，將反應混合物加入到O~4°C的乙醇中沉澱，真空乾燥後得到聚己內酯聚乙二醇二胺嵌段共聚物；所述聚乙二醇二胺的分子量為2000~6000 ；
[0012](3)將外徑為2~6mm的不鏽鋼管安裝至靜電紡絲旋轉接收裝置上，然後以體積比為3: I的二氯甲烷、N-二甲基甲酚胺的混合溶液為溶劑，以質量比為I~3:1~3聚己內酯聚乙二醇二胺嵌段共聚物與聚三亞基碳酸酯的混合物為溶質，配製成質量體積濃度為8%~10%的混合溶液，攪拌均勻，採用靜電紡絲技術製備管型支架材料；
[0013](4)以0.05mol/L, pH = 5.6的脂肪醇聚氧乙烯醚磺基琥珀酸酯二鈉鹽緩衝液為溶劑，配製質量體積濃度為0.4%~0.6%的肝素溶液；在肝素溶液中加入EDC和NHS，37°C下，活化肝素的羥基團lOmin，浸入管型支架材料，於室溫，60~80r/min攪拌條件下反應2~6h ;用0.01mol/L PBS溶液浸泡肝素化的管型支架材料2~4h，其間換所述PBS溶液3-6次，再用蒸餾水浸泡2~4h，其間換蒸餾水3-6次；真空乾燥，消毒滅菌後得到一種小口徑原位組織工程血管，所述EDC與肝素的質量比為1:1~2，EDC與NHS質量比為I~
2: 1，所述EDC為1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亞胺的縮寫，NHS為N-羥基琥珀醯亞胺的縮寫。
[0014]上述方法構建的一種小口徑原位組織工程血管。
[0015]本發明的優點:
[0016]本發明首次嘗試了以聚己內酯-聚乙二醇嵌段共聚物、PTMC為生物可降解材料構建小口徑原位組織工程血管，主要具有以下4方面的優點:(1)具有與天然脈管相似的力學性能，其斷裂拉伸強度為3.0~7.0Mpa，斷裂伸長率為20~40%，爆破強度為2000~3000mmHg，縫合強度為1.5~2.5N ; (2)具有良好的血液相容性，溶血率在0.38%~0.60%範圍內，均值為0.51%，凝血酶原時間、活化的部分凝血活酶時間分別為89.77±6.54s、15.74±0.86s ;(3)能通過細胞介導的材料表面侵蝕作用發生逐步的降解，可以持續刺激巨噬細胞積聚，提供適當的慢性炎症反應環境，有利於自體幹細胞和祖細胞在支架材料表面及內部的黏附和生長，體內植入3個月，自體細胞侵蝕約佔管壁厚度的25% ；(4)成品易於保存，適合工業化生產。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0017]圖1為聚己內酯-聚乙二醇嵌段共聚物/聚三亞基碳酸酯管型支架材料大體觀。
[0018]圖2為掃描電鏡顯示聚己內酯-聚乙二醇嵌段共聚物/聚三亞基碳酸酯靜電紡絲片狀材料表面形 態特徵。
[0019]圖3為掃描電鏡顯示聚己內酯-聚乙二醇嵌段共聚物/聚三亞基碳酸酯靜電紡絲管型支架材料橫斷面的形態特徵。
[0020]圖4為甲苯胺藍染色顯示肝素化後的聚己內酯-聚乙二醇嵌段共聚物/聚三亞基碳酸酯靜電紡絲片狀材料。
[0021]圖5肝素-甲苯胺藍絡合物紫外-可見光吸收光譜，A:甲苯胺藍與自由肝素結合；B:肝素化修飾聚己內酯-聚乙二醇嵌段共聚物/聚三亞基碳酸酯片狀材料室溫下浸入5mL甲苯胺藍水溶液(0.lmol/L HCl，2g/L NaCl，0.4g/L甲苯胺藍)4h。
[0022]圖6為雷射共聚焦顯微鏡顯示聚己內酯-聚乙二醇嵌段共聚物/聚三亞基碳酸酯複合纖維材料表面內皮細胞生長情況。
[0023]圖7為蘇木素-伊紅染色法顯示小口徑原位組織工程血管(實施例1製備)植入小鼠皮下組織I個月組織形態學變化。
[0024]圖8為免疫螢光染色顯示小口徑原位組織工程血管(實施例1製備)植入小鼠皮下組織I個月，材料降解及周圍⑶68+巨噬細胞分布情況。
[0025]圖9為蘇木素-伊紅染色法染色顯示兩種管型材料植入小鼠皮下組織I個月，內腔組織形態學變化，A:聚己內酯管型材料；B:小口徑原位組織工程血管(實施例1製備)。
[0026]圖10為免疫螢光染色顯示小口徑原位組織工程血管(實施例1製備)植入小鼠皮下組織I個月，內腔⑶105+間充質幹細胞及⑶11+炎症細胞分布情況。 [0027]圖11為蘇木素-伊紅染色法染色顯示小口徑原位組織工程血管(實施例1製備)植入小鼠皮下組織3個月組織形態學變化。
【具體實施方式】
[0028]下面的實施例是為了使本領域的技術人員能夠更好地理解本發明，但並不對本發明作任何限制。
[0029]本發明所涉及的EDC為1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)_碳化二亞胺的縮寫，NHS為N-羥基琥珀醯亞胺的縮寫。PCL-PEG/PTMC是聚己內酯-聚乙二醇二胺嵌段共聚物/聚三亞基碳酸酯的縮寫
[0030]實施例1
[0031]一種小口徑原位組織工程血管的構建方法，包括如下步驟:
[0032](I)在2°C，攪拌條件下，將吡啶、對硝基苯基氯甲酸酯加入濃度為9% (w/v)的聚己內酯二氯甲烷溶液中，室溫下反應3h，反應混合物放入2°C乙醚中沉澱，沉澱物真空乾燥；所述吡啶、對硝基苯基氯甲酸酯、聚己內酯的質量比為1: 1.2: 3000，所述聚己內酯的分子量為70，000 ；
[0033](2)以二氯甲烷為溶劑，分別配製濃度為60% (w/v)的聚乙二醇二胺溶液和濃度為7% (w/v)的步驟⑴獲得的沉澱物溶液，在攪拌條件下，按體積比為1: 25的比例，將聚乙二醇二胺溶液一滴滴地加入到沉澱物溶液中，室溫下反應18h，將反應混合物加入到2°C的乙醇中沉澱，真空乾燥後得到聚己內酯聚乙二醇二胺嵌段共聚物；所述聚乙二醇二胺的分子量為4000 ；
[0034](3)將外徑為4mm的不鏽鋼管安裝至靜電紡絲旋轉接收裝置上，然後以體積比為
3: I的二氯甲烷、N-二甲基甲酚胺的混合溶液為溶劑，以質量比為1:1聚己內酯聚乙二醇二胺嵌段共聚物與聚三亞基碳酸酯的混合物為溶質，配製成濃度為9% (w/v)的混合溶液，攪拌均勻，採用靜電紡絲技術製備管型支架材料，具體方法為:裝入帶有直徑18G點膠針頭的20ml注射器中，將帶有2mm外徑的不鏽鋼管安裝至旋轉接收裝置上，進行靜電紡絲，紡絲條件為:轉速500rpm，電壓25kV，針頭噴嘴於收集裝置距離20cm。微量注射器速度3ml/h，溶液體積2ml。電噴後從不鏽鋼管上小心取下聚己內酯_聚乙二醇嵌段共聚物/聚三亞基碳酸酯管型支架材料，真空乾燥24h，去除殘留的有機溶劑和水分，密封包裝，4°C保存待用；
[0035](4)以0.05mol/L,pH = 5.6的脂肪醇聚氧乙烯醚磺基琥珀酸酯二鈉鹽緩衝液為溶劑，配製濃度為0.5% (w/v)的肝素溶液；在肝素溶液中加入EDC和NHS, 37°C下,活化肝素的羥基團IOmin,浸入管型支架材料,於室溫，70r/min攪拌條件下反應4h ;用0.01mol/LPBS溶液浸泡肝素化的管型支架材料3h，其間換所述PBS溶液4次，再用蒸餾水浸泡3h，其間換蒸餾水4次；真空乾燥，消毒滅菌後得到一種小口徑原位組織工程血管，所述EDC與肝素的質量比分別為1: 1.5，EDC與NHS質量比為1.5: I。
[0036]實施例2
[0037]一種小口徑原位組織工程血管的構建方法，包括如下步驟:
[0038](I)在4°C，攪拌條件下，將吡啶、對硝基苯基氯甲酸酯加入濃度為8% (w/v)的聚己內酯二氯甲烷溶液中，室溫下反應4h，反應混合物放入4°C乙醚中沉澱，沉澱物真空乾燥；所述吡啶、對硝基苯基氯甲酸酯、聚己內酯的質量比為1:1: 3000，所述聚己內酯的分子量為40，000 ；
[0039](2)以二氯甲烷為溶劑，分別配製濃度為50% (w/v)的聚乙二醇二胺溶液和濃度為6% (w/v)的步驟⑴獲得的沉澱物溶液，在攪拌條件下，按體積比為1: 20的比例，將聚乙二醇二胺溶液一滴 滴地加入到沉澱物溶液中，室溫下反應12h，將反應混合物加入到4°C的乙醇中沉澱，真空乾燥後得到聚己內酯聚乙二醇二胺嵌段共聚物；所述聚乙二醇二胺的分子量為2000 ；
[0040](3)將外徑為2mm的不鏽鋼管安裝至靜電紡絲旋轉接收裝置上，然後以體積比為
3: I的二氯甲烷、N-二甲基甲酚胺的混合溶液為溶劑，以質量比為2: 3聚己內酯聚乙二醇二胺嵌段共聚物與聚三亞基碳酸酯的混合物為溶質，配製成濃度為8% (w/v)的混合溶液，攪拌均勻，採用靜電紡絲技術製備管型支架材料；真空乾燥24h，去除殘留的有機溶劑和水分，密封包裝，4°C保存待用；
[0041](4)以0.05mol/L, pH = 5.6的脂肪醇聚氧乙烯醚磺基琥珀酸酯二鈉鹽緩衝液為溶劑，配製濃度為0.4% (w/v)的肝素溶液；在肝素溶液中加入EDC和NHS，37°C下，活化肝素的羥基團IOmin,浸入管型支架材料,於室溫，60r/min攪拌條件下反應6h ;用0.01mol/LPBS溶液浸泡肝素化的管型支架材料2h，其間換所述PBS溶液3次，再用蒸餾水浸泡2h，其間換蒸餾水3次；真空乾燥，消毒滅菌後得到一種小口徑原位組織工程血管，所述EDC與肝素的質量比分別為1: 1，EDC與NHS質量比為1:1。
[0042]實施例3
[0043]一種小口徑原位組織工程血管的構建方法，包括如下步驟:
[0044](I)在0°C，攪拌條件下，將吡啶、對硝基苯基氯甲酸酯加入濃度為10% (w/v)的聚己內酯二氯甲烷溶液中，室溫下反應2h，反應混合物放入0°C乙醚中沉澱，沉澱物真空乾燥；所述吡啶、對硝基苯基氯甲酸酯、聚己內酯的質量比為1: 15: 3000，所述聚己內酯的分子量為100，000 ；
[0045](2)以二氯甲烷為溶劑，分別配製濃度為70% (w/v)的聚乙二醇二胺溶液和濃度為8% (w/v)的步驟⑴獲得的沉澱物溶液，在攪拌條件下，按體積比為1: 30的比例，將聚乙二醇二胺溶液一滴滴地加入到沉澱物溶液中，室溫下反應24h，將反應混合物加入到(TC的乙醇中沉澱，真空乾燥後得到聚己內酯聚乙二醇二胺嵌段共聚物；所述聚乙二醇二胺的分子量為6000 ；
[0046](3)將外徑為6mm的不鏽鋼管安裝至靜電紡絲旋轉接收裝置上，然後以體積比為
3: I的二氯甲烷、N-二甲基甲酚胺的混合溶液為溶劑，以質量比為3: I聚己內酯聚乙二醇二胺嵌段共聚物與聚三亞基碳酸酯的混合物為溶質，配製成濃度為10% (w/v)的混合溶液，攪拌均勻，採用靜電紡絲技術製備管型支架材料，真空乾燥24h，去除殘留的有機溶劑和水分，密封包裝，4°C保存待用；
[0047](4)以0.05mol/L, pH = 5.6的脂肪醇聚氧乙烯醚磺基琥珀酸酯二鈉鹽緩衝液為溶劑，配製濃度為0.6% (w/v)的肝素溶液；在肝素溶液中加入EDC和NHS，37°C下，活化肝素的羥基團IOmin,浸入管型支架材料,於室溫，80r/min攪拌條件下反應2h ;用0.01mol/LPBS溶液浸泡肝素化的管型支架材料4h，其間換所述PBS溶液6次，再用蒸餾水浸泡4h，其間換蒸餾水6次；真空乾燥，消毒滅菌後得到一種小口徑原位組織工程血管，所述EDC與肝素的質量比分別為1: 2，EDC與NHS質量比為2: I。
[0048]實施例4
[0049]PCL-PEG/PTMC 片狀材料製備:
[0050]以體積比為3: I的二氯甲烷、N-二甲基甲酚胺的混合溶液為溶劑，以質量比為
1: I聚己內酯-聚乙二醇二胺嵌段共聚物與聚三亞基碳酸酯的混合物為溶質，配製成濃度為9% (w/v)的混合溶液，攪拌均勻，採用靜電紡絲技術，通過平板接收裝置製備片層材料。真空乾燥24h，去除殘留的有機溶劑和水分，密封包裝，4°C保存待用。
[0051]實施例5 [0052]肝素化PCL-PEG/PTMC片狀材料的製備
[0053]以0.05mol/L, pH = 5.6的脂肪醇聚氧乙烯醚磺基琥珀酸酯二鈉鹽緩衝液為溶劑，配製濃度為0.5% (w/v)的肝素溶液；在肝素溶液中加入EDC和NHS, 37°C下,活化肝素的羥基團lOmin，浸入實施例4製備的PCL-PEG/PTMC片狀材料，於室溫，70r/min攪拌條件下反應4h ;用0.01mol/L PBS溶液浸泡肝素化修飾PCL-PEG/PTMC片狀材料3h，其間換所述PBS溶液4次，再用蒸餾水浸泡3h，其間換蒸餾水4次；真空乾燥，消毒滅菌後得到肝素化PCL-PEG/PTMC片狀材料，所述EDC與肝素的質量比分別為1: 1，EDC與NHS質量比為
2: 10
[0054]實施例6
[0055]對實施例1涉及的小口徑原位組織工程血管及相關材料分別留取標本，依下述方法分別進行形態學、肝素含量、力學性能及生物相容性檢測。
[0056]一、檢測方法
[0057]( 一 ) PCL-PEG/PTMC支架材料的形態學觀察
[0058]將實施例4製備的PCL-PEG/PTMC片狀材料和實施例1步驟(3)獲得的管型支架材料入臨界點乾燥儀中乾燥2h ;離子濺射儀中噴金3min，於掃描電鏡下觀察各樣品形態學特徵，採用圖像分析系統測量靜電紡絲直徑見圖2和圖3。
[0059] ( 二 )肝素化修飾PCL-PEG/PTMC片狀材料肝素含量的測定
[0060]1.肝素標準曲線的繪製:將0、0.l、0.2、0.4、0.8、L0、L2mg肝素鈉分別溶解於2mL0.1mol HC1/0.2% NaCl液體中；加入2mL質量分數為0.0004的甲苯胺藍至每個標本中，室溫下反應4h形成肝素-甲苯胺藍絡合物，3000g離心10min，去除上清液，重複以上過程3次；以5mL4: I乙醇與0.lmol/L NaOH混合液(V/V)溶解沉澱液，I: 10稀釋後，於530nm處以分光光度計測吸光值。
[0061]2.肝素含量測定:將實施例5獲得的片狀材料室溫下浸入5mL甲苯胺藍水溶液(0.lmol/L HCl, 2g/L NaCl, 0.4g/L甲苯胺藍)4h ;形成肝素-甲苯胺藍絡合物之後,蒸懼水洗滌3次，每次lh，靜置過夜；肝素-甲苯胺藍絡合物以5mL4: I乙醇與0.lmol/L NaOH混合液(V/V)溶解，I: 5稀釋後，於530nm處以分光光度計測吸光值，見圖5。
[0062](三)力學性能檢測
[0063]1.斷裂拉伸強度和斷裂伸長率的檢測:將各實施例中獲得的小口徑原位組織工程血管沿長軸切開，在Instron萬能材料實驗機上進行拉伸實驗，記錄斷裂拉伸強度和斷裂伸長率，檢測原位組織工程血管抗拉伸能力和變形能力。
[0064]2.爆破強度測定:將各實施例中得到的小口徑原位組織工程血管標本連接於爆破壓測量表，游離端封閉，裝置內充盈PBS液，調節加壓螺栓壓縮腔內的液體，記錄管型材料爆破前所達到的最高壓力，檢測小口徑原位組織工程血管對壓力變化的耐受能力。
[0065]3.縫合強度測定:將各實施例中得到的小口徑原位組織工程血管一端夾在Instron萬能材料實驗機上,另一端以6-0的尼龍縫合線連接於另一個夾具上,然後以Imm/min的速度勻速牽拉，記錄完全斷裂時的拉力，檢測原位組織工程血管的可縫合性。
[0066](四)生物相容性檢測
[0067]1.血液相容性檢測
[0068]I)溶血率測定:肝素化修飾PCL-PEG/PTMC片狀材料與PCL-PEG/PTMC片狀材料各5g,剪成5mmX20mm小條；新鮮健康志願者靜脈血與抗凝劑(枸櫞酸葡萄糖緩衝液)按9: I (體積比)均勻混合；該抗凝血再與生理鹽水按1: 1.25(體積比)稀釋，得到稀釋抗凝血；按表1所示方法分組，並在各試管內分別加入試樣、生理鹽水或蒸餾水，將所有試管放入37°C溫箱恆溫30min，向各管分別加入稀釋抗凝血0.2mL，輕搖混勻，37°C溫箱中孵育60min，各管液體750g離心5min，以蒸餾水為參比，在波長545nm處測定上清液的吸光度。按公式HR = (DtDnc)/(DpcDnc) X 100%，式中HR為溶血率，Dt為試驗樣品的吸光度；Dn。為陰性對照的吸光度；DP。為陽性對照的吸光度。
[0069]表1
【權利要求】
1.一種小口徑原位組織工程血管的構建方法，包括如下步驟: (1)在O~4°C，攪拌條件下，將吡啶、對硝基苯基氯甲酸酯加入質量體積濃度為8%~10%的聚己內酯二氯甲烷溶液中，室溫下反應2~4h，反應混合物放入O~4°C乙醚中沉澱，沉澱物真空乾燥；所述吡啶、對硝基苯基氯甲酸酯、聚己內酯的質量比為1:1~1.5: 3000，所述聚己內酯的分子量為40,000~100,000 ; (2)以二氯甲烷為 溶劑，分別配製質量體積濃度為50%~70%的聚乙二醇二胺溶液和質量體積濃度為6%~8%的步驟(1)獲得的沉澱物溶液，在攪拌條件下，按體積比為I: 20~30的比例，將聚乙二醇二胺溶液一滴滴地加入到沉澱物溶液中，室溫下反應12~24h，將反應混合物加入到O~4°C的乙醇中沉澱，真空乾燥後得到聚己內酯-聚乙二醇二胺嵌段共聚物；所述聚乙二醇二胺的分子量為2000~6000 ； (3)將外徑為2~6mm的不鏽鋼管安裝至靜電紡絲旋轉接收裝置上，然後以體積比為3: I的二氯甲烷、N-二甲基甲酚胺的混合溶液為溶劑，以質量比為I~3: I~3聚己內酯-聚乙二醇二胺嵌段共聚物與聚三亞基碳酸酯的混合物為溶質，配製成質量體積濃度為8%~10%的混合溶液，攪拌均勻，採用靜電紡絲技術製備管型支架材料； (4)以0.05mol/L,pH = 5.6的脂肪醇聚氧乙烯醚磺基琥珀酸酯二鈉鹽緩衝液為溶劑，配製質量體積濃度為0.4%~0.6%的肝素溶液；在肝素溶液中加入EDC和NHS，37°C下，活化肝素的羥基團IOmin,浸入管型支架材料,於室溫,60~80r/min攪拌條件下反應2~6h ；用0.01mol/L PBS溶液浸泡肝素化的管型支架材料2~4h，其間換所述PBS溶液3_6次，再用蒸餾水浸泡2~4h，其間換蒸餾水3-6次；真空乾燥，消毒滅菌後得到一種小口徑原位組織工程血管，所述EDC與肝素的質量比為1:1~2，EDC與NHS質量比為I~2: 1，所述EDC為1-乙基-3-(3- 二甲基氨丙基)-碳化二亞胺的縮寫，NHS為N-羥基琥珀醯亞胺的縮與。
2.權利要求1的方法構建的一種小口徑原位組織工程血管。
【文檔編號】A61L27/58GK103961750SQ201410164683
【公開日】2014年8月6日 申請日期:2014年4月22日 優先權日:2014年4月22日
【發明者】江濤, 張國權, 李輝, 金迅, 何文彤, 王英慧 申請人:中國人民武裝警察部隊後勤學院