一種河豚毒素口服液態製劑及其製備方法
2023-06-17 18:37:46 2
專利名稱：一種河豚毒素口服液態製劑及其製備方法
技術領域：
本發明涉及ー種河豚毒素ロ服液態製劑及其製備方法，屬於醫藥技術領域。
背景技術：
近幾年來，國內外對河豚毒素新藥的研發十分火熱。但是，迄今為止，尚未見有河豚毒素新藥能夠正式應用於臨床。究其原因，可能與単一的河豚毒素不具有鎮痛效果相關。國外有研究者發現，単一的河豚毒素水針劑用於鎮痛很難見效，在臨床試驗中還經常出現受試者有中毒反應或局部疼痛的現象。現有技術中，有關河豚毒素軟膠囊製劑主要是黃致強申請的發明專利，名稱為「河飩毒素油相製劑的製備方法」，專利號為「ZL 200410080557. 7」。
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根據試驗，現有技術存在以下不足之處
I)現有技術是將河豚毒素溶入動植物的油脂，因為河豚毒素被油脂包裹，無法完全從中分離出來，因而無法對有效物質的使用劑量進行檢測，產品質量難以控制。本發明因為河豚毒素是溶入水溶性的物質，可以直接通過HPLC對有效物質進行含量檢測，使產品的質量控制具有可操作性。2)現有技術是利用了脂溶性物質具有快速穿透血腦屏障(BBB)的特徵，將河豚毒素溶入油脂。本發明是利用尿素、丙三醇、甘露醇、こ醇、半乳糖、阿拉伯糖、果糖、葡萄糖、乳醯胺等高滲透性物質能夠打開血腦屏障(BBB)的特徵，同樣能夠提高河豚毒素對血腦屏障(BBB)的穿透性。3)現有技術雖然具有良好的藥效，但由於河豚毒素受到油脂包裹，在油劑中只能緩慢釋放，造成河豚毒素起效較慢。本發明不存在這個問題，因此起效較快。
發明內容
本發明的目的是克服現有技術的不足之處，提供ー種河豚毒素ロ服液態製劑及其製備方法。本發明的河豚毒素ロ服液態製劑，所述的ロ服液態製劑包含河豚毒素、助溶劑、增溶劑、抗氧化劑、防腐剤、開放血腦屏障的高滲透物質和輔料。所述的助溶劑選自醋酸、磷酸或檸檬酸及其鈉鹽。所述的增溶劑選自聚こ烯吡咯烷酮(PVP)、聚氧こ烯氫化蓖麻油HEL-40、聚氧こ烯氫化蓖麻油HEL-20中的ー種或多種。所述的抗氧化劑選自還原型穀胱甘肽、こニ胺四こ酸ニ鈉、植酸、抗壞血酸及其鈉鹽或異抗壞血酸及其鈉鹽。所述的防腐劑選自苯甲酸及其鹽類、山梨酸及其鹽類、脫氫こ酸及其鈉鹽、雙こ酸鈉、丙酸鈣、乳酸鈉或生物食品防腐剤。所述的開放血腦屏障的高滲透物質選自尿素、丙三醇、甘露醇、こ醇、半乳糖、果糖、葡萄糖、阿拉伯糖或乳醯胺。
所述的輔料為可食用非油脂類物質。所述的可食用非油脂類物質選自液體聚乙二醇、丙三醇、甘油明膠、果膠、蜂膠、海藻膠或瓊脂。所述的液體聚乙二醇選自PEG-200、PEG-300、PEG-400、PEG-600。本發明的河豚毒素口服液態製劑的製備方法，包括以下步驟將河豚毒素通過助溶劑、增溶劑充分溶解，添加抗氧化劑、防腐劑，以及開放血腦屏障的高滲透物質，然後溶入輔料，製成河豚毒素口服液態製劑。本發明的河豚毒素口服液態製劑，在以下實驗的基礎上得出
I.河豚毒素在酸性水溶液中對小鼠不具有顯著的鎮痛作用。
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試驗I.小鼠熱板添足試驗小鼠4組，其中3個給藥組分別使用河豚毒素，含量為0. I ii g/ml、0. 2 u g/ml和0. 4 y g/ml，用量0. 2ml/只(ip)，I個對照組使用生理鹽水，用量0.2ml/只(ip)。給藥I小時後，採用小鼠熱板添足試驗法，觀察並比較小鼠的痛閾值。結果顯示，給藥組給藥後與給藥前無顯著差異(P > 0. 05)，與對照組也無顯著差異(P >
0.05)。試驗2.小鼠醋酸扭體試驗小鼠4組，其中3個給藥組分別使用河豚毒素，含量為0. I ii g/ml、0. 2 u g/ml和0. 4 y g/ml，用量0. 2ml/只(ip)，I個對照組使用生理鹽水，用量0.2ml/只(ip)。給藥I小時後，以0.6%醋酸溶液0.2ml注射各小鼠(ip)，觀察小鼠15分鐘內的扭體次數。結果顯示，給藥組與對照組無顯著差異(P > 0. 05)。上述試驗結果與蔡志基等人的試驗結果一致。(蔡志基，黃致強，潘心富《國產河豚毒素的藥理研究摘要》河北水產科技，1983，I :1-3)
可以得出單一的河豚毒素在酸性水溶液中對小鼠鎮痛無顯著作用。上述情況表明，河豚毒素水溶液不能鎮痛的原因在於它不能穿透血腦屏障，只有讓它透過血腦屏障進入大腦和中樞神經，才能產生治療神經性疾病的效果。河豚毒素在油劑中鎮痛效果很好，但質量控制非常困難。黃致強的發明專利，其名稱為「河飩毒素油相製劑的製備方法」，專利號為「ZL200410080557. 7」，是將河豚毒素溶入動植物油脂製成口服河豚毒素製劑。該製劑具有非常顯著的鎮痛效果。該專利解決了河豚毒素穿透血腦屏障的難題，為河豚毒素的廣泛應用創造了良好的開端。但是，按照該專利的方法製備的河豚毒素油相製劑質量控制非常困難，原因在於溶入油脂中的河豚毒素不能完全回收，擱置時間越長，回收的得率越低，儘管該專利產品的藥效沒有降低，但是產品中有效物質的含量很難得到準確的定量分析。上述情況表明，河豚毒素軟膠囊的研製既要注重它的有效性，又要注重產品中河豚毒素含量檢測的可操作性。本發明將河豚毒素的有效性與質量可控性結合起來。文獻表明，河豚毒素通過酸性水溶液進入小鼠體內30min後，分布狀況為血液10. 2%,肺 20. 2%,小腸 9. 0%,胃 5. 0%,肝 4. 0%,大腸 3. 4%,腎 5. 0%,心臟 0. 5%,脾 0. 2%,腦
0.09%。由此可見，河豚毒素在大腦中的分布只佔總量的0. 09%，說明單一的河豚毒素在水劑中的很難透過血腦屏障(BBB)。(劉敏，趙創新等《河豚毒素在小鼠體內分布及代謝動力學》中國藥理學通報2006 Apr =22-4-507-8)
本發明的發現，河豚毒素不但在油相製劑中能夠穿透血腦屏障(BBB)，它在與尿素、丙三醇、甘露醇、乙醇、半乳糖、阿拉伯糖、果糖、葡萄糖、乳醯胺等具有高滲透特點的物質共溶後，同樣可以穿透血腦屏障(BBB)，並隨同這類物質透過大腦毛細血管，進入中樞神經系統，發揮藥效。本發明所使用的河豚毒素載體均為水溶性物質，因此，能夠比較容易地將河豚毒素從其中分離出來，不但保證河了豚毒素能夠透過血腦屏障(BBB)，而且保證了河豚毒素含量的可控性和可檢測性。本發明的河豚毒素口服製劑可用於鎮痛和戒除藥物依賴性，具有起效迅速、藥效持久，安全性強等特徵，產品質量控制具有可操作性，與現有技術相比，本發明具有如下技術效果
I)現有技術(即ZL 200410080557. 7)是將河豚毒素溶入動植物的油脂，本發明是將河豚毒素溶入非油脂類的物質。前者因為河豚毒素被油脂包裹，無法完全從中分離出來，因而無法對有效物質的使用劑量進行檢測，產品質量難以控制。後者因為河豚毒素是溶入水溶·性物質，可以直接通過HPLC對有效物質進行含量檢測，使產品的質量控制具有可操作性。2)現有技術(即ZL 200410080557. 7)是利用了脂溶性物質具有快速穿透血腦屏障(BBB)的特徵，將河豚毒素溶入油脂。本發明是利用聚氧乙烯氫化蓖麻油P-40 (或HEL-40)包合藥物所形成的乳粒能穿透血腦屏障(BBB)的特點，或同時利用尿素、丙三醇、甘露醇、乙醇、半乳糖、阿拉伯糖、果糖、葡萄糖、乳醯胺等物質的高滲透性，從而能增加河豚毒素進入中樞神經的比例，提高河豚毒素的生物利用度。3)現有技術(即ZL 200410080557. 7)研製的產品具有很好的藥效，本發明研製的產品其藥效與現有技術產品相同。但是，由於本發明產品中的河豚毒素未受到油脂的包裹，因此，藥效的釋放比現有技術的產品來得快。
具體實施例方式實施例I製備含量為2. 5微克/粒的河豚毒素軟膠囊製劑
①取河豚毒素純品50 mg,朽1檬酸94. 5 mg,朽1檬酸鈉155. 5 mg,置入IOOml小燒杯中，加入純水100ml，溶解，至澄清，取聚乙烯吡咯烷酮(PVP) 5克，溶入河豚毒素水溶液中，攪
動，至澄清，備用。②取純水100ml，置500ml燒杯中，溶入葡萄糖100 g，溶入穀胱甘肽100g，溶入山梨酸鉀20g，常溫下攪拌，邊攪拌邊將上述河豚毒素水溶液IOOml完全注入，再注入無水乙醇200ml，繼續攪拌，備用。③取聚乙二醇(400) 1500ml，置2000ml燒杯中，加熱，恆溫60 °C，攪拌，至稀釋狀，停止加熱，至常溫後，邊攪拌，邊將含有上述含有河豚毒素、葡萄糖和乙醇的溶液完全注入，添加聚乙二醇(400)適量，調節總量至2000ml，繼續攪拌，得河豚毒素種子製劑2000ml，備用。④取聚乙二醇(400) 2000ml，平分，置5000 ml燒杯，加熱，恆溫60 °C，攪拌至稀
釋狀，停止加熱，至常溫後，邊攪拌邊將上述河豚毒素種子製劑完全注入，繼續攪拌，直至進入軟膠囊生產線。⑤將上述河豚毒素製劑4000ml通過膠囊機製成軟膠囊20000粒，每粒膠囊的裝量為0. 2ml,河豚毒素的含量為2. 5微克/粒。
實施例2製備含量為2. 0微克/支的河豚毒素糖漿製劑
①取河豚毒素純品5 mg,朽1檬酸9. 45 mg,朽1檬酸鈉15. 55 mg,聚乙烯卩比咯燒酮(PVP)
5mg,置5ml西林瓶,加入醫用純水3ml,溶解,至澄清,備用。②取聚氧乙烯氫化蓖麻油HEL-40 5_10 ml，置IOOml燒杯，攪拌，加熱，恆溫60V，邊攪拌，邊將河豚毒素溶液3ml完全滴入，攪拌，至透明，得TTX/P40溶液。③取聚氧乙烯氫化蓖麻油HEL-20 10-30 ml，完全滴入上述TTX/P40溶液中，恆溫60 V，攪拌，至透明，得TTX/P40 + P7溶液。④取純水200 ml，置入250ml燒杯中，常溫下攪拌，邊攪拌，邊將TTX/P40 + P7溶液完全注入，繼續攪拌，使其乳化，得河豚毒素乳化液，備用。⑤取純水24千克，置入30千克攪拌桶，攪拌，同時加入甘露醇2千克，葡萄糖4·千克，半乳糖2千克，邊攪拌，邊溶入抗壞血酸及其鈉鹽20克，溶入山梨酸鉀20g，製成葡萄糖糖漿，備用。⑥將河豚毒素乳化液完全注入上述正在攪拌的葡萄糖糖漿中，繼續攪拌，使其充分混合，同時,添加純水,使其總量達到25千克。⑦將上述河豚毒素葡萄糖糖漿25千克進行分裝，灌裝入口服液專用小瓶，每瓶裝量10 ml，製得河豚毒素口服糖漿2500支，河豚毒素的含量為2. 0微克/支。實施例3製備含量為2. 0微克/粒的河豚毒素軟膠囊製劑
①取河豚毒素純品40 mg，檸檬酸75. 6 mg，檸檬酸鈉124. 4 mg，置入IOml稱量瓶中，加純水5ml，溶解，至澄清，得河豚毒素水溶液，備用。②取乙烯吡咯烷酮(PVP) 15g，置IOOml燒杯中，加純水75ml，常溫攪拌，至全溶，邊攪拌，邊將上述稱量瓶中的河豚毒素水溶液完全滴入，再加入抗壞血酸10g，山梨酸鉀IOg,食用色素適量，繼續攪拌，至全溶，備用。③取丙三醇250ml，置入500ml燒杯中，加熱至55 °C，恆溫，邊攪拌，邊將上述TTX
水溶液完全注入，繼續攪拌，得河豚毒素丙三醇溶液，備用。④取葡萄糖2000克，置5000ml燒杯，加純水1500ml，至全溶，攪拌，加熱至550C，恆溫，加入丙三醇2000ml，攪拌，將上述河豚毒素丙三醇溶液完全注入，邊攪拌邊添加丙三醇，使其總量達到4000ml，繼續攪拌，直至進入膠囊機。⑤將上述河豚毒素製劑4000ml通過膠囊機製成軟膠囊20000粒，每粒膠囊的裝量為0. 2ml,河豚毒素的含量為2. 0微克/粒。實施例4製備含量為I. 0微克/粒的河豚毒素軟膠囊製劑
①取河豚毒素純品20 mg，檸檬酸37. 8mg，檸檬酸鈉62. 2mg，置入IOml稱量瓶中，加純水5ml，溶解，至澄清，得河豚毒素水溶液，備用。②取乙烯吡咯烷酮(PVP) 15g，置IOOml燒杯中，加純水75ml，常溫攪拌，至全溶，邊攪拌，邊將上述稱量瓶中的河豚毒素水溶液完全滴入，再加入抗壞血酸10g，山梨酸鉀IOg,食用色素適量，繼續攪拌，至全溶，備用。③取無水乙醇150ml，置IOOOml燒杯中，常溫下攪拌，邊攪拌邊將上述河豚毒素溶液完全注入，攪拌，邊攪拌，邊加入聚乙二醇(400)，使其總量達到1000ml，得河豚毒素種子溶液，備用。④取聚乙二醇(400)1000ml，置2000ml燒杯，加熱至55 °C，恆溫，攪拌，邊攪拌邊將上述河豚毒素種子溶液完全注入，得河豚毒素製劑2000ml，備用。⑤將上述河豚毒素製劑4000ml通過膠囊機製成軟膠囊20000粒，每粒膠囊的裝量為0. 2ml，河豚毒素的含量為I. 0微克/粒。實施例5河豚毒素口服液態製劑的藥用效果檢測
將以實施例1-3製備的河豚毒素製劑給志願者食用，結果如下
I)徐某，男，59歲，肺癌晚期，疼痛不堪，每天注射3-5次杜冷丁仍不能完全鎮痛。服用本發明的產品(含量為2. 0微克/粒的河豚毒素軟膠囊)，起初3天，每天3次，每次3粒，後來逐漸減少，同時，杜冷丁的使用次數隨之減少，10天後，每天服膠囊改為2次，每次服用I粒，每天注射杜冷丁降為2次。持續服藥30天後，杜冷丁停止使用，疼痛得到控制。2)王某，女，61歲，類風溼性關節炎，手指關節腫大，雙手各有3指彎曲，早晨疼痛比較嚴重，常年服用強的松，疼痛仍不能受到控制。服用本發明產品(含量為1.0微克/粒·的河豚毒素軟膠囊)，持續30天，每天早晚各服I粒，強的松的用量從每天服3粒減少為每天服I粒，疼痛得到了完全控制。3)某腫瘤醫院住院部有晚期癌症患者17人，其中有志願者11人願意服用本發明的產品。其中肺癌轉移4人，肝癌轉移2人，食道癌名胃癌轉移3人，骨癌I人，淋巴癌I人。志願者中，疼痛不停者5人，劇痛不停者6人；使用嗎啡針劑4人，使用杜冷丁針劑5人，月艮用嗎啡2人。給11名志願者服用本發明的產品(河豚毒素含量為2. 5微克/粒的軟膠囊)，同時還繼續使用原來的鎮痛方法，並逐漸以本發明產品取代原來使用的嗎啡和杜冷丁。30天後，有2人無痛而終，有I人繼續使用杜冷丁，從每天6次降為I次，其餘8人都繼續服用本發明產品，不再使用嗎啡和杜冷丁針劑。4)溫某，男，43歲，吸毒史10年，多使用海洛因一類毒品，間斷注射苯丙胺類毒品，多次戒毒無效。後來，在使用丁丙諾啡(與微量河豚毒素共用)戒毒時，同時服用本發明產品(含量為2. 5微克/粒的河豚毒素軟膠囊)，一個星期以後，停止注射丁丙諾啡，繼續服用本發明產品，至今毒癮未見復發，也未出現無法忍受的戒斷反應。5)葉某，男，35歲，吸食海洛因5年，在戒毒所使用丁丙諾啡戒毒多次，形成丁丙諾啡依賴性，產生了戒了又吸，吸了又戒的後果。後來，在使用丁丙諾啡戒毒時服用本發明產品(河豚毒素含量為I微克/粒的軟膠囊)，在戒斷後繼續服用，經過一年時間觀察，至今未出現復發現象，心癮同樣消失。6)曹某，女，48歲，風溼性關節炎，渾身疼痛，四肢尤其嚴重，每天服用潑尼松3粒，疼痛仍無法緩解。後來，給服本發明產品河豚毒素糖漿(含量為2. 0微克/支)，3天後，潑尼松降為每天I粒，疼痛緩解，全身輕鬆，30天以後，疼痛完全消除，至今仍然服用本發明產品。
權利要求
1.一種河豚毒素口服液態製劑，其特徵在於，所述的口服液態製劑包含河豚毒素、助溶齊U、增溶劑、抗氧化劑、防腐劑、開放血腦屏障的高滲透物質和輔料。
2.根據權利要求I所述的河豚毒素口服液態製劑，其特徵在於，所述的助溶劑選自醋酸、磷酸或檸檬酸及其鈉鹽。
3.根據權利要求I所述的河豚毒素口服液態製劑，其特徵在於，所述的增溶劑選自聚乙烯吡咯烷酮、聚氧乙烯氫化蓖麻油ffiL-40、聚氧乙烯氫化蓖麻油HEL-20中的一種或多種。
4.根據權利要求I所述的河豚毒素口服液態製劑，其特徵在於，所述的抗氧化劑選自還原型穀胱甘肽、乙二胺四乙酸二鈉、植酸、抗壞血酸及其鈉鹽或異抗壞血酸及其鈉鹽。
5.根據權利要求I所述的河豚毒素口服液態製劑，其特徵在於，所述的防腐劑選自苯甲酸及其鹽類、山梨酸及其鹽類、脫氫乙酸及其鈉鹽、雙乙酸鈉、丙酸鈣、乳酸鈉或生物食品防腐劑。
6.根據權利要求I所述的河豚毒素口服液態製劑，其特徵在於，所述的開放血腦屏障的高滲透物質選自尿素、丙三醇、甘露醇、乙醇、半乳糖、果糖、葡萄糖、阿拉伯糖或乳醯胺。
7.根據權利要求I所述的河豚毒素口服液態製劑，其特徵在於，所述的輔料為可食用非油脂類物質。
8.根據權利要求I所述的河豚毒素口服液態製劑，其特徵在於，所述的可食用非油脂類物質選自液體聚乙二醇、丙三醇、甘油明膠、果膠、蜂膠、海藻膠或瓊脂。
9.根據權利要求I所述的河豚毒素口服液態製劑，其特徵在於，所述的液體聚乙二醇選自 PEG-200、PEG-300、PEG-400 或 PEG-600。
10.根據權利要求1-9中任意一項所述的河豚毒素口服液態製劑的製備方法，其特徵在於，包括以下步驟將河豚毒素通過助溶劑、增溶劑充分溶解，添加抗氧化劑、防腐劑，以及開放血腦屏障的高滲透物質，然後溶入輔料，製成河豚毒素口服液態製劑。
全文摘要
本發明提供了一種河豚毒素口服液態製劑及其製備方法，所述的口服液態製劑包含河豚毒素、助溶劑、增溶劑、抗氧化劑、防腐劑、開放血腦屏障的高滲透物質和輔料。所述的製備方法包括將河豚毒素通過助溶劑、增溶劑充分溶解，添加抗氧化劑、防腐劑，以及開放血腦屏障的高滲透物質，然後溶入輔料，製成河豚毒素口服液態製劑。本發明的河豚毒素口服液態製劑可用於鎮痛和戒除藥物依賴性，具有起效迅速、藥效持久，安全性強等特徵，產品質量控制具有可操作性。
文檔編號A61P25/30GK102784102SQ20121030953
公開日2012年11月21日 申請日期2012年8月28日 優先權日2012年8月28日
發明者湯波瀾, 趙繼紅 申請人:湯波瀾, 趙繼紅