一種治療帕金森氏綜合症的藥物的製作方法
2023-06-03 14:35:16
專利名稱：一種治療帕金森氏綜合症的藥物的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種藥物，特別是關於一種用於治療帕金森氏綜合症的藥物。
背景技術：
帕金森氏綜合症是慢性進行性神經系統變性疾病，主要症狀是震顫、肌僵直、運動遲緩和姿勢障礙。發病率約為0.1-0.15％，世界患病人數約有400萬，我國約有150萬名患者，隨著我國人口老齡化問題進一步嚴重，抗帕金森綜合症藥將在我國有著較大的市場。近年國外上市的抗帕金森氏綜合症新藥主要為多巴胺D2激動劑羅匹尼羅；兒茶酚O-甲基轉移酶抑制劑託卡朋；選擇性a2/多巴胺D2激動劑他克利索等藥物。國內主要有多巴胺激動劑左旋多巴、金鋼烷胺；多巴脫羧酶抑制劑如卡比多巴等藥物用於臨床，但仍不能滿足臨床需求。並且該病長期使用上述藥物治療僅能消除症狀，開關現象和自動症等副作用發生較為普遍，患者需要終生服藥控制。因此尋找和製備具能夠治療帕金森氏綜合症無毒副作用的藥物十分必要。
發明內容
本發明的目的是提供一種治療帕金森氏綜合症的藥物，它採用生化製劑治療帕金森氏綜合症，具有無毒，副作用小，有效率高的特點。
本發明的技術方案是設計一種治療帕金森氏綜合症的藥物，其特徵是它將α-溶血鏈球菌33號菌種搭載往返式太空飛行器，在太空的特殊條件下導致α-溶血鏈球菌33號菌種遺傳特性發生變異，返回地面後優選出其中的正變異、遺傳特性穩定的菌種，經培養及生物發酵後生產出治療帕金森氏綜合症的藥物；該菌種已經在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，編號為CGMCCNo.1082。
所述的治療帕金森氏綜合症的藥物是口服液，1000ml中含太空誘變菌種生產的甘露聚糖肽0.8g-15.0g。
所述的口服液是搭載、變異、優選後的菌種，經培育發酵的生產原液，加入其它附料。
所述的口服液是搭載、變異、優選後的菌種，經培育發酵的生產原液，加入純化水溶解攪勻。
所述的附料是香精、糖精鈉、木糖醇。
所述甘露聚糖肽製備方法是；優選α-溶血性鏈球菌33菌種進行太空搭載，經過太空誘變精心選育的α-溶血性鏈球菌33號菌珠作為生產菌種製備；經一級發酵和二級發酵，將發酵液提純，最終生產出太空誘變菌種生產的甘露聚糖肽。
所述的菌種製備A.斜面種子培養基牛肉膏0.2-0.8％，酵母膏0.2-0.8％，蛋白腖0.3-0.8％，葡萄糖0.1-0.8％，氯化鈉0.2-0.6％，瓊脂1-5％，綿羊血5-10％；pH 7.2-7.4；斜面種子培養基滅菌溫度105-125℃，時間30分鐘，蒸汽壓力0.11-0.14Mpa；啟封菌種冷凍管，用無菌肉湯培養基稀釋，在無菌條件下接入血斜面，接種後置25-40℃恆溫培養24-30小時；B.肉湯種子培養基牛肉膏0.2-0.8％，酵母膏0.2-0.8％，蛋白腖0.3-0.8％，葡萄糖0.1-0.8％，氯化鈉0.2-0.6％；pH 7.0-7.4；肉湯種子培養基滅菌溫度105-125℃，時間30分鐘，蒸汽壓力0.11-0.14Mpa；將培養好的斜面菌種在無菌條件下按1-9％接種量接入肉湯種子培養基內，25-40℃恆溫培養10-30小時。
所述的發酵過程用發酵培養基牛肉膏0.2-0.8％，酵母膏0.2-0.8％，蛋白腖0.3-0.8％，葡萄糖0.1-0.9％，氯化鈉0.2-0.6％；發酵培養基滅菌溫度105-125℃，時間30分鐘，蒸汽壓力0.11-0.14Mpa；A.一級發酵罐將優良的肉湯菌種在無菌條件下按1-10％接種量接入一級種子罐，在25-40℃恆溫培養10-50小時，罐壓不超過0.02Mpa，通氣量以能翻動培養液為宜，連續充分攪拌；B.二級發酵罐將一級發酵培養液在無菌條件下按2-20％接種量接入發酵罐，在25-40℃恆溫培養20-100小時，罐壓不超過0.02Mpa；滅活放罐，滅活採用加溫使發酵液溫度達到70-120℃，保溫20-60分鐘，冷卻靜置。
所述的提取過程a、發酵液進行濃縮，使濃縮液體積與發酵液體積比控制在1∶15-1∶20或酌情而定；b、發酵液的濃縮液加入80-99％乙醇，體積量比控制在1∶1.5-1∶5.5或酌情而定，充分攪拌靜置後，離心去除上清液，沉澱用蒸餾水溶解，調pH1.0-5.0，得到溶解液並將溶解液靜置；c、再將溶解液離心去除雜質得到上清液，準確量取上清液體積，按上清液體積計算出所需乙醇量，將乙醇緩慢加入到上清液中，並充分攪拌，靜置後離心去除上清液得到沉澱物；d、沉澱物再用蒸餾水溶解，調pH、離心，上清液再加乙醇沉澱，這樣的工藝反覆操作至含量檢測合格為止，得到的沉澱物為太空誘變菌種所生產的甘露聚糖肽粗品；真空乾燥3-8小時即得太空誘變菌種生產的甘露聚糖肽產品。
本發明的特點是由於本發明將α-溶血鏈球菌菌種搭載返回式太空飛行器(宇宙飛船或返回式衛星)，利用太空中微(零)重力、宇宙射線、交變磁場、高真空、高熱深冷等因素的綜合作用，使菌株的DNA雙鏈結構斷裂，基因組發生重排，從而產生新的菌株。返回地面後，對經過太空搭載的菌株進行培養和篩選，通過研究其形態特徵、培養特徵、生理生化反應、代謝產物、遺傳性狀及蛋白表達、遺傳穩定性、中試生產指標等內容，優選出其中的正變異、遺傳特性穩定的菌種，經培養發酵後得到治療帕金森氏綜合症的藥物。該菌種已經在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，編號為CGMCCNo.1082。
特別是α-溶血鏈球菌D33菌株經太空搭載誘變，地面上的篩選、分離和純化後，選育出發酵單位更高、所分泌的甘露聚糖肽含量更高的高產、優質菌株T33株。通過中國科學院微生物研究所對T33菌株及D33菌株的全細胞蛋白SDS-聚丙烯醯胺凝膠(SDS-PAGE)分析和菌株的基因組DNA限制性酶切分析(RFLP/PFGE)比較，可以證明空間誘變及地面篩選出的T33菌株其基因有變異。該突變菌株在遺傳上穩定，有較強的生產適應性，由其發酵產生的甘露聚糖肽含量提高，多肽含量比國家標準(80％)提高3至5倍，西安市藥品檢驗所送樣測定達到271.6％，發酵含量比對照組產物含量平均高出三倍以上。經過收集大量服藥患者病歷資料，深入研究歸納總結，證實該菌株經培養、發酵、提純及精製等高科技手段製備而成的口服液對治療帕金森氏綜合症有顯著的療效。(見附件附件材料1陝西省科學技術廳陝西省科學技術成果鑑定證書材料。
附件材料2太空誘變菌種生產的甘露聚糖肽生產菌株經「神舟三號」飛船搭載公證書。
附件材料3太空誘變菌種生產的甘露聚糖肽生產菌株經「神舟三號」飛船搭載返回地面篩選報告附件材料4中國科學院微生物所關於「神舟三號」飛船搭載太空誘變菌種生產的甘露聚糖肽生產菌株與地面對照菌的形態生理生化鑑定報告書附件材料5中國科學院微生物所關於「神舟三號」飛船搭載太空誘變菌種生產的甘露聚糖肽生產菌株與地面對照菌的SDS-PAGE及RFLP/PFGE分析鑑定報告書附件材料6陝西省藥品檢驗所「神舟三號」太空誘變菌種生產的甘露聚糖肽口服液檢測報告附件材料7科技查新報告複印件附件材料8中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏菌種保藏受理通知書複印件)新藥理作用試驗分析驗證帕金森氏病最根本的病理損害是黑質-紋狀體系統多巴胺能神經元的變性壞死。從而造成DA功能降低。當黑質緻密區DA神經元退變超過80％以後，就出現類似去神經支配的超敏現象，有運動不能，肌肉僵硬，和震顫等表現。
有關治療帕金森氏病甘露聚糖肽新的藥理作用是l、甘露聚糖肽激活促進巨噬細胞分泌鹼性成纖維細胞生長因子bFGF，使中樞神經損傷修復。促進神經功能恢復。詳見李校坤著《生長因子與創傷修復的基礎與臨床應用研究》。
2、甘露聚糖肽調節紅細胞變形能力，有利於腦部損傷後微循環障礙的改善。詳見唐玉和藺桂芬著《人參多糖和多抗甲素對動物紅細胞變形能力的影響》首都醫學學報，1995；16(3)204。
3、動物實驗證實口服甘露聚糖肽500微克/100克每天兩次共三周可完全緩解由利血平持續給藥引起的大鼠震顫麻痺樣症狀。對6-羥多巴胺單側黑質注射造成的大鼠慢性震顫模型，用藥四周後可以觀察到大鼠向健側(右側)轉動，可以判斷甘露聚糖肽存在DA激動作用。
新用途驗證經過對一千例使用「神舟三號」甘露聚糖肽口服液患者的調查發現12例60歲以上的帕金森氏病患者，在服藥四周後肌僵直，震顫，運動遲緩等症狀不同程度緩解或消失。三個月後回訪其中6例停藥復發，繼續服藥一周後症狀再次緩解。服藥24周回訪8例患者停藥無復發。完全緩解10例，兩例震顫消失，但肌僵直，運動遲緩改善不明顯。所有患者在治療期間均於三周內停用美多巴，病史最長者15年，合併腦萎縮者5例，有腦梗塞，腦出血病史者11例，總有效率90％。
新療效驗證陳光明，男，74歲，家住建國路。患帕金森氏病十五年。十五年前無明顯誘因出現右手顫抖，逐漸右上肢、左上肢先後出現振顫，面部肌肉緊張，呈現面具臉，長期口服安坦等藥物無效，拿筷子，繫鞋帶，扣扣子等精細運動困難。在市中心醫院診斷為帕金森氏病。2003年5月服神舟三號甘露聚糖肽口服液每天兩支共6盒，服藥四周上述症狀減輕，繼續服用6盒後，雙上肢不再振顫，面部表情自如，生活能夠自理。三個月後回訪已停藥症狀無復發。臨床判斷為痊癒。
具體實施方案菌種選育在α-溶血鏈球菌生長規律的基礎上，選定較合適生長時期的菌種，採用平皿生長的菌落、浸入其它物質中的菌懸液、帶菌的砂土等方法，於2002年3月25日搭載「神舟三號」宇宙飛船。在太空軌道(近地點高度200公裡、遠地點高度350公裡)進行了6天零18小時的在軌飛行。太空的特殊條件主要體現為微重力、高真空、高輻射、交變磁場等特殊環境。在外層空間飛行的菌種被置於一個與地球上的生態環境完全不同的環境中，主要包括來自磁場俘獲的電子、質子及低能重粒子；來自銀河系的宇宙射線如質子、粒子及更重的高能重粒子；來自太陽磁暴的質子及重粒子等。這些粒子作用於微生物細胞核中的DNA雙鏈結構，可導致雙鏈斷裂。微重力、高真空環境可使DNA的鹼基序列發生重組，即基因組的重組和變異。變異後產生的新菌株，其形態特徵、培養特徵、生理生化反應、代謝產物、遺傳性狀及蛋白表達、中試生產指標等均會發生不同程度的變化。在宇宙飛船返回地面後，經過進一步篩選，僅優選出其中0.2％的正變異且遺傳特性穩定的菌株，經培育製成生產菌種。這種經航天搭載誘變後選育出的菌種已經在在2003年12月29日由中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，編號為CGMCCNo.1082。
實驗及中試生產結果表明，經空間誘變後的新型太空菌種在遺傳特性上穩定，有較強的生產適應性，由其發酵產生的甘露聚糖肽含量提高，多肽含量比國家標準(80％)提高3至5倍，西安市藥品檢驗所送樣測定達到271.6％，發酵含量比對照組產物含量平均高出三倍以上，發酵周期大大縮短。
製備方法太空誘變菌種生產甘露聚糖肽的製備過程本發明所述的太空誘變菌種生產的甘露聚糖肽是由以下方法製備太空菌種製備---一級發酵---二級發酵----發酵液提純，最終生產出甘露聚糖肽。
①太空菌種製備以經過空間誘變育種精心選育的α-溶血鏈球菌作為生產菌種。
A.斜面種子培養基牛肉膏0.5％，酵母膏0.6％，蛋白腖0.5％，葡萄糖0.4％，氯化鈉0.5％，瓊脂3％，綿羊血8％；pH 7.4。
斜面種子培養基滅菌溫度121℃，時間30分鐘，蒸汽壓力0.12Mpa。
啟封菌種冷凍管，用無菌肉湯培養基稀釋，在無菌條件下接入血斜面，接種後置38℃恆溫培養30小時。
B.肉湯種子培養基牛肉膏0.5％，酵母膏0.6％，蛋白腖0.5％，葡萄糖0.4％，氯化鈉0.5％；pH 7.4。
肉湯種子培養基滅菌溫度121℃，時間30分鐘，蒸汽壓力0.12Mpa。
將培養好的斜面菌種在無菌條件下按9％接種量，接入肉湯種子培養基內，38℃恆溫培養30小時。
②發酵過程發酵培養基牛肉膏0.4％，酵母膏0.5％，蛋白腖0.5％，葡萄糖0.4％，氯化鈉0.5％。
發酵培養基滅菌溫度121℃，時間30分鐘，蒸汽壓力0.12Mpa。
A.一級發酵罐將優良的肉湯菌種在無菌條件下按10％接種量，接入一級種子罐，在29℃恆溫培養30小時，罐壓不超過0.02Mpa，通氣量以能翻動培養液為宜，連續充分攪拌。
B.二級發酵罐將一級發酵培養液在無菌條件下按20％接種量，接入發酵罐，在29℃恆溫培養70小時，罐壓不0.02Mpa，滅活放罐。滅活採用加溫使發酵液溫度達到100℃，保溫60分鐘，冷卻靜置。
③提取過程a、發酵液進行濃縮，使濃縮液體積與發酵液體積比控制在1∶15-1∶20或酌情而定。
b、發酵液的濃縮液加入80-99％乙醇，體積量比控制在1∶1.5-1∶5.5或酌情而定。充分攪拌靜置後，離心去除上清液，沉澱用蒸餾水溶解，調pH5.0，得到溶解液並將溶解液靜置。
c、再將溶解液離心去除雜質得到上清液，準確量取清液體積，按上清液體積計算出所需乙醇量，調pH值，將乙醇緩慢加入到上清液中，並充分攪拌，靜置後離心去除上清液得到沉澱物。
d、沉澱物再用蒸餾水溶解，調pH，離心，上清液再加乙醇沉澱。這樣的工藝反覆操作至中間檢測合格為止，得到的沉澱物為太空誘變菌種生產的甘露聚糖肽粗品。真空乾燥3-8小時，即得到太空誘變菌種生產的甘露聚糖肽產品。
上述方法得到的產品的檢驗[性狀]本品為白色或微黃色無定形粉末；無臭、無味。
本品在水中易溶，在乙醇、氯仿及丙酮中不溶。
比旋度取本品，精密稱定，加水溶解並稀釋成每1ml中約含10mg的溶液，依法測定(中國藥典2000年版二部附錄vIE)，比旋度為+70℃至+80℃。
1、取本品10mg，加水0.5ml使溶解，加a-萘酚乙醇溶液(5-100)1ml，搖勻，沿管壁緩緩加硫酸0.5ml，數分鐘後，界面呈紫紅色。
2、取本品，加水製成每1ml中含1mg的溶液，取約10ul點於濾紙上，晾乾，用無水乙醇固定，置高硝酸溶液(取高碘酸1.2g，加水30ml溶解後.加0.2mol/L醋酸鈉溶液1.5ml與乙醇100ml，混勻即得。置暗處保存，可使用數月)中浸泡5分鐘，取出，用70％乙醇溶液衝洗，置還原液(取碘化鉀5g，硫代硫酸鈉5g，加水100ml使溶解，再加乙醇150ml、2mol/L鹽酸液2.5ml，隨加隨攪拌，臨用時配)中浸泡5分鐘，取出，用70％乙醇溶液衝洗，置品紅業硫酸試液中浸泡約30分鐘，取出，用焦亞硫酸鈉溶液(取焦亞硫酸鈉0.4g，加鹽酸1ml，加水溶解使成100ml，即得)，衝洗，晾乾，在濾紙片點樣處應呈紫紅色。
3、取供試品和對照品適量，分別加氯化鈉注射液製成每1ml中含1mg的溶液作為供試品溶液和對照品溶液，按甘露聚糖肽免疫原性測定法試驗，供試品和對照品管應均無溶血發生。
1、酸度取本品，加水製成每1ml中含I0mg的溶液，依法測定(中國藥典2000年版二部附錄VIH)，pH值應為3.0-5.0。
2、吸收度取本品，加水製成每1ml中含0.4mg的溶液，照分光光度法(中國藥典2000年版二部附錄VIA)，在260nm的波長處，其吸收度不得大於0.25，在280nm的波長處，其吸收度不得大於0.20。
3、總氮量取本品，照氮測定法(中國藥典2000年版二部附錄VIID第二法)測定.按乾燥品計算，含總氮量應為0.8-2.0％。
4、免疫原性取供試品和對照品適量，分別加氯化鈉注射液製成每1ml中含10mg的溶液，再分別用磷酸鹽緩衝液製成1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128、1∶256的稀釋液作為供試品溶液和對照品溶液，依法檢查(附甘露聚糖肽免疫原性測定法)，供試品不溶血管的最低濃度應不得高於對照品相應濃度的一倍以上。
5、乾燥失重 取本品，在105℃乾燥至恆重，減失重量不得過5.0％(中國藥典2000年版二部附錄VIIIL)。
6、重金屬 取本品，在1.0g，依法檢查(中國藥典2000年版VIIIH)含重金屬不得過百萬分之二十。
7、異常毒性取本品，加氯化鈉注射液製成每1ml中含0.5mg的溶液，依法檢查(中國藥典2000年版附錄XIC).按靜脈注射法給藥，應符合規定(供注射用)。
1.對照品溶液的製備精密稱取經105℃乾燥至恆重的D-甘露糖對照品0.1g置100ml量瓶中，加水溶解並稀釋至刻度.搖勻；精密量取5ml，置100ml的量瓶中，加水至刻度，搖勻。每1ml中含甘露糖50ug。
2.供試品溶液備取本品適量，精密稱定，加水溶解製成每1ml中含40ug的溶液。
3.標準曲線的製備精密稱取對照品溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分別置具塞試管中，各加水至1.0ml，再加3％苯酚溶液1.0ml，搖勻，衝入硫酸4.5ml，搖勻，放置於室溫，以0管為空白。照分光光度法(中國藥典2000年版二部附錄IVA)在490nm的波長處測定吸收度。以甘露糖ug數對相應的吸收度，計算回歸方程。
4.測定法精密量取供試品溶液1.0ml，照標準曲線製備項下自「再加3％苯酚溶液1.0ml」起，依法操作，測定吸收度，由回歸方程計算甘露糖的含量。
甘露聚糖肽免疫原性測定法(補體結合法)；1、試液A.酸鹽緩衝液(pH7.2)取氯化鈉8.5g、磷酸氫二鈉0.565g及磷酸二氫鉀0.135g，加水至1000ml使其溶解，加10％硫酸鎂溶液1ml，搖勻。
B.1％羊紅細胞懸液羊血紅細胞的製備由綿羊頸靜脈無菌採血於盛有等量阿氏液(取葡萄糖20.5g、枸椽酸鈉8.0g、氯化鈉4.2g，枸椽酸5.5g，加水至1000mI使溶解，100℃滅菌30分鐘)的無菌容器中，4℃保存。
1％羊血紅細胞懸液的製備取上述羊血紅細胞適量，用氯化鈉注射液洗滌三次，每次離心5分鐘(2000轉/分)，取壓積羊血紅細胞，用氯化鈉注射液製成1％羊血紅細胞懸液。取懸液，用氯化鈉注射液稀釋20倍製成供試品溶液，另取等量懸液加水稀釋20倍作為空白溶液，照分光光度法(中國藥典2000年版二部附錄IVA)，在541nm的波長處測定，其吸收度應為0.65-0.70，如超出限度應調節1％羊紅細胞懸液的濃度。
C.溶血素及致敏羊血紅細胞溶血素的製備取上述壓積羊血紅細胞，用氯化鈉注射液製成25％羊血紅細胞懸液.取家兔1隻，靜脈注射上述羊血紅細胞懸液，每日一次，共七次，前三次3ml，後三次5ml，末次注射後七日採血。分離血清，56℃。30分鐘滅活，分裝，0℃以下保存。
溶血素單位的測定取溶血素適量，加磷酸鹽緩衝液分別製成1∶1000、1∶2000、1∶3000、1∶4000、1∶5000、1∶6000、1∶7000、1∶8000、1∶9000、1∶10000的稀釋液，各取0.1ml置試管中，加1％羊血細胞懸液0.1ml，搖勻，加稀釋度為1∶30的豚鼠血清(補體)0.2ml及磷酸鹽緩衝液0.2ml，搖勻，37℃保溫30分鐘，完全溶血管最高稀釋度為1單位溶血素。
致敏羊血紅細胞的製備臨用前，將2％的羊血紅細胞懸液與2單位溶血索等體積混合，37℃保溫15分鐘即得。
補體取三隻以上的豚鼠，心臟採血，離心分離血清，0℃以下保存。
補體單位的測定取補體適量，加磷酸鹽緩衝液，分別製成1∶40、1∶60、1∶80、1∶100、1∶120、1∶140、1∶160、1∶180的稀釋液，各取0.2ml置試管中，加0.2ml磷酸鹽緩衝液，搖勻，37℃保溫30分鐘後，分別加致敏羊血紅細胞0.2ml，搖勻，37℃再保溫30分鐘.完全溶血管的最高稀釋度為1單位的補體。
抗體取甘露聚糖肽對照品適量，加氯化鈉注射液製成每1ml中含10mg的對照品溶液免疫家兔，隔日採用耳靜脈注射對照品溶液一次。第一次注射0.2ml，第二次至第五次各注射0.5ml，第六次至第十次各注射1.0ml，第十一次至第十五次各注射2.0ml，末次注射後三日採血，離心分離血清，56℃下30分鐘滅活，分裝，0℃以下保存(臨用前，需56℃30分鐘再次滅活)。
抗體單位的測定取抗體適量，加磷酸鹽緩衝液分別製成1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32。1∶64、1∶128的稀釋液，各取0.1ml置試管中，加甘露聚糖肽對照品溶液0.1ml及2單位補體0.2m]，搖勻，於4-8℃放置4小時以上，置37℃保溫30分鐘，不溶血管的最高稀釋度為1單位抗體。同時設抗原(不加抗體，以0.1ml磷酸鹽緩衝液代替)、抗體(不加抗原，以0.1ml磷酸鹽緩衝液代替)、補體(不加抗原，抗體，以0.2ml磷酸鹽緩衝液代替)對照管，以上三種對照管應全溶血；另設的致敏羊血紅細胞(不加抗原、抗體和補體，以0.4ml磷酸鹽緩衝液代替)對照管應不溶血。
2、免疫原性測定法取甘露驟糖肽對照品與供試品適量，照藥品項下的規定製成不同濃度的對照品溶液和供試品溶液，各取0.1ml置試管中，加入2單位抗體0.1ml及2單位補體0.2ml。搖勻，於4-8℃放置4小時以上，置37℃保溫30分鐘，加入致敏羊血紅細胞0.2ml，搖勻，37℃再保溫30分鐘。觀察各管的溶血情況，不溶血管的最低濃度代表甘露聚糖肽的免疫原性。同時設抗原(不加抗體，以0.1ml磷酸鹽緩衝液代替)、抗體(不加抗原，以0.1ml磷酸鹽緩衝液代替)、補體(不加抗原、抗體、以0.2ml磷酸鹽緩衝液代替)對照管，以上三種對照管應全溶血另設的致敏羊血紅細胞(不加抗原、抗體和補體，以0.4ml磷酸鹽緩衝液代替)對照管應不溶血。
太空誘變菌種生產「神舟三號」甘露聚糖肽口服液的製備方法取太空誘變菌種生產的甘露聚糖肽，加適量香精、矯味劑溶解，加純化水到全量，攪拌均勻後過濾，灌裝，熱壓滅菌105-121℃，20-30分鐘，經燈檢合格後包裝入庫。
實施例1太空誘變菌種生產的甘露聚糖肽1克；加甜味劑適量和香精適量；製成1000ml。
將太空誘變菌種生產的甘露聚糖肽1g，糖精鈉0.10g，用少量純化水溶解，加入香精0.1ml、加純化水至1000ml攪勻，過濾，化驗合格後，灌封，流通蒸汽滅菌121℃，30分鐘.
實施例2太空誘變菌種生產的甘露聚糖肽原料液1000ml，活性炭0.25g，木糖醇0.8g，，製成1000ml。
取太空誘變菌種生產的甘露聚糖肽原料液1000ml，加入活性炭0.25g，攪勻，過濾，加入木糖醇0.5g，攪勻，化驗合格後，灌封，流通蒸汽滅菌121℃，30分鐘。
權利要求
1.一種治療帕金森氏綜合症的藥物，其特徵是它將α-溶血鏈球菌33號菌種搭載往返式太空飛行器，在太空的特殊條件下導致α-溶血鏈球菌33號菌種遺傳特性發生變異，返回地面後優選出其中的正變異、遺傳特性穩定的菌種，經培養及生物發酵後生產出治療帕金森氏綜合症的藥物；該菌種已經在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，編號為CGMCCNo.1082。
2.根據權利要求1所述的一種治療帕金森氏綜合症的藥物，其特徵是所述的治療帕金森氏綜合症的藥物是口服液，1000ml中含太空誘變菌種生產的甘露聚糖肽0.8g-15.0g。
3.根據權利要求1所述的一種治療帕金森氏綜合症的藥物，其特徵是所述的口服液是α-溶血鏈球菌33號菌種搭載空間飛行器、變異、優選後的菌種，經培育發酵的生產原液，加入其它附料製成。
4.根據權利要求1所述的一種治療帕金森氏綜合症的藥物，其特徵是所述的口服液是α-溶血鏈球菌33號菌種搭載空間飛行器、變異、優選後的菌種，經培育發酵的生產原液，加入純化水溶解攪勻製成。
5.根據權利要求3所述的一種治療帕金森氏綜合症的藥物，其特徵是所述的附料是香精、糖精鈉、木糖醇。
6.根據權利要求2所述的一種治療帕金森氏綜合症的藥物，其特徵是所述甘露聚糖肽製備方法是；優選α-溶血性鏈球菌33菌種進行太空搭載，經過太空誘變精心選育的α-溶血性鏈球菌33號菌珠作為生產菌種製備；經一級發酵和二級發酵，將發酵液提純，最終生產出太空誘變菌種生產的甘露聚糖肽。
7.根據權利要求6所述的一種治療帕金森氏綜合症的藥物，其特徵是所述的菌種製備A. 斜面種子培養基牛肉膏0.2-0.8％，酵母膏0.2-0.8％，蛋白腖0.3-0.8％，葡萄糖0.1-0.8％，氯化鈉0.2-0.6％，瓊脂1-5％，綿羊血5-10％；pH7.2-7.4；斜面種子培養基滅菌溫度105-125℃，時間30分鐘，蒸汽壓力0.11-0.14Mpa；啟封菌種冷凍管，用無菌肉湯培養基稀釋，在無菌條件下接入血斜面，接種後置25-40℃恆溫培養24-30小時；B.肉湯種子培養基牛肉膏0.2-0.8％，酵母膏0.2-0.8％，蛋白腖0.3-0.8％，葡萄糖0.1-0.8％，氯化鈉0.2-0.6％；pH7.0-7.4；肉湯種子培養基滅菌溫度105-125℃，時間30分鐘，蒸汽壓力0.11-0.14Mpa；將培養好的斜面菌種在無菌條件下按1-9％接種量接入肉湯種子培養基內，25-40℃恆溫培養10-30小時。
8.根據權利要求6所述的一種治療帕金森氏綜合症的藥物，其特徵是所述的發酵過程用發酵培養基牛肉膏0.2-0.8％，酵母膏0.2-0.8％，蛋白腖0.3-0.8％，葡萄糖0.1-0.9％，氯化鈉0.2-0.6％；發酵培養基滅菌溫度105-125℃，時間30分鐘，蒸汽壓力0.11-0.14Mpa；A.一級發酵罐將優良的肉湯菌種在無菌條件下按1-10％接種量接入一級種子罐，在25-40℃恆溫培養10-50小時，罐壓不超過0.02Mpa，通氣量以能翻動培養液為宜，連續充分攪拌；B.二級發酵罐將一級發酵培養液在無菌條件下按2-20％接種量接入發酵罐，在25-40℃恆溫培養20-100小時，罐壓不超過0.02Mpa；滅活放罐，滅活採用加溫使發酵液溫度達到70-120℃，保溫20-60分鐘，冷卻靜置。
9.根據權利要求1所述的一種治療帕金森氏綜合症的藥物，其特徵是所述的提取過程a、發酵液進行濃縮，使濃縮液體積與發酵液體積比控制在1∶15-1∶20或酌情而定；b、發酵液的濃縮液加入80-99％乙醇，體積量比控制在1∶1.5-1∶5.5或酌情而定，充分攪拌靜置後，離心去除上清液，沉澱用蒸餾水溶解，調pH1.0-5.0，得到溶解液並將溶解液靜置；c、再將溶解液離心去除雜質得到上清液，準確量取上清液體積，按上清液體積計算出所需乙醇量，將乙醇緩慢加入到上清液中，並充分攪拌，靜置後離心去除上清液得到沉澱物；d、沉澱物再用蒸餾水溶解，調pH、離心，上清液再加乙醇沉澱，這樣的工藝反覆操作至含量檢測合格為止，得到的沉澱物為太空誘變菌種所生產的甘露聚糖肽粗品；真空乾燥3-8小時即得太空誘變菌種生產的甘露聚糖肽產品。
全文摘要
本發明涉及一種治療帕金森氏綜合症的藥物，其特徵是它將α－溶血鏈球菌33號菌種搭載往返式太空飛行器，在太空的特殊條件下導致α－溶血鏈球菌33號菌種遺傳特性發生變異，返回地面後優選出其中的正變異、遺傳特性穩定的菌種，經培養及生物發酵後生產出治療帕金森氏綜合症的藥物；該菌種已經在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，編號為CGMCCNo.1082。所述的治療帕金森氏綜合症的藥物是口服液，1000ml中含太空誘變菌種生產的甘露聚糖肽0.8g－15.0g。這種治療帕金森氏綜合症的藥物，它採用生化製劑治療帕金森氏綜合症，具有無毒，副作用小，有效率高的特點。
文檔編號A61P25/16GK1634558SQ20031012224
公開日2005年7月6日 申請日期2003年12月31日 優先權日2003年12月31日
發明者趙恆 , 劉恆 申請人:趙恆