從大花金挖耳提取的具殺菌活性的桉烷型倍半萜內酯化合物及其用途的製作方法
2023-06-03 06:04:01
專利名稱：從大花金挖耳提取的具殺菌活性的桉烷型倍半萜內酯化合物及其用途的製作方法
技術領域：
本發明專利涉及化合物及其製備，特別是具殺菌活性的桉烷型倍半萜內酯化合物及其該化合物作為殺菌劑在防治植物病害方面的應用。
背景技術：
大花金挖耳為菊科天明精屬植物，西北農林科技大學無公害農藥研究服務中心在植物源殺菌劑研究中，發現其對植物病原真菌具有很高的抑制活性，並申請專利「大花金挖耳殺菌劑及其製備方法」，專利申請號02139350.8。在此基礎上，申請人對大花金挖耳中的抑菌活性成分進行了系統研究，從中得到了具有抑菌活性的化合物。
發明內容
本發明的目的在於，提供一種從大花金挖耳中提取的具殺菌活性的桉烷型倍半萜內酯化合物及其該化合物作為殺菌劑在防治植物病害方面的應用。
為了實現上述任務，本發明採取的技術方案是一種從大花金挖耳分離的具殺菌活性的桉烷型倍半萜內酯化合物，其特徵在於，分離的該具殺菌活性的桉烷型倍半萜內酯化合物包括2α-乙醯氧基-5α-羥基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯；5α，6α-二羥基-4α，11αH-桉烷-12，8β-內酯；5α-羥基-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-內酯；2α-羥基-5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-內酯；2α，5α-羥基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯；5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-內酯；5α，11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯；5α-羥基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯；2α-O-β-D-吡喃葡萄糖甙-5α，11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯；2α-O-β-D-吡喃葡萄糖甙-5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-內酯；其分子結構分別為化合物I2α-乙醯氧基-5α-羥基-11α-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯
化合物II5α，6α-二羥基-4α，11αH-桉烷-12，8β-內酯 化合物III5α-羥基-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-內酯 化合物IV5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-內酯 化合物V2α-羥基-5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-內酯
化合物VI2α，5α-羥基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯 化合物VII5α-羥基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯 化合物VIII5α，11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯 化合物IX5α-羥基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯
化合物X；2α-O-β-D-吡喃葡萄糖甙-5α，11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯 化合物XI2α-O-β-D-吡喃葡萄糖甙-5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-內酯 大花金挖耳中主要的抑菌活性化合物為萜類和倍半萜內酯化合物，按結構特點，倍半萜內酯化合物又分為卡拉布烷型倍半萜內酯和桉烷型倍半萜內酯。
本發明對分離得到的具殺菌活性的桉烷型倍半萜內酯化合物進行了系統的抑菌活性測定，證明上述化合物I～XI對供試的植物病原菌具有較高的抑制活性，能夠用於防治由植物病原真菌引起的植物病害的農藥製劑應用。
圖1是具殺菌活性的桉烷型倍半萜內酯化合物分子結構，中(a)～(k)分別表示化合物I～XI。
圖2是倍半萜內酯分離純化流程圖；以下結合附圖和實施例對本發明作進一步的詳細說明。
具體實施例方式
研究發現，大花金挖耳中含有的桉烷型倍半萜內酯化合物種類較多，其中對植物病原菌具有活性的主要有化合物I2α-乙醯氧基-5α-羥基-11α-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯；化合物II2α-乙醯氧基-5α-羥基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯；化合物III5α，6α-二羥基-4α，11αH-桉烷-12，8β-內酯；化合物IV5α-羥基-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-內酯；化合物V2α-羥基-5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-內酯；化合物VI2α，5α-羥基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯；化合物VII5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-內酯；化合物VIII5α，11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯；化合物IX5α-羥基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯；化合物X2α-O-β-D-吡喃葡萄糖甙-5α，11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯；化合物XI2α-O-β-D-吡喃葡萄糖甙-5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-內酯。各個化合物的分子結構參見圖1。
1、化合物的分離過程將大花金挖耳植物樣品粉碎，用重蒸工業甲醇室溫(25℃左右)下浸泡提取6次，每次2天，提取液經活性炭脫色後減壓濃縮得總浸膏。用矽膠拌樣進行矽膠柱層析，依次用石油醚、氯仿、氯仿∶甲醇(1∶1)和甲醇梯度洗脫，得石油醚洗脫部分、氯仿洗脫部分，氯仿∶甲醇(1∶1)洗脫部分，甲醇洗脫部分。氯仿洗脫部分經過反覆柱層析及重結晶得到化合物I～IV；氯仿∶甲醇(1∶1)洗脫部分經過反覆柱層析及重結晶得到化合物V～XI。各化合物具體的分離過程見圖2。
2、各化合物的理化性質及波譜數據在分離得到各化合物後，對其的理化性質及分子結構進行了鑑定，得到各化合物的理化性質及波譜數據如下化合物I2α-乙醯氧基-5α-羥基-11α-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯，無色針狀結晶，折光率為+77.0°(c 0.44，CHCl3)。溶於氯仿、乙酸乙酯、甲醇和芳香類溶劑。m/z308(M+)，1H-NMR(CDCl3)δH1.95(1H，dd，12，12，H-1)，1.40(1H，dd，5，12.5，H-1』)，4.98(1H，dddd，5，6，11，12，H-2)，2.64(1H，ddd，2，11，12，H-3)，2.58(1H，ddd，2，6，12，H-3』)，1.65(1H，dd，6，14，H-6)，1.56(1H，dd，12，14，H-6』)，2.86(1H，dddd，5，6，7，12，H-7)，4.58(1H，ddd，2，4.6，5，H-8)，2.02(1H，dd，4.6，15，H-9)，1.83(1H，dd，2，15，H-9)，2.97(1H，dq，7，7，H-13)，1.16(3H，s，H-13)，4.93(1H，brs，H-15)，4.78(1H，brs，H-15』)，2.04(s，2』H)，13C-NMR的化學位移見表1。
化合物II2α-乙醯氧基-5α-羥基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯，無色針狀結晶，溶於氯仿、乙酸乙酯、甲醇和芳香類溶劑。m.p＝128-130℃，折光率為+68.8℃(c0.46，CHCl3).m/z292(M+)，1H-NMR(CDCl3)δH1.99(1H，dd，12，12，H-1)，1.40(1H，dd，J＝5，12.5，H-1』)，4.98(1H，dddd，5，6，11，12，H-2)，2.08(1H，ddd，2，11，12，H-3)，2.38(1H，ddd，2，6，12，H-3』)，1.75(1H，dd，6，14，H-6)，2.50(1H，dd，12，14，H-6』)，2.34(1H，dddd，5，6，7，12，H-7)，4.44(1H，ddd，2，4.6，5，H-8)，1.54(1H，dd，4.6，15，H-9)，2.28(1H，dd，2，15，H-9)，2.81(1H，dq，7，7，H-11)，1.25(1H，d，7，H-13)，1.23(3H，s，H-13)，1.68(brs，H-15)，2.04(s，2』H)，13C-NMR的化學位移見表1。
化合物III5α，6α-二羥基-4α，11αH-桉烷-12，8β-內酯，無色針狀結晶，溶於氯仿、乙酸乙酯、甲醇和芳香類溶劑。m.p＝178-180℃，折光率為-22°(c 0.36，CHCl3)。m/z268(M+)，1H-NMR(CDCl3)δH1.43(1H，ddd，13，12，4.5，H-1)，1.18(1H，ddd，13，4，2，H-1』)，1.78(1H，m，H-2)，1.92(1H，ddd，5.5，11，12，H-3)，1.66(1H，m，H-3』)，2.04(1H，m，H-3』)，3.90(1H，dd，6，9，H-6)，2.60(1H，ddd，5，9，7.5，H-7)，4.56(1H，ddd，2，4.5，5，H-8)，2.03(1H，dd，4.5，15，H-9)，1.62(1H，dd，2，15，H-9)，2.91(1H，dq，7，7.5，H-11)，1.39(1H，d，7，H-13)，1.10(3H，s，H-13)，1.08(d，7.5，H-15)，13C-NMR的化學位移見表1。
化合物IV5α-羥基-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-內酯，無色稜狀結晶，m.p＝156-158℃，折光率為+196°(c 0.2，CHCl3)。溶於氯仿、乙酸乙酯、甲醇和芳香類溶劑。m/z248(M+)，1H-NMR(CDCl3)δH6.13(1H，d，1.2，H-13)，5.58(1H，d，1.2，H-13』)，4.85(1H，brs，H-15)，4.68(1H，brs，H-15』)，4.56(1H，td，1.2，5，5，H-8)，3.34(1H，ddd，5，8，11.8，H-7)，0.94(3H，S，14-CH3)，13C-NMR的化學位移見表1。
化合物V2α-羥基-5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-內酯，無色稜狀晶體，m.p＝134-135℃，折光率為+142°(c 1.0，CHCl3)。溶於氯仿、乙酸乙酯、甲醇和芳香類溶劑。m/z248(M+)，1H-NMR(CDCl3)δH6.15(1H，d，3.0，H-13a)，5.62(1H，d，3.0，H-13b)，4.89(1H，brs，H-15a)，4.57(1H，brs，H-15b)，4.49(1H，ddd，H-8)，3.83(1H，m，H-2)，3.03(1H，m，H-7)，2.65(2H，dd，12.3，H-3)，2.23(2H，dd，15.6，H-9)，2.00(1H，t，H-5)，1.82(2H，m，H-1)，1.79(2H，d，6.9，H-6)，0.84(3H，s，H-14)，13C-NMR的化學位移見表1。
化合物VI2α，5α-羥基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯，無色顆粒晶體(甲醇)，m.p＝108-110℃，折光率為+68.0°(c0.74，CH3OH)。溶於氯仿、乙酸乙酯、甲醇和芳香類溶劑。m/z266(M+)，1H-NMR(CDCl3)δH1.81(1H，dd，12，12，H-1)，1.40(1H，dd，5，12.5，H-1』)，3.79(1H，dddd，5，5.5，11.5，12，H-2)，2.59(1H，ddd，2，11.5，12，H-3)，2.42(1H，ddd，2.5，5，12，H-3』)，1.69(1H，dd，6，13.8，H-6)，1.42(1H，dd，12，13.8，H-6』)，2.86(1H，dddd，5，6，7，12，H-7)，4.58(1H，ddd，2，4.6，5，H-8)，2.02(1H，dd，4.6，15，H-9)，1.83(1H，dd，2，15，H-9)，2.97(1H，dq，7.7，H-13)，0.9(3H，s，H-13)，4.93(1H，brs，H-15)，4.78(1H，brs，H-15』)，13C-NMR的化學位移見表1。
化合物VII5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-內酯，無色針狀結晶，m.p＝106-108℃，折光率為+168°(c1.43，CHCl3)。溶於氯仿、乙酸乙酯、甲醇和芳香類溶劑。m/z232(M+)，1H-NMR(CDCl3)δH6.14(1H，brs，H-13)，5.60(1H，brs，H-13』)，4.78(1H，brs，H-15)，4.45(1H，brs，H-15』)，4.51(1H，ddd，1.5，5，5Hz，H-8)，2.98(1H，ddd，5，6.8，13.5Hz，H-7)，0.83(3H，S，14-CH3)，13C-NMR的化學位移見表1。
化合物VIII5α，11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯，無色針狀結晶，m.p＝172-173℃，折光率為+18.5°(c0.70，CHCl3)。溶於氯仿、乙酸乙酯、甲醇和芳香類溶劑。m/z234(M+)，1H-NMR(CDCl3)δH2.80(1H，dq，H-11)，1.23(3H，d，7.4，H-13)，4.78(1H，brs，H-15)，4.48(1H，brs，H-15』)，4.47(1H，ddd，2，5，5Hz，H-8)，2.38(1H，m，H-7)，0.83(3H，S，14-CH3)，13C-NMR的化學位移見表1。
化合物IX5α-羥基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯，無色針狀結晶，m.p＝188-190℃，折光率為+130.8°(c0.37，CHCl3)。溶於氯仿、乙酸乙酯、甲醇和芳香類溶劑。m/z250(M+)，1H-NMR(CDCl3)δH4.88(1H，brs，H-15)，4.73(1H，brs，H-15』)，4.56(1H，td，J＝1.2，5，5，H-8)，2.84(1H，dq，H-11)，2.48(1H，m，H-7)，1.21(3H，d，J＝7，H-13)，0.94(3H，S，H-14)，13C-NMR的化學位移見表1。
化合物X2α-O-β-D-吡喃葡萄糖甙-5α，11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯，無色針狀結晶，m.p.206-208℃(甲醇)。溶於氯仿、乙酸乙酯、甲醇和芳香類溶劑。折光率為+17.9°(c 0.56，CH3OH)。m/z412(M+)，1HNMR(CH3OH)δ1.25(1H，br，dd，12.5，12.5，1αH)，1.99(1H，ddd，2，5，12.5，1βH)，3.87(1H，m，2βH)，2.11(1H，t，12.5，12.5，3αH)，2.79(1H，ddd，2，5，12.5，3βH)，1.88(1H，brs，d，12.5，5αH)，1.63(1H，m，6αH)，1.06(1H，ddd，12.5，12.5，12.5，6βH)，2.49(1H，m，7α)，4.52(1H，ddd，2，4，4.5，8α)，1.58(1H，dd，4.5，15.5，9α)，2.16(1H，dd，2，15.5，9β)，2.93(1H，m，11α)，1.18(3H，m，13H)，0.78(3H，s，14H)，4.89(1H，br.s，15αH)，4.62(1H，br.s，15βH)，13C-NMR的化學位移見表1。
化合物XI2α-O-β-D-吡喃葡萄糖甙-5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-內酯，無色針狀結晶，m.p.176-178℃(甲醇)；折光率為+13.0°(c 0.69，CH3OH)。溶於氯仿、乙酸乙酯、甲醇和芳香類溶劑。m/z410(M+)，1HNMR(CH3OH)δ1.24(1H，br，dd，12，4，12.4，1αH)，1.99(1H，ddd，2，5，12.4，1βH)，3.84(1H，m，2βH)，2.12(1H，t，12，12，3αH)，2.79(1H，ddd，2，6，13，3βH)，1.95(1H，brs，d，13，5αH)，1.82(1H，m，6αH)，1.26(1H，ddd，13，13，13，6βH)，3.10(1H，m，7α)，4.55(1H，ddd，2，4，5，8α)，1.63(1H，dd，5，15.5，9α)，2.16(1H，dd，2，15.5，9β)，6.06，5.70(2H，br.s，13H)，0.78(3H，s，14H)，4.89(1H，br.s，15αH)，4.56(1H，br.s，15βH)，13C-NMR的化學位移見表1。
3、化合物製備的殺菌製劑桉烷型倍半萜內酯化合物包括的上述11種化合物，可以製成各種製劑形態的殺菌劑，噴霧使用，用於植物真菌性病害的防治。各種劑型中各物質的重量百分比為
由桉烷型倍半萜內酯化合物組成的各種製劑，其中的填料可以是白炭黑、膨潤土、矽澡土等本領域工作人員共知的物質中的一種或幾種混合物；溶劑可以是甲醇、乙醇、正(異)丙醇，乙酸乙酯，芳香烴等本領域工作人員共知的物質中的一種或幾種混合物；表面活性劑可以是本領域人員共知且常用的各類表面活性物質的一種或幾種的混合物。
表1化合物1～XI的13C-NMR(100MHz)數據
以下通過實施例對本專利涉及的化合物及其製劑對植物病害防治效果進行闡述。
4、各化合物的生物活性測定共選取6種病原菌作為供試菌種，供試菌種列於表4-1。所有供試菌種均由西北農林科技大學無公害農藥研究服務中心提供。
供試植物寄主材料番茄Lycopersicon esculentum果實，採自楊凌楊村鄉大棚溫室；黃瓜(津研七號)，市購。
標準藥劑50％乙膦鋁WP，50％速克靈WP。
表4-1供試病原菌
生長速率法化合物對病原菌菌絲生長抑制作用的測定採用生長速率法，設丙酮和空白對照，每種供試菌一皿為一處理，每處理三次重複。用十字交叉法測量菌落直徑，按式4-1和式4-2計算抑制率(計算抑制率時以丙酮處理為對照)菌落直徑(mm)＝菌落平均直徑-4(菌餅直徑) 4-1
孢子萌發法上述化合物對病菌孢子萌發抑制作用的測定採用懸滴法[114]([114]方仲達，植病研究方法[M]，北京農業出版社，第三版，1995)。試驗中，當對照萌發(以孢子芽管長超過孢子短直徑一半時即為萌發，若來不及鏡檢，可加0.5％升汞一滴固定)率大於80％後，記錄檢查所有處理的萌發情況；若對照萌發率低於80％，本次試驗作廢重做。採用公式(4-3)和(4-4)計算孢子萌發抑制率。
盆栽試驗將本發明涉及的所述各化合物配製成乳油製劑，進行盆栽和組織法測定。
黃瓜霜黴病的防治效果採用盆栽試驗法進行。具體方法如下在每營養缽播種2～3粒已催芽的黃瓜種子，在溫室培養，待黃瓜長至兩葉(真葉)，進行治療和保護作用試驗。以常量噴霧進行施藥，每個處理設3次重複，設溶劑對照和清水對照。
從田間採集帶黃瓜霜黴病原菌的病葉，用清水衝洗後保溼培養24h，用毛筆刷下病葉上的病原菌孢子，配置成10×10倍顯微鏡視野下30～50個孢子懸浮液進行噴霧接種，處理後的黃瓜放在高溼、20℃左右的環境中培養。
治療作用，首先在未被處理的苗上接病菌孢子，24h後再進行噴藥處理、培養。6～8d後檢查試驗結果；保護作用，首先對苗進行噴藥處理，24h後再接菌，培養6～8d後檢查葉片發病情況並記錄，統計試驗結果。
黃瓜霜黴病的分級標準(以葉片為單位)(方仲達，植病研究方法[M]，北京農業出版社，第三版，1995)0級無病；1級病斑面積佔整片葉面積的5％以下；2級病斑面積佔整片葉面積的6～25％；3級病斑面積佔整片葉面積的26％～50％；4級病斑面積佔整片葉面積的50％以上。
按式5-5和式5-6計算病情指數和防治效果 組織測定法對番茄灰黴病的藥效試驗採用番茄幼果法進行。具體方法為將從田間採集的未施任何殺菌藥劑的番茄果實，先用清水洗滌乾淨、晾乾，再用脫脂棉醮取75％的乙醇擦拭果實表面，進行滅菌處理。用接種針在番茄果實表面刺出直徑約5mm的侵染區域，以利灰黴病菌的侵染。以直徑4mm的打孔器打制菌餅，將菌餅倒扣在番茄果實表面。分保護和治療兩種方法處理。保護作用為先在番茄表面採用噴霧法將稀釋好的藥劑直接噴灑在果實表面，待藥液晾乾後即開始接菌。治療作用為先將菌餅接在番茄果實表面，4h後開始接菌。保溼培養，3d後檢查結果。按4.1.2.1中的方法對結果進行統計分析。
4.1 11種化合物對病原菌孢子萌發的抑制毒力參見下表化合物I對4種病原菌孢子萌發的抑制毒力
化合物II對4種病原菌孢子萌發的抑制毒力
化合物III對4種病原菌孢子萌發的抑制毒力
化合物IV對6種病原菌孢子萌發的抑制毒力
化合物V對6種病原菌孢子萌發的抑制毒力
化合物VI對4種病原菌孢子萌發的抑制毒力
化合物VII對4種病原菌孢子萌發的抑制毒力
化合物VIII對4種病原菌孢子萌發的抑制毒力
化合物IX對4種病原菌孢子萌發的抑制毒力
化合物X對4種病原菌孢子萌發的抑制毒力
化合物XI對4種病原菌孢子萌發的抑制毒力
4.2 11種化合物對番茄灰黴病菌菌絲生長的抑制毒力見下表11種化合物對番茄灰黴病菌菌絲生長的抑制作用(72h)
注空白對照菌落直徑為68.37mm。
4.3 11種化合物對番茄灰黴病和黃瓜霜黴病的防治效果見下表11種化合物對番茄果實上灰黴病的防治效果(7d)
11種化合物對黃瓜霜黴病盆栽防治效果
5、各化合物各種製劑的製備實施例115％2α-乙醯氧基-5α-羥基-11α-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯(化合物I)可溼性粉劑的製備。在錐形混合機中，加入粉碎至200目左右的2α-乙醯氧基-5α-羥基-11α-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯15kg，市售的商品填料白碳黑50kg、膨潤土25kg，以及拉開粉7.5kg、皂素2.5kg。充分混和，即可製得15％2α-乙醯氧基-5α-羥基-11α-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯可溼性粉劑100kg。製劑的水中分散性、稀釋液穩定性、冷熱貯穩定性符合商品農藥製劑得要求。
實施例255％2α-乙醯氧基-5α-羥基-11α-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯(化合物I)可溼性粉劑的製備。將55kg2α-乙醯氧基-5α-羥基-11α-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯(化合物I)原藥粉碎至300目，稱取商品填料白碳黑30kg，木質素磺酸鈉10kg，月桂醇聚氧乙烯醚5kg，加入混合機中充分混和均勻，即可製得55％2α-乙醯氧基-5α-羥基-11α-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯可溼性粉劑。製劑的水中分散性、稀釋液穩定性、冷熱貯穩定性符合商品農藥製劑得要求。
實施例35％2α-乙醯氧基-5α-羥基-11α-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯(化合物I)乳油的製備。將5kg2α-乙醯氧基-5α-羥基-11α-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯，溶解於80kg乙酸乙酯中，苯乙烯酸聚氧乙烯醚15kg，加入到200L反應釜中，在40～50℃溫度下攪拌0.5小時，即製得100kg 5％2α-乙醯氧基-5α-羥基-11α-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯乳油。乳油的水分散性、稀釋液穩定性、冷熱貯穩定性符合商品農藥製劑得要求。
實施例450％2α-乙醯氧基-5α-羥基-11α-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯(化合物I)乳油的製備。200L反應釜中，將50kg天明精內酯酮，溶於25kg乙酸乙酯和10kg氯仿混和溶劑中，再加入苯乙烯酸聚氧乙烯醚5kg，辛基酚聚氧乙基醚10kg，在40～50℃溫度下攪拌0.5小時，即製得100kg50％2α-乙醯氧基-5α-羥基-11α-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯乳油。乳油的水分散性、稀釋液穩定性、冷熱貯穩定性符合商品農藥製劑得要求。
實施例510％2α-乙醯氧基-5α-羥基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯(化合物II)微乳劑的製備。稱取2α-乙醯氧基-5α-羥基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯原藥10kg，溶解於15kg異丙醇中，再加入10kg十二烷基苯磺酸鈣，10kg辛基酚聚氧乙基醚，在高速攪拌下混和，加熱至40℃左右；高速攪拌下滴加去離子水55kg，控制水的滴加速度，使溫度保持在40℃左右；水滴加完畢，升溫至50℃，攪拌1小時，製得10％2α-乙醯氧基-5α-羥基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯微乳劑100kg。製劑的穩定性、外觀等符合商品製劑的要求。
實施例620％5α，6α-二羥基-4α，11αH-桉烷-12，8β-內酯(化合物III)微乳劑的製備。稱取5α，6α-二羥基-4α，11αH-桉烷-12，8β-內酯原藥20kg，溶解於30kg乙酸乙酯中，再加入15kg十二烷基苯磺酸鈣，5kg苯乙烯酸聚氧乙烯醚，在高速攪拌下混和，加熱至40℃左右；高速攪拌下滴加去離子水30kg，控制水的滴加速度，使溫度保持在40℃左右；水滴加完畢，升溫至50℃，攪拌1小時，製得20％5α，6α-二羥基-4α，11αH-桉烷-12，8β-內酯微乳劑100kg。製劑的穩定性、外觀等符合商品製劑的要求。
實施例740％2α-羥基-5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-內酯(化合物V)可溼性粉劑的製備。在錐形混合機中，加入粉碎至200目左右的2α-羥基-5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-內酯40kg，市售的商品填料白碳黑20kg、膨潤土20kg，以及拉開粉5kg、木質素15kg。充分混和，即可製得40％2α-羥基-5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-內酯可溼性粉劑100kg。製劑的水中分散性、稀釋液穩定性、冷熱貯穩定性符合商品農藥製劑得要求。
實施例830％2α，5α-羥基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯(化合物VI)乳油的製備。200L反應釜中，將30kg 2α，5α-羥基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯，溶於30kg甲醇和25kg甲苯混和溶劑中，再加入苯乙烯酸聚氧乙烯醚10kg，辛基酚聚氧乙基醚5kg，在40～50℃溫度下攪拌0.5小時，即製得100kg 30％2α，5α-羥基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯乳油。乳油的水分散性、稀釋液穩定性、冷熱貯穩定性符合商品農藥製劑得要求。
實施例910％5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-內酯(化合物VII)微乳劑的製備。稱取5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-內酯原藥10kg，溶解於30kg乙酸乙酯中，再加入10kg十二烷基苯磺酸鈣，10kg苯乙烯酸聚氧乙烯醚，在高速攪拌下混和，加熱至40℃左右；高速攪拌下滴加去離子水40kg，控制水的滴加速度，使溫度保持在40℃左右；水滴加完畢，升溫至55℃，攪拌1小時，製得10％5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-內酯微乳劑100kg。製劑的穩定性、外觀等符合商品製劑的要求。
實施例1035％2α-O-β-D-吡喃葡萄糖甙-5α，11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯(化合物X)乳油的製備。200L反應釜中，將35kg 2α-O-β-D-吡喃葡萄糖甙-5α，11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯，溶於55kg甲苯溶劑中，再加入苯乙烯酸聚氧乙烯醚15kg，在40～50℃溫度下攪拌1.0小時，即製得100kg 35％2α-O-β-D-吡喃葡萄糖甙-5α，11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯乳油。乳油的水分散性、稀釋液穩定性、冷熱貯穩定性符合商品農藥製劑得要求。
實施例1115％5α-羥基-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-內酯(化合物IV)微乳劑的製備。稱取5α-羥基-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-內酯原藥15kg，溶解於30kg異丙醇中，再加入5kg十二烷基苯磺酸鈣，10kg苯乙烯酸聚氧乙烯醚，在高速攪拌下混和，加熱至40℃左右；高速攪拌下滴加去離子水40kg，控制水的滴加速度，使溫度保持在40℃左右；水滴加完畢，升溫至55℃，攪拌1小時，製得15％5α-羥基-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-內酯微乳劑100kg。製劑的穩定性、外觀等符合商品製劑的要求。
實施例1220％5α，11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯(化合物VIII)可溼性粉劑的製備。在錐形混合機中，加入粉碎至200目左右的5α，11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯20kg，市售的商品填料白碳黑30kg、膨潤土30kg，以及拉開粉15kg、木質素5kg。充分混和，即可製得20％5α，11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯可溼性粉劑100kg。製劑的水中分散性、稀釋液穩定性、冷熱貯穩定性符合商品農藥製劑得要求。
實施例1325％5α-羥基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯(化合物IX)乳油的製備。200L反應釜中，將25kg 5α-羥基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯，溶於60kg二甲苯溶劑中，再加入苯乙烯酸聚氧乙烯醚15kg，在40～50℃溫度下攪拌1.0小時，即製得100kg 25％5α-羥基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯乳油。乳油的水分散性、稀釋液穩定性、冷熱貯穩定性符合商品農藥製劑得要求。
實施例1410％2α-O-β-D-吡喃葡萄糖甙-5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-內酯(化合物XI)微乳劑的製備。稱取2α-O-β-D-吡喃葡萄糖甙-5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-內酯原藥10kg，溶解於20kg異丙醇中，再加入10kg十二烷基苯磺酸鈣，10kg苯乙烯酸聚氧乙烯醚，在高速攪拌下混和，加熱至40℃左右；高速攪拌下滴加去離子水50kg，控制水的滴加速度，使溫度保持在40℃左右；水滴加完畢，升溫至55℃，攪拌1小時，製得10％2α-O-β-D-吡喃葡萄糖甙-5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-內酯微乳劑100kg。製劑的穩定性、外觀等符合商品製劑的要求。
6、大田試驗實驗實施例將本發明涉及的上述11種桉烷型倍半萜內酯化合物，用本發明的製劑配製方法，配製成15％微乳劑，在大田進行了防治番茄灰黴病、豇豆灰黴病、黃瓜灰黴病以及草莓灰黴病的藥效試驗，清水為對照，不同濃度藥液噴霧後的防治效果見表6-1～表6-4。
在實驗中，對於化合物組成的各種製劑、填料或溶劑、表面活性劑的重量百分比，按本發明的技術方案配製，均可達到理想的效果。
調查方法採取平行線2行取樣，每行調查1.5cm以上果子的發病情況，按以下分級標準對果實灰黴病的發生分級。據病情指數計算防治效果，以DMRT法分析各處理間的差異顯著性。
0級果實不發病；1級病斑佔整個果實面積的5％以下；3級病斑佔整個果實面積的6％～15％；5級病斑佔整個果實面積的16％～25％；7級病斑佔整個果實面積的26％～50％；9級病斑佔整個果實面積的50％以上。
表6-1化合物VII～XI微乳劑對番茄灰黴病防治效果
表6-2 15％化合物I和化合物II微乳劑對黃瓜灰黴病的防治效果
注施藥前摘除所有病果。
表6-3 15％化合物III和化合物IV微乳劑對豇豆灰黴病的防治效果
注藥前摘除所有病果。
表6-4 15％化合物V和化合物VI微乳劑對草莓灰黴病的防治效果
權利要求
1.從大花金挖耳分離的具殺菌活性的桉烷型倍半萜內酯化合物，其特徵在於，分離的該具殺菌活性的桉烷型倍半萜內酯化合物包括2α-乙醯氧基-5α-羥基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯；5α，6α-二羥基-4α，11αH-桉烷-12，8β-內酯；5α-羥基-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-內酯；2α-羥基-5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-內酯；2α，5α-羥基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯；5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-內酯；5α，11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯；5α-羥基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯；2α-O-β-D-吡喃葡萄糖甙-5α，11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯；2α-O-β-D-吡喃葡萄糖甙-5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-內酯；其分子結構分別為2α-乙醯氧基-5α-羥基-11α-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯 5α，6α-二羥基-4α，11αH-桉烷-12，8β-內酯 5α-羥基-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-內酯 5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-內酯 2α-羥基-5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-內酯 2α，5α-羥基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯 5α-羥基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯 5α，11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯 5α-羥基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯 2α-O-β-D-吡喃葡萄糖甙-5α，11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-內酯 2α-O-β-D-吡喃葡萄糖甙-5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-內酯
2.權利要求1所述的從大花金挖耳分離的具殺菌活性的桉烷型倍半萜內酯化合物用於防治由植物病原真菌引起的植物病害的農藥製劑應用。
3.如權利要求2所述的應用，其特徵在於，將上述具殺菌活性的桉烷型倍半萜內酯化合物製成各種製劑噴霧，防治植物真菌性病害，各種製劑的各物質的重量百分比為劑型為可溼性粉劑桉烷型倍半萜內酯化合物20％～90％，填料或溶劑0～74％，表面活性劑1％～10％，原料物質的總和為100％；劑型為乳油桉烷型倍半萜內酯化合物5％～60％，填料或溶劑40％～95％，表面活性劑5％～35％，原料物質的總和為100％；劑型為微乳劑桉烷型倍半萜內酯化合物10％～40％，填料或溶劑40％～84％，表面活性劑1％～20％，原料物質的總和為100％。
4.如權利要求3所述的應用，其特徵在於，所述的填料是白炭黑、膨潤土、矽澡土或本領域公知的物質中的一種或幾種混合物；所述的溶劑是甲醇、乙醇、正異丙醇，乙酸乙酯，芳香烴或本領域工作人員公知的物質中的一種或幾種混合物；所述的表面活性劑是常用的各類表面活性物質的一種或幾種的混合物。
全文摘要
本發明公開了從大花金挖耳分離的具殺菌活性的桉烷型倍半萜內酯化合物，包括2α－乙醯氧基－5α－羥基－11αH－桉烷－4(15)－烯－12，8β－內酯；5α，6α－二羥基－4α，11αH－桉烷－12，8β－內酯；5α－羥基－桉烷－4(15)，11(13)－二烯－12，8β－內酯；2α－羥基－5αH－桉烷－4(15)，11(13)－二烯－12，8β－內酯；2α，5α－羥基－11αH－桉烷－4(15)－烯－12，8β－內酯；5αH－桉烷－4(15)，11(13)－二烯－12，8β－內酯；5α，11αH－桉烷－4(15)－烯－12，8β－內酯；5α－羥基－11αH－桉烷－4(15)－烯－12，8β－內酯；2α－O－β－D－吡喃葡萄糖甙－5α，11αH－桉烷－4(15)－烯－12，8β－內酯；2α－O－β－D－吡喃葡萄糖甙－5αH－桉烷－4(15)，11(13)－二烯－12，8β－內酯；上述化合物的抑菌活性測定證明，對供試的植物病原菌具有較高的抑制活性。
文檔編號C07H17/00GK101050209SQ20061010488
公開日2007年10月10日 申請日期2006年11月10日 優先權日2006年11月10日
發明者馮俊濤, 王俊儒, 李廣澤, 何軍, 王智輝, 張興 申請人:西北農林科技大學無公害農藥研究服務中心