病毒性疾病的預防或治療劑的製作方法

2023-06-14 14:07:06

專利名稱：病毒性疾病的預防或治療劑的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種病毒性疾病的預防或治療劑，.所述病毒性疾病的預防
或治療劑組合使用22 (3 -曱氧基齊墩果-12-烯-3 P ，24(4 (3 )-二醇(22 (3 -乂卜年
〉才^7 乂-12-工>-3 P ，24(4 P )-、2才一/W和幹擾素。
背景技術：
據統計，日本國內C型肝炎病毒(HCV)的持續感染者約150萬~200萬 人，其中大多數表現為慢性肝炎症狀(參照非專利文獻1)。在B型肝炎的情 況中，還發現了很多不經過慢性肝炎而演變為肝癌的實例。另一方面，通 過肝組織觀察可知，HCV感染者中的80 90%為慢性肝疾病；感染者中的 5 0 60%有可能由慢性肝炎演變為肝硬化、150肝細胞癌(參照非專利文獻2)。 HCV感染症已成為世界性的重大醫療課題。
已知，幹擾素(IFN)是一種具高度同種特異性的蛋白質家族，可阻礙病 毒複製及細胞增殖、調節免疫響應，人體中存在4類幹擾素(非專利文獻3)。
基於所述幹擾素的抗病毒作用，幹擾素被應用於各類病毒性疾病。特 別是，在由HVC感染所引發的丙型慢性肝炎中，幹擾素被廣泛應用於以除 去HCV為目的的治療，其中，所述HCV是以正鏈RNA承載遺傳信息的病 毒之一。可是，在影響IFN治療效果的因素中，對於基因型(genotype)lb、 或高病毒量(lMeq以上)的患者，IFN的治療效果低下；其中，所述的基因 型lb患者據稱佔日本丙型慢性肝炎患者中的7成以上(參照非專利文獻4， 5)。另外，作為所述IFN治療的副作用，發熱、四肢無力及精神症狀的異常 等的高出現率已被認知。
作為現有的針對基因型lb且高病毒量患者的治療法，已知的是IFN與 病毒唑的並用療法，聚乙二醇化幹擾素a-2a(PEG-IFNoc-2a)、聚乙二醇化 幹擾素oc -2b(PEG-IFN oc -2b)與病毒唑的並用療法。這些治療法的治療效果 (痊癒率)尚不能滿足要求。即使是目前治療效果最高的PEG-IPN與病毒唑 的並用療法，其效果也只有50%左右。另外，作為副作用，與IFN單獨療 法相比，在IFN與病毒唑的並用療法中，血紅蛋白減少、紅血3求減少、白
4血球減少等的高出現率已^皮認知。在PEG-IFNa-2a療法中，其流感症狀雖 然較IFN療法低，但也發現產生更多的皮膚症狀及淋巴球減少、血小板減 少、紅血球減少。在PEG-IFN a-2b與病毒唑的並用療法中，經常發生給藥 部位失調(投與部位障害)，血球類有害項目(血球系有害事象)的實驗值的回 復產生一定延遲，進一步還發現，在老年人中，高度的實驗值異常以及須 減少的頻率有增高趨勢。因而，期待開發一種針對下述病例有效的治療方 法，所述病例為通過IFN治療未獲得顯著效果的病例、基因型lb及高病 毒量的情況下通過進行IFN給藥也無法期待其有效性的病例、或老年人及 已經開始向肝硬化演變的病例等。
另一方面，22 (3 -曱氧基齊墩果-12-烯-3 (3 ,24(4 (3 )-二醇是以下述結構表 示的化合物，已知其具有肝細胞損傷抑制作用(參照專利文獻1， 2)。
另外，據報告，所述22P-曱氧基齊墩果-12-烯-3P,24(4p)-二醇具有抗 HCV活性(參照非專利文獻6)，期待將其開發為一種病毒性肝疾病治療劑。 可是，迄今為止，尚無關於其與其他類藥物並用效果的研究。
專利文獻1:日本國際公開第97/03088號小冊子
專利文獻2:專利第3279574號說明書
非專利文獻l:日本肝臟學會編，"慢性肝炎的治療指南，，，文光堂林 式會社，2006年，p.21
非專利文獻2:飯野四郎，"C型肝炎治療方針"，日本臨床，2004, 第62巻，增刊號7， p.342-346
非專利文獻3:"生物化學年度綜述(Annual Review of Biochemistry)", (美國)，1987年，第56巻，p.727-777非專利文獻4:飯野四郎，"已被認識到的幹擾素的作用和範圍"，內
科，1999，第84巻，第2號，p.285-291
非專利文獻5:"柳葉刀(Lancet)"，(英國)，1998年，第352巻，第 9138號，p.1426-1432
非專利文獻6:"肝臟學(Hepatology)",(美國)，2005年，第42巻， p.248A

發明內容
本發明所要解決的課題
本發明人為了解決上述課題，針對對病毒性疾病、尤其是由以正鏈RNA 承載遺傳信息的病毒引發的感染症的預防或治療有效的藥物進行了潛心研 究，發現了下述結果通過組合併同時給藥22P-曱氧基齊墩果-12-烯-3 P,24(4(3)-二醇和幹擾素，可增強HCV增殖抑制效果，並獲得對上述病毒 性疾病的預防或治療優秀的治療劑。 解決問題的手段
即，本發明涉及 一種病毒性疾病的預防或治療劑，所述病毒性疾病的預防或治療劑 組合22 (3 -曱氧基齊墩果-12-烯-3 (3 ,24(4 |3 )-二醇和幹擾素作為其有效成分。根據項[l]所述的預防或治療劑，其中，所述病毒性疾病是由RNA 病毒引發的疾病。根據項[2]所述的預防或治療劑，其中，所述RNA病毒是以正《連RNA 承載遺傳信息的病毒。根據項[3]所述的預防或治療劑，其中，所述RNA病毒是C型肝炎病毒。根據項[l]所述的預防或治療劑，其中，所述病毒性疾病是C型肝炎、 或由C型肝炎引發的肝硬化或肝癌。 —種病毒性疾病的預防或治療方法，所述病毒性疾病的預防或治療 方法包括給有必要進行病毒性疾病的預防或治療的對象施用有效量的22 (3 -曱氧基齊墩果-12-烯-3 P ，24(4 (3 )-二醇和幹擾素。根據項[6]所述的預防或治療方法，其中，所述病毒性疾病是由RNA 病毒引發的疾病。
6[8]根據項[7]所述的預防或治療方法，其中，所述RNA病毒是以正鏈RNA承載遺傳信息的病毒。根據項[8]所述的預防或治療方法，其中，所述RNA病毒是丙型肝
炎病毒。根據項[6]所述的預防或治療方法，其中，'所述病毒性疾病是C型肝炎、或由C型肝炎引發的肝硬化或肝癌。 22 (3 -曱氧基齊墩果-12-烯-3 (3 ,24(4 P )-二醇和幹擾素在製備病毒性疾病的預防或治療劑中的用途。根據項[ll]所述的用途，其中，所述病毒性疾病是由RNA病毒引發的疾病。根據項[12]所述的用途，其中，所述RNA病毒是以正鏈RNA承載
遺傳信息的病毒。根據項[13]所述的用途，其中，所述RNA病毒是C型肝炎病毒。[15]根據項[ll]所述的用途，其中，所述病毒性疾病是C型肝炎、或由
C型肝炎引發的肝硬化或肝癌。
發明的效果
本發明涉及的預防或治療劑通過組合併同時給藥22 P -曱氧基齊墩果-12-烯-3 (3 ,24(4 (3 )-二醇和幹擾素，可獲得對病毒性疾病的高度預防或治療效果；其中，所述病毒性疾病優選由RNA病毒引發的病毒性疾病，更優選由以正鏈RNA承載遺傳信息的病毒引發的病毒性疾病，尤其優選由C型肝炎病毒引發的C型肝炎或由C型肝炎引發的肝硬化或肝癌。


表示單獨添加22 (3 -甲氧基齊墩果-12-烯-3 (3 ,24(4 e )-二醇、單獨添加IFN、同時添加22 (3 -曱氧基齊墩果-12-蹄-3 (3 ，24(4 (3 )-二醇和IFN的各情況下，Ad-T7po1感染1日後的HCV增殖抑制效果圖。表示單獨添加22 P -甲氧基齊墩果-12-烯-3 P ，24(4 (3 )-二醇、單獨添加IFN、同時添加22 (3 -曱氧基齊墩果-12-烯-3 (3 ,24(4 (3 )-二醇和IFN的各情況下，Ad-T7po1感染2日後的HCV增殖抑制效果圖。表示單獨添加22 (3 -曱氧基齊墩果-12-烯-3 P ,24(4 (3 )-二醇、單獨添加 同時添加22 (3 -甲氧基齊墩果-12-烯-3 (3 ，24(4 P )-二醇和IFN的各情況下，Ad-T7pol感染3日後的HCV增殖抑制效果圖。
發明的
具體實施例方式
本說明書中的"病毒性疾病"是指由病毒引發的疾病，所述病毒包括DNA病毒和RNA病毒兩種。作為所述DNA病毒，可列舉例如B型肝炎病毒、痘病毒、皰滲病毒、腺病毒、細小病毒。作為所述RNA病毒，可列舉例如呼腸孤病毒、披膜病毒、日冕形病毒、棒狀病毒、副粘病毒、正粘病毒、布尼亞病毒、沙粒病毒、逆轉錄病毒、小核糖核酸病毒、杯狀病毒。
在本發明的預防或治療劑中，作為上述病毒，'優選RNA病毒，更優選以正鏈RNA承載遺傳信息(具有正鏈RNA基因組)的RNA病毒，尤其優選C型肝炎病毒。作為所述以正鏈RNA承載遺傳信息的RNA病毒，可列舉例如灰質炎病毒、考克賽基病毒、艾柯病毒、腸道病毒、鼻病毒、曱型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、風滲病毒、東部馬腦炎病毒、西部馬腦炎病毒、黃熱病毒、登革熱病毒、聖路易斯腦炎病毒、C型肝炎病毒、庚型肝炎病毒、日冕形病毒、西尼羅病毒、水泡性口炎病毒。
所述以正鏈RNA承載遺傳信息的RNA病毒通過共同的方法增殖。即，當細胞被病毒感染後，病毒RNA入侵到細胞內。從入侵的病毒RNA直接翻譯成病毒蛋白質，製備出為了複製病毒RNA所必.需的依賴於RNA的RNA聚合酶等蛋白質。通過上述產生的蛋白質，並以入侵的RNA作為模板，病毒RNA被複製。複製的病毒RNA被納入到由其自身合成的蛋白質內成為病毒，並向細胞外釋放(以上，參照日本特開2005-35913號公才艮)。
另一方面，關於幹擾素的抗病毒作用機制，在例如日本特開2005-35913號公報中提出了下述機理。即，幹擾素與細胞表面上的受體結合之後，在細胞內誘導出顯示抗病毒作用的蛋白質。例如，通過由幹擾素誘導的2，-5，腺苷酸合成酶，可製備寡2，-5，腺苷酸。該寡2，-5，腺苷酸使依賴於RNA的RNA酶活化，通過被活化的依賴於RNA的RNA酶，病毒RNA被分解，從而，幹擾素表現出抗病毒作用。通過上述的作用機理，可以認為，本發明的預防或治療劑可以針對以正鏈RNA承載遺傳信息的RNA病毒產生充分的效果。
在上述病毒性疾病中，作為由肝炎病毒[例如，B型肝炎病毒(HBV)、C型肝炎病毒(HCV)]引發的疾病，可列舉例如急性或慢性病毒性肝炎(例如，
8B型肝炎、C型肝炎)等肝損傷等，優選C型肝炎、或由C型肝炎引發的肝^
硬化或肝癌。B型肝炎，是指由HBV感染引發的肝炎；C型肝炎，是指由 HCV感染引發的肝炎。慢性肝炎是指如下臨床狀況肝臟中的炎症持續6 個月以上或可以認為持續6個月以上。肝損傷，是指肝臟的炎症性疾病， 根據病情的發展，也作為包括脂肪肝、肝硬化、肝細胞癌在內的概念使用。
作為可用作本發明的預防或治療劑的有效成分的2 2 P -曱氧基齊墩果 -12-烯-3 (3 ,24(4 P )-二醇，是一種公知的化合物，可利用例如WO97/03088 號公報的實施例22(化合物27)中記載的方法獲得。
所述22 (3 -曱氧基齊墩果-12-烯-3 (3 ,24(4 (3 )-二醇通常可以以例如膠嚢、 微膠囊、藥片、顆粒、細粒、粉末等常用的藥劑形式口服給藥。而且，也 可以以靜脈注射、肌肉注射等注射劑等常用的藥劑形式非口給藥(例如，靜 脈注射、筋肉注射、皮下給藥、腹腔內給藥、直腸給藥、經皮給藥)。上述 各種製劑可通過使用常用的賦形劑、補充劑、粘合劑、溼潤劑、崩解劑、 表面活性劑、潤滑劑、分散劑、緩衝劑、保存劑、助溶劑、防腐劑、矯味 矯臭劑、去痛劑、穩定劑等，利用常規方法製造而成。作為可用的無毒性 的上述添加劑，可列舉例如乳糖、果糖、葡萄糖、澱粉、明膠、碳酸鎂、 合成矽酸鎂、滑石、硬脂酸鎂、曱基纖維素、羧曱基纖維素或其鹽、阿拉 伯樹膠、聚乙二醇、糖漿、凡士林、甘油、乙醇、丙二醇、檸檬酸、氯化 鈉、亞硫酸鈉、磷酸鈉等。
本發明的預防或治療劑中的22 (3 -曱氧基齊墩果-12-烯-3 P ,24(4 P )-二 醇的劑型、給藥方法、給藥量、給藥周期等可以根據例如患者的體重、年 齡、病情的程度等進行適當設定。另外，只要是在通過與幹擾素組合使用 來增強抗病毒作用的範圍內，則無特殊限制。例如，可以按照每日1 1000mg、 1次性或分為數次進行口服或非口服給藥。優選每日25 800mg、分兩次進 行口服或非口服給藥。
例如，作為市售或臨床開發中的任意IFN,可列舉天然型IFNa(Sumiferon: 大日本住友製藥公司制)、IFNa-2a、 IFN a-2b(Intron A: Schering Plough 乂> 司制)、聚乙二醇(PEG)化天然型IFN cx 、 PEG化IFN a -2a(Pegasys:日本中 外製藥公司制)、PEG化IFN a-2b(PEG-I咖n A)、天然型IFN (3 (IFN (3 Mochida:日本持田製藥公司制；Feron:日本東麗(TORAY)公司制)、PEG
9化天然型IFN(3、天然型IFNy、重組複合IFN(Advaferon: Astellas製藥公 司制)、或PEG化重組複合IFN、以及它們的組合。
關於本發明的預防或治療劑中IFN的給藥量、給藥周期、給藥日程、 給藥途徑等，只要是對上述病毒性疾病的預防或治療有效，則無特殊限制。 例如，在C型肝炎中，通常按照每曰10萬~1000萬國際單位、每日一次或 分為數次、2周 48周、連日或是一周3次左右的給藥間隔，進行皮下、筋 肉內或靜脈內給藥；根據病毒類型及病毒量、患者的體重、年齡等，也可 以做出適當改動。優選每日600 1000萬單位、在進行2周 8周的連日給 藥後再進行22~46周的間歇性給藥，但也可以根據給藥的IFN的種類、劑 型進行適當改動。
進一步，關於22 (3 -曱氧基齊墩果-12-烯-3 (3 ，24(4 P )-二醇和幹擾素的組 合比(使用比或混合比)，只要是對上述病毒性疾病的預防或治療有效，則無 特殊限制。例如，在C型肝炎中，通常可以在每日lmg: 10萬國際單位 1000mg: 1000萬國際單位的範圍內適當選定，但優選每日25mg: 100萬 國際單位 800mg: 1000萬國際單位的範圍。本發明的預防或治療劑是一種 組合使用22 P -曱氧基齊墩果-12-烯-3 (3 ，24(4 P )-二醇和千擾素進行給藥的 藥劑，其中，所述"組合使用"，包括以各自的獨立藥劑的形式同時或先 後給藥等，各成分的給藥次數可以相同也可以不同。
當分別對22 [3 -曱氧基齊墩果-12-烯-3 (3 ,24(4 (3 )-二醇和幹擾素的適當 給藥量及給藥間隔進行設定時，可通過可控的臨床試驗結果來確定。
本發明的預防或治療劑可以是在1種組合物中包含上述2種有效成分 的1劑類藥物，也可以是在各自獨立的組合物中分別含有上述2種有效成 分的2劑類藥物。 實施例
以下根據實施例對本發明進行具體說明，但本發明的範圍不受限於這
些實施例。
實施例1:組合使用22 (3 -曱氧基齊墩果-12-烯-3 (3 ,24(4 P )-二醇和幹擾素對 HCV的增殖抑制效果的確認
在本實施例中，利用非專利文獻6中所述的全基因組HCV複製模型 (full-genome HCV replication model)對本發明的預防或治療劑進行了評價。
即，製備了下述質粒(pT7-flHCV-Rz)，所述質粒在cDNA的5'側具有T7啟動子、在cDNA的3'側具有T7 丁型肝炎病毒的核酶基因；其中，所 述cDNA由具有感染性、且顯示難於進行幹擾素治療的基因型la的丙型肝 炎病毒(HCV)H77抹[GenBank AF011751; Yanagi， M., Purcell， R.H., Emerson, S.U., Bukh， J. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 94(16), 8738-8743(1997)]全長克隆 製備而成。將上述質粒pT7-flHCV-Rz轉染(3 jug/孔)到播種於6孔板的 HepG2細胞(資源序號JCRB1054)中，經過24小時後，用重組腺病毒 (Ad-T7pol)進行感染(10空斑形成單位/細胞)，所述重組腺病毒表達T7聚合 酶；由此，使宿主細胞表達HCV基因。從而，通過上述的複製模型，在細 胞中作成了與HCV基因(正鏈)完全相同的RNA。該HCV正鍊表達具有依 賴於RNA的RNA聚合酶作用的NS5B蛋白質，其結果，HCV負鏈得以表 達，並觀察到HCV在細胞內的增殖。
在被Ad-T7po1感染3小時後，分別單獨或組合添加22 (3 -曱氧基齊墩 果-12-烯-3 P ，24(4 (3 )-二醇和/或IFN- a 2b(Intron A: Schering Plough公司制)， 並對其HCV增殖抑制效果進行了研究。向培養液(2mL)中添加22 (3 -甲氧基 齊墩果-12-烯-3(3,24(4P)-二醇和IFN-a2b，使其濃度滿足22P-曱氧基齊 墩果-12-烯-3 (3 ，24(4 (3 )-二醇的最終濃度為0.1 jamol/L， IFN-a2b的最終濃 度為100IU/mL。在被Ad-T7po1感染1日後，進行培養液交換(交換後的培 養液中也添加了上述濃度的各評價用化合物)。而且，在參比培養液中僅添 加了用於溶解22 P -甲氧基齊墩果-12-烯-3 (3 ,24(4 (3 )-二醇的二曱基亞碸 (DMSO),使其最終濃度為0.1%。另外，本試驗在無細胞毒性的濃度範圍內 進行操作。
在被Ad-T7pol感染的1、 2、 3日後，分別回收細胞並提取其中的RNA。 對宿主細胞的看家基因(Housekeeping geres)即甘油醛-孓磷酸脫氫酶 (GAPDH)mRNA利用MuLV逆轉錄酶進行逆轉錄反應後，使用rTth DNA 聚合酶，對HCV RNA的表達通過實時PCR(Light Cycler: Roche Diagnostics 公司制)進行定量。另外，作為實時PCR用引物，針對HCVRNA,使用了 正向引物
5，-GCA GAA AGC GTC TAG CCA TGG CGT-3，(序列號1: 5'UTR的68-9lnt) 反向引物
5，-CTC GCA AGC ACC CTA TCA GGC AGT-3，(序列號2: 5'UTR的 311匿288nt);
li針對GAPDH，使用了市售的試劑盒(Human GAPDH primer set: Search LC
公司)。
結果如圖1 圖3所示。在圖1 圖3中，柱l為參比樣品的結果，柱2 為單獨添加了 22 (3 -甲氧基齊墩果-12-烯-3 (3 ，24(4 (3 )-二醇的結果，柱3為單 獨添加了 IFN(100IU/mL)的結果，柱4為組合添加22 (3-曱氧基齊墩果-12-烯-3 P ,24(4 (3 )-二醇和IFN的結果。
由該結果可確定組合添加22 P -曱氧基齊墩果-12-烯-3 (3 ,24(4 (3 )-二醇 和IFN的情況與分別單獨添加各組分的情況相比，其HCV增殖抑制效果得 到了顯著地協同性增強。 工業實用性
通過本發明，提供了一種病毒性疾病的預防或治療劑，所述病毒性疾 病的預防或治療劑組合使用22 (3 -曱氧基齊墩果-12-烯-3 (3 ,24(4 (3 )-二醇和 幹擾素；所述病毒性疾病的預防或治療劑是對下述疾病有效的藥物，其中， 所述疾病優選由以正鏈RNA承載遺傳信息的病毒引起的感染症、尤其優選 由C型肝炎病毒引發的C型肝炎、或由C型肝炎引發的肝硬化或肝癌。
以上按照具體的方式對本發明進行了說明，但本領域技術人員由此而 進行的合理的變形及改良也包括在本發明的範圍內。
1權利要求
1. 一種病毒性疾病的預防或治療劑，所述病毒性疾病的預防或治療劑組合22β-甲氧基齊墩果-12-烯-3β，24(4β)-二醇和幹擾素作為其有效成分。
2. 根據權利要求1所述的預防或治療劑，其中，所述病毒性疾病是由 RNA病毒引發的疾病。
3. 根據權利要求2所述的預防或治療劑，其中，所述RNA病毒是以正 鏈RNA承載遺傳信息的病毒。
4. 根據權利要求3所述的預防或治療劑，其中，所述RNA病毒是丙型 肝炎病毒。
5. 根據權利要求1所述的預防或治療劑，其中，所述病毒性疾病是丙 型肝炎、或由C型肝炎引發的肝硬化或肝癌。
6. —種病毒性疾病的預防或治療方法，所述病毒性疾病的預防或治療 方法包括給有必要進行病毒性疾病的預防或治療的對象施用有效量的22 P -曱氧基齊墩果-12-烯-3 (3 ,24(4 (3 )-二醇和幹擾素。
7. 根據權利要求6所述的預防或治療方法，其中，所述病毒性疾病是 由RNA病毒引發的疾病。
8. 根據權利要求7所述的預防或治療方法，其中，所述RNA病毒是以 正鏈RNA承載遺傳信息的病毒。
9. 根據權利要求8所述的預防或治療方法，其中，所述RNA病毒是丙 型肝炎病毒。
10. 根據權利要求6所述的預防或治療方法，其中，所述病毒性疾病是 C型肝炎、或由C型肝炎引發的肝硬化或肝癌。
11. 所述22 P -曱氧基齊墩果-12-烯-3 P ，24(4 (3 )-二醇和幹擾素在製備病 毒性疾病的預防或治療劑中的用途。
12. 根據權利要求11所述的用途，其中，所述病毒性疾病是由RNA病 毒引發的疾病。
13. 根據權利要求12所述的用途，其中，所述RNA病毒是以正鏈RNA承載遺傳信息的病毒。
14. 根據權利要求13所述的用途，其中，所述RNA病毒是C型肝炎病毒。2
15.根據權利要求11所述的用途，其中，所述病毒性疾病是C型肝炎、或由C型肝炎引發的肝硬化或肝癌。
全文摘要
本發明公開一種病毒性疾病的預防或治療劑，所述病毒性疾病的預防或治療劑組合22β-甲氧基齊墩果-12-烯-3β，24(4β)-二醇和幹擾素作為其有效成分。通過在本發明的病毒性疾病的預防或治療劑中組合併同時給藥22β-甲氧基齊墩果-12-烯-3β，24(4β)-二醇和幹擾素，可以獲得高度的治療效果。
文檔編號A61K38/21GK101489579SQ20078002586
公開日2009年7月22日 申請日期2007年7月6日 優先權日2006年7月7日
發明者日淺陽一, 葛原博幸 申請人:明治制果株式會社