抗-fgfr3抗體及其使用方法

2023-06-01 16:17:01

專利名稱：抗-fgfr3抗體及其使用方法
技術領域：
本發明總體上涉及分子生物學領域。更具體地，本發明涉及抗-FGFR3抗體及其用途。
背景技術：
成纖維細胞生長因子(FGFs)和它們的受體(FGFRs)在胚胎發育、組織內環境穩定和代謝過程中具有關鍵性的作用(1-3)。在人類中，存在22種FGFs(FGFl-14，FGF16-23) 和4種具有酪氨酸激酶結構域的FGF受體(FGFR1-4)。FGFR由具有兩個或三個免疫球蛋白樣結構域(IgDl-3)的細胞外配體結合區，單次跨膜區和細胞質的分開的酪氨酸激酶結構域組成。FGFR1，2和3各自具有兩個主要的選擇性剪接同種型，稱為Inb和IIIc。這些同種型在後半個IgD3中有約50個胺基酸的差異，並且具有截然不同的組織分布和配體特異性。通常，IIIb同種型見於上皮細胞中，而IIIc在間充質細胞中表達。在與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖(h印aran sulfat印roteoglycans)協同結合FGF後，FGFR 二聚化並且在特定的酪氨酸殘基處磷酸化。這有助於募集關鍵性的銜接蛋白(adaptor protein)，諸如FGFR 底物2a (FRS2ci)，導致多個信號傳導級聯的激活，包括促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)和 PII-AKT途徑(1，3，4)。因此，FGF和它們的同源受體以前後相關(context-d印endent)的方式調節眾多的細胞過程，包括增殖、分化、遷移和存活。異常激活的FGFRs已經被認為與特定的人惡性腫瘤有關(1，5)。特別地，W4 ； 14) (pl6. 3 ；q32)染色體易位發生在約15_20%的多發性骨髓瘤患者中，導致FGFR3的過度表達並且與較短的總存活時間相關(6-9)。FGFR3也與賦予培養中的骨髓瘤細胞系以化學抗性有關(10)，這與t G ;14) +患者對常規化療的臨床反應差相一致(8)。突變活化的FGFR3的過度表達足以誘導造血幹細胞和成纖維細胞(11-14，15)、轉基因小鼠模型(16)、和鼠骨髓移植模型(16，17)中的癌性轉化。因此，FGFR3已經被提議作為多發性骨髓瘤中的潛在治療靶標。實際上，靶向FGFRs的幾種小分子抑制劑，儘管對FGFR3沒有選擇性並且針對某些其他激酶具有交叉抑制活性，但已經證明針對培養中和小鼠模型中的FGFR3-陽性骨髓瘤細胞具有細胞毒性(18-22)。還已經記載了在大部分膀胱癌症中存在FGFR3過度表達03，對)。此外，已經在60-70%的乳頭狀膀胱癌和16-20%的肌肉侵襲性膀胱癌中鑑定到FGFR3的體細胞激活突變04，25)。在細胞培養實驗中，RNA幹擾(11，26)或FGFR3單鏈Fv抗體片段抑制膀胱癌細胞增殖、2 )。近來的研究證明FGFR3抗體-毒素綴合物通過FGFR3-介導的毒素遞送至腫瘤而減弱膀胱癌細胞系的異種移植物的生長08)。然而，仍然不清楚FGFR3 信號傳導是否的確是膀胱腫瘤體內生長的致癌驅動力。此外，基於體內模型還沒有明確在膀胱癌中靶向FGFR3的治療可能性。涉及FGFR3和抗-FGFR3抗體的出版物包括美國專利公開號 2005/0147612 ;Rauchenberger 等，J BiolChem(生物化學雜誌)278 00) 38194-38205(2003) ；W02006/048877 ；Martinez-Torrecuadrada 等，(2008)Mol Cancer Ther(分子癌症治療)7(4) :862-873 ；W02007/144893 ；Trudel 等· (2006) 107(10) 4039-4046 ；Martinez-iTorrecuadrada 等 Q005) Clin Cancer Res (臨床癌症研究)11 (17) 6280-6290 ；Gomez-Roman 等 U005)Clin Cancer Res(臨床癌症研究)11 :459-465 ； Direnzo, R 等 O007)Proceedings of AACR Annual Meeting(AACR 年會進展)，摘要 No. 2080 ；W02010/002862。很明顯持續存在著對具有臨床屬性的藥劑的需求，所述藥劑最適於開發為治療劑。本文所述的發明滿足此需求並且提供其他益處。本文引用的所有參考文獻，包括專利申請和出版物的全部內容通過引用合併。發明概述本發明部分地基於多種FGFR3結合劑(諸如抗體，及其片段)的鑑定。FGFR3呈現了重要的和有利的治療靶標，並且本發明基於所述試劑與FGFR3的結合提供了組合物和方法。本發明的FGFR3結合劑，如本文所述，提供了用於靶向與FGFR3信號傳導途徑的表達和/或活性相關的病理學狀況的重要的治療劑和診斷劑。因此，本發明提供了與FGFR3結合相關的方法、組合物、試劑盒和製品。本發明提供了與FGFR3結合的抗體。在一個方面，本發明的特徵在於與FGFR3結合的分離抗體。在一些實施方案中，所述抗體結合FGFR3inb同種型和/或FGFR3IIIC同種型。在一些實施方案中，所述抗體結合突變的FGFR3(例如，FGFR3 IIIb R248C，S249C， G372C, Y375C, K652E，中的一種或多種和 / 或 FGFR3 IIIc R248C, S249C, G370C, Y373C, K650E中的一種或多種)。在一些實施方案中，所述抗體結合單體的FGFR3(例如，單體的 FGFR3IIIb和/或IIIc同種型)。在一些實施方案中，所述抗體促進單體FGFR3的形成，諸如通過穩定與二聚體FGFR3形式相關的單體FGFR3形式。在一個方面，本發明提供了分離的抗-FGFR3抗體，其中所述抗體的全長IgG形式以lxlO—7或更強的Kd結合人FGFR3。如本領域中眾所周知的那樣，配體與其受體的結合親合力可以使用多種測定中的任一種來測定，並且可以按照多種定量值來表示。因此，在一個實施方案中，結合親合力表示為Kd值並且反映固有的結合親合力(例如，具有最小化的抗體親抗原性效應(avidity effect) )0通常和優選地，結合親合力在體外測量，無論是在無細胞的環境中還是在細胞相關的環境中測量。本領域中已知的許多測定中的任一種，包括本文所述的那些，可以用來獲得結合親合力測量值，包括，例如，Biacore,放射免疫測定 (RIA)，和ELISA。在一些實施方案中，所述抗體的全長IgG形式以1χ10_8或更強的Kd，以 lxlO—9或更強的Kd，或以IxKTki或更強的Kd結合人FGFR3。通常，本發明的抗-FGFR3抗體是拮抗劑抗體。因此，在一個方面，所述抗-FGFR3 抗體抑制FGFR3活性(例如，FGFR3-IIIb和/或FGFR3-IIIc活性)。在一些實施方案中， 抗-FGFR3抗體(通常以二價形式)不具有實質的FGFR3激動劑功能。在一些實施方案中， 抗-FGFR3拮抗劑抗體(通常以二價形式)具有很少或沒有FGFR3激動劑功能。在一個實施方案中，本發明的抗體(通常以二價形式)不顯示超出本底水平的有統計學顯著性的FGFR3 激動劑活性水平。在一個方面，所述抗體與FGFR3的結合可以抑制所述受體與另一單位的所述受體的二聚作用，從而抑制所述受體的激活(至少部分由於缺乏受體二聚作用導致)。抑制可以是直接的或間接的。在一個方面，本發明提供了抗-FGFR3抗體，其不具有實質的凋亡活性(例如，不誘導細胞的凋亡，所述細胞例如，移行性細胞癌細胞或多發性骨髓瘤細胞，諸如包含FGFR3易位，諸如W4;14)易位的多發性骨髓瘤細胞)。在一些實施方案中，抗-FGFR3抗體擁有很少或沒有凋亡功能。在一些實施方案中，所述FGFR3抗體不顯示超出本底水平的有統計學顯著性的凋亡功能。在一個方面，本發明提供了抗-FGFR3抗體，其不誘導實質的TOFR3下調。在一些實施方案中，抗-FGFR3抗體誘導很少的或不誘導受體下調。在一些實施方案中，FGFR3抗體不誘導超出本底水平的有統計學顯著性的受體下調。在一個方面，本發明提供了抗-FGFR3抗體，其擁有效應子功能。在一個實施方案中，效應子功能包括抗體-依賴性細胞介導的細胞毒性(ADCC)。在一個實施方案中， 抗-FGFR3抗體(在一些實施方案中，裸抗-FGFR3抗體)能夠殺死細胞，在一些實施方案中， 殺死多發性骨髓瘤細胞(例如，包含易位，例如W4;14)易位的多發性骨髓瘤細胞)。在一些實施方案中，抗-FGFR3抗體能夠殺死每個細胞表達約10，000或更多個FGFR3分子(諸如每個細胞約 11，000，約 12，000，約 13，000，約 14，000，約 15，000，約 16，000，約 17，000，約 18，000或更多個FGFR3分子)的細胞。在其他實施方案中，所述細胞每個細胞表達約2000， 約3000，約4000，約5000，約6000，約7000，約8000，或更多個FGFR3分子。在一個方面，本發明的抗-FGFR3抗體抑制組成型FGFR3活性。在一些實施方案中， 組成型FGFR3活性是配體依賴性FGFR3組成型活性。在一些實施方案中，組成型FGFR3活性是配體不依賴性組成型FGFR3活性。在一個方面，抗-FGFR3抗體抑制包含對應於FGFR3_IIIbK248G的突變的FGFR3。如本文所使用的術語「包含對應於FGFR3-IIIbK248G的突變」理解為包涵FGFR3-IIIbK248G和 FGFR3-IIIce248c,以及另外的包含在對應於FGFR3-IIIb R248的位置處的R至C突變的FGFR3 形式。本領域普通技術人員理解如何比對FGFR3序列從而鑑定各個FGFR3序列之間的對應殘基,例如，比對FGFR3-IIIc序列與FGFR3_IIIb序列以鑑定FGFR3中對應FGFR3_IIIb中的R248位置的位置。在一些實施方案中，所述抗-FGFR3抗體抑制FGFR3_inbK248G和/或 FGFR3-III cK248C。在一個方面，抗-FGFR3抗體抑制包含對應於FGFR3_IIIbK652E的突變的FGFR3。為了方便起見，術語「包含對應於FGFR3-II IbK652E的突變「理解為包涵FGFR3-II IbK652E和 FGFR3-IIIck650e,以及另外的包含在對應於FGFR3-IIIb K652的位置處的K至E突變的FGFR3 形式。本領域普通技術人員理解如何比對FGFR3序列從而鑑定各個FGFR3序列之間的對應殘基,例如，比對reFR3-IIIc序列與FGFR3-inb序列以鑑定FGFR3中的對應FGFR3-IIIb中的K652位置的位置。在一些實施方案中，所述抗-FGFR3抗體抑制FGFR3_inbK652E和/或 FGFR3-II Ick650eo在一個方面，抗-FGFR3抗體抑制包含對應於FGFR3_IIIbS249G的突變的FGFR3。為了方便起見，術語「包含對應於FGFR3-IIIbS249G的突變〃理解為包涵FGFR3-IIIb ^49g和 FGFR3-IIIc S249C,以及另外的包含在對應於FGFR3_IIIb S249的位置處的S至C突變的 FGFR3形式。在一些實施方案中，所述抗-FGFR3抗體抑制FGFR3-IIIbs249c和/或FGFR3-IIIcS249C
O在一個方面，抗-FGFR3抗體抑制包含對應於FGFR3_inbG372G的突變的FGFR3。為了方便起見，術語「包含對應於FGFR3-IIIbG372G的突變〃理解為包涵FGFR3-IIIb G372G和 FGFR3-IIIc G370C,以及另外的包含在對應於FGFR3_IIIb G372的位置處的G至C突變的 FGFR3形式。在一些實施方案中，所述抗-FGFR3抗體抑制FGFR3-IIIbc372c和/或FGFR3-IIIc
G370C
ο在一個方面，抗-FGFR3抗體抑制包含對應於FGFR3_IIIbY375G的突變的FGFR3。為了方便起見，術語「包含對應於FGFR3-II Iby375c的突變「理解為包涵FGFR3-II Iby375c和 FGFR3-IIIcy373c,以及另外的包含在對應於FGFR3-IIIb S249的位置處的S至C突變的FGFR3 形式。在一些實施方案中，所述抗-FGFR3抗體抑制FGFR3-IIIbY375G和/或FGFR3-IIIcY373G。在一個方面，抗-FGFR3抗體抑制(a)FGFR3-IIIbK652E 和(b)FGFR3-IIIbE248C, FGFR3-IIIbY375C, FGFR3-IIIbs249c，和 FGFR3IIIb G372C 中的一種或多種。在一個方面，抗-FGFR3抗體抑制(a)FGFR3-IIIck650e 和(b)FGFR3-IIIce248c, FGFR3-IIIcy373c, FGFR3-IIIcs249g,和 FGFR3IIIc G370C 中的一種或多種。在一個方面，抗-FGFR3抗體抑制(a)FGFR3-IIIbE248C 和(b)FGFR3-IIIbK652E, FGFR3-IIIbY375C, FGFR3-IIIbs249c，和 FGFR3_IIIbG372C 中的一種或多種。在一個方面，抗-FGFR3抗體抑制(a)FGFR3-IIIcE248C 和(b)FGFR3-IIIck650e, FGFR3-IIIcy373c, FGFR3-IIIcS249G，和 FGFR3-IIIcg37qg 中的一種或多種。在一個方面，抗-FGFR3抗體抑制(a)FGFR3_IIIbG372C 和(b)FGFR3-IIIbK652E, FGFR3-IIIbY375C, FGFR3-IIIbs249c，和 reFR3_IIIbK248C 中的一種或多種。在一個方面，抗-FGFR3抗體抑制(a)FGFR3-IIIcg370c 和(b)FGFR3-IIIck650e, FGFR3-IIIcy373c, FGFR3-IIIcs249c，和 FGFR3-IIIck248c 中的一種或多種。在一個方面，抗-FGFR3 抗體抑制 FGFR3-II IbE248C, FGFR3-II IbK652E, FGFR3-II IbY375C, FGFR3-IIIb S249C，和 FGFR3_IIIb G372C。在一個方面，抗-fgfr3抗體抑制 fgfr3-i iice248c, fgfr3-i iick650e, fgfr3-i iicy373c, FGFR3-IIIc S249C，和 FGFR3_IIIc G370C。在一個方面，本發明提供了分離的抗-FGFR3抗體，其包含(a)至少一個、兩個、三個、四個或五個高變區(HVR)序列，所述高變區序列選自(i) HVR-Ll，其包含序列 Al-Al 1，其中 Al-All 是 RASQDVDTSLA (SEQ ID NO 87),(ii)HVR-L2，其包含序列 B1-B7，其中 B1-B7 是 SASFLYS(SEQ IDNO :88)，(iii)HVR-L3，其包含序列 C1-C9，其中 C1-C9 是 QQSTGHPQT(SEQ ID NO :89)，(iv) HVR-Hl，其包含序列 D1-D10，其中 Dl-DlO 是 GFTFTSTGIS (SEQ ID NO 84),(v)HVR-H2，其包含序列 E1-E18，其中 E1-E18 是 GRIYPTSGSTNYADSVKG(SEQ ID NO: 85)，和(vi)HVR-H3，其包含序列 F1-F20，其中 F1-F20 是 ARTYGIYDLYVDYTEYVMDY(SEQ ID NO 86)；和(b)至少一個變體HVR，其中所述變體HVR序列包含SEQ IDNOS 1-18，48-131和 140-145中所示的序列的至少一個殘基(至少兩個殘基，至少三個或更多個殘基)的修飾。 所述修飾合意的是置換、插入或缺失。
在一些實施方案中，HVR-Ll變體包含下列位置的任意組合中的1_6個(1，2，3，4， 5，或 6 個)置換:A5 (V 或 D)，A6 (V 或 I)，A7 (D，E 或 S)，A8 (T 或 I)，A9 (A 或 S)和 AlO (V 或 L)。在一些實施方案中，HVR-L2變體包含下列位置的任意組合中的1-2個(1或2個)置換B1 (S或G)，B4(F或S或Τ)和Β6 (Α或Y)。在一些實施方案中，HVR-L3變體包含下列位置的任意組合中的1-6個(1，2，3，4，5，或6個)置換C3 (G或S或Τ)，C4 (Τ或Y或Α)， C5 (G或S或T或A)，C6 (A或H或D或T或N)，C7⑴或P或幻，和C8 (S或Y或L或P或Q)。 在一些實施方案中，HVR-Hl變體包含下列位置的任意組合中的1-3個(1，2，或3個)置換 D3 (S或T)，D5 (W或Y或S或T)，D6 (S或G或T)。在一些實施方案中，HVR-H2變體包含下列位置的任意組合中的1-6個(1，2，3，4，5，或6)置換E2 (R或S)，E6 (Y或A或L或S或 T)，E7 (A或Q或D或G或Y或S或N或F)，E8 (A或D或G)，E9 (T或幻，ElO (K或F或T或 S)，Ell (Y 或 H或 N或 I)。在一個方面，本發明提供了分離的抗-FGFR3抗體，其包含(a)至少一個、兩個、三個、四個或五個高變區(HVR)序列，所述高變區序列選自(i)HVR-Ll，其包含序列 RASQXA2X3X4X5X6A,其中 &是￥或0，)(2是￥或1，)(3是0』 或 S，& 是 T 或 I，& 是 A 或 S，和 & 是 V 或 L(SEQID NO :146)，(ii)HVR-L2，其包含序列 ^C1ASFLX2S,其中 &是3或G且)(2是々或 Y(SEQ ID NO: 147)，(iii)HVR-L3，其包含序列 QQX1X2X3X4X5X6TjJt^ &是6，3或1\)(2是1\￥或六，)(3是 G，S，T，或A， 是A，H，D，T，或N，)(5是Q，P或S，)(6是S，Y，L，P或Q(SEQ ID NO :148)，(iv) HVR-Hl，其包含序列 GFXiRyCJGIS，其中 X1 是 S 或 T，X2 是 W，Y，S 或 T，X3 是 S, G，或 T (SEQ ID NO :149)，(v) HVR-H2，其包含序列 GRIYP^CA^y^^y^YADSVKG,其中 ^C1 是 Y，A, L, S,或 T，& 是 A, Q，D，G，Y，S，N 或 F，X3 是 A，D，或 G，& 是 T 或 S，X5 是 K，F，T，或 S，& 是 Y，H，N 或 I (SEQ ID NO :150)，和(vi) HVR-H3，其包含序列 ARTYGIYDLYVDYTEYVMDY (SEQ IDNO 151)。在一些實施方案中，HVR-Ll包含序列RASQX1VX2X3X4VA,其中&是乂或D，&是0， E或S，^是！1或I，)(4是々或S(SEQ ID NO :152)。在一些實施方案中，HVR-L3包含序列 QQXA^yCJAT，其中 &是5，6，或1\)(2是￥，1\ 或六，)(3是11 或6，)(4是1\!1或隊)(5是？或5，)(6是 P,Q,Y,或L(SEQ ID NO :153)。在一些實施方案中，HVR-H2包含序列GRIYPXAGSTAYADSVKG, 其中 是T或L， 是N，Y，S，G，A，或Q; 是N或H(SEQ ID NO 154) 在另一個方面，本發明的特徵在於分離的抗-FGFR3抗體，所述分離的抗-FGFR3抗體包含一個、兩個、三個、四個、五個或六個HVR，其中各個HVR包含選自下列的序列，由選自下列的序列組成，或基本上由選自下列的序列組成=SEQ ID NOS 1-18，48-131和140-145， 並且其中 SEQID NO 1,7,13，48，54，60，66，72，78，84，90，96，102，108，114，120，126 或 143 對應於 HVR-H1，SEQ ID NO :2，8，14，49，55，61，67，73，79，85，91，97，103，109，115，121，127 或 144 對應於 HVR-H2, SEQ ID NO :3，9，15，50，56，62，68，74，80，86，92，98，104，110，116， 122，128 或 145 對應於 HVR-H3, SEQ ID NO :4，10，16，51，57，63，69，75，81，87，93，99，105， 111，117，123，129 或 140 對應於 HVR-Ll, SEQ ID NO :5，11，17，52，58，64，70，76，82，88，94， 100，106，112，118，124，130 或 141 對應於 HVR-L2，且 SEQ ID NO :6，12，18，53，59，65，71，77，
983,89,95,101,107,113,119,125,131 或 142 對應於 HVR-L3。在一個方面，本發明提供包含HVR-Hl的抗-FGFR3抗體，所述HVR-Hl包含SEQ ID NO 1,7,13，48，54，60，66，72，78，84，90，96，102，108，114，120，126 或 143 的序列。在一個方面，本發明提供包含HVR-H2的抗-FGFR3抗體，所述HVR-H2包含SEQ ID NO 2,8,14，49，55，61，67，73，79，85，91，97，103，109，115，121，127 或 144 的序列。在一個方面，本發明提供包含HVR-H3的抗-FGFR3抗體，所述HVR-H3包含SEQ ID NO 3,9,15，50，56，62，68，74，80，86，92，98，104，110，116，122，128 或 145 的序列。在一個方面，本發明提供包含HVR-Ll區的抗-FGFR3抗體，所述HVR-Ll區包含SEQ ID NO 4,10，16，51，57，63，69，75，81，87，93，99，105，111，117，123，129 或 140 的序列。在一個方面，本發明提供包含HVR-L2區的抗-FGFR3抗體，所述HVR-L2區包含SEQ ID NO 5,11，17,52,58,64,70,76,82,88,94,100，106，112，118，124，130 或 141 的序列。在一個方面，本發明提供包含HVR-L3區的抗-FGFR3抗體，所述HVR-L3區包含SEQ ID NO 6,12，18,53,59,65,71,77,83,89,95,101，107，113，119，125，131 或 142 的序列。在一個方面，抗-FGFR3抗體包含重鏈可變區和/或輕鏈可變區，所述重鏈可變區包含HVR-H1，HVR-H2，HVR-H3，其中各個按順序地包含SEQ ID NO 1，2，3，所述輕鏈可變區包含HVR-L1，HVR-L2，和HVR-L3，其中各個按順序地包含SEQ ID NO :4，5，6。在另一個方面，抗-FGFR3抗體包含重鏈可變區和/或輕鏈可變區，所述重鏈可變區包含HVR-Hl，HVR-H2，HVR-H3，其中各個按順序地包含SEQ ID NO :7，8，9，所述輕鏈可變區包含HVR-L1，HVR-L2，和HVR-L3，其中各個按順序地包含SEQ ID N0:10，ll，12。在另一個方面，抗-FGFR3抗體包含重鏈可變區和/或輕鏈可變區，所述重鏈可變區包含HVR-Hl，HVR-H2，HVR-H3，其中各個按順序地包含SEQ ID NO :13，14，15，所述輕鏈可變區包含HVR-L1，HVR-L2，和HVR-L3，其中各個按順序地包含SEQ ID NO :16，17，18。在另一個方面，抗-FGFR3抗體包含重鏈可變區和/或輕鏈可變區，所述重鏈可變區包含HVR-Hl，HVR-H2，HVR-H3，其中各個按順序地包含SEQ ID NO =48,49, 50，所述輕鏈可變區包含HVR-L1，HVR-L2，和HVR-L3，其中各個按順序地包含SEQ ID N0:51，52，53。在另一個方面，抗-FGFR3抗體包含重鏈可變區和/或輕鏈可變區，所述重鏈可變區包含HVR-Hl，HVR-H2，HVR-H3，其中各個按順序地包含SEQ ID NO :54，55，56，所述輕鏈可變區包含HVR-L1，HVR-L2，和HVR-L3，其中各個按順序地包含SEQ ID N0:57，58，59。在另一個方面，抗-FGFR3抗體包含重鏈可變區和/或輕鏈可變區，所述重鏈可變區包含HVR-Hl，HVR-H2，HVR-H3，其中各個按順序地包含SEQ ID NO :60，61，62，63，所述輕鏈可變區包含HVR-L1，HVR-L2，和HVR-L3，其中各個按順序地包含SEQ ID NO :63，64，65。在另一個方面，抗-FGFR3抗體包含重鏈可變區和/或輕鏈可變區，所述重鏈可變區包含HVR-Hl，HVR-H2，HVR-H3，其中各個按順序地包含SEQ ID NO :66，67，68，所述輕鏈可變區包含HVR-L1，HVR-L2，和HVR-L3，其中各個按順序地包含SEQ ID N0:69，70，71。在另一個方面，抗-FGFR3抗體包含重鏈可變區和/或輕鏈可變區，所述重鏈可變區包含HVR-Hl，HVR-H2，HVR-H3，其中各個按順序地包含SEQ ID NO :72，73，74，所述輕鏈可變區包含HVR-L1，HVR-L2，和HVR-L3，其中各個按順序地包含SEQ ID N0:75，76，77。在另一個方面，抗-FGFR3抗體包含重鏈可變區和/或輕鏈可變區，所述重鏈可變區包含HVR-Hl，HVR-H2，HVR-H3，其中各個按順序地包含SEQ ID NO :78，7980，所述輕鏈可變區包含HVR-L1，HVR-L2，和HVR-L3，其中各個按順序地包含SEQ ID N0:81，82，83。在另一個方面，抗-FGFR3抗體包含重鏈可變區和/或輕鏈可變區，所述重鏈可變區包含HVR-Hl，HVR-H2，HVR-H3，其中各個按順序地包含SEQ ID NO :84，85，86，所述輕鏈可變區包含HVR-L1，HVR-L2，和HVR-L3，其中各個按順序地包含SEQ ID N0:87，88，89。在另一個方面，抗-FGFR3抗體包含重鏈可變區和/或輕鏈可變區，所述重鏈可變區包含HVR-Hl，HVR-H2，HVR-H3，其中各個按順序地包含SEQ ID NO :90，91，92，所述輕鏈可變區包含HVR-L1，HVR-L2，和HVR-L3，其中各個按順序地包含SEQ ID N0:93，94，95。在另一個方面，抗-FGFR3抗體包含重鏈可變區和/或輕鏈可變區，所述重鏈可變區包含HVR-Hl，HVR-H2，HVR-H3，其中各個按順序地包含SEQ ID NO :96，97，98，所述輕鏈可變區包含HVR-Ll，HVR-L2，和HVR-L3，其中各個按順序地包含SEQ ID NO :99，100，101。在另一個方面，抗-FGFR3抗體包含重鏈可變區和/或輕鏈可變區，所述重鏈可變區包含HVR-Hl，HVR-H2，HVR-H3，其中各個按順序地包含SEQ ID NO 102，103，104，所述輕鏈可變區包含HVR-L1，HVR-L2，和HVR-L3，其中各個按順序地包含SEQ ID NO :105，106，107。在另一個方面，抗-FGFR3抗體包含重鏈可變區和/或輕鏈可變區，所述重鏈可變區包含HVR-Hl，HVR-H2，HVR-H3，其中各個按順序地包含SEQ ID NO :108，109，110，所述輕鏈可變區包含HVR-L1，HVR-L2，和HVR-L3，其中各個按順序地包含SEQ ID NO :111，112，113。在另一個方面，抗-FGFR3抗體包含重鏈可變區和/或輕鏈可變區，所述重鏈可變區包含HVR-Hl，HVR-H2，HVR-H3，其中各個按順序地包含SEQ ID NO :114，115，116，所述輕鏈可變區包含HVR-L1，HVR-L2，和HVR-L3，其中各個按順序地包含SEQ ID NO :117，118，119。在另一個方面，抗-FGFR3抗體包含重鏈可變區和/或輕鏈可變區，所述重鏈可變區包含HVR-Hl，HVR-H2，HVR-H3，其中各個按順序地包含SEQ ID NO :120，121，122，所述輕鏈可變區包含HVR-L1，HVR-L2，和HVR-L3，其中各個按順序地包含SEQ ID NO :123，124，125。在另一個方面，抗-FGFR3抗體包含重鏈可變區和/或輕鏈可變區，所述重鏈可變區包含HVR-Hl，HVR-H2，HVR-H3，其中各個按順序地包含SEQ ID NO 126，127，128，所述輕鏈可變區包含HVR-L1，HVR-L2，和HVR-L3，其中各個按順序地包含SEQ ID NO 1 ，130，131。在另一個方面，抗-FGFR3抗體包含重鏈可變區和/或輕鏈可變區，所述重鏈可變區包含HVR-Hl，HVR-H2，HVR-H3，其中各個按順序地包含SEQ ID NO :140，141，142，所述輕鏈可變區包含HVR-L1，HVR-L2，和HVR-L3，其中各個按順序地包含SEQ ID NO :143，144，145。SEQ ID NOs :1-18,48-131和140-145的胺基酸序列關於如

圖1中所示的單個 HVR( S卩，HI, H2或H3)進行編號，所述編號與如下所述的Kabat編號系統一致。在另一個方面，抗-FGFR3抗體包含重鏈可變區和輕鏈可變區，所述重鏈可變區包含 SEQ ID NO :132ο在另一個方面，抗-FGFR3抗體包含輕鏈可變區和重鏈可變區，所述輕鏈可變區包含 SEQ ID NO :133ο在另一個方面，抗-FGFR3抗體包含重鏈可變區和輕鏈可變區，所述重鏈可變區包含SEQ ID NO 132，所述輕鏈可變區包含SEQ ID Ν0:133。在另一個方面，抗-FGFR3抗體包含重鏈可變區和輕鏈可變區，所述重鏈可變區包含 SEQ ID NO :134ο在另一個方面，抗-FGFR3抗體包含輕鏈可變區和重鏈可變區，所述輕鏈可變區包含 SEQ ID NO :135ο在另一個方面，抗-FGFR3抗體包含輕鏈可變區和重鏈可變區，所述輕鏈可變區包含 SEQ ID NO :139 ο在另一個方面，抗-FGFR3抗體包含重鏈可變區和輕鏈可變區，所述重鏈可變區包含SEQ ID NO 134，所述輕鏈可變區包含SEQ ID ΝΟ: ;35。在另一個方面，抗-FGFR3抗體包含重鏈可變區和輕鏈可變區，所述重鏈可變區包含 SEQ ID NO :136 ο在另一個方面，抗-FGFR3抗體包含輕鏈可變區和重鏈可變區，所述輕鏈可變區包含 SEQ ID NO :137ο在另一個方面，抗-FGFR3抗體包含重鏈可變區和輕鏈可變區，所述重鏈可變區包含SEQ ID NO 136，所述輕鏈可變區包含SEQ ID Ν0:137。在另一個方面，抗-FGFR3抗體包含重鏈可變區和輕鏈可變區，所述重鏈可變區包含 SEQ ID NO :138 ο在另一個方面，抗-FGFR3抗體包含輕鏈可變區和重鏈可變區，所述輕鏈可變區包含 SEQ ID NO :139 ο在另一個方面，抗-FGFR3抗體包含重鏈可變區和輕鏈可變區，所述重鏈可變區包含SEQ ID NO 138，所述輕鏈可變區包含SEQ ID Ν0:139。在一個方面，本發明提供抗-FGFR3抗體，所述抗-FGFR3抗體包含至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個高變區(HVR)序列，所述高變區序列選自由下列各項組成的組(a)HVR-Ll，其包含序列SASSSVSYMH(SEQ ID NO 155), SASSSVSYMH (SEQ ID NO: 156) LASQTIGTffLA(SEQ ID NO :157)，(b)HVR-L2，其包含序列 TWIYDTSILAS(SEQ ID NO 158), RffIYDTSKLAS (SEQ ID NO: 159)，或 LLIYAATSLAD (SEQ ID NO 160)，(c)HVR-L3，其包含序列 QQWTSNPLT(SEQ ID NO :161), QQffSSYPPT (SEQ ID NO: 162)，或 QQLYSPPffT (SEQ ID NO 163)，(d) HVR-Hl，其包含序列 GYSFTDYNMY (SEQ ID NO :164), GYVFTHYNMY (SEQ ID NO: 165)，或 GYAFTSYNMY (SEQ ID NO 166)，(e)HVR-H2,其包含序列 WIGYIEPYNGGTSYNQKFKG(SEQ IDNO :167)， WIGYIEPYNGGTSYNQKFKG (SEQ ID NO : 168)，或 WIGYIDPYIGGTSYNQKi7KG (SEQ ID NO: 169)，和(f)HVR-H3 包含序列 ASPNYYDSSPFAY(SEQ ID NO :170), ARGQGPDFDV (SEQ ID NO: 171)，或 ARWGDYDVGAMDY (SEQ IDNO : 172)。在一個方面，本發明提供抗-FGFR3抗體，其包含至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個高變區(HVR)序列，所述高變區序列選自由下列各項組成的組(a) HVR-Ll，其包含序列 SASSSVSYMH (SEQ ID NO : 155)，(b)HVR-L2，其包含序列 TWIYDTSILAS (SEQ ID NO :158)，(c)HVR-L3，其包含序列 QQWTSNPLT (SEQ ID NO :161)，(d) HVR-Hl，其包含序列 GYSFTDYNMY (SEQ ID NO : 164)，(e) HVR-H2，其包含序列 WIGYIEPYNGGTSYNQKFKG (SEQ IDNO 167)，禾口(f) HVR-H3，其包含序列 ASPNYYDSSPFAY (SEQ ID NO : 170)。
在一個方面，本發明提供抗-FGFR3抗體，其包含至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個高變區(HVR)序列，所述高變區序列選自由下列各項組成的組(a) HVR-Ll，其包含序列 SASSSVSYMH(SEQ ID NO :156)，(b)HVR-L2，其包含序列 RWIYDTSKLAS (SEQ ID NO :159)，(c)HVR-L3，其包含序列 QQWSSYPPT (SEQ ID NO :162)，(d) HVR-Hl，其包含序列 GYVFTHYNMY (SEQ ID NO 165)，(e) HVR-H2，其包含序列 WIGYIEPYNGGTSYNQKFKG (SEQ IDNO 168)，禾口(f)HVR-H3，其包含序列 ARGQGPDFDV(SEQ ID NO :171).在一個方面，本發明提供抗-FGFR3抗體，其包含至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個高變區(HVR)序列，所述高變區序列選自由下列各項組成的組(a) HVR-Ll，其包含序列 LASQTIGTWLA (SEQ ID NO 157)，(b)HVR-L2，其包含序列 LLIYAATSLAD (SEQ ID NO :160)，(c)HVR-L3，其包含序列 QQLYSPPWT (SEQ ID NO :163)，(d) HVR-Hl，其包含序列 GYAFTSYNMY (SEQ ID NO 166)，(e) HVR-H2，其包含序列 WIGHDPnGGTSYNQKi7KG (SEQ IDNO 169)，禾口(f) HVR-H3，其包含序列 ARWGDYDVGAMDY (SEQ ID NO 172)。在一個方面，本發明提供抗-FGFR3抗體，所述抗-FGFR3抗體包含(a)輕鏈，所述輕鏈包含(i) HVR-Ll，其包含序列 SASSSVSYMH(SEQ IDNO :155) ； (ii) HVR-L2，其包含序列 TffIYDTSILAS (SEQ ID NO :158)；禾口 (iii) HVR-L3，其包含序列 QQWTSNPLT (SEQ ID NO :161)； 和/或(b)重鏈，所述重鏈包含⑴HVR-Hl，其包含序列GYSFTDYNMY(SEQ IDNO :164) ； (ii) HVR-H2，其包含序列 WIGYIEPYNGGTSYNQKFKG(SEQID NO :167)；和(iii) HVR-H3，其包含序列 ASPNYYDSSPFAY(SEQ IDNO :170)。在一個方面，本發明提供抗-FGFR3抗體，所述抗-FGFR3抗體包含(a)輕鏈， 其包含(i)HVR-Ll,其包含序列 SASSSVSYMH(SEQ IDNO :156) ； (ii)HVR_L2，其包含序列 RWIYDTSKLAS (SEQ ID NO :159);和(iii) HVR-L3，其包含序列 QQWSSYPPT (SEQ ID NO: 162)；和 / 或(b)重鏈，其包含(i) HVR-Hl 包含序列 GYVFTHYNMY (SEQ ID NO 165) ； (ii) HVR-H2，其包含序列 WIGYIEPYNGGTSYNQKFKG(SEQ ID NO :168)；和(iii) HVR-H3，其包含序列 ARGQGPDFDV(SEQ ID NO :171)。在一個方面，本發明提供抗-FGFR3抗體，所述抗-FGFR3抗體包含(a)輕鏈， 其包含(i)HVR-Ll,其包含序列 LASQTIGTWLA(SEQ IDNO :157) ； (ii)HVR_L2，其包含序列 LLIYAATSLAD (SEQ ID NO :160)；和(iii) HVR-L3，其包含序列 QQLYSPPWT (SEQ ID NO :163)； 和 / 或(b)重鏈，其包含(i) HVR-Hl，其包含序列 GYAFTSYNMY (SEQ ID NO 166) ； (ii) HVR-H2，其包含序列 WIGYIDPYIGGTSYNQKi7KG (SEQ ID NO 169)；和(iii) HVR-H3，其包含序列ARWGDYDVGAMDY(SEQ ID NO :172)。本發明的抗體的一些實施方案包含如下面SEQ ID NO 173 中所示的人源化 4D5 抗體(huMAb4D5_8) ( HERCEPTIN , Genentech, Inc.，South SanFrancisco, CA, USA)(也在美國專利號 6，407, 213 和 Lee 等·，J. Mol. Biol.(分子生物學雜誌)(2004)，340 (5) :1073-1093中提及)的輕鏈可變結構域。I Asp lie Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val GlyAsp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val .1.、" Thr Ala
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Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lieTyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser GlySer Ar^' Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gln Pro GluAsp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Hk Tyr Thr Thr Pro Pro ThrPhe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 107(SEQ ID NO :173)(HVR殘基被下劃線)在一個實施方案中，huMAb4D5-8輕鏈可變結構域序列在位置30，66，和91(分別如上面以粗體/斜體所示的ASn，Arg，和His)中的一個或多個處被修飾。在具體的實施方案中，修飾的huMAb4D5-8序列包含位置30中的kr，位置66中的Gly，和/或位置91中的 Ser0因此，在一個實施方案中，本發明的抗體包含輕鏈可變結構域，所述輕鏈可變結構域包含下面SEQ ID NO 174中所示的序列I Asp lie Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val GlyAsp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Scr Thr AlaVal Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lieTyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly SerGty Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gln Pro GluAsp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln SCi' Tyr Thr Thr Pro Pro ThrPhe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 107(SEQ ID NO :174)(HVR殘基被下劃線)關於huMAb4D5_8的置換殘基以粗體/斜體指示。本發明的抗體可以包含任何合適的構架可變結構域序列，條件是基本上保留與 FGFR3的結合活性。例如，在一些實施方案中，本發明的抗體包含人亞組III重鏈構架共有序列。在這些抗體的一個實施方案中，構架共有序列包含位置71，73，和/或78處的置換。 在這些抗體的一些實施方案中，位置71是A，73是T和/或78是A。在一個實施方案中， 這些抗體包含 huMAb4D5-8(HERCEPTIN ,Genentech，Inc. , South San Francisco, CA, USA)(也在美國專利號6，407，213和5，821，337，和Lee等.，J. Mol. Biol.(分子生物學雜誌)(2004)，340 (5) :1073-1093中提及)的重鏈可變結構域構架序列。在一個實施方案中， 這些抗體還包含人κ I輕鏈構架共有序列。在具體的實施方案中，這些抗體包含如美國專利號6，407，213和5，821，337中所述的huMAb4D5_8的輕鏈HVR序列。在一個實施方案中， 這些抗體包含 huMAb4D5-8 ( HERCEPTIN , Genentech, Inc.，South San Francisco, CA, USA)(也在美國專利號6，407，213和5，821，337，和Lee等.，J. Mol. Biol.(分子生物學雜誌)(2004)，340 (5) :1073-1093中提及)的輕鏈可變結構域序列。在一個實施方案中，本發明的抗體包含重鏈可變結構域，其中構架序列包含SEQ ID NOS 19 和 203-205，20 和 206-208，21 和 209-211，22 和 212-214，23 和 215-217，24 和 218-220，25 和 221-223，26 和 224-226，27 和 227-229，28 和 230-232，29 和 233-235，30 和 236-238,31 和 239-241，32 和 242-244，33 和 245-247，34 和 248-250，35 和 251-253，36 和 254-256，和 / 或 37 禾口 257-259 的序列，並且 HVR HI, H2，禾口 H3 序列分別是 SEQ IDNOS :13， 14和/或15。在另一個實施方案中，所述構架序列包含SEQ IDNOS 19和203-205,20和 206-208，21 和 209-211,22 和 212-214，23 和 215-217，24 和 218-220，25 和 221-223，26 和224-226，27 和 227-229，28 和 230-232，29 和 233-235，30 和 236-238，31和 239-241，32 和 242-244，33 和 245-247，34 和 248-250，35 和 251-253，36 和 254-256，和 / 或 37 禾口 257-259 的序列，並且HVR H1，H2，和H3序列分別是SEQ ID NOS :48，49和/或50。還在另一個實施方案中，所述構架序列包含SEQ ID NOS 19和203-205，20和206-208，21和209-211，22和 212-214，23 和 215-217，24 和 218-220，25 和 221-223，26 和 224-226，27 和 227-229，28 和 230-232，29 和 233-235，30 和 236-238，31和 239-241，32 和 242-244，33 和 245-247，34 和 248-250,35 和 251-253，36 和 254-256，和 / 或 37 禾口 257-259 的序列，並且 HVR HI, H2，禾口 H3序列分別是SEQ ID NOS :84，85，和/或86。在進一步的實施方案中，所述構架序列包含 SEQ ID NOS 19 和 203-205，20 和 206-208，21 和 209-211，22 和 212-214，23 和 215-217，24 和 218-220，25 和 221-223，26 和 224-226，27 和 227-229，28 和 230-232，29 和 233-235，30 和 236-238,31和 239-241，32 和 242-244，33 和 245-247，34 和 248-250，35 和 251-253，36 和254-256，和/或37禾口 257-259的序列，並且HVR HI, H2，禾口 H3序列分別是SEQ IDNOS 108，109，和 / 或 110。在具體的實施方案中，本發明的抗體包含輕鏈可變結構域，其中構架序列包含SEQ ID NOS 38和洸0-洸2，39和洸3_洸5，40和洸6_洸8，和/或41和洸9_271的序列，並且HVR L1，L2，和L3序列分別是SEQ IDNOS 16，17，和/或18。在另一個實施方案中，本發明的抗體包含輕鏈可變結構域,其中構架序列包含SEQ ID NOS 38和260-262，39和沈3力65，40 和洸6-洸8，和/或41和洸9-271的序列，並且HVR Li，L2，和L3序列分別是SEQ ID NOS 51，52和/或53。在另外的實施方案中，本發明的抗體包含輕鏈可變結構域，其中構架序列包含 SEQ ID NOS 38 和 260-262，39 和 263-265，40 和 266-268，和 / 或 41 禾口 269-271 的序列，並且HVR L1，L2，和L3序列分別是SEQ ID NOS :87，88和/或89。還在另一個實施方案中，本發明的抗體包含輕鏈可變結構域，其中構架序列包含SEQ ID NOS 38和沈0力62，39 和263-265,40 ^P 266-268，和/或41和269-271的序列，並且HVR Li, L2，和L3序列分別是 SEQ ID NOS :111，112，和 / 或 113。在另一個方面，本發明的抗體包含重鏈可變結構域和/或輕鏈可變結構域，所述重鏈可變結構域包含SEQ ID NO 132的序列，所述輕鏈可變結構域包含SEQ ID NO :133的序列。在另一個方面，本發明的抗體包含重鏈可變結構域和/或輕鏈可變結構域，所述重鏈可變結構域包含SEQ IDNO 134的序列，所述輕鏈可變結構域包含SEQ ID NO :135的序列。 在另一個方面，本發明的抗體包含重鏈可變結構域和/或輕鏈可變結構域，所述重鏈可變結構域包含SEQ ID NO :136的序列，所述輕鏈可變結構域包含SEQ ID NO :137的序列。在另一個方面，本發明的抗體包含重鏈可變結構域和/或輕鏈可變結構域，所述重鏈可變結構域包含SEQ ID NO 138的序列，所述輕鏈可變結構域包含SEQ ID NO :139的序列。在一個方面，本發明提供結合多肽的抗-FGFR3抗體，所述多肽包含下列的胺基酸序列，基本上由下列的胺基酸序列組成或由下列的胺基酸序列組成LAVPAANTVRFRCPA (SEQ ID NO 179)和 / 或 SDVEFHCKVYSDAQP (SEQ ID NO :180)。在一些實施方案中，所述抗體結合多肽，所述多肽包含成熟的人FGFR3胺基酸序列的胺基酸數164-178和/或沈9-觀3，基本上由成熟的人FGFR3胺基酸序列的胺基酸數 164-178和/或269-283組成或由成熟的人FGFR3胺基酸序列的胺基酸數164-178和/或 269-283 組成。
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在一個實施方案中，本發明的抗-FGFR3抗體特異性地結合與序列 LAVPAANTVRFRCPA (SEQ ID NO 179)和 / 或 SDVEHICKVYSDAQP (SEQ ID NO :180)具有至少 50%,60%, 70%,80%,90%, 95%,98%序列同一性或相似性的胺基酸序列。在一個方面，本發明的抗呼6 1 3抗體與？6 1 311讓多肽的殘基154，155，158，159， 161，162，163，164，165，166，167，168，169，170，171，172，173，174，175，177，202，205，207， 210，212，214，216，217，241，246，247，248，278，279，280，281，282，283，314，315，316，317 和 /或318，或FGFR3IIIC多肽的等效殘基中的至少一個、兩個、三個、四個或至多達全部的任意數目個殘基結合。本領域普通技術人員理解如何比對FGFR3序列從而鑑定各個FGFR3序列之間的對應殘基。兩個或多個殘基的組合可以包括FGFR3inb多肽的殘基154，155，158， 159，161，162，163，164，165，166，167，168，169，170，171，172，173，174，175，177,202,205, 207，210，212，214，216，217，241，246，247，248，278，279，280，281，282，283，314，315，316， 317和/或318，或FGFR3IIIC多肽的等效殘基中的任一個。在一些實施方案中，抗-FGFR3 抗體與 FGFR3IIIb 多肽的殘基 158，159，169，170，171，173，175，205，207，和 / 或 315，或 FGFR3IIIC多肽的等效殘基中的至少一個、兩個、三個、四個或至多達全部的任意數目個殘基結合。在一些實施方案中，抗-FGFR3抗體與FGFR3inb多肽的殘基158，170，171，173， 175，和/或315，或FGFR3IIIC多肽的等效殘基中的至少一個、兩個、三個、四個或至多達全部的任意數目個殘基結合。在一個方面，本發明提供了抗-FGFR3抗體，所述抗-FGFR3抗體與上面提及的抗體中的任一個競爭與FGFR3的結合。在一個方面，本發明提供了抗-FGFR3抗體，所述抗-FGFR3 抗體結合與上面提及的抗體中的任一個所結合的相同或相似的FGFR3上的表位。如本領域中已知的那樣，以及如下文更詳細描述的那樣，對抗體的高變區劃界的抗體的胺基酸位置/邊界可以根據具體情況和本領域中已知的各種定義(如下所述)而變化。可變結構域內的一些位置可以視為雜合的超變位置，因為根據一組標準這些位置可以視為處於高變區內，而根據不同組的標準這些位置可以被視為在高變區之外。這些位置中的一個或多個也可見於擴展的高變區中(如下面進一步定義)。在一些實施方案中，所述抗體是單克隆抗體。在其他實施方案中，所述抗體是多克隆抗體。在一些實施方案中，所述抗體選自由嵌合抗體、親和力成熟抗體、人源化抗體和人抗體組成的組。在某些實施方案中，所述抗體是抗體片段。在一些實施方案中，所述抗體是 Fab, Fab 『 , Fab' -SH, F (ab 『 )2，或 scFv。在一些實施方案中，FGFR3抗體是包含Fc區的單臂抗體(即，重鏈可變結構域和輕鏈可變結構域形成單個抗原結合臂)，其中Fc區包含第一和第二 Fc多肽，其中第一和第二 Fc多肽以複合體存在並形成Fc區，所述Fc區與包含所述抗原結合臂的Fab分子相比增加所述抗體片段的穩定性。參見，例如，W02006/015371。在一個實施方案中，所述抗體是嵌合抗體，例如，包含移植至異源的非人、人或人源化序列(例如，構架和/或恆定結構域序列)的來自非人供體的抗原結合序列的抗體。在一個實施方案中，所述非人供體是小鼠。在進一步的實施方案中，抗原結合序列是合成的， 例如，通過誘變獲得(例如，噬菌體展示篩選等)。在具體的實施方案中，本發明的嵌合抗體具有鼠的V區和人的C區。在一個實施方案中，鼠輕鏈V區與人K輕鏈融合。在另一個實施方案中，鼠重鏈V區與人IgGlC區融合。
本發明的人源化抗體包括在構架區(FR)中具有胺基酸置換的那些和在移植的 CDR中有改變的親和力成熟變體。CDR或FR中被置換的胺基酸不限於存在於供體或受體抗體中的那些。在其他的實施方案中，本發明的抗體還包含Fc區中的胺基酸殘基改變，所述改變導致提高的效應子功能，包括增強的CDC和/或ADCC功能和B-細胞殺傷作用。本發明的其他抗體包括具有改善穩定性的特異性改變的那些。在其他實施方案中，本發明的抗體包含Fc區中的胺基酸殘基改變，所述改變導致降低的效應子功能，例如降低的CDC和/或 ADCC功能和/或減小的B-細胞殺傷作用。在一些實施方案中，本發明的抗體的特徵在於與自然殺傷(NK)細胞上的人補體因子Clq和/或人Fc受體的結合減少(諸如缺乏結合)。 在一些實施方案中，本發明的抗體的特徵在於與人Fc γ RI，Fc γ RIIA,和/或Fc γ RIIIA的結合減少(諸如缺乏結合)。在一些實施方案中，本發明的抗體是IgG類(例如，IgGl或 IgG4)並且包含 E233, L234, G236, D265, D270, N297, E318, K320, K322, A327, A330, P331, 和/或(根據EU指數編號)中的至少一個突變。在一些實施方案中，所述抗體包含突變 L234A/L235A 或 D265A/N297A。在抗體包含Fc區的情況下，與其結合的糖類可以改變。例如，具有成熟的糖結構(所述糖結構缺少與抗體的Fc區連接的巖藻糖)的抗體記述在美國專利申請號US 2003/0157108 (Presta，L.)中。還參見 US2004/0093621 (Kyowa Hakko Kogyo Co. , Ltd)。 在與抗體的Fc區連接的糖中具有平分型N-乙醯氨基葡糖胺(GlcNAc)的抗體參見WO 2003/011878，Jean-Mairet等和美國專利號6，602，684，Umana等。在與抗體的Fc區連接的寡糖中具有至少一個半乳糖殘基的抗體在WO 1997/30087，Patel等中報導。還參見，WO 1998/58964 (Raju, S.)和WO 1999/22764 (Raju, S.)，它們涉及與抗體的Fc區連接的糖發生改變的抗體。還參見US 2005/0123546 (Umana等)，其關於具有改變的糖基化作用的抗原結合分子。在一個方面，本發明提供了 FGFR3結合多肽，所述多肽包含本文提供的任一個抗原結合序列，其中所述FGFR3結合多肽特異性地結合FGFR3，例如，人和/或犬和/或小鼠 FGFR3。本發明的抗體結合(諸如特異性結合)FGFR3 (例如，FGFR3_IIIb和/或 FGFR3-IIIC)，並且在一些實施方案中，可以調節(例如，抑制)FGFR3信號傳導(諸如FGFR3 磷酸化)中的一個或多個方面和/或破壞任何生物學相關的FGFR3和/或FGFR3配體生物學途徑，和/或治療和/或預防腫瘤、細胞增生性病症或癌症；和/或治療或預防與FGFR3 表達和/或活性(諸如增加的FGFR3表達和/或活性)相關的病症。在一些實施方案中， FGFR3抗體特異性結合由FGFR3 (例如，人或小鼠FGFR3)組成或基本上由FGFR3 (例如，人或小鼠FGFR3)組成的多肽。在一些實施方案中，所述抗體以Ixl0-7M或更強的Kd特異性結合 FGFR3。在一些實施方案中，本發明的抗-FGFR3抗體不是美國專利公開號2005/0147612 中所述的抗-FGFR3 抗體(例如，抗體 MSPR02，MSPROl2，MSPR059, MSPROl 1，MSPR021, MSPR024, MSPR026, MSPR028, MSPR029, MSPR043, MSPR055)， Rauchenberger 等，J Biol Chem(生物化學雜誌)27800) =38194-38205(2003)中所述的抗體；PCT公開號 W02006/048877 中所述的抗體(例如，抗體 PR0-001)，Martinez-Torrecuadrada 等，Mol Cancer Ther (分子癌症治療)0008)7(4) :862-873中所述的抗體(例如，scFv α FGFR3 3C), Direnzo, R 等 Q007) Proceedings of AACR Annual Meeting (AACR 年會進展)，摘要
17No. 2080中所述的抗體(例如，Dll)，或WO 2010/002862中所述的抗體(例如，抗體15D8， 27H2，4E7，2G4，20B4)。在一個方面，本發明提供包含載體和本發明的一種或多種抗體的組合物。在一個實施方案中，所述載體是藥用的。在另一個方面，本發明提供編碼本發明的FGFR3抗體的核酸。還在另一個方面，本發明提供包含本發明的核酸的載體。在進一步的方面，本發明提供包含載體和本發明的一種或多種核酸的組合物。在一個實施方案中，所述載體是藥用的。在一個方面，本發明提供包含本發明的核酸或載體的宿主細胞。載體可以是任何類型，例如，重組載體諸如表達載體。可以使用多種宿主細胞中的任一種。在一個實施方案中，宿主細胞是原核細胞，例如，大腸桿菌(E. coli)。在另一個實施方案中，宿主細胞是真核細胞，例如，哺乳動物細胞，諸如中國倉鼠卵巢(CHO)細胞。在進一步的方面，本發明提供製備本發明的抗體的方法。例如，本發明提供製備抗-FGFR3抗體的方法(所述抗-FGFR3抗體如本文所定義其包括全長抗體及其片段)，所述方法包括在合適的宿主細胞表達編碼所述抗體的本發明的重組載體，並回收所述抗體。在一些實施方案中，所述方法包括培養包含編碼所述抗體的核酸的宿主細胞，使得所述核酸得以表達。在一些實施方案中，所述方法進一步包括從所述宿主細胞培養物中回收所述抗體。在一些實施方案中，所述抗體從所述宿主細胞培養基中回收。在一些實施方案中，所述方法進一步包括將回收的抗體與藥用載體、賦形劑或載體組合從而製備包含所述人源化抗體的藥物製劑。在一個方面，本發明提供一種包含容器的製品；和包含在容器內的組合物，其中所述組合物包含本發明的一種或多種FGFR3抗體。在一個實施方案中，所述組合物包含本發明的核酸。在另一個實施方案中，包含抗體的組合物還包含載體，在一些實施方案中所述載體是藥用的。在一個實施方案中，本發明的製品還包含用於將所述組合物(例如，所述抗體)施用於個體的說明書(諸如用於本文所述的任一種方法的說明書)。在另一個方面，本發明提供一種包含第一容器和第二容器的試劑盒，所述第一容器包含組合物，所述組合物包含本發明的一種或多種抗-FGFR3抗體；所述第二容器包含緩衝劑。在一個實施方案中，所述緩衝劑是藥用的。在一個實施方案中，包含抗體的組合物還包含載體，在一些實施方案中所述載體是藥用的。在另一個實施方案中，試劑盒還包含用於將所述組合物(例如，所述抗體)施用於個體的說明書。在進一步的方面，本發明提供了本發明的抗-FGFR3抗體，所述抗-FGFR3抗體用作藥物。在進一步的方面，本發明提供本發明的抗-FGFR3抗體，所述抗-FGFR3抗體用於治療或預防病症，諸如與FGFR3激活和/或表達(在一些實施方案中，過表達)相關的病理學狀況。在一些實施方案中，所述病症是癌症、腫瘤和/或細胞增生性病症。在一些實施方案中，所述癌症、腫瘤和/或細胞增生性病症是多發性骨髓瘤或膀胱癌症(例如，移行性細胞癌)，乳腺癌或肝癌。在進一步的方面，本發明提供本發明的抗-FGFR3抗體，所述抗-FGFR3抗體用於治療或預防病症諸如骨骼病症。在一些實施方案中，所述病症是軟骨發育不全(achondroplasia)、軟骨發育不良(hypochondroplasia)、侏儒症(dwarfism)、至文死性發育不全(thantophoricdysplasia) (TD ；臨床形式TDl和TDII)或顱縫早閉綜合症 (craniosynostosissyndrome)。在進一步的方面，本發明提供本發明的抗-FGFR3抗體，所述抗-FGFR3抗體用於減少細胞增殖。在進一步的方面，本發明提供本發明的抗-FGFR3抗體，所述抗-FGFR3抗體用於殺傷細胞。在一些實施方案中，所述細胞是多發性骨髓瘤細胞。在一些實施方案中，所述細胞被ADCC殺傷。在一些實施方案中，所述抗體是裸抗體。在一些實施方案中，所述細胞過表達 FGFR3。在進一步的方面，本發明提供本發明的抗-FGFR3抗體，所述抗-FGFR3抗體用於清除細胞，諸如多發性骨髓瘤細胞。在一些實施方案中，所述細胞被ADCC殺傷。在一些實施方案中，所述抗體是裸抗體。在一些實施方案中，所述細胞過表達FGFR3。在進一步的方面，本發明提供本發明的抗-FGFR3抗體在製備用於治療性和/或預防性治療病症的藥物中的用途，所述病症諸如與FGFR3激活和/或表達(在一些實施方案中，過表達)相關的病理學狀況。在一些實施方案中，所述病症是癌症、腫瘤和/或細胞增生性病症。在一些實施方案中，所述癌症、腫瘤和/或細胞增生性病症是多發性骨髓瘤或膀胱癌(例如，移行性細胞癌)，乳腺癌或肝癌。在一些實施方案中，所述病症是骨骼病症，例如，軟骨發育不全、軟骨發育不良、侏儒症、致死性發育不全(TD ；臨床形式TDl和TDII)或顱縫早閉綜合症。在一個方面，本發明提供本發明的核酸在製備用於治療性和/或預防性治療病症的藥物中的用途，所述病症諸如與FGFR3激活和/或表達(在一些實施方案中，過表達)相關的病理學狀況。在一些實施方案中，所述病症是癌症、腫瘤和/或細胞增生性病症。在一些實施方案中，所述癌症、腫瘤和/或細胞增生性病症是多發性骨髓瘤或膀胱癌(例如， 移行性細胞癌)，乳腺癌或肝癌。在一些實施方案中，所述病症是骨骼病症，例如，軟骨發育不全、軟骨發育不良、侏儒症、致死性發育不全(TD ；臨床形式TDl和TDII)或顱縫早閉綜合症。在另一個方面，本發明提供本發明的表達載體在製備用於治療性和/或預防性治療病症的藥物中的用途，所述病症諸如與FGFR3激活和/或表達(在一些實施方案中，過表達)相關的病理學狀況。在一些實施方案中，所述病症是癌症、腫瘤和/或細胞增生性病症。 在一些實施方案中，所述癌症、腫瘤和/或細胞增生性病症是多發性骨髓瘤或膀胱癌(例如，移行性細胞癌)，乳腺癌或肝癌。在一些實施方案中，所述病症是骨骼病症，例如，軟骨發育不全、軟骨發育不良、侏儒症、致死性發育不全(TD ；臨床形式TDl和TDII)或顱縫早閉綜合症。還在另一個方面，本發明提供本發明的宿主細胞在製備用於治療性和/或預防性治療病症的藥物中的用途，所述病症諸如與FGFR3激活和/或表達(在一些實施方案中，過表達)相關的病理學狀況。在一些實施方案中，所述病症是癌症、腫瘤和/或細胞增生性病症。在一些實施方案中，所述癌症、腫瘤和/或細胞增生性病症是多發性骨髓瘤或膀胱癌 (例如，移行性細胞癌)，乳腺癌或肝癌。在一些實施方案中，所述病症是骨骼病症，例如，軟骨發育不全、軟骨發育不良、侏儒症、致死性發育不全(TD ；臨床形式TDl和TDII)或顱縫早閉綜合症。在進一步的方面，本發明提供本發明的製品在製備用於治療性和/或預防性治療病症的藥物中的用途，所述病症諸如與FGFR3激活和/或表達(在一些實施方案中，過表達)相關的病理學狀況。在一些實施方案中，所述病症是癌症、腫瘤和/或細胞增生性病症。 在一些實施方案中，所述癌症、腫瘤和/或細胞增生性病症是多發性骨髓瘤或膀胱癌(例如，移行性細胞癌)，乳腺癌或肝癌。在一些實施方案中，所述病症是骨骼病症，例如，軟骨發育不全、軟骨發育不良、侏儒症、致死性發育不全(TD ；臨床形式TDl和TDII)或顱縫早閉綜合症。在進一步的方面，本發明提供本發明的試劑盒製備用於治療性和/或預防性治療病症的藥物中的用途，所述病症諸如與FGFR3激活和/或表達(在一些實施方案中，過表達)相關的病理學狀況。在一些實施方案中，所述病症是癌症、腫瘤和/或細胞增生性病症。 在一些實施方案中，所述癌症、腫瘤和/或細胞增生性病症是多發性骨髓瘤或膀胱癌(例如，移行性細胞癌)，乳腺癌或肝癌。在一些實施方案中，所述病症是骨骼病症，例如，軟骨發育不全、軟骨發育不良、侏儒症、致死性發育不全(TD;臨床形式TDl和TDII)或顱縫早閉綜合症。在進一步的方面，本發明提供本發明的抗-FGFR3抗體在製備用於抑制細胞增殖的藥物中的用途。在進一步的方面，本發明提供本發明的抗-FGFR3抗體在製備用於細胞殺傷的藥物中的用途。在一些實施方案中，所述細胞是多發性骨髓瘤細胞。在一些實施方案中，所述細胞被ADCC殺傷。在一些實施方案中，所述抗體是裸抗體。在一些實施方案中，所述細胞過表達FGFR3。在進一步的方面，本發明提供本發明的抗-FGFR3抗體在製備用於清除細胞(諸如多發性骨髓瘤細胞)的藥物中的用途。在一些實施方案中，所述細胞被ADCC殺傷。在一些實施方案中，所述抗體是裸抗體。在一些實施方案中，所述細胞過表達FGFR3。本發明提供可用於調節與FGFR3的表達和/或信號傳導，諸如增加表達和/或信號傳導或不合乎需要的表達和/或信號傳導相關的病症的方法和組合物。本發明的方法可以用來影響任何合適的病理學狀態。示例性的病症如本文所述，並且包括選自由下列各項組成的組的癌症非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer)，卵巢癌，甲狀腺癌，睪丸癌(testicularcancer)，子宮內膜癌(endometrial cancer)，頭頸癌，腦癌(例如，神經母細胞瘤(neuroblastoma)或腦膜瘤(meningioma))， 皮膚癌(例如，黑色素瘤，基底細胞癌(basal cell carcinoma)或鱗狀細胞癌)，膀胱癌 (例如，移行性細胞癌)，乳腺癌，胃癌，結直腸癌(CRC)，肝細胞癌，子宮頸癌，肺癌，胰腺癌， 前列腺癌和惡性血液病(例如，T-細胞急性淋巴細胞白血病(T-ALL)，B-細胞急性淋巴細胞白血病(B-ALL)，急性髓細胞白血病(AML)，B-細胞惡性腫瘤，霍奇金淋巴瘤(Hodgkin lymphoma)和多發性骨髓瘤)。在一些實施方案中，所述病症是侵襲性移行性細胞癌。在一些實施方案中，所述病症是多發性骨髓瘤。其他的示例性病症包括骨骼病症，諸如軟骨發育不全、軟骨發育不良、侏儒症、致死性發育不全(TD ；臨床形式TDl和TDII)或顱縫早閉綜合症。在某些實施方案中，所述癌症表達FGFR3，擴增的FGFR3，易位的FGFR3，和/或突變的FGFR3。在某些實施方案中，所述癌症表達激活的FGFR3。在某些實施方案中，所述癌症表達易位的FGFR3(例如，t(4 ； 14)易位)。在某些實施方案中，所述癌症表達組成型FGFR3。 在一些實施方案中，組成型TOFR3包括酪氨酸激酶結構域和/或近膜結構域和/或配體結合結構域中的突變。在某些實施方案中，所述癌症表達配體不依賴性FGFR3。在一些實施方案中，所述癌症表達配體依賴性FGFR3。在一些實施方案中，所述癌症表達包含對應於FGFR3-inbS248G&突變的FGFR3。在一些實施方案中，所述癌症表達FGFR3-IIIb S248C ^P /或FGFR3-IIIcS248G。在一些實施方案中，所述癌症表達包含對應於FGFR3_IIIbK652E的突變的FGFR3。在一些實施方案中，所述癌症表達FGFR3-IIIb Κ6521Π/或FGFR3-IIIc K65°E。FGFR3包含對應於FGFR3_IIIbS249G的突變。在一些實施方案中，所述癌症表達 FGFR3-IIIbs249c 和 / 或 FGFR3_IIIc S249C。在一個方面，所述癌症表達包含對應於FGFR3-inbG372G的突變的FGFR3。在一些實施方案中，所述癌症表達 FGFR3-IIIbG372lP / 或 FGFR3-IIIc G37°G。在一個方面，所述癌症表達包含對應於FGFR3_inbY375G的突變的FGFR3。在一些實施方案中，所述癌症表達FGFR3-inbY375G和/或FGFR3-IIIcY373G。在一些實施方案中，所述癌症表達(a)FGFR3-II IbK652E 和(b) FGFR3-II IbE248C, FGFR3-IIIbY375C, FGFR3-IIIbs249c，和 FGFR3IIIb G372C 中的一種或多種。在一些實施方案中，所述癌症表達(a)FGFR3-II IbE248C 和(b) FGFR3-II IbK652E， FGFR3-IIIbY375C, FGFR3-IIIbs249c，和 FGFR3_IIIbG372C 中的一種或多種。在一些實施方案中，所述癌症表達(a)FGFR3-II Ibc372c 和(b) FGFR3-II IbK652E， FGFR3-IIIbY375C, FGFR3-IIIbs249c，和 reFR3_IIIbK248C 中的一種或多種。在一些實施方案中，所述癌症表達FGFR3_IIIbK248G，FGFR3_IIIbK652E， FGFR3-IIIbY375C，FGFR3-IIIb S249C，和 FGFR3_IIIb G372C。在某些實施方案中，所述癌症表達相對於對照樣品(例如，正常組織的樣品)或水平增加水平的磷酸-FGFR3，磷酸-FRS2和/或磷酸-MAPK。在一些實施方案中，所述癌症表達(例如，在細胞表面上)約10，000個FGFR3分子 / 細胞或更多(諸如 11，000，12，000，13，000，14，000，15，000，16，000，17，000，18，000 或更多個FGFR3受體)。在一些實施方案中，所述癌症表達約13000個FGFR3分子。在其他實施方案中，所述癌症表達約5000，6000，7000，8000，或更多個FGFR3分子。在一些實施方案中，所述癌症表達小於約4000，3000，2000，1000，或更少個FGFR3分子。在一些實施方案中，所述癌症表達小於約1000個FGFR3分子。在一個實施方案中，在本發明的方法中被靶向的細胞是癌細胞。例如，癌細胞可以是選自由下列各項組成的組的一種乳腺癌細胞，結直腸癌細胞，肺癌細胞(例如，非小細胞肺癌細胞)，甲狀腺癌細胞，多發性骨髓瘤細胞，睪丸癌細胞，乳頭狀癌(papillary carcinoma)細胞，結腸癌細胞，胰腺癌細胞，卵巢癌細胞，宮頸癌細胞，中樞神經細胞癌細胞，骨源性肉瘤(osteogenic sarcoma)細胞，腎癌細胞，肝細胞癌細胞，膀胱癌細胞(例如， 移行性細胞癌細胞)，胃癌細胞，頭頸鱗狀癌細胞，黑色素瘤細胞，白血病細胞，多發性骨髓瘤細胞(例如，包含W4 14)FGFR3易位的多發性骨髓瘤細胞)和結腸腺瘤細胞。在一個實施方案中，在本發明的方法中被靶向的細胞是過度增生和/或增生的細胞。在另一個實施方案中，在本發明的方法中被靶向的細胞是異常增生細胞(dysplastic cell)。還在另一個實施方案中，在本發明的方法中被靶向的細胞是轉移細胞。在一個方面，本發明提供抑制受試者中的細胞增殖的方法，所述方法包括向所述受試者施用有效量的抗-FGFR3抗體以減少細胞增殖。在一個方面，本發明提供殺傷受試者中的細胞的方法，所述方法包括向所述受試者施用有效量的抗-FGFR3抗體以殺傷細胞。在一些實施方案中，所述細胞是多發性骨髓瘤細胞。在一些實施方案中，所述細胞被ADCC殺傷。在一些實施方案中，所述抗體是裸抗體。 在一些實施方案中，所述細胞過表達FGFR3。在一個方面，本發明提供清除受試者中的細胞(諸如多發性骨髓瘤細胞)的方法， 所述方法包括向所述受試者施用有效量的抗-FGFR3抗體以殺傷細胞。在一些實施方案中， 所述細胞被ADCC殺傷。在一些實施方案中，所述抗體是裸抗體。在一些實施方案中，所述細胞過表達FGFR3。在一個方面，本發明提供治療或預防骨骼病症的方法。在一些實施方案中，所述病症是軟骨發育不全、軟骨發育不良、侏儒症、致死性發育不全(TD ；臨床形式TDl和TDII)或顱縫早閉綜合症。本發明的方法可以進一步包括附加的治療步驟。例如，在一個實施方案中，一種方法進一步包括一個步驟，在所述步驟中被靶向的細胞和/或組織(例如，癌細胞)暴露於放射治療或化療劑。在一個方面，本發明提供了下述方法，所述方法包括施用有效量的抗-FGFR3抗體結合有效量的另一種治療劑(諸如抗-血管生成劑，另一種抗體，化療劑，細胞毒性劑，免疫抑制劑，前藥，細胞因子，細胞毒性放射治療，皮質類固醇，止吐劑，癌症疫苗，止痛劑，或生長抑制劑)。例如，抗-FGFR3抗體與抗癌劑或抗血管生成劑聯合使用以治療多種腫瘤或非腫瘤病症。在具體的實例中，抗-FGFR3抗體與下列聯合使用萬珂(velcade)，來那度胺(revlimid)，他莫昔芬(tamoxifen)，來曲唑(Ietrozole)，依西美坦(exemestane)， 阿那曲唑(anastrozole),伊立替康(irinotecan),西妥昔單抗(cetuximab),氟維司群(fulvestrant),長春瑞濱(vinorelbine),貝伐珠單抗(bevacizumab),長春新鹼 (vincristine),順鉬(Cisplain)AllKt!^ (gemcitabine),甲氨蝶呤(methotrexate),長春喊(vinblastine),卡怕(carboplatin),紫杉醇(paclitaxel),多西他賽(docetaxel), 培美曲塞(pemetrexed), 5-氣尿口密 Pg (5-f luorouracil)，多柔比星(doxorubicin)， 硼替佐米(bortezomib)，來那度胺(Ienalidomide)，地塞米松(dexamethasone)，馬法蘭(melphalin)，潑尼松(prednisone)，長春新鹼(vincristine)和/或沙利度胺 (thalidomide)。取決於待治療的具體癌症適應證，本發明的聯合療法可以與附加的治療劑諸如化療劑，或附加的療法諸如放療或手術結合。許多已知的化療劑可以用於本發明的聯合療法中。優選使用為用於治療所述具體適應證的標準的那些化療劑。要聯合使用的每種治療劑的劑量或頻次優選與當不使用其他一種或多種藥劑時相應治療劑的劑量或頻次相同，或小於相應治療劑的劑量或頻次。在另一個方面，本發明提供本文所述的任一種抗-FGFR3抗體，其中所述抗-FGFR3 抗體包含可檢測的標記物。在另一個方面，本發明提供本文所述的任一種抗-FGFR3抗體和FGFR3的複合體。在一些實施方案中，所述複合體在體內或體外。在一些實施方案中，所述複合體包含癌細胞。在一些實施方案中，抗-FGFR3抗體被可檢測地標記。附圖簡要說明圖1A，IB和IC 抗-FGFR3抗體的重鏈和輕鏈HVR環序列。所述附圖顯示重鏈HVR 序列，HI, H2和H3，以及輕鏈HVR序列，Li，L2，禾口 L3。序列編號如下克隆184. 6 (HVR-H1 是 SEQ ID NO 1 ；HVR-H2 是 SEQ ID NO 2 ；HVR-H3 是 SEQ ID NO 3 ；HVR-Ll 是 SEQ ID NO 4 ；HVR-L2 是 SEQ IDNO 5 ；HVR-L3 是 SEQ ID NO 6)；克隆184. 6. 1 (HVR-H1 是 SEQ ID NO 7 ；HVR-H2 是 SEQ ID NO 8 ；HVR-H3 是 SEQ ID NO 9 ；HVR-Ll 是 SEQ ID NO 10 ；HVR-L2 是 SEQ IDNO 11 ；HVR-L3 是 SEQ ID NO 12)克隆184. 6. 58 (HVR-H1 是 SEQ ID NO 13 ；HVR-H2 是 SEQ ID NO 14 ；HVR-H3 是 SEQ ID NO 15 ；HVR-Ll 是 SEQ ID NO 16 ；HVR-L2 是 SEQ IDNO 17 ；HVR-L3 是 SEQ ID NO 18)克隆184. 6. 62 (HVR-H1 是 SEQ ID NO 48 ；HVR-H2 是 SEQ ID NO 49 ；HVR-H3 是 SEQ ID NO 50 ；HVR-Ll 是 SEQ ID NO 51 ；HVR-L2 是 SEQ IDNO 52 ；HVR-L3 是 SEQ ID NO 53)克隆184. 6. 21 (HVR-H1 是 SEQ ID NO 54 ；HVR-H2 是 SEQ ID NO 55 ；HVR-H3 是 SEQ ID NO 56 ；HVR-Ll 是 SEQ ID NO 57 ；HVR-L2 是 SEQ IDNO 58 ；HVR-L3 是 SEQ ID NO 59)克隆184. 6. 49 (HVR-H1 是 SEQ ID NO 60 ；HVR-H2 是 SEQ ID NO 61 ；HVR-H3 是 SEQ ID NO 62 ；HVR-Ll 是 SEQ ID NO 63 ；HVR-L2 是 SEQ IDNO 64 ；HVR-L3 是 SEQ ID NO 65)克隆184. 6. 51 (HVR-H1 是 SEQ ID NO 66 ；HVR-H2 是 SEQ ID NO 67 ；HVR-H3 是 SEQ ID NO 68 ；HVR-Ll 是 SEQ ID NO 69 ；HVR-L2 是 SEQ IDNO 70 ；HVR-L3 是 SEQ ID NO 71)克隆184. 6. 52 (HVR-H1 是 SEQ ID NO 72 ；HVR-H2 是 SEQ IDNO 73 ；HVR-H3 是 SEQ ID NO 74 ；HVR-Ll 是 SEQ ID NO 75 ；HVR-L2 是 SEQ ID NO 76 ；HVR-L3 是 SEQ ID NO 77)克隆184. 6. 92 (HVR-H1 是 SEQ ID NO 78 ；HVR-H2 是 SEQ IDNO 79 ；HVR-H3 是 SEQ ID NO 80 ；HVR-Ll 是 SEQ ID NO 81 ；HVR-L2 是 SEQ ID NO 82 ；HVR-L3 是 SEQ ID NO 83)克隆184. 6. 1. N54S (HVR-H1 是 SEQ ID NO 84 ；HVR-H2 是 SEQ IDNO 85 ；HVR-H3 是 SEQ ID NO 86 ；HVR-Ll 是 SEQ ID NO 87 ；HVR-L2 是 SEQ ID NO 88 ；HVR-L3 是 SEQ ID NO 89)克隆184. 6. 1. N54G (HVR-H1 是 SEQ ID NO 90 ；HVR-H2 是 SEQ IDNO 91 ；HVR-H3 是 SEQ ID NO 92 ；HVR-Ll 是 SEQ ID NO 93 ；HVR-L2 是 SEQ ID NO 94 ；HVR-L3 是 SEQ ID NO 95)克隆184. 6. 1. N54A (HVR-H1 是 SEQ ID NO 96 ；HVR-H2 是 SEQ IDNO 97 ；HVR-H3 是 SEQ ID NO 98 ；HVR-Ll 是 SEQ ID NO 99 ；HVR-L2 是 SEQ ID NO :100 ；HVR-L3 是 SEQ ID NO 101)克隆184. 6. 1. N54Q (HVR-H1 是 SEQ ID NO :102 ；HVR-H2 是 SEQID NO :103 ；HVR-H3 是 SEQ ID NO 104 ；HVR-Ll 是 SEQ ID NO :105 ；HVR-L2 是 SEQ ID NO :106 ；HVR-L3 是 SEQ ID NO 107)克隆184. 6. 58. N54S (HVR-H1 是 SEQ ID NO 108 ；HVR-H2 是 SEQID NO 109 ；HVR-H3 是 SEQ ID NO 110 ；HVR-Ll 是 SEQ ID NO :111 ;HVR_L2 是 SEQ ID NO :112 ;HVR_L3 是 SEQ ID NO 113)克隆184. 6. 58. N54G(HVR-H1 是 SEQ ID NO :114 ;HVR_H2 是 SEQID NO 115 ；HVR-H3是 SEQ ID NO 116 ；HVR-Ll 是 SEQ ID NO :117 ;HVR_L2 是 SEQ ID NO :118 ；HVR-L3 是 SEQ ID NO 119)克隆184. 6. 58. N54A (HVR-H1 是 SEQ ID NO :120 ；HVR-H2 是 SEQID NO :121 ；HVR-H3 是 SEQ ID NO 122 ；HVR-Ll 是 SEQ ID NO :123 ；HVR-L2 是 SEQ ID NO 124 ;HVR_L3 是 SEQ ID NO 125)克隆184. 6. 58. N54Q (HVR-H1 是 SEQ ID NO :126 ；HVR-H2 是 SEQID NO :127 ；HVR-H3 是 SEQ ID NO 128 ；HVR-Ll 是 SEQ ID NO :129 ；HVR-L2 是 SEQ ID NO :130 ；HVR-L3 是 SEQ ID NO 131)。克隆184. 6. l.NS D30E (HVR-H1 是 SEQ ID NO 143 ;HVR_H2 是 SEQ ID NO :144; HVR-H3 是 SEQ ID NO :145 ；HVR-Ll 是 SEQ ID NO :140 ；HVR-L2 是 SEQ ID NO :141 ；HVR-L3 是 SEQ ID NO 142)。胺基酸位置根據下述Kabat編號系統進行編號。圖 2A 和 2B 描繪了 (A)抗-FGFR3 抗體 184. 6. 1. N54S, 184. 6. 58，和 184. 6. 62 的重鏈可變區和輕鏈可變區的胺基酸序列；和⑶抗-FGFR3抗體1G6，6G1，和15B2的高變區。圖3A，3B，和4 描繪了示例性的接納體(acceptor)人共有構架序列，其用於使用如下的序列標識符實施本發明可變重鏈(VH)共有構架(圖3A,3B)人VH 亞組 I 共有構架減去 Kabat CDRs (SEQ ID NOS 19 和 203-205)人VH亞組I共有構架減去延伸的高變區(SEQ ID NOS :20和206-208，21和 209-211,22 和 212-214)人VH 亞組 II 共有構架減去 Kabat CDRs (SEQ ID NOS 23 和 215-217)人VH亞組II共有構架減去延伸的高變區(SEQ ID NOS : 和218-220，25和 221-223,26 和 224-226)人VH亞組II共有構架減去延伸的人VH 亞組 III 共有構架減去 Kabat CDRs (SEQ ID NOS 27 和 227-229)人VH亞組III共有構架減去延伸的高變區(SEQ ID NOS 和230-232，四和 233-235,30 和 236-238)人VH 接納體構架減去 Kabat CDRs (SEQ ID NOS 31 和 239-241)人VH接納體構架減去延伸的高變區(SEQ ID NOS :32和M2-M4，33和2245-247)人VH 接納體 2 構架減去 Kabat CDRs (SEQ ID NOS 34 和 248-250)人VH接納體2構架減去延伸的高變區(SEQ ID NOS :；35和251-253，36和254-256， 37 和 257-259)可變輕鏈(VL)共有構架(圖4)人VL κ亞組I共有構架(SEQ ID NO 38和洸0_262)人VL κ 亞組 II 共有構架(SEQ ID NO 39 和洸3_265)人VLk 亞組 III 共有構架(SEQ ID NO 40 和洸6_268)人VL κ 亞組 IV 共有構架(SEQ ID NO 41 和洸9_271)圖 5 描繪了 huMAb4D5-8 輕鏈(SEQ ID NOS 42-45)和重鏈(SEQ IDNOS :46,47, 175，176)的構架區序列。上標/粗體中的數字表示按照Kabat的胺基酸位置。
圖 6 描繪了 huMAb4D5-8 輕鏈(SEQ ID NOS :42,43,177，45)和重鏈(SEQ ID NOS 46，47，178，和176)的修飾/變體的構架區序列。上標/粗體中的數字表示按照Kabat的胺基酸位置。上標/粗體中的數字表示按照Kabat的胺基酸位置。圖7 在膀胱癌細胞RTl 12中敲低FGFR3抑制增殖並在體外誘導Gl細胞周期停滯， 並在體內抑制腫瘤生長。將三種不同的FGFR3shRNA克隆進Tet-可誘導型表達載體中。使用嘌呤黴素選擇建立穩定表達FGFR3shRNAs或對照shRNA的RTl 12細胞。㈧在選擇的用強力黴素處理或未用強力黴素(DoX，0，0. 1和1μ g/ml，從左至右)處理的克隆中顯示FGFR3 表達的代表性印跡.(B)RT112穩定細胞的[咕]-胸苷的摻入。將RT112穩定的克隆用或不用 1 μ g/ml強力黴素培養3天，然後與[3H]-胸苷(1 μ Ci/孔)溫育16小時。摻入的[3H]-胸苷的計數針對來自沒有使用強力黴素誘導的細胞的計數進行標準化。誤差條代表SEM。(C) RTl 12穩定細胞的DNA螢光流式細胞儀直方圖。表達對照shRNA或FGFR3 shRNA4的RTl 12 克隆用或不用1 μ g/ml強力黴素培養72小時，並用碘化丙啶(PI)染色細胞核。對FGFR3 shRNA2和6獲得類似的結果(圖16)。(D)表達對照shRNA (每個處理組η = 9)或FGFR3 shRNA4(每個處理組η= 11)的RT112細胞在小鼠中的生長。小鼠單獨給予5%蔗糖或補充以lmg/ml強力黴素，並且一周測量腫瘤大小兩次。誤差條代表SEM。對FGFR3shRNA2和 6獲得類似的結果(圖16)。下部圖片從對照shRNA或FGFR3shRNA4穩定細胞異種移植物組織中提取的腫瘤裂解產物中FGFR3蛋白的表達。圖8 :R3Mab阻斷FGF/FGFR3相互作用。(A) R3Mab對人FGFR3的選擇性結合。人 FGFR1-4FC嵌合蛋白被固定並與漸增量的R3Mab溫育。使用抗-人Fab抗體檢測特異性結合。(B-C)R3Mab阻斷FGFl與人FGFR3-IIIb(B)或IIIc(C)的結合。使用生物素化的 FGFl-特異性多克隆抗體檢測特異性結合。(D-E) R3Mab阻斷FGF9與人FGFR3_inb (D)或 IIIc(E)的結合。使用生物素化的FGF9-特異性多克隆抗體檢測特異性結合。誤差條代表平均值的標準誤差(SEM)並且有時小於符號。圖9 :R3Mab抑制由野生型和突變的FGFR3驅動的Ba/F3細胞增殖。(A) R3Mab對表達野生型人FGFR3-IIIb的Ba/F3細胞的活力的抑制作用。細胞在不含FGFl (無FGF1)的培養基中培養，或在單獨的lOng/ml FGFl加10 μ g/ml肝素(FGFl)的存在下培養，或結合對照抗體(Control)或R3Mab培養。在與抗體溫育72小時後用CellTiter-Glo (Promega) 評價細胞活力。(B)在Ba/F3-FGFR3-inbWT穩定的細胞中R3Mab對FGFR3和MAPK磷酸化的抑制。將細胞用15ng/ml FGFl和10 μ g/ml肝素⑴或單獨肝素㈠處理10分鐘，然後與對照Ab (Ctrl)，遞減量的PBS中的R3Mab (分別為1，0，2，0. 04 μ g/ml)，或單獨PBS (模擬 (Mock))預溫育3小時。裂解產物用分別針對pFGFRY65V654和pMAPK—4的抗體進行免疫印跡以評價FGFR3和p44/42MAPK的磷酸化。(C)基於發表的數據的膀胱癌中FGFR3突變熱點和頻次的示意性圖示(繪製的序列編號基於FGFR3inb同種型胺基酸序列)(32)。TM， 跨膜結構域；TKl和TK2，酪氨酸激酶結構域1和2。(D-H) R3Mab對表達癌相關FGFR3突變體的Ba/F3細胞的活力的抑制作用。G372C來自IIIc同種型，且其餘的來自Inb同種型。 對於所有突變體的序列編號基於FGFR3inb同種型胺基酸序列(包括G372C突變體，其將基於FGFR3IIIC同種型胺基酸序列編號為G370C)。如(A)中所述在與抗體溫育72小時後評價細胞活力。誤差條表示SEM。圖10 :R3Mab的表位作圖以及R3Mab Fab片段和人FGFR3_IIIb的IgD2_D3之間的複合體的晶體結構。(A)通過跨越人FGFR3的IgD2-D3的13個肽與R3Mab的結合確定的表位。每個生物素化的肽被俘獲在鏈黴抗生物素蛋白(streptavidin)包被的微量滴定孔上並與R3Mab溫育。使用山羊抗人IgG抗體檢測特異性結合的R3Mab。(B)人FGFR3肽 3 (LAVPAANTVRFRCPA (SEQ ID NO :179)和 11 (SDVEFHCKVYSDAQP(SEQ ID NO :180)與人FGFRl 的細胞外區段(肽 3 :HAVPAAKTVKn(CPS(SEQ ID NO :181)；肽 11 :SNVEFMCKVYSDPQP (SEQ ID NO 182))的序列比對。參與初級FGF2-FGFR1相互作用、肝素結合、和受體-受體締合的 FGFRl殘基分別以粗體、斜體和下劃線的字體顯示。FGFRl殘基的功能比對基於Plotnikov 等(34)。(C)與人reFR3IgD2-D3(顯示在分子表面，白色)形成複合體的R3Mab Fab (顯示為絲帶-螺旋，輕鏈灰色，重鏈黑色)的結構。參與配體結合和二聚作用的受體殘基基於Plotnikov等(34)分別以灰色/陰影交叉線和深灰色著色。(D)晶體結構的特寫顯示來自Fab的⑶R-H3和-H2構成與FGFR3的IgD2和IgD3的主要相互作用位點。(E) FGFR3-IIIc-FGFl 複合體(PDB 代碼 1RY7)與 FGFR3-IIIb_Fab 複合體的重疊。FGFR3_IIIc 和FGFl分別以灰色和深灰色著色。FGFR3-IIIb以白色顯示，且Fab以淺灰色顯示輕鏈，深灰色顯示重鏈。IgD2用作用於重疊的錨。注意當被R3Mab結合時來自兩個結構的重疊良好的IgD2和FGFR3-IIIb的IgD3所採取的新構象。(F)FGFR3-IIIc-FGFl複合體(PDB代碼 1RY7)與FGFR3-IIIb-Fab複合體重疊的另一圖示。FGFR3_IIIc和FGFl顯示為分子表面， 它們分別是灰色/網狀構造和深灰色/斑點構造。FGFR3-inb顯示為白色且Fab以灰色顯示輕鏈，黑色顯示重鏈。IgD2用作用於重疊的錨。注意當被R3Mab結合時來自兩個結構的重疊良好的IgD2和FGFR3-IIIb的IgD3所採取的新構象。圖11 :R3Mab抑制表達野生型或突變的FGFR3S249e的膀胱癌細胞中的增殖、克隆性生長和FGFR3信號傳導。㈧在膀胱癌細胞系RT112中R3Mab抑制[3H]-胸苷摻入。誤差條代表SEM。(B)在膀胱癌細胞系RT112中與單獨處理培養基(Mock)或對照抗體(Ctrl)相比較，R3Mab (15 μ g/ml)阻斷FGFl-激活的FGFR3信號傳導。細胞裂解物用抗-FGFR3抗體免疫沉澱並用抗磷酸-酪氨酸抗體GG10)評價FGFR3磷酸化。將裂解物免疫印跡以檢測 AKT(pAKTs473)和p44/42MAPK(pMAPK—4)的磷酸化。(C)在膀胱癌細胞系UMUC_14(攜帶 FGFR3S249C)中與單獨處理培養基(Mock)或對照抗體(Ctrl)相比較，R3Mab (10 μ g/ml)抑制克隆性生長。(D) (C)中研究的定量，從12個孔的復孔報告每孔直徑大於120 μ m的集落數。 誤差條代表 SEM。P < 3. 4X10"9 相對於 Mock 或 Ctrl。(E)在 UMUC-14 細胞中 R3Mab (15 μ g/ ml)抑制FGFR3磷酸化。如(B)中那樣分析FGFR3磷酸化。注意在此細胞系中FGFR3的組成型磷酸化。圖12 :R3Mab通過將二聚體-單體平衡朝向單體狀態驅動來減少二硫化物連接的 FGFR3S249C 二聚體的穩態水平。(A)在UMUC-14細胞中R3Mab對FGFR3S249e 二聚體的作用。將細胞與R3Mab (15 μ g/ml)或對照抗體(Ctrl)溫育3小時，且通過在非還原和還原條件下的免疫印跡來分析全細胞裂解物。(B)在UMUC-14細胞中游離巰基阻斷劑DTNB對FGFR3S249G二聚體-單體平衡的作用。將UMUC-14細胞用漸增濃度的DTNB處理3小時，如㈧中那樣分析細胞裂解物。(C)在體外R3Mab對純化的重組FGFR3S249e 二聚體的作用。由IgD2_D3構成的 FGFR3S249C 二聚體通過尺寸排阻柱純化，並與PBS (Mock)，對照抗體(Ctrl)，或R3Mab在37°C 下溫育。在指定的時間收集樣品用於在非還原條件下進行免疫印跡分析。使用抗-FGFR3 雜交瘤抗體6G1 (A-C)檢測FGFR3 二聚體-單體。
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圖13 :R3Mab抑制膀胱癌細胞的異種移植物生長和Ba/F3_FGFR3S249G的同種異體移植物生長。(A)與賦形劑(vehicle)對照相比，R3Mab對預先形成的RT112膀胱癌異種移植物的生長的作用。每組η = 10。(B)R3Mab抑制RT112腫瘤組織中的FGFR3信號傳導。在獨立的實驗中，收集用15mg/kg對照抗體(Ctrl)或R3Mab處理48小時或72小時的RTl 12 異種移植物腫瘤(每組η = 3)，勻漿並通過免疫印跡分析FRS2 α和MAPK激活。(C) R3Mab 對預先形成的Ba/F3-FGFR3S249G同種異體移植物的生長的作用。每組n = 10。(D)R3Mab對預先形成的UMUC-14膀胱異種移植物的生長的作用，每組η = 10。(E)在UMUC-14腫瘤組織中R3Mab對FGFR3S249G 二聚體和信號傳導的作用。收集用30mg/kg對照抗體(Ctrl)或 R3Mab處理M小時或72小時的UMUC-14異種移植物腫瘤(每組η = 3)，勻漿並通過免疫印跡分析FGFR3S249G 二聚體-單體以及MAPK激活。使用抗-FGFR3兔多克隆抗體sc9007檢測FGFR3 二聚體-單體以避免來自腫瘤裂解物中小鼠IgG的幹擾。誤差條代表SEM。圖14 :在^4 ； 14)陽性多發性骨髓瘤模型中，ADCC有助於R3Mab的抗-腫瘤功效。 (A-B) R3Mab對預先形成的0PM2 (A)和KMSll (B)骨髓瘤異種移植物的生長的作用。每組η =10。(C-F)在細胞培養中R3Mab誘導的骨髓瘤細胞系0PM2 (C)和KMSll (D)，或膀胱癌細胞系RT112(E)和UMUC-14(F)的細胞裂解。骨髓瘤或膀胱癌細胞與新鮮分離的人PBMC在 R3Mab或對照抗體的存在下溫育。細胞毒性通過測量上清液中釋放的LDH來測定。(G-H) R3Mab或其DANA突變體對預先形成的0PM2 (G)和KMSll (H)骨髓瘤異種移植物的生長的作用。每組η = 10。誤差條代表SEM並且有時小於符號。圖15 用SiRNA敲低FGFR3抑制膀胱癌細胞系的細胞增殖。在Genentech設計和合成6-7種不同的FGFR3 siRNAs和三種非特異性對照siRNA。將膀胱癌細胞系RTl 12 (A)， SW780 (B)，RT4 (C)和UMUC-14 (D)接種至96孔板(3000細胞/孔)中並使其貼壁過夜，並且用與RNAiMaxanvitrogen)形成複合體的25nM siRNA瞬時轉染。轉染後72hr，將[3H]-胸苷(1 μ Ci/孔)加入至培養物(Α，C，和D)中進行另外16小時溫育。摻入的[3H]-胸苷用 TopCoimt定量。數據針對來自用單獨RNAiMax轉染的細胞(Mock)的數據進行標準化。誤差條代表SEM。下部圖片顯示siRNA轉染的細胞中FGFR3表達的代表性印跡。(B)轉染後 96小時用CellTiter-Glo(Promega)測量細胞活力。誤差條代表SEM。圖16 在膀胱癌細胞系RTl 12中敲低FGFR3在體外誘導Gl細胞周期停滯，並在體內抑制腫瘤生長。設計三種不同的FGFR3RNA並克隆至Tet-誘導型shRNA表達逆轉錄病毒載體中。採用嘌呤黴素選擇建立表達FGFR3shRNA或對照shRNA的RT112穩定的克隆。 (A)在用或不用1 μ g/ml強力黴素處理72小時後從表達FGFR3shRNA2或shRNA6的RT112 穩定的細胞獲得的碘化丙啶(PI)-染色的細胞核的DNA螢光流式細胞儀直方圖。(B)表達 FGFR3shRNA2-4(每個處理組 η = 11)或 FGFR3shRNA6_16 (每個處理組 η = 10)的 RT112 穩定的細胞在nu/nu小鼠中的生長。荷瘤小鼠接受僅5%蔗糖(實心圓圈)或5%蔗糖加 lmg/ml強力黴素(實心方形)，並且用測徑器測量腫瘤一周兩次。誤差條代表SEM。圖17 抗-FGFR3雜交瘤抗體16G，6G1和15B2對由野生型和突變的FGFR3驅動的 Ba/F3細胞增殖的作用。抗-FGFR3雜交瘤抗體通過用人FGFR3_IIIb/Fc或人FGFR3_IIIc/ Fc嵌合體免疫BALB/c小鼠產生。在來自ClonaCell 雜交瘤選擇試劑盒(StemCell Technologies, Inc.，Vancouver, BC, Canada)的培養基D中使用次黃嘌呤-氨基喋呤_胸苷選擇來選擇融合的雜交瘤細胞。相繼地通過ELISA篩選雜交瘤抗體結合FGFR3-inb和FGFR3-IIIC的能力並通過FACS識別細胞表面FGFR3。然後將選擇的雜交瘤通過有限稀釋克隆。類似於圖9A中所述，16G，6G1和15B2是用來評價對表達野生型或突變的FGFR3的 Ba/F3細胞增殖的作用的克隆。誤差條代表SEM。圖18 通過肽譜和晶體結構分析確定的R3Mab表位的比較。㈧由與人FGFR3的細胞外IgD2-D3區段形成複合體的R3Mab Fab片段的結構揭示的表位。與Fab重鏈和輕連結觸的FGFR3殘基分別用黑色和灰色著色。(B)FGFR3上肽3和11的位置。圖19 在包含野生型或突變的FGFR3S249G的膀胱癌細胞中，R3Mab抑制增殖和FGFR3 信號傳導。(A)在膀胱癌細胞系RT4中R3Mab抑制細胞活力。在與抗體溫育96hr後用 CellTiter-Gl0(Promega)評價細胞活力。誤差條代表SEM。(B)在膀胱癌細胞系RT4中 R3Mab (15ug/ml)阻斷FGFl-激活的FGFR3信號傳導。(C)在膀胱癌細胞系RCC-97-7 (包含FGFR3S249G)中，R3Mab抑制[3H]-胸苷摻入。誤差條代表SEM。(D)在TCC-97-7細胞中， R3Mab(15ug/ml)抑制 FGFR3 磷酸化。(E)與對照抗體(Ctrl)相比，在與 R3Mab (15ug/ml) 溫育3小時後TCC-97-7細胞中的FGFR3S249G 二聚體減少。圖20 在UMUC-14細胞中，胞吞作用抑制劑對R3Mab和FGFR3S249e 二聚體的內在化的作用。(A)胞吞作用抑制劑對R3Mab的內在化的作用。將用各種胞吞作用抑制劑或DMSO 在37°C下預處理1小時的UMUC-14細胞與R3Mab (15ug/ml)在37°C下溫育3小時以允許內在化。使用低PH洗滌來移除細胞表面R3Mab從而使內在化的抗體可視化。固定細胞並用 Alexa 488-標記的抗-人IgG染色細胞。使用共聚焦顯微鏡攝取圖像。(B)在用R3Mab處理的UMUC-14細胞中，胞吞作用抑制劑對FGFR3S249e 二聚體的作用。將用各種胞吞作用抑制劑或DMSO在37°C下預處理1小時的UMUC-14細胞與載體對照(mock) (1道)，對照抗體O 道)，或R3Mab (15ug/ml,3道)在37°C下溫育3小時。細胞裂解物在非還原或還原條件下通過免疫印跡分析FGFR3蛋白。注意氯丙嗪(網格蛋白介導的胞吞作用的抑制劑)和染料木素(胞吞作用的pan-抑制劑(pan-inhibitor))阻斷R3Mab內在化，但對R3Mab誘導的 FGFR3S249C 二聚體減少沒有作用。圖21 不同抗-FGFR3抗體在非還原條件下針對單體和二聚體FGFR3S249G的檢測靈敏度。在用R3Mab (1道)，對照IgGl O道)，或PBS (3道)處理3小時後，將UMUC-14細胞裂解，並將細胞裂解物在還原或非還原條件下進行免疫印跡分析。注意6G1 (在Genentech 產生的鼠雜交瘤抗體)檢測FGFR3S249G:聚體和單體兩者，而sc9007(兔多克隆抗體， SantaCruz Biotechnology)或 scl3121 (鼠雜交瘤抗體，Santa Cruz Biotechnology)優先地檢測二聚體FGFR3S249G。圖22 :R3Mab對t(4 ； 14) +多發性骨髓瘤細胞的增殖的作用。(A) R3Mab對UTMC-2細胞的[3H]-胸苷摻入的抑制作用。UTMC-2細胞在包含R3Mab或對照抗體的培養基中在25ng/ ml FGF9和5ug/ml肝素或單獨肝素(無FGF9)的存在下生長。溫育6天後，加入[3H]-胸苷溫育16hr。數據針對來自在缺少FGF9和抗體的條件下生長的細胞的數據進行標準化。 (B-C) R3Mab對0PM2 (B)和KMSll(C)細胞的[3H]-胸苷摻入的作用。生長在1. 5% FBS培養基中的細胞用R3Mab或對照抗體處理6天。數據針對來自未處理的細胞的數據進行標準化。誤差條代表SEM。圖23 骨髓瘤和膀胱癌細胞中FGFR3的細胞表面表達水平。(A)通過FACS分析評估的骨髓瘤細胞和膀胱癌細胞中的細胞表面FGFR3表達。細胞用藻紅蛋白-綴合的針對人FGFR3的小鼠mAb (FAB766P，R&DSystems)或藻紅蛋白-綴合的同種型對照小鼠IgGl (BD Pharmingen)染色。(B)骨髓瘤細胞和膀胱癌細胞中FGFR3密度的katchard分析。R3Mab 被放射性碘化並與細胞在含有過量未標記的抗體的懸浮液中溫育。在RT下溫育2小時後， 細胞通過離心沉澱，並洗滌兩次。測定特異性結合的1251。受體密度和結合親合力(Kd)代表兩次結合實驗的平均值。圖M :R3Mab或其DANA突變體對膀胱癌細胞的異種移植物生長的作用。(A) R3Mab 和其DANA突變體(各自50mg/kg)對預先形成的RTl 12腫瘤的生長的作用。⑶R3Mab和其 DANA突變體(各自50mg/kg)對預先形成的UMUC-14腫瘤的生長的作用。誤差條代表SEM。發明詳述本發明在本文中提供可用於例如，治療或預防與FGFR3的表達和/或活性，諸如增加的表達和/或活性或不合乎需要的表達和/或活性相關的疾病狀態的抗-FGFR3抗體。在一些實施方案中，本發明的抗體用來治療腫瘤、癌症和/或細胞增生性病症。在另一個方面，本發明的抗-FGFR3抗體具有用作檢測和/或分離FGFR3，諸如在多種組織和細胞類型中檢測FGFR3的試劑的用途。本發明進一步提供製備和使用抗-FGFR3抗體、和編碼抗-FGFR3抗體的多核苷酸的方法。通用技術本文所述或參考的技術和方法通常是本領域技術人員充分了解的並且使用常規方法普遍地採用的，諸如例如，在下述參考文獻中所述廣泛使用的方法Sambrook等， 分子克隆實驗室手冊(Molecular Cloning =ALaboratory Manual)，第 3 版(2001) 冷泉港實驗室出版社，冷泉港，N. Y.現代分子生物學實驗技術(⑶RRENT PROTOCOLS IN M0LECULARBI0L0GY) (F. Μ· Ausubel，等.編輯，(2003))；酶學方法(Methods INENZYM0L0GY)系列(學術出版社公司)PCR 2 實用方法(PCR 2 :APRACTICAL APPROACH) (Μ. J. MacPherson，B. D. Hames 和 G. R. Taylor 編輯(1995))，Harlow 和 Lane,編輯(1988) 抗體，實驗室手冊，和動物細胞培養(ANTIBODIES, A LABORATORY MANUAL, and ANIMAL CELLCULTURE) (R. I. Freshney，編輯(1987))。定義「分離的」抗體指已經鑑定且與其天然環境的成分分離和/或從其回收的抗體。 抗體的天然環境的汙染性成分是將會干擾其診斷或治療用途的物質，並且可包括酶、激素、 和其它蛋白質性或非蛋白質性的溶質。在優選實施方案中，將抗體純化至(1)通過例如 Lowry法確定，超過95重量％的抗體，並且最優選超過99重量％的抗體，( 足以通過使用轉杯式測序儀(spinning cup sequenator)獲得至少15個殘基的N-末端或內部胺基酸序列的程度，或C3)通過使用例如考馬斯藍或優選銀染色，在還原性或非還原性條件下的 SDS-PAGE (十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺凝膠電泳)，達到同質。既然抗體的天然環境的至少一種成分不會存在，那麼分離的抗體包括重組細胞內的原位抗體。然而，分離的抗體通常通過至少一個純化步驟來製備。「分離的」核酸分子是這樣的核酸分子，其被鑑定並與至少一種汙染性核酸分子分離，其與所述至少一種汙染性核酸分子通常在所述核酸的天然來源中締合。分離的核酸分子不同於其在自然界中被發現時的形式或環境。因此，分離的核酸分子不同於存在於天然細胞中的核酸分子。然而，分離的核酸分子包括包含在通常表達核酸分子的細胞中的核酸分子(例如，編碼抗體的核酸)，其中，例如，所述核酸分子存在的染色體位置與天然細胞的染色體位置不同。術語「依照Kabat的可變結構域殘基編號方式」或「依照Kabat的胺基酸位置編號方式」及其變化形式指 Kabat 等，Sequences of Proteins of Immunological Interest (免疫學感興趣的蛋白的序列)，第 5 版，PublicHealth Service, National Institutes of Health,Bethesda,MD. (1991)中的用於抗體編制的重鏈可變結構域或輕鏈可變結構域的編號系統。使用此編號系統，實際的線性胺基酸序列可包含較少或另外的胺基酸，對應於可變結構域FR或⑶R的縮短或插入。例如，重鏈可變結構域可包含H2的殘基52後的單一胺基酸插入物(依照Kabat為殘基52a)及重鏈FR殘基82後的多個插入殘基(例如依照 Kabat為殘基82a、82b和82c等)。給定抗體的Kabat殘基編號方式可通過將抗體序列與 「標準」 Kabat編號序列的同源區進行比對來確定。術語「基本相似」或「基本不同，」用於本文時，是指在兩個數值(通常一個與本發明的抗體相關，而另一個與參照/比較抗體相關)之間的足夠高程度的相似性，從而使本領域技術人員認為在通過所述值(例如，Kd值)測量的生物學特徵的背景下，在兩個值之間的差異是具有很少或沒有生物學和/或統計學顯著性的。在所述兩個值之間的差異作為參照/比較抗體的值的函數優選小於約50%，優選小於約40%，優選小於約30%，優選小於約 20%，和/或優選小於約10%。「結合親合力」通常指分子(例如抗體)的單一結合位點與其結合配偶體(例如抗原)之間全部非共價相互作用總和的強度。除非另有說明，在用於本文時，「結合親合力」指反映結合對(例如抗體與抗原)的成員之間1 1相互作用的固有結合親合力。分子X對其配偶體Y的親合力通常可用解離常數(Kd)來表述。合乎需要的是Kd為1χ10_7，1χ10_8， &10-8，1Χ10-9，3Χ10-9，&10-9，或甚至1x10,或更強。親合力可通過本領域知道的常用方法來測量，包括本文中所描述的那些方法。低親合力抗體通常緩慢的結合抗原且趨於容易解離，而高親合力抗體通常更快速的結合抗原且趨於保持更長時間的結合。本領域知道測量結合親合力的多種方法，其中任一種都可用於本發明的目的。具體說明型實施方案在下文中描述。在一個實施方案中，根據本發明的「Kd」或「Kd值」通過如在下面測定法中所述用目的抗體的Fab形式和其抗原進行的放射性標記的抗原結合測定法(RIA)測量所述測定法測量Fabs對抗原的溶液結合親合力，這通過在存在滴定系列的未標記抗原時，用最小濃度的(125I)-標記的抗原來平衡Fab，接著用抗-Fab抗體-包被的板捕獲結合的抗原來進行 (Chen，等，(1999)分子生物學雜誌(J. Mol. Biol.) 293 :865-881)。為了確定測定的條件，將微量滴定板(Dynex)用5 μ g/ml的在50mM碳酸鈉(pH 9. 6)中的捕獲抗-Fab抗體(Cappel Labs)包被過夜，並隨後用PBS中的2% (w/v)牛血清白蛋白在室溫(約23°C )封閉2_5小時。在非吸附板(Nunc#269620)中，將IOOpM或^pM[125I]-抗原與目的Fab的系列稀釋物混合(例如，與在 I^resta 等，(1997)癌症研究(Cancer Res). 57 :4593-4599 中的抗-VEGF 抗體，Fab-12的評價一致)。接著，將目的Fab溫育過夜；然而溫育可以持續更長的階段(例如65小時)從而確保達到平衡。隨後，將混合物轉移到捕獲板中來在室溫進行溫育(例如， 1小時)。接著，去除溶液，並將所述板用在PBS中的0.1%吐溫-20洗滌8次。當所述板已經乾燥時，加入150 μ 1/孔的閃爍劑(Micrc^cint-20 ；Packard)，並將所述板在!"opcount γ 計數器O^ckard)上計數10分鐘。選擇提供少於或等於20%的最大結合的每種Fab的濃度用在競爭性結合測定法中。根據另一個實施方案，Kd或Kd值是通過使用表面等離振子共振測定法使用 BIAcore -2000 或 BIAcore -3000 (BIAcore，Inc.，Piscataway, NJ)在 25°C 使用固定化抗原CM5晶片以約10個響應單位(RU)測量的。簡言之，依照供應商的說明書用鹽酸 N-乙基-N，- (3- 二甲基氨基丙基)-碳化二亞胺(N-ethyl-N，- (3-dimethylaminoprop yl)-carbodiimide hydrochloride) (EDC)禾口 N-輕基琥拍酉先亞胺(N-hydroxysuccinimide) (NHS)活化羧甲基化葡聚糖生物傳感器晶片(CM5，BIAcore Inc.) 0用IOmM乙酸鈉pH4. 8 將抗原稀釋至5 μ g/ml (約0. 2 μ Μ)，然後以5 μ 1/分鐘的流速注入以獲得約10個響應單位(RU)的偶聯蛋白質。注入抗原後，注入IM乙醇胺以封閉未反應的基團。為了進行動力學測量，將Fab的兩倍連續稀釋液(0. 78ηΜ至500ηΜ)在25°C以約25 μ 1/分鐘的流速注入在含0.05%吐溫20的PBS(PBST)中。在一些實施方案中，下列的改進用於表面等離振子共振測定法將抗體固定在CM5生物傳感器晶片以達到大約400RU，並用於動力學測量，靶蛋白(例如，FGFR3-IIIb或-IIIc)的兩倍系列稀釋液(從67nM開始)在25°C以約30ul/分鐘的流速注入至PBST緩衝液中。使用簡單一對一朗格繆爾結合模型(one-to-oneLangmuir binding model) (BIAcore 評價軟體 3· 2 版(BIAcore EvaluationSoftware version 3.2)) 通過同時擬合締合和解離傳感圖來計算締合速率(k。n)和解離速率(k。ff)。平衡解離常數 (Kd)以比率！^乂！^計算。參見例如Chen等，(1999) J. Mol. Biol.(分子生物學雜誌)293 865-881。如果根據上文表面等離振子共振測定法，締合速率(on-rate)超過106M.1 S—1，則締合速率可使用螢光淬滅技術來測定，即如在分光計諸如配備了斷流裝置的分光光度計 (Aviv Instruments)或 8000 系列 SLM-Aminco 分光光度計(ThermoSpectronic)中用攪拌比色杯(stirred cuvette)測量，在存在漸增濃度的抗原的條件下，測量PBS，pH 7. 2中的 20nM抗-抗原抗體(Fab形式)在25 °C的螢光發射強度(激發=295nm ；發射=340nm, 16nm 通帶)的升高或降低。 Aimi _ 白勺 「·& Ι·，， (on—rate，g rate of association, association rate)或 「k。n」 也可使用 BIAcore -2000 或 BIAcore -3000 (BIAcore，Inc.，Piscataway, NJ)採用上述相同的表面等離振子共振技術，在25°C利用固定的抗原CM5晶片以約10個響應單位(RU)來測定。簡言之，依照供應商的說明書用鹽酸N-乙基-N』 -(3-二甲基氨基丙基)_碳化二亞胺(EDC)和N-羥基-琥珀醯亞胺(MB)活化羧甲基化葡聚糖生物傳感器晶片(CM5，BIAcore Inc.)。用IOmM乙酸鈉ρΗ4· 8將抗原稀釋至5 μ g/ml (約0· 2 μ Μ)，然後以5μ1/分鐘的流速注入至獲得約10個響應單位(RU)的偶聯蛋白質。注入抗原後，注入 IM乙醇胺以封閉未反應的基團。為了進行動力學測量，在25°C以約25 μ 1/分鐘的流速在含0. 05%吐溫20的PBS(PBST)中注入Fab (0. 78ηΜ至500ηΜ)的兩倍連續稀釋液。在一些實施方案中，下列的改進用於表面等離振子共振測定法將抗體固定在CM5生物傳感器晶片以達到大約400RU，並對於動力學測量，靶蛋白(例如，FGFR3-inb或-IIIc)的兩倍連續稀釋液(從67nM開始)在25°C以約30ul/分鐘的流速注入至PBST緩衝液中。使用簡單一對一朗格繆爾(Langmuir)結合模型(BIAcore Evaluation Software version 3. 2)通過同時擬合締合和解離S型曲線計算締合速率(k。n)和解離速率(k。ff)。平衡解離常數(Kd) 以比率k。ff/k。n計算。參見例如Chen，Y.等，(1999) J. Mol. Biol.(分子生物學雜誌)皿
31865-881。然而，如果根據上文表面等離振子共振測定法，締合速率超過IO6M-1S^那麼締合速率優選地使用螢光淬滅技術來測定，即根據分光計諸如配備了斷流裝置的分光光度計 (stop-flow equippedspectrophometer) (Aviv Instruments)或 8000 系列 SLM-Aminco 分光光度計(ThermoSpectronic)中用攪拌比色杯的測量，在存在濃度漸增的抗原的條件下， 測量PBS，pH 7.2中的20碰抗-抗原抗體(Fab形式)在25°C的螢光發射強度(激發= 295nm ；發射=340nm, 16nm帶通)的升高或降低。當用於本文時，術語「載體」意在指能夠運送已經與其連接的另一核酸的核酸分子。一種類型的載體是「質粒」，其指環狀雙鏈DNA環，另外的DNA區段可以連接在該環狀雙鏈DNA環中。另一種類型的載體是噬菌體載體。另一種類型的載體是病毒載體，其中另外的DNA區段可以連接至病毒基因組中。某些載體能夠在已經引入它們的宿主細胞中自主複製(例如，具有細菌複製起始點的細菌載體和附加型哺乳動物載體)。其他載體(例如，非附加型哺乳動物載體)在引入至宿主細胞中時可以整合至宿主細胞的基因組中，並且因此它們與宿主基因組一起複製。此外，某些載體能夠指導與它們可操作地連接的基因的表達。 這樣的載體在本文中稱為「重組表達載體」(或簡單地，「重組載體」)。通常，用於重組DNA 技術中的表達載體經常是質粒的形式。在本說明書中，「質粒」和「載體」可以互換使用，因為質粒是最普遍使用的載體形式。「多核苷酸」或「核酸」當在本文中可互換使用時，是指任意長度的核苷酸的聚合物，包括DNA和RNA。核苷酸可以是脫氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、修飾的核苷酸或鹼基、和 /或它們的類似物、或可以通過DNA或RNA聚合酶、或通過合成反應摻入至聚合物中的任何基質。多核苷酸可以包含修飾的核苷酸，諸如甲基化的核苷酸和它們的類似物。如果存在， 可以在所述聚合物組裝之前或之後施加對核苷酸結構的修飾作用。核苷酸的序列可以被非核苷酸成分中斷。多核苷酸可以在合成後進一步被修飾，諸如通過與標記物綴合。其他類型的修飾作用包括，例如，「帽(caps) 」，一個或多個天然存在的核苷酸被類似物的置換， 核苷酸間修飾諸如，例如，具有不帶電荷的鍵的那些(例如，膦酸甲酯，膦酸三酯，氨基磷酸酯(phosphoamidates)，氨基甲酸酯，等)和具有帶電荷鍵的那些(例如，硫代磷酸酯，二硫代磷酸酯，等)，包含側基結構部分的那些，諸如，例如，蛋白質(例如，核酸酶，毒素，抗體， 信號肽，聚-L-賴氨酸，等)，具有嵌入劑的那些(例如，吖啶，補骨脂素(psoralen)，等)， 包含螯合劑的那些(例如，金屬，放射性金屬，硼，氧化性金屬，等)，包含烷化劑的那些，具有修飾的鍵的那些(例如，α異頭核酸，等)，以及一種或多種未修飾形式的多核苷酸。此外，通常存在於糖中的任一個羥基可以被例如膦酸酯基團、磷酸酯基團置換，被標準的保護基團保護，或被活化以製備與另外的核苷酸連接的另外的鍵，或可以與固體或半固體的支持體綴合。5』和3』末端OH可以被磷酸化或被胺或1-20個碳原子的有機封端基團結構部分取代。其他羥基也可以被衍生為標準的保護基團。多核苷酸也可以包含本領域中普遍已知的核糖或脫氧核糖糖類的類似形式，包括，例如，2』-0-甲基-，2』-0-烯丙基，2』-氟-或 2』-疊氮基-核糖，碳環糖類似物，α -異頭糖，差向異構糖諸如阿拉伯糖，木糖或來蘇糖，吡喃糖，呋喃糖，景天庚酮糖(sedoh印tulose)，無環類似物和鹼性核苷類似物諸如甲基核糖核苷。一個或多個磷酸二酯鍵可以被可選的連接基團置換。這些可選的連接基團包括，但不限於，其中磷酸酯被P (O)S ( 「硫代酯(thioate)"),P(S)S( 「二硫代酯(dithioate) 」)， (0)NR2( 「醯胺化物」)，P(0)R，P(O)OR', CO 或 CH2( 「 甲縮醛(formacetal)")置換的實施方案，其中每個R或R』獨立地是H或取代的或未取代的烷基(1-20C)，任選地包含醚(-0-) 鍵，芳基，烯基，環烷基，環烯基或araldyl。多核苷酸中的所有鍵沒有必要是相同的。前面的描述適用於本文提及的所有多核苷酸，包括RNA和DNA。「寡核苷酸，，，當用於本文中時，通常是指短的、-般是單鏈的、-般是合成的多核苷酸，其通常，但非必要地，長度小於約200個核苷酸。術語「寡核苷酸」和「多核苷酸」不互斥。上面對於多核苷酸的描述同樣和完全地適用於寡核苷酸。關於肽或多肽序列的「百分比(％)胺基酸序列同-性」，定義為將候選序列與具體肽或多肽序列在進行序列比對(並在必要時導入空隙)以獲取最大百分比序列同-性，且不將任何保守置換視為序列同-性的部分之後，候選序列中的胺基酸殘基與所述具體肽或多肽序列中的胺基酸殘基相同的百分數。可使用本領域技術內的各種方法進行序列比對以便測定胺基酸序列同-性百分比，例如，使用公眾可得到的計算機軟體如BLAST、BLAST-2、 ALIGN或Megalign(DNASTAR)軟體。本領域技術人員可以決定測量比對的適宜參數，包括對所比較的序列全長獲得最大比對所需的任何算法。然而，為此目的，胺基酸序列同-性％值使用序列比較電腦程式ALIGN-2產生，其中用於ALIGN-2程序的全部原始碼在下面的表 A中提供。ALIGN-2序列比對電腦程式的作者是Genentech，Inc.，該原始碼已經隨用戶文檔提交至美國版權局(Washington D. C.，20559)，其美國版權註冊登記號為TXU510087。 公眾可通過Genentech，Inc. (South SanFrancisco，加利福尼亞)得到ALIGN-2程序，或者可以從例如W02007/001851中提供的原始碼進行編譯。ALIGN-2程序應當為在UNIX作業系統，優選在數字UNIX V4. OD上使用而進行編譯。ALIGN-2程序設定了所有序列比對參數並且不變。在ALIGN-2應用於胺基酸序列比較的情況中，給定胺基酸序列A相對於(to)、與 (with)、或針對(against)給定胺基酸序列B的胺基酸序列同-性％ (或者這樣說給定胺基酸序列A具有或含有相對於、與或針對給定胺基酸序列B的某胺基酸序列同-性)如下計算X/Y 比值乘以 100，其中X是用序列比對程序ALIGN-2在該程序的A和B比對中評分為相同匹配的胺基酸殘基數，且其中Y是B中的胺基酸殘基總數。可以理解，當胺基酸序列A與胺基酸序列 B的長度不相等時，A相對於B的胺基酸序列同-性％將不等於B相對於A的胺基酸序列同-性％。在-些實施方案中，兩個或多個胺基酸序列至少50 %，60 %，70 %，80 %，或90 %相同。在-些實施方案中，兩個或多個胺基酸序列至少95 %，97 %，98 %，99 %，或甚至100 % 相同。除非另外特別指出，使用ALIGN-2電腦程式如在緊接的前面段落中所述獲得在本文中所用的所有的％胺基酸序列同-性的值。術語「FGFR3，」當在本文中使用時，除非具體或另外根據上下文指示，是指任何天然或變體(不論天然或合成的)FGFR3多肽(例如，FGFR3-IIIb同種型或FGFR3-IIIc同種型)。術語「天然序列」具體包涵天然存在的截短形式(例如，細胞外結構域序列或跨膜亞基序列)，天然存在的變體形式(例如，選擇性拼接形式)和天然存在的等位基因變體。術語「野生型FGFR3」通常是指包含天然存在的FGFR3蛋白的胺基酸序列的多肽。術語「野生型FGFR3序列」通常是指存在於天然存在的FGFR3中的胺基酸序列。
術語「FGFR3配體，」(可互換地稱為「FGF」)當在本文中使用時，除非具體或另外根據上下文指示，是指任何天然或變體(不論天然或合成的)FGFR3配體(例如，FGF1，FGF2， FGF4，FGF8，FGF9，FGF17，FGF18，FGF23)多肽。術語「天然序列」具體地包涵天然存在的截短形式(例如，細胞外結構域序列或跨膜亞基序列)，天然存在的變體形式(例如，選擇性拼接形式)和天然存在的等位基因變體。術語「野生型FGFR3配體」通常是指包含天然存在的FGFR3配體蛋白的胺基酸序列的多肽。術語「野生型FGFR3配體序列」通常是指存在於天然存在的FGFR3配體中的胺基酸序列。"FGFR3激活」是指FGFR3受體的激活或磷酸化。一般而言，FGFR3激活導致信號轉導(例如，由FGFR3受體的胞內激酶結構域磷酸化FGFR3或底物多肽中的酪氨酸殘基所導致)。FGFR3激活可由FGFR配體結合目的FGFR3受體介導。結合FGFR3的FGFR3配體(例如，諸如FGFl或FGF9)可激活FGFR3的激酶結構域，從而導致FGFR3中的酪氨酸殘基的磷酸化和/或另外的一種或多種底物多肽中的酪氨酸殘基的磷酸化。術語「組成型」當用於本文中時，當例如應用於受體激酶活性時，是指受體的連續信號傳導活性，該活性不依賴於配體或其他激活分子的存在。取決於受體的性質，所有活性可以是組成型的或受體的活性可以進一步被其他分子(例如，配體)的結合激活。導致受體的激活的細胞事件對於本領域普通技術人員是公知的。例如，激活可以包括低聚化(例如，二聚化，三聚化等)成為更高級的受體複合物。複合物可以包含單一的蛋白物種，即，均聚複合物(homomeric complex)。備選地，複合物可以包含至少兩種不同的蛋白物種，S卩，異聚複合物(heteromeric complex)。複合物形成可以由例如，正常或突變體形式的受體在細胞表面上的過表達導致。複合物形成也可以由受體中一個或多個特定的突變導致。術語「配體-不依賴性」當用於本文中時，當例如應用於受體信號傳導活性時，是指不依賴於配體的存在的信號傳導活性。具有配體-不依賴性激酶活性的受體沒有必要排除用於產生另外的激酶活性激活的配體與該受體的結合。術語「配體-依賴性」當用於本文中時，當例如應用於受體信號傳導活性時，是指依賴於配體的存在的信號傳導活性。短語"基因擴增"是指這樣的過程，通過該過程在特定細胞或細胞系中形成多拷貝的基因或基因片段。被複製的區(一段擴增的DNA)常常被稱為「擴增子」。通常，所產生的信使RNA(mRNA)的量，即基因表達的水平，也與被表達的該特定基因產生的拷貝數成比例地增加。『『酪氨酸激酶抑制劑〃是這樣的分子，其在一些程度上抑制酪氨酸激酶如FGFR3 受體的酪氨酸激酶活性。「顯示FGFR3表達、擴增或激活」的癌症或生物學樣品是在診斷檢測中，表達(包括過表達)FGFR3，具有擴增的FGFR3基因，和/或以其他方式證明FGFR3的激活或磷酸化的癌症或生物學樣品。『『顯示FGFR3激活〃的癌症或生物學樣品是在診斷測試中，證明FGFR3的激活或磷酸化的癌症或生物學樣品。此類激活可直接確定(例如通過ELISA測量FGFR3磷酸化) 或間接確定。丨'顯示FGFR3激活〃的癌症或生物學樣品是在診斷檢測中，表現出FGFR3的組成型激活或磷酸化的癌症或生物學樣品。此類激活可直接確定(例如通過ELISA測量C-FGFR3磷酸化)或間接確定。『『顯示FGFR3擴增『『的癌症或生物學樣品是在診斷檢測中具有擴增的FGFR3基因的癌症或生物學樣品。「顯示FGFR3易位〃的癌症或生物學樣品是在診斷檢測中具有易位的FGFR3基因的癌症或生物學樣品。FGFR3易位的實例是W4;14)易位，其發生在一些多發性骨髓瘤腫瘤中。「磷酸-ELISA測定(phospho-ELISA assay) 」在本文中是其中在酶聯免疫吸附測定法(ELISA)中評估一種或多種FGFR3、底物或下遊信號傳導分子的磷酸化的測定，該測定使用試劑，通常是抗體，檢測磷酸化的FGFR3、底物或下遊信號傳導分子。在一些實施方案中，使用檢測磷酸化的FGFR3或pMAPK的抗體。該測定可對細胞裂解物、優選來自新鮮的或冷凍的生物學樣品的細胞裂解物進行。『『顯示配體-不依賴性FGFR3激活〃的癌症或生物學樣品是在診斷檢測中，表現出FGFR3的配體-不依賴性激活或磷酸化的癌症或生物學樣品。此類激活可直接確定(例如通過ELISA測量FGFR3磷酸化)或間接確定。「顯示配體-依賴性FGFR3激活"的癌症或生物學樣品是在診斷檢測中，表現出 FGFR3的配體-依賴性激活或磷酸化的癌症或生物學樣品。此類激活可直接確定(例如通過ELISA測量FGFR3磷酸化)或間接確定。「顯示配體-不依賴性FGFR3激活"的癌症或生物學樣品是在診斷檢測中，表現出FGFR3的配體-不依賴性激活或磷酸化的癌症或生物學樣品。此類激活可直接確定(例如通過ELISA測量FGFR3磷酸化)或間接確定。具有「FGFR3過表達或擴增」的癌細胞指與同一組織類型的非癌細胞相比，具有顯著更高的FGFR3蛋白質或基因水平的癌細胞。此類過表達可以是由基因擴增或者轉錄或翻譯增加引起。可在診斷或預後測定中通過評估細胞表面上存在的增加的FGFR3蛋白質水平 (例如通過免疫組化測定，IHC)來測定FGFR3的過表達或擴增。備選地，或另外地，可測量細胞中編碼FGFR3的核酸的水平，例如通過螢光原位雜交(FISH ；參見1998年10月公布的 W098/45479), Southern印跡或聚合酶鏈式反應(PCR)技術，諸如定量實時PCR(qRT-PCR)。 在上述測定法之外，熟練從業人員還可利用多種體內測定法。例如，可將患者體內細胞暴露於任選用可檢測標記物例如放射性同位素標記的抗體，並且可評估該抗體與患者體內細胞的結合，例如通過外部掃描放射性或通過分析取自事先已暴露於所述抗體的患者的活組織檢查。術語「突變」在本文中使用時指特定蛋白質或核酸(基因，RNA)分別相對於野生型蛋白質或核酸的胺基酸或核酸序列的差異。突變的蛋白質或核酸可以由基因的一個等位基因(雜合的)或兩個等位基因(純合的)表達或者在其中找到，而且它可以是體細胞的或種系的。在本發明中，突變一般是體細胞的。突變包括序列重排，諸如插入、缺失、和點突變 (包括單核苷酸/胺基酸多態性)。「抑制」是與參照相比降低或減少活性、功能，和/或量。當一種藥劑模擬目的多肽(例如，FGFR配體，諸如FGFl或FGF9)的至少一種功能性活性時，其具有「激動劑活性或功能」。「激動劑抗體」在本文中使用時是模擬目的多肽(例如，FGFR配體，諸如FGFl或FGF9)的至少一種功能性活性的抗體。蛋白質「表達」指基因中所編碼的信息轉換成信使RNA(mRNA)，然後轉換成蛋白質。在本文中，「表達」目的蛋白質(諸如FGF受體或FGF受體配體)的樣品或細胞指這樣的樣品或細胞，在所述樣品或細胞中確定存在有編碼該蛋白質的mRNA，或蛋白質(包括其片段)。「免疫綴合物」(可互換地稱為「抗體-藥物綴合物」或「ADC」 )，是指與一種或多種細胞毒性劑綴合的抗體，所述細胞毒性劑諸如化療劑、藥物、生長抑制劑、毒素(例如蛋白毒素，細菌、真菌、植物或動物來源的酶活性毒素，或其片段)或放射性同位素(即放射綴合物)。術語「Fc區」用於本文時一般是指包含免疫球蛋白重鏈C末端的多肽序列的二聚體複合物，其中C末端多肽序列是可以通過木瓜蛋白酶消化完整抗體獲得的序列。Fc區可以包括天然或變體Fc序列。雖然免疫球蛋白重鏈Fc序列的邊界可以變化，但是人IgG重鏈Fc序列通常定義為Fc序列自大約Cys2^位置或大約ft~o230位置的胺基酸殘基至羧基末端的區段。免疫球蛋白的Fc序列一般包含兩個恆定結構域，即CH2結構域和CH3結構域，任選包含CH4結構域。Fc區的C-末端賴氨酸(依照EU編號系統的殘基447)可以被移除，例如，在抗體的純化期間或通過編碼所述抗體的核酸的重組改造。因此，根據本發明包含具有Fc區的抗體的組合物可以包含具有K447的抗體、所有K447均被移除的抗體、或具有K447殘基的抗體和沒有K447殘基的抗體的混合物。本文中「Fe多肽」的意思是構成Fc區的多肽之一。Fc多肽可從任何適當的免疫球蛋白(如IgG1, IgG2, IgG3，或IgG4亞型，IgA，IgE, IgD或IgM)獲得。在一些實施方案中， Fc多肽包含部分或全部野生型鉸鏈序列(一般在其N末端)。在一些實施方案中，Fc多肽不包含功能的或野生型鉸鏈序列。「封閉」抗體或抗體「拮抗劑」是抑制或降低其結合的抗原的生物學活性的抗體。優選的封閉抗體或拮抗性抗體完全抑制抗原的生物學活性。「裸抗體(naked antibody)，，是沒有綴合異源分子(如細胞毒性結構部分或放射性標記)的抗體。具有指定抗體的「生物學特徵」的抗體指具有該指定抗體區別於結合相同抗原的其它抗體的一項或多項生物學特徵的抗體。為了篩選這樣的抗體，其結合由目的抗體結合的抗原的表位，可以實施常規交叉阻斷測定法，諸如抗體，實驗室手冊(Antibodies，A Laboratory Manual)，冷泉港實驗室， Ed Harlow 和 David Lane (1988)中所記載的。為增加包含本發明的胺基酸序列的抗體或多肽的半衰期，可將拯救受體(salvage receptor)結合表位連接到抗體(尤其是抗體片段)，如例如美國專利5，739，277所述。例如，可將編碼拯救受體結合表位的核酸分子與編碼本發明多肽序列的核酸符合閱讀框地連接，從而使改造的核酸分子所表達的融合蛋白包含所述拯救受體結合表位和本發明的多肽序列。本文所用的術語「拯救受體結合表位」指IgG分子(例如IgG1, IgG2, IgG3,或IgQ)的 Fc區的表位，其負責增加IgG分子的體內血清半衰期(例如(ihetie等，Arm. Rev. Immunol. (免疫學年評)18 =739-766 (2000)，表1)。在其Fc區具有取代並且血清半衰期增加的抗體也見於 W000/42072，WO 02/060919 ；Shields 等，生物化學雜誌(J. Biol. Chem.) 276
366591-6604(2001) ；Hinton，生物化學雜誌(J. Biol. Chem.) 279 :6213-6216 (2004))的描述。 在另一個實施方案中，例如通過連接其它多肽序列，也可以增加血清半衰期。例如，本發明的方法中有用的抗體或其它多肽可與血清白蛋白或血清白蛋白的結合Fcfoi受體的部分或血清白蛋白結合肽連接，從而使所述血清白蛋白結合所述抗體或多肽，例如這樣的多肽序列見於W001/45746的公開。在一個優選的實施方案中，所連接的血清白蛋白肽包含胺基酸序列DICLPRWGCLW(SEQID NO :183)。在另一個實施方案中，Fab的半衰期是通過這些方法增加的。血清白蛋白結合肽序列也見Dermis等，生物化學雜誌(J. Biol. Chem.) 277 35035-35043(2002)。「片段」意指優選包含參照核酸分子或多肽的完整長度的至少10^,20^,30%, 40%, 50%,60%, 70%,80%,90%,95%,或更多的多肽或核酸分子的部分。片段可以包含 10，20，30，40，50，60，70，80，90，或 100，200，300，400，500，600，或更多個核苷酸或 10，20， 30,40,50,60,70,80,90,100，120，140，160，180，190,200 個胺基酸或更多個胺基酸。關於本發明的抗體的短語「很少至沒有激動劑功能」在本文中使用時是指例如，在施用於受試者時，所述抗體不引發有生物學意義的量的激動劑活性。如本領域中所理解的， 活性的量可以定量地或定性地確定，只要在本發明的抗體和參照副本之間可以作出比較。 所述活性可以根據本領域已知的任何測定或技術來測量或檢測，包括，例如，本文所述的那些。本發明的抗體及其參照副本的活性的量可以平行地確定或在單獨的運行中確定。在一些實施方案中，本發明的二價抗體不具有實質的激動劑功能。術語「凋亡」和「凋亡活性」以廣義使用，並且是指哺乳動物中細胞死亡的有秩序或可控形式，其典型地伴有一種或多種特徵性細胞改變，包括細胞質的凝聚，質膜微絨毛的損失，細胞核的分裂(segmentation)，染色體DNA的降解或線粒體功能的喪失。此活性可以使用本領域中已知的技術確定和測量，例如，通過細胞活力測定，FACS分析或DNA電泳，和更具體地通過膜聯蛋白Vbrmexin V)的結合，DNA的片段化，細胞收縮，內質網的擴張，細胞片段化，和/或膜囊泡的形成(稱為凋亡小體)確定和測量。術語「抗體」和「免疫球蛋白」以最廣義可互換使用，並且包括單克隆抗體(例如， 全長或完整的單克隆抗體)、多克隆抗體、多價抗體、多特異性抗體(例如雙特異性抗體，只要它們顯示所需的生物學活性)，並且還可以包括某些抗體片段(如本文中更詳細地描述的那樣)。抗體可以是人的、人源化的和/或親和力成熟的。術語「可變的」指可變結構域中的某些部分在抗體間序列差異廣泛且用於每種特定抗體對其特定抗原的結合和特異性的事實。然而，變異性並非均勻分布於抗體的整個可變結構域。它集中於輕鏈和重鏈可變結構域中稱作互補性決定區(CDRS)或高變區的三個區段。可變結構域中更加高度保守的部分被稱作構架(FR)。天然重鏈和輕鏈的可變結構域各自包含四個FR區，它們大多採取β -摺疊構象，通過形成環狀連接且在有些情況中形成β-摺疊結構一部分的三個⑶Rs連接。每條鏈中的⑶Rs通過FR區非常接近的保持在一起，並與另一條鏈的CDRs —起促成抗體的抗原結合位點的形成(參見Kabat等，免疫學感興趣的蛋白的序列(Sequences of Proteins of Immunological Interest),第 5 版，國立衛生研究所(National Institute of Health), Bethesda, MD. (1991))。恆定結構域不直接參與抗體與抗原的結合，但展現出多種效應子功能，諸如抗體在抗體依賴性細胞毒性中的參與。
抗體的木瓜蛋白酶消化產生兩個相同的抗原結合片段，稱為「Fab」片段，所述 「Fab」片段每個具有單抗原結合位點，並且產生殘餘的「Fe」片段，其名稱反映其容易結晶的能力。胃蛋白酶處理產生F (ab』)2片段，所述片段具有兩個抗原組合位點，並且仍舊能夠交聯抗原。「Fv」是包含完整抗原識別和結合位點的最小抗體片段。在雙鏈Fv種類中，此區由一個重鏈可變結構域和一個輕鏈可變結構域以緊密的、非共價締合的二聚體組成。在單鏈 Fv種類中，一個重鏈可變結構域和一個輕鏈可變結構域可以通過柔性肽接頭共價連接從而使輕鏈和重鏈可以以類似於雙鏈Fv種類的「二聚體」結構締合。在這種構型中，每個可變結構域的三個CDRs相互作用從而限定在VH-VL 二聚體的表面上的抗原結合位點。總而言之，六個CDRs將抗原結合特異性賦予抗體。然而，即使是單個可變結構域(或只包含對抗原特異的三個CDRs的半個Fv)也具有識別和結合抗原的能力，然而親和性低於完整結合位點οFab片段還包含輕鏈的恆定結構域和重鏈的第一恆定結構域(CHl)。Fab』片段與 Fab片段的不同之處在於在重鏈CHl結構域的羧基端加入幾個殘基，包括來自抗體鉸鏈區的一個或多個半胱氨酸。Fab』 -SH是本文關於Fab』的名稱，其中恆定結構域的半胱氨酸殘基具有游離巰基。F(ab』)2抗體片段最初作為在它們之間具有鉸鏈半胱氨酸的Fab』片段對產生。還已知抗體片段的其它化學偶聯。基於抗體(免疫球蛋白)的恆定結構域的胺基酸序列，可以將來自任何脊椎動物物種的抗體(免疫球蛋白)的「輕鏈」分為兩種清楚區分的類型之一，稱為kappa(K)和
lambda (入)。取決於免疫球蛋白的重鏈的恆定結構域的胺基酸序列，可以將免疫球蛋白分為不同的種類。存在五種主要的免疫球蛋白類別IgA，IgD, IgE, IgG，和IgM，並且這些中的一些可以進一步分為亞類(同種型)，例如IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1JP IgA2。對應於不同類別的免疫球蛋白的重鏈恆定結構域分別被稱為α，δ，ε，Y，和μ。不同類別的免疫球蛋白的亞基結構和三維構型是眾所周知的。「抗體片段」僅包含完整抗體的一部分，其中所述部分優選地保留與該部分存在於完整抗體中時正常相關的至少一種、優選大多數或全部功能。抗體片段的實例包括Fab、Fab'、F(ab' ) 2和Fv片段；雙抗體；線性抗體；單鏈抗體分子；和由抗體片段形成的多特異性抗體。在一個實施方案中，抗體片段包含完整抗體的抗原結合位點，並且因此保留了結合抗原的能力。在另一個實施方案中，抗體片段，例如包含Fc區的抗體片段保留了與Fc區存在於完整抗體中時正常相關的至少一種生物學功能， 諸如Fcfoi結合，抗體半衰期調節，ADCC功能和補體結合。在一個實施方案中，抗體片段是單價抗體，其在體內的半衰期基本上類似於完整的抗體。例如，這樣的抗體片段可以在與Fc 連接的抗原結合臂上包含能夠賦予該片段以體內穩定性的序列。術語「高變區」、「HVR」或「HV」在用於本文時指抗體可變結構域中序列上高度可變和/或形成結構上限定的環的區域。通常，抗體包含六個高變區三個在VH中(HI、 H2、H3)，三個在VL中(L1、L2、L3)。本文中使用且涵蓋許多高變區的敘述。Kabat互補性決定區(CDR)是以序列變異性為基礎的，而且是最常用的(Kabat等，免疫學感興趣的蛋白的序列(Sequences of Proteins of Immunological Interest),第 5 版·公眾健康服務(Public Health Service)，國立衛生研究所(National Institutes of Health),Bethesda,MD. (1991))。相反，Chothia指結構環的位置(Chothia和Lesk，分子生物學雜誌 (J. Mol. Biol.) 196 :901-917 (1987))。AbM 高變區代表 Kabat CDRs 與 Chothia 結構環之間的折衷，而且由Oxford Molecular的AbM抗體建模軟體使用。「接觸(contact) 」高變區是以對可獲得的複合物晶體結構的分析為基礎的。下文記錄了這些高變區中每一個的殘基。
權利要求
1.一種分離的抗-FGFR3拮抗劑抗體，其中所述抗體以1X10—8或更強的Kd結合人 FGFR3，其中所述抗體抑制FGFR3受體與另一單位的所述受體的二聚作用，從而抑制所述受體的活化，並且其中所述抗體具有抗體-依賴性細胞介導的細胞毒性活性。
2.權利要求1所述的抗-FGFR3拮抗劑抗體，其中所述抗體能夠殺傷包含tG ； 14)易位的多發性骨髓瘤細胞。
3.前述權利要求中任一項所述的抗-FGFR3拮抗劑抗體，其中所述抗體不誘導實質性的FGFR3下調。
4.前述權利要求中任一項所述的抗-FGFR3拮抗劑抗體，其中所述抗體的二價形式不具有實質性的激動劑功能。
5.前述權利要求中任一項所述的抗-FGFR3拮抗劑抗體，其中所述抗體結合這樣的多肽，所述多肽包含與胺基酸序列LAVPAANTVRFRCPA (SEQ ID NO 179)和/或 SDVEFHCKVYSDAQP (SEQ ID NO :180)具有至少 50%，60%，70%，80%，90%，95%，98% 的序列同一性或相似性的胺基酸序列。
6.前述權利要求中任一項所述的抗-FGFR3拮抗劑抗體，其中所述抗體結合FGFR3inb 的殘基 154，155，158，159，161，162，163，164，165，166，167，168，169，170，171，172，173， 174，175，177，202，205，207，210，212，214，216，217，241，246，247，248，278，279，280，281， 觀2，觀3，314，315，316，317和/或318中的至少一個、兩個、三個、四個或至多達全部的任意個殘基。
7.前述權利要求中任一項所述的抗-FGFR3拮抗劑抗體，其中所述抗體抑制組成型 FGFR3活性。
8.權利要求7所述的抗-FGFR3拮抗劑抗體，其中組成型FGFR3活性是配體-依賴性 FGFR3活性。
9.權利要求7所述的抗-FGFR3拮抗劑抗體，其中組成型FGFR3活性是配體-不依賴性組成型FGFR3活性。
10.前述權利要求中任一項所述的抗-FGFR3拮抗劑抗體，其中所述抗-FGFR3抗體抑制(a)reFR3-inbK248C 禾口 (b)FGFR3-IIIbK652E, FGFR3-IIIbY375C, FGFR3-IIIbs249c,和 FGFR3-IIIbc372c中的一種或多種。
11.前述權利要求中任一項所述的抗-FGFR3拮抗劑抗體，其中所述抗體包含(i)HVR-L3，其包含序列QQX1X2X3X4X5X6T (SEQ ID NO :148)，其中 X1 是 G，S 或 T，& 是 T， Y 或 A，& 是 G，S，T，或 A，& 是 A，H，D，T，或 N，& 是 Q，P 或 S，X6 是 S，Y，L，P 或 Q，(ii)HVR-H2，其包含序列GRIYPA^yy^XgXeYADSVKG (SEQ IDNO :150)，其中 \ 是 Y，A，L， S，或 T，& 是 A，Q，D，G，Y，S，N 或 F，X3 是 A，D，或 G，& 是 T 或 S，X5 是 K，F，T，或 S，& 是 Y， H，N或I，和(iii)HVR-H3，其包含序列ARTYGIYDLYVDYTEYVMDY (SEQ IDNO :151)。
12.前述權利要求中任一項所述的抗-FGFR3拮抗劑抗體，其中所述抗體包含(i)HVR-Ll，其包含序列 RASQX1X2X3X4X5X6A (SEQ ID NO 146)，其中 & 是 V 或 D，& 是 V 或 I，&是D，E或S，&是T或I，&是A或S，且&是V或L，(ii)HVR-L2，其包含序列^C1ASFLX2S (SEQ ID NO 147)，其中 & 是 S 或 G 且 & 是 A 或 Y，和(iii)HVR-L3，其包含序列 QQX1X2X3X4X5X6T (SEQ ID NO :148)，其中 X1 是6，S 或 T，X2 是 T，Y 或 A，& 是 G，S，T，或 A，& 是 A，H，D，T，或 N，& 是 Q，P 或 S，X6 是 S，Y，L，P 或 Q0
13.權利要求1或12所述的抗-FGFR3拮抗劑抗體，其中所述抗體包含(i)HVR-Hl，其包含序列 GFX1RyC3TGIS (SEQ ID NO 149)，其中 ^C1 是 S 或 T，& 是 W，Y，S 或 1\)(3是5，6，或 T，(ii)HVR-H2，其包含序列GRIYPA^yy^XgXeYADSVKG (SEQ IDNO :150)，其中 \ 是 Y，A，L， S，或 T，& 是 A，Q，D，G，Y，S，N 或 F，X3 是 A，D，或 G，& 是 T 或 S，X5 是 K，F，T，或 S，& 是 Y， H，N或I，和(iii)HVR-H3，其包含序列ARTYGIYDLYVDYTEYVMDY (SEQ IDNO :151)。
14.權利要求12所述的抗-FGFR3拮抗劑抗體，其中HVR-Ll包含序列 RASQX1VX2X3X4VA(SEQ ID 而152)，其中)(1是￥或0，)(2是0或5，)(3是11或1，)(4是六或5。
15.權利要求12所述的抗-FGFR3拮抗劑抗體，其中HVR-L3包含序列 QQX1X2X3X4X5X6T (SEQ ID NO 153)，其中 & 是 S，G，或 T，& 是 Y，T，或 A，)(3 是 T 或 G，& 是 T， H 或 N，& 是 P 或 S，& 是 P，Q，Y，或 L0
16.權利要求13所述的抗-FGFR3拮抗劑抗體，其中HVR-H2包含序列 Griypx1X2Gstx3YAdsvkG(seq id no :i54)，其中 X1 是丁或l，X2 是隊 y, s, g，A，或Q ；X3是ν 或H。
17.前述權利要求中任一項所述的抗-FGFR3拮抗劑抗體，其中所述抗體包含重鏈可變區和輕鏈可變區，所述重鏈可變區包含SEQ ID NO :132且所述輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 133。
18.前述權利要求中任一項所述的抗-FGFR3拮抗劑抗體，其中構架序列的至少一部分是人共有構架序列。
19.權利要求18所述的抗-FGFR3拮抗劑抗體，其中所述抗體包含人κ亞組共有構架序列。
20.權利要求18所述的抗-FGFR3拮抗劑抗體，其中所述抗體包含重鏈人亞組III共有構架序列。
21.前述權利要求中任一項所述的抗-FGFR3拮抗劑抗體，其中所述抗體是單克隆抗體。
22.前述權利要求中任一項所述的抗-FGFR3拮抗劑抗體，其中所述抗體選自由嵌合抗體、人源化抗體、親和力成熟抗體、人抗體、雙特異性抗體和抗體片段組成的組。
23.編碼前述權利要求中任一項所述的抗體的多核苷酸。
24.包含權利要求23所述的多核苷酸的載體。
25.權利要求M所述的載體，其中所述載體是表達載體。
26.包含權利要求M或25所述的載體的宿主細胞。
27.權利要求沈所述的宿主細胞，其中所述宿主細胞是原核細胞。
28.權利要求沈所述的宿主細胞，其中所述宿主細胞是真核細胞。
29.權利要求沈所述的宿主細胞，其中所述宿主細胞是哺乳動物細胞。
30.一種製備抗-FGFR3抗體的方法，所述方法包括培養包含編碼權利要求1-22中任一項所述的抗體的多核苷酸的宿主細胞，從而表達所述多核苷酸，和任選地，從培養物中回收所述抗體。
31.權利要求30所述的方法，其中所述宿主細胞是原核細胞。
32.權利要求30所述的方法，其中所述宿主細胞是真核細胞。
33.一種藥物製劑，所述藥物製劑包含權利要求1-22中任一項所述的抗體和藥用載體。
34.權利要求1-22中任一項所述的抗-FGFR3拮抗劑抗體，其用作藥物。
35.權利要求1-22中任一項所述的抗-FGFR3拮抗劑抗體，其用於治療癌症。
36.權利要求1-22中任一項所述的抗-FGFR3拮抗劑抗體，其用於抑制細胞增殖或消除多發性骨髓瘤細胞。
37.權利要求1-22中任一項所述的抗-FGFR3拮抗劑抗體在製備藥物中的用途。
38.權利要求37所述的用途，其中所述藥物用於治療癌症。
39.權利要求37所述的用途，其中所述藥物用於抑制細胞增殖或消除多發性骨髓瘤細
全文摘要
本發明提供了FGFR3抗體，和包含這些抗體的組合物和使用這些抗體的方法。
文檔編號C07K16/28GK102378767SQ201080013816
公開日2012年3月14日 申請日期2010年3月24日 優先權日2009年3月25日
發明者克裡斯蒂安·維斯曼, 吳雁, 阿維·阿什克納濟, 青婧 申請人:霍夫曼-拉羅奇有限公司