一種提高酵素中活性sod酶的製備方法
2023-06-12 18:01:51 1
一種提高酵素中活性sod酶的製備方法
【專利摘要】本發明公開了一種提高酵素中活性SOD酶的製備方法。包括：分別製備蟲草發酵菌液和雲芝發酵菌液；製備水果蔬菜食用菌酵素髮酵液；蟲草發酵菌液和雲芝發酵菌液依次連續在食用菌酵素中發酵；機械破碎擠壓，收集發酵液體步驟。本發明結合酵素生產實際，在發酵工藝中增加蟲草菌液和雲芝菌液兩步發酵，在經過機械強力破碎細胞，更有益於SOD酶從細胞內向外流出，本發明工藝製備方法提高了通過發酵製備的活性SOD酶含量。
【專利說明】—種提高酵素中活性SOD酶的製備方法
【技術領域】
[0001]本發明屬於生物發酵【技術領域】，尤其屬於一種通過發酵方法提高酵素中活性SOD酶含量的製備方法。
【背景技術】
[0002]超氧化歧化酶0rgotein(Superoxide Dismutase, SOD),別名肝蛋白、奧谷蛋白，簡稱:S0D。SOD是一種源於生命體的活性物質，能消除生物體在新陳代謝過程中產生的有害物質。SOD是氧自由基的自然天敵，是機體內氧自由基的頭號殺手，是生命健康之本。對人體不斷地補充SOD具有抗衰老的特殊效果，SOD被視為生命科技中最具神奇魔力的酶、人體內的垃圾清道夫。
[0003]超氧化歧化酶是一種新型酶製劑。它在生物界的分布極廣，幾乎從動物到植物，甚至從人到單細胞生物，都有它的存在。SOD是生物體內重要的抗氧化酶，廣泛分布於各種生物體內，如動物，植物，微生物等。SOD具有特殊的生理活性，是生物體內清除自由基的首要物質。
[0004]SOD在生物體內的高低意味著衰老的直觀指標；現已證實，由氧自由基引發的疾病多達60多種。SOD可對抗與阻斷因氧自由基對細胞造成的損害，並及時修復受損細胞。由於現代生活壓力，環境汙染，各種輻射和超量運動都會造成氧自由基大量形成；因此，生物抗氧化機制中SOD的地位越來越重要！
[0005]近年來，經過各國科學家們的不懈努力研究、實驗、一致證明，外源SOD —旦進入人體內血液後，進入微循環，就能有效地保護機體細胞裡的脂質、蛋白質、DNA、細胞膜等生命物質，使它們免受人體內多餘的超氧陰離子自由基氧離子和羥自由基的破壞，增強機體細胞和各種重要器官的免疫功能，對治療自身免疫性疾病，病毒性疾病，心血管疾病，如各種炎症、高血壓、血栓病、糖尿病、風溼關節炎、紅斑狼瘡和癌症等，有特殊功效，對輻射有防護作用。所以，SOD被稱為是21世紀最有開發前途的藥用酶。
[0006]目前，SOD的生產主要是從動物血液或肝臟中提取，由於資源有限而且容易造成汙染。鑑於動物血液來源困難，許多研究者開始利用微生物的大規模培養優勢以製備，因此，不少學者也積極探索用微生物發酵生產S0D。
[0007]現有製取SOD技術有多種，包括從動物血液中、植物及果實中製取S0D，用微生物發酵方法製取S0D，以及用基因重組的方法製備Rh-SOD。植物中更多存在的是Cu-Zn-SOD，Mn-SOD較少。利用微生物發酵的方法製備出的SOD含量低，因此，在微生物發酵工程安全的製備方法中，需要進一步研究如何通過自然發酵方式提高SOD含量，獲得SOD含量更高的有益物質。
【發明內容】
[0008]本發明根據現有技術的不足公開了一種提高酵素中活性SOD酶的製備方法。本發明要解決的問題是提供一種通過微生物發酵工程安全製備更高含量活性SOD的方法，本發明還提供了一種製備活性SOD的微生物發酵酵素複合菌劑。
[0009]本發明通過以下技術方案實現:
[0010]提高酵素中活性SOD酶製備方法，包括以下步驟:
[0011]I)分別製備蟲草發酵菌液和雲芝發酵菌液；
[0012]2)製備水果蔬菜食用菌酵素髮酵液；
[0013]3)蟲草發酵菌液和雲芝發酵菌液依次連續在食用菌酵素中發酵；
[0014]4)機械破碎擠壓，收集發酵液體。
[0015]進一步所述步驟包括:
[0016]I)分別製備蟲草發酵菌液和雲芝發酵菌液:
[0017]培養基按以下重量比例製備:葡萄糖10份，蛋白腖5份，MgSO4.7H201份，KH2P042份，檸檬酸銨I份，水1000份；在121°C下滅菌30分鐘，冷卻；
[0018]製備蟲草發酵菌液，取蟲草原種，在無菌環境下按重量比5%的接種量接種到製備的液體培養基中，然後放於轉速180r/min的搖床上，在18°C黑暗的環境下培養7_10天，得到蟲草菌液；
[0019]製備雲芝發酵菌液，取雲芝原種，在無菌環境下按重量比5%的接種量接種到製備的液體培養基中，然後放於轉速180r/min的搖床上，在溫度25_28°C的環境下培養7_10天，製備得到雲芝菌液；
[0020]2)製備水果蔬菜食用菌酵素髮酵液；
[0021 ] 3 )將步驟2 )製得的水果蔬菜食用菌酵素髮酵液在發酵後30-35天後，加入步驟I)製備的蟲草菌液，加入量是為酵素髮酵液重量的2-5%，然後在自然室溫下繼續發酵60-70天；然後繼續加入步驟I)製備的雲芝菌液，加入量是原酵素髮酵液重量的2-5%，然後在溫度25-28 °C下繼續發酵60-70天；
[0022]4)將步驟3)得到的發酵液和發酵渣經過機械破碎擠壓，收集液體得到SOD酶發酵液。
[0023]上述步驟2)製備水果蔬菜食用菌酵素髮酵液可以採用水果，蔬菜及食用菌為原料通過自然發酵得到。
[0024]上述步驟2)製備水果蔬菜食用菌酵素髮酵液還可以採用水果，蔬菜及食用菌為發酵原料，加入相對於發酵原料10-15%重量份的酵素複合菌劑，密封放於自然室溫下保存發酵二個月以上得到；所述酵素複合菌劑由以下結構數量比例的成分組成，酵母菌:乳酸菌:醋酸菌:雙歧桿菌:嗜熱鏈球菌=18?25: 35?45: 15?22: 18?25: 8?10。採用上述提供的酵素複合菌劑製備的發酵液製備活性SOD酶，可以進一步提供活性SOD酶的含量。
[0025]本發明採用蟲草菌液和雲芝菌液兩步發酵。蟲草菌:蟲草是北冬蟲草的簡稱，也叫蛹蟲草或蛹草，俗名不老草，是蟲，菌結合的藥用真菌，現代珍稀中草藥，北冬蟲夏草屬於真菌門，子囊菌綱，肉座菌目，麥角菌科，蟲草屬。它主要生長在我國的北方增加地區。主要成分是蟲草素、蟲草多糖、蟲草酸、SOD酶、多肽(蛋白質)，特別是能產生高含量的SOD酶活性物質。雲芝菌:雲芝以其生長周期相對較短，菌絲體生物量較高，發酵液中SOD總活力相對較高，且在發酵過程中可以產生濃鬱果香味的特點。
[0026]本發明有益性，實驗檢測證明:本發明結合酵素生產實際，在發酵工藝中增加蟲草菌液和雲芝菌液兩步發酵，在經過機械強力破碎細胞，更有益於SOD酶從細胞內向外流出，本發明工藝製備方法提高了通過發酵製備的活性SOD酶含量。
【具體實施方式】
[0027]下面通過實施例對本發明進行具體的描述，本實施例只用於對本發明進行進一步的說明，但不能理解為對本發明保護範圍的限制，本領域的技術人員根據上述本發明的內容作出的一些非本質的改進和調整也屬於本發明保護的範圍。
[0028]提高酵素中活性SOD酶製備:
[0029]I)分別製備蟲草發酵菌液和雲芝發酵菌液:
[0030]培養基按以下重量比例製備:葡萄糖10份，蛋白腖5份，MgSO4.7H201份，KH2P042份，檸檬酸銨I份，水1000份；在121°C下滅菌30分鐘，冷卻；
[0031]製備蟲草發酵菌液，取蟲草原種，在無菌環境下按重量比5%的接種量接種到製備的液體培養基中，然後放於轉速180r/min的搖床上，在18°C黑暗的環境下培養7_10天，得到蟲草菌液；
[0032]製備雲芝發酵菌液，取雲芝原種，在無菌環境下按重量比5%的接種量接種到製備的液體培養基中，然後放於轉速180r/min的搖床上，在溫度25_28°C的環境下培養7_10天，製備得到雲芝菌液；
[0033]2)製備水果蔬菜食用菌酵素髮酵液:
[0034]本例採用水果，蔬菜及食用菌為發酵原料,加入相對於發酵原料10-15%重量份的酵素複合菌劑，密封放於自然室溫下保存發酵二個月以上得到；所述酵素複合菌劑由以下結構數量比例的成分組成，酵母菌:乳酸菌:醋酸菌:雙歧桿菌:嗜熱鏈球菌=18?25:35?45: 15?22: 18?25: 8?10。採用上述提供的酵素複合菌劑製備的發酵液製備活性SOD酶，可以進一步提供活性SOD酶的含量。
[0035]3)將步驟2)製得的水果蔬菜食用菌酵素髮酵液在發酵後30-35天後，加入步驟I)製備的蟲草菌液，加入量是為酵素髮酵液重量的2-5%，然後在自然室溫下繼續發酵60-70天；然後繼續加入步驟I)製備的雲芝菌液，加入量是原酵素髮酵液重量的2-5%，然後在溫度25-28 °C下繼續發酵60-70天；
[0036]4)將步驟3)得到的發酵液和發酵渣經過機械破碎擠壓，收集液體得到SOD酶發酵液。
[0037]本發明方法製備活性SOD酶對比實驗
[0038]實驗生產方法:在酵素製備工藝中，總共四批酵素生產原液，其中有一批為對照組，定期進過時間段進行SOD酶的檢測。
[0039]四批酵素原液的原料是用水果、蔬菜食用菌等為原料混合後，平均分成四份製成。在第一批、第二批、第三批中按本發明方法操作進行發酵處理，第四批為空白對照組，自然發酵處理，然後定期同時測定每批次的SOD酶的活性含量。
[0040]檢測方法:採用NBT (四唑氮藍)光化還原法測定SOD的活力。
[0041]檢測結果如下:
[0042][0043]
【權利要求】
1.一種提高酵素中活性SOD酶製備方法，其特徵在於包括以下步驟: 1)分別製備蟲草發酵菌液和雲芝發酵菌液；2)製備水果蔬菜食用菌酵素髮酵液；3)蟲草發酵菌液和雲芝發酵菌液依次連續在食用菌酵素中發酵；4)機械破碎擠壓,收集發酵液體。
2.根據權利要求1所述的提高酵素中活性SOD酶製備方法，其特徵在於所述步驟是: O分別製備蟲草發酵菌液和雲芝發酵菌液: 培養基按以下重量比例製備:葡萄糖10份，蛋白腖5份，MgSO4.7H201份，KH2P042份，檸檬酸銨I份，水1000份；在121°C下滅菌30分鐘，冷卻； 製備蟲草發酵菌液，取蟲草原種，在無菌環境下按重量比5%的接種量接種到製備的液體培養基中，然後放於轉速180r/min的搖床上，在18°C黑暗的環境下培養7_10天，得到蟲草菌液； 製備雲芝發酵菌液，取雲芝原種，在無菌環境下按重量比5%的接種量接種到製備的液體培養基中，然後放於轉速180r/min的搖床上，在溫度25_28°C的環境下培養7_10天，製備得到雲芝菌液； 2)製備水果蔬菜食用菌酵素髮酵液； 3)將步驟2)製得的水果蔬菜食用菌酵素髮酵液在發酵後30-35天後，加入步驟I)製備的蟲草菌液，加入量是為酵素髮酵液重量的2-5%，然後在自然室溫下繼續發酵60-70天；然後繼續加入步驟I)製備的雲芝菌液，加入量是原酵素髮酵液重量的2-5%，然後在溫度25-28 °C下繼續發酵60-70天； 4)將步驟3)得到的發酵液和發酵渣經過機械破碎擠壓，收集液體得到SOD酶發酵液。
3.根據權利要求2所述的提高酵素中活性SOD酶製備方法，其特徵在於所述2)製備水果蔬菜食用菌酵素髮酵液是採用水果，蔬菜及食用菌為原料通過自然發酵得到。
4.根據權利要求2所述的提高酵素中活性SOD酶製備方法，其特徵在於所述2)製備水果蔬菜食用菌酵素髮酵液是採用水果，蔬菜及食用菌為發酵原料，加入相對於發酵原料10-15%重量份的酵素複合菌劑，密封放於自然室溫下保存發酵二個月以上得到；所述酵素複合菌劑由以下結構數量比例的成分組成，酵母菌:乳酸菌:醋酸菌:雙歧桿菌:嗜熱鏈球菌=18 ?25: 35 ?45: 15 ?22: 18 ?25: 8 ?10。
【文檔編號】A23L1/29GK103549428SQ201310539885
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2013年11月4日 優先權日:2013年11月4日
【發明者】趙輝, 萬強 申請人:西藏月王生物技術有限公司