一種用於降低血清膽固醇的益生菌製劑及其製備方法
2023-06-01 08:19:31
專利名稱：一種用於降低血清膽固醇的益生菌製劑及其製備方法
技術領域：
本發明涉及一種益生菌製劑，具體地說，涉及一種用於改善腸道微生態平衡，降低 人或動物血清膽固醇的益生菌製劑及其製備方法。
背景技術：
已有的益生菌的研究也只限於對單個菌種的研究，沒有針對益生菌群相互促進、 共生，協調促進改善降低人或動物血清膽固醇的研究，也沒有協調促進降低人或動物血清 膽固醇的益生菌群製劑、飼料添加劑及工藝。
膽固醇是人體內重要的固醇類物質。但是，圍繞著膽固醇與人體健康的關係，在 世界範圍內食品學界和食品工業界一直存在很大的爭議自上世紀30年代國外研究者得出 「血管壁增厚即動脈粥樣硬化症是不正常膽固醇代謝的結果」這一結論以來，已有越來越 多的試驗和研究表明膽固醇與高脂血症、冠心病等心血管疾病間的關係，對此，有人描述為 "one to two」規律，即降低的血清膽固醇可隨之減少2%患冠心病的危險性。儘管存在 著降血脂化學藥物，但其可使轉氨酶增高等不良反應使人們致力於探索和研究新的安全有 效的調脂藥物，以嗜酸乳桿菌和雙歧桿菌為代表的微生態製劑得到了廣泛青睞。益生菌作 為「有生命的綠色藥品」，已被越來越多的研究證明具有優效、安全、符合生態的諸多優點， 被越來越多的應用於人類疾病的各個領域。
目前我國有近1/3的成年人的血脂偏高，高脂血症現在已成為人類健康的第一隱 形殺手，因此治療高血脂是擺在醫學界的首要課題。為了更好的了解益生菌是否具有體內 降解膽固醇的功能高脂動物模型在益生乳酸菌降膽固醇功能性實驗研究中得到越來越廣 泛的應用。高脂高膽固醇飼料可以誘發動物脂代謝紊亂，血脂水平發生變化血清膽固醇 (TC)和肝臟膽固醇含量升高，降血清功能性實驗通常做法是飼餵高脂高膽固醇飼料建造高 脂實驗動物模型後飼餵實驗動物實驗樣品，通過測定動物血清脂類含量的變化來確定實驗 樣品對動物血脂的影響效果。
益生菌降膽固醇的研究現狀，近年來國內外的學者在益生菌降膽固醇方面做了大 量的研究。Akalin等應用小鼠作為模型，給小鼠飼餵含有嗜酸乳桿菌的酸奶和鮮奶，並研 究了嗜酸乳桿菌對小鼠血清中TC、TG和LDL的影響，發現嗜酸乳桿菌可以降低小鼠血清中 這些脂蛋白的含量。肖琳琳從西藏傳統發酵乳中分離篩選得到一株在液體培養基中降膽 固醇達到51. 8%的乾酪乳桿菌(LactcAacil Ius casei)，用這株乾酪乳桿菌製備的菌懸 液灌胃高脂模型小鼠14d後，發現實驗組小鼠血清中膽固醇和甘油三指濃度較對照組顯著 降低(P <0.01)，同時HDL-膽固醇濃度有所增加，動脈硬化指數低於對照組的水平。據報 道，某些微生物能在以膽固醇為唯一碳源的培養基上生長，通過降解膽固醇來獲得碳源和 能量，並且有些微生物可以將膽固醇吸附在自身的細胞膜上，進而同化膽固醇為細胞膜的 組成成分。能夠降解膽固醇的微生物種類很多，目前報導的主要有諾卡氏菌屬(Noccardia eythropoli s ；N. rhodochrous)、鏈毒菌屬(Streptomyces Iividans ；S. hygroscopicus)、 紅球菌屬(Rhodococcuse、equi ；R. erythropoli s)短桿菌屬(Brevibacterium)、棒狀桿菌屬(Corynebacrerium spp)、節桿菌屬(Arthrobacter s implex)、假單胞菌屬 尹(Pseudomonas fluorescens)等。這些菌株都可產生較高活性的膽固醇氧化酶或 膽鹽水解酶。有的可產生較高活性的胞內酶，如諾卡氏菌屬(Noccardiaeythropolis ； N. rhodochrous)；還有的可產生較高活性的胞外酶，如鏈黴菌屬(s. Iividans)和短桿菌屬 (B. steroIicum)等。
益生菌的研究與應用，在日本、法國、俄羅斯、德國等國家較受到重視，而且具有專 業化和系統性的研究。就目前的研究與應用水平而言，日本處於較領先的地位。早在上一 世紀30年代初時，日本的京都帝國大學微生物教研室的代田稔博士就已成功地分離出來 自於腸道的乳酸桿菌，這種有益菌在經過強化培養後，使之能活著到達腸內生存。而這種後 來被人們稱之為益力多菌的乳酸桿菌，目前已被廣泛地運用在日本的食品、飲品、醫學等領 域。其中在乳製品上的運用成績十分驚人，據國外有關公司調查，日本在2000/2001年由益 生菌所生產的乳製品，其總產值就已達22億美元。而今的益力多，在日本已無人不曉，利用 這種益生菌製作的乳製品成功地打入了國際奶品飲料市場，目前已攻下了 25個國家的城 池，甚至在這些國家建造了 18家加工廠，使目前全球每天至少2500萬人在飲用這種產品。 2005年整個歐洲市場益生菌原料的市場規模估計約為0. 35億歐元，到2010年能夠達到 1.2億歐元。益生菌市場的產值估計為25億歐元。目前市場上大約有1000多種不同的益 生菌產品。歐洲最主要的4類益生菌產品為1)傳統的發酵乳製品，例如酸奶。2)益生菌 飲料產品。幻濃縮的凍幹的以膠囊、片劑或粉劑銷售的益生菌產品。4)新型的益生菌產品 形式，是益生菌在培養基或腸道內代謝的產物。其中，法國含有雙歧桿菌和嗜酸乳桿菌產品 已經增長了 300%，佔總乳銷售量的4%。
國外益生菌開發日益深入，在發酵乳中添加益生菌，可以大大提高發酵乳的營養 功效。除了改善對乳成分的消化吸收外，還能促進腸道對礦物質的吸收和利用。這一研究 成果激發了益生菌食品熱。
益生菌在我國的研究與利用，起步較遲。基礎研究和開發利用，與發達國相比，尚 差一定的距離。隨著人們生活水平的提高以及對自身保健功能的需求，益生菌的應用逐漸 受到了重視，它已被人們科學地運用到食品工業生產中，特別是在乳製品和一些功能性的 食品中已廣為運用。目前我國已大量使用雙歧桿菌和乳桿菌這些有益菌生產營養、可口兼 有保健功能的酸牛奶。
據衛生部網站消息，衛生部辦公廳2010年4月近日印發《可用於食品的菌種名單》 的通知，根據《食品安全法》及其實施條例的有關規定，衛生部組織制定了《可用於食品的菌 種名單》。
發明內容
本發明要解決的問題是針對以上不足，提供一種能夠降低人體或動物血清膽固醇 的益生菌製劑及其製備方法。
為解決以上問題，本發明的技術方案如下一種用於降低血清膽固醇的益生菌制 劑，其特徵在於所述益生菌製劑包括以下體積配比的成分
屎腸球菌10-30份、鼠李糖乳桿菌10-30份和嗜酸乳桿菌10_30份。
作為上述技術方案的進一步改進
所述益生菌製劑包括以下體積配比的成分
屎腸球菌20份、鼠李糖乳桿菌20份和嗜酸乳桿菌20份。
所述製備方法包括以下步驟
(1)屎腸球菌發酵液的製備將屎腸球菌菌株種子液接入已經滅菌後的培養 基中，培養基含有重量比為1 % -3 %的葡萄糖、0. 5-1. 5 %的蛋白腖、0. 5-1 %的酵母浸 膏、0. 1-0. 5 %的Nei2HPO4和0. 1-0. 5% KH2PO4，餘量為作為溶劑的水，接種量為0. 3 %，在 320C _38°C下厭氧發酵後，得到屎腸球菌發酵液；
(2)鼠李糖乳桿菌發酵液的製備鼠李糖乳桿菌菌株種子液接入已經滅菌後的培 養基中，培養基含有重量比為-3%的葡萄糖、0. 5-1. 5%的蛋白腖、0. 5-1%的酵母浸 膏，餘量為作為溶劑的水，接種量為0. 3%，在32°C _36°C下厭氧發酵後，得到鼠李糖乳桿菌 發酵液；
(3)嗜酸乳桿菌發酵液的製備嗜酸乳桿菌菌株種子液接入已經滅菌後的養基 中，培養基含有重量比為-3%的葡萄糖、0. 5-1. 5%的蛋白腖、0. 5-1%的酵母浸膏，餘 量為作為溶劑的水，接種量為0. 3%，在32°C _36°C下厭氧發酵後，得到嗜酸乳桿菌發酵液；
(4)將屎腸球菌發酵液、鼠李糖乳桿菌發酵液和嗜酸乳桿菌發酵液按照以上比例 混合，得到降低血清膽固醇的益生菌製劑。
本發明採用以上技術方案，具有以下優點乳酸菌降膽固醇機制有多種方式，對 3-羥基-3-甲基戊二醯COA還酶的抑制作用，該酶是膽固醇體內生物合成的限速酶；通過 膽鹽水解酶的作用，將部小腸內的膽鹽水解，水解後的膽鹽能與食物中的膽固醇發生共沉 澱作用，從而促進食源中的膽固醇向糞便中轉移；3.菌體對膽固醇的同化作用，直接分解 膽固醇。屎腸球菌、雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌三種菌分別在人或動物的不同腸段上定植，其降 膽固醇的作用機制也不同，將三種菌組合起來可以發揮他們在各自腸段以不同機制共同發 揮作用，優勢互補。
下面結合實施例對本發明進行詳細說明。
具體實施方式
實施例，一種用於降低血清膽固醇的益生菌製劑，包括以下體積配比的成分屎腸 球菌20份、鼠李糖乳桿菌20份和嗜酸乳桿菌20份。
益生菌製劑的製備方法，其特徵在於所述製備方法包括以下步驟
(1)屎腸球菌發酵液的製備將屎腸球菌菌株種子液接入已經滅菌後的培養 基中，培養基含有重量比為1 % -3 %的葡萄糖、0. 5-1. 5 %的蛋白腖、0. 5-1 %的酵母浸 膏、0. 1-0. 5 %的Nei2HPO4和0. 1-0. 5% KH2PO4，餘量為作為溶劑的水，接種量為0. 3 %，在 320C _38°C下厭氧發酵後，得到屎腸球菌發酵液；
(2)鼠李糖乳桿菌發酵液的製備鼠李糖乳桿菌菌株種子液接入已經滅菌後的培 養基中，培養基含有重量比為1 % -3 %的葡萄糖、0. 5-1. 5 %的蛋白腖、0. 5-1 %的酵母浸 膏，餘量為作為溶劑的水，接種量為0. 3%，在32°C _36°C下厭氧發酵後，得到鼠李糖乳桿菌 發酵液；
(3)嗜酸乳桿菌發酵液的製備嗜酸乳桿菌菌株種子液接入已經滅菌後的養基 中，培養基含有重量比為-3%的葡萄糖、0. 5-1. 5%的蛋白腖、0. 5-1%的酵母浸膏，餘5量為作為溶劑的水，接種量為0. 3%，在32°C _36°C下厭氧發酵後，得到嗜酸乳桿菌發酵液；
(4)將屎腸球菌發酵液、鼠李糖乳桿菌發酵液和嗜酸乳桿菌發酵液按照以上比例 混合，得到降低血清膽固醇的益生菌製劑。
在對屎腸球菌降膽固醇作用研究中，從142份健康兒童糞便中分離出一株具有在 體外降解膽固醇作用的菌株，經中科院微生物研究所鑑定為屎腸球菌。通過藥效學研究證 明與飼以高脂飼料的對照組大鼠相比，在實驗的第14J8天分別測定大鼠血清TC濃度低與 對照組，並有顯著性差異(P < 0. 05)。通過計算顯示高中劑量組HDL/TC比值高與對照組、 動脈硬化指數低與對照組並有顯著性差異(P < 0. 05)。(見表1、表2、表3、表4)。根據 《保健食品功能學評價程序和檢驗方法》的判定標準，可以認為屎腸球菌具有調節大鼠血脂 的作用。通過人體實驗證明本菌具有同樣的作用(見表幻。藥理學研究證明本菌無毒、無 害、安全。是人體內一種具有調節膽固醇代謝作用的正常生理性細菌。生產工藝研究表明， 屎腸球菌DM891U9菌株經篩選、馴化後，採用發酵、濃縮、冷凍乾燥等工藝可製成穩定的微 生態調節劑。
表1 實驗前後各組大鼠體重變化(g，M士 SD，η = 10)
權利要求
1.一種用於降低血清膽固醇的益生菌製劑，其特徵在於所述益生菌製劑包括以下體 積配比的成分屎腸球菌10-30份、鼠李糖乳桿菌10-30份和嗜酸乳桿菌10-30份。
2.如權利要求1所述的一種用於降低血清膽固醇的益生菌製劑，其特徵在於所述益 生菌製劑包括以下體積配比的成分屎腸球菌20份、鼠李糖乳桿菌20份和嗜酸乳桿菌20份。
3.如權利要求1或2所述用於降低血清膽固醇益生菌製劑的製備方法，其特徵在於 所述製備方法包括以下步驟(1)屎腸球菌發酵液的製備將屎腸球菌菌株種子液接入已經滅菌後的培養基中， 培養基含有重量比為-3%的葡萄糖、0. 5-1. 5%的蛋白腖、0. 5-1%的酵母浸膏、 0. 1-0. 5 %的Na2HPO4和0. 1-0. 5 % KH2PO4,餘量為作為溶劑的水，接種量為0. 3 %，在 320C _38°C下厭氧發酵後，得到屎腸球菌發酵液；(2)鼠李糖乳桿菌發酵液的製備鼠李糖乳桿菌菌株種子液接入已經滅菌後的培養基 中，培養基含有重量比為1 % -3 %的葡萄糖、0. 5-1. 5 %的蛋白腖、0. 5-1 %的酵母浸膏，餘 量為作為溶劑的水，接種量為0.3%，在32°C _36°C下厭氧發酵後，得到鼠李糖乳桿菌發酵 液；(3)嗜酸乳桿菌發酵液的製備嗜酸乳桿菌菌株種子液接入已經滅菌後的養基中，培 養基含有重量比為1 % -3%的葡萄糖、0. 5-1. 5%的蛋白腖、0. 5-1 %的酵母浸膏，餘量為作 為溶劑的水，接種量為0. 3%，在32°C _36°C下厭氧發酵後，得到嗜酸乳桿菌發酵液；(4)將屎腸球菌發酵液、鼠李糖乳桿菌發酵液和嗜酸乳桿菌發酵液按照以上比例混合， 得到降低血清膽固醇的益生菌製劑。
全文摘要
本發明公開了一種用於降低血清膽固醇的益生菌製劑，包括屎腸球菌10-30份、鼠李糖乳桿菌10-30份和嗜酸乳桿菌10-30份。優點是1.對3-羥基-3-甲基戊二醯COA還酶的抑制作用，該酶是膽固醇體內生物合成的限速酶；2.通過膽鹽水解酶的作用，將部小腸內的膽鹽水解，水解後的膽鹽能與食物中的膽固醇發生共沉澱作用，從而促進食源中的膽固醇向糞便中轉移；3.菌體對膽固醇的同化作用，直接分解膽固醇。屎鏈球菌、雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌三種菌分別在人或動物的不同腸段上定植，其降膽固醇的作用機制也不同，將三種菌組合起來可以發揮他們在各自腸段以不同機制共同發揮作用，優勢互補。
文檔編號A61K35/74GK102028713SQ201010590788
公開日2011年4月27日 申請日期2010年12月12日 優先權日2010年12月12日
發明者夏學德, 孟祥宜, 曲嫣紅, 袁傑利 申請人:夏學德, 曲嫣紅