一種高載藥量的緩釋莫西沙星納米粒的製備方法
2023-05-28 01:02:51
一種高載藥量的緩釋莫西沙星納米粒的製備方法
【專利摘要】本發明涉及藥物製劑領域，具體涉及一種高載藥量的緩釋莫西沙星納米粒的製備方法。該方法用高壓均質法製備空白脂質體，然後用硫酸銨梯度裝載水溶性的鹽酸莫西沙星藥物。本發明獲得的脂質體納米粒對莫西沙星具有較高的載藥量，並能對藥物起到緩釋作用。
【專利說明】一種高載藥量的緩釋莫西沙星納米粒的製備方法
【技術領域】
[0001]本發明屬於主動智能載藥【技術領域】，具體涉及一種將硫酸銨梯度法與高壓均質法相結合，進行改良和工藝優化，以製備高載藥量緩釋莫西沙星脂質體納米粒的方法。
【背景技術】
[0002]莫西沙星是20世紀90年代末由德國拜耳公司合成上市的第4代氟喹諾酮類抗菌素藥物。莫西沙星以其抗菌譜廣、抗菌力強、體內分布廣、與其他抗菌藥物無交叉耐藥性、幾乎無光敏反應等優點自上市以來得到臨床廣泛應用，是第4代氟喹諾酮類抗菌素藥物中對結核菌最有效的一種，對95種株肺炎鏈球菌的敏感度為95.78%。莫西沙星早期滅菌活性高，防突變濃度低，耐藥選擇指數低，組織穿透性好，在呼吸道黏膜及肺組織中易蓄積，這些特點使其成為新一 代抗結核藥物。至今已上市的莫西沙星製劑為拜耳公司的鹽酸莫西沙星注射液和口服片劑。然而莫西沙星在人體半衰期短，藥物體內分布不具選擇性，且用藥量大，易產生毒副反應；莫西沙星作為抗結核藥，在臨床治療上存在治療周期長、病人順應性低等問題。故能在肺部滯留並在較長時間內緩慢釋放藥物的劑型將成為肺結核治療的新方向。為此首先需要製備出具有一定載藥量能較長時間內緩慢釋放藥物的微米或納米大小的載藥微粒。
脂質體是由脂質雙分子層構成的內部為水相的封閉囊泡。脂質體作為一種廣泛使用的智能納米給藥系統具有優良的生物相容性、良好的緩釋作用和一定的肺部靶向性，並已能夠工業化生產。
莫西沙星是小分子水溶性藥物，由於極強的水溶性，目前尚無能同時實現莫西沙星緩釋和高載藥量的在納米或微米尺度內的載藥微粒。尤其是高載藥量是莫西沙星等小分子水溶性藥物緩釋微粒難以實現的目標。以復乳法製備的聚合物納米粒或微球、微囊，在低載藥量(如小於5% )可以實現對莫西沙星對水溶性小分子藥物的緩釋，但當載藥量提高(如大於10% )，緩釋能力急劇降低，甚至完全失去緩釋能力。莫西沙星具有一定的弱鹼性，採用磷酸銨梯度法主動轉載法製備莫西沙星脂質體，有望能提高脂質體的載藥量。
[0003]目前，製備脂質體的方法很多，較為成熟的被動載藥法有薄膜蒸發法、逆向蒸發法、乙醇注入發等。但是被動載藥製得的脂質體對水溶性藥物包封率低、載藥量低，並存在包封條件不易掌握、包封率差異較大等缺點限制了其應用。主動載藥法因能夠克服被動載藥對水溶性藥物的不足而近年來得到了快速發展。主動載藥法特別是硫酸銨梯度法適於製備兩親性藥物脂質體。硫酸銨梯度法是利用硫酸銨水溶液為脂質體的內水相，緩衝溶液為外水相，而在磷脂雙分子層兩側產生硫酸銨的濃度梯度，而硫酸銨梯度又是產生pH值梯度的原動力[7]。外水相中的弱鹼性藥物分子通過磷脂雙分子層進入內水相後，與S042—形成硫酸鹽，因磷酸鹽難以跨越雙分子層不能再返回外水相而滯留在脂質體內水相。這樣，外水相中的弱鹼性分子持續不斷地進入內水相，而使藥物具有很高的包封率。
本發明在硫酸銨梯度法主動載藥製備脂質體的基礎上，為儘可能提高莫西沙星的載藥量、包封率和成品中莫西沙星的濃度，最優方案使用高濃度的硫酸銨溶液，藉助高壓均質法使得高含高濃度硫酸銨和高磷脂濃度的空白脂質體得以製備成功，並能控制粒逕到較好的範圍；使用最高的藥物-磷脂比例；載藥時，將莫西沙星以藥物固體粉末的形式直接加入到空白脂質體中溶解、混勻和孵育。
所製備的高載藥莫西沙星緩釋納米粒尤其適合與透明質酸等肺部相容性凝膠材料製備成脂質體凝膠，在支氣管鏡導引下介入給藥到肺部病患部位(如肺結核病灶部位)，實現長效緩釋作用，以減少給藥次數，提高病人順應性，改善治療效果。這是因為脂質體材料對肺部生物相容性好，也不會引起明顯的刺激和不良反應。
【發明內容】
[0004]本發明根據脂質體載體材料的特性及莫西沙星產品本身的特性，而提供了一種硫酸銨梯度法與高壓均質法相結合，進行方法改良和工藝優化，從而獲得高載藥緩釋莫西沙星脂質體納米粒。此方法創建了一種新的易於工業化的主動載藥的方法，以製備莫西沙星脂質體。本發明有效解決了莫西沙星緩釋微粒存在的載藥量低、包封率低、終產品終莫西沙星藥物濃度不夠高等問題，同時得到的脂質體粒徑小、尺寸均一，製備工藝也較簡單。
[0005]完成上述任務本發明的技術方案是，高濃度的硫酸銨結合高壓均質法製備粒徑合適的空白脂質體，在很高的藥物-磷脂比例下用硫酸銨梯度法裝載莫西沙星製備緩釋脂質體納米粒，步驟如下:
[0006]用燒杯稱取一定量50_800mg氫化大豆磷脂、1/5量的膽固醇、1/20量的DSPE-PEG2000在50°C加熱條件下高速攪拌均勻分散到硫酸銨水溶液中，溫和攪拌下持續加熱lh，得到白色乳狀懸液；
[0007]將懸液在60°C加熱並一定壓力下經高壓均質機循環均質若干次得脂質體溶液；
[0008]以160mmolNaCl為透析介質一定溫度下透析4_6h,製造硫酸銨梯度,得空白脂質體；
[0009]取5mL空白脂質體中加入150mg莫西沙星粉末，攪拌均勻後在40°C孵化20_30min ；
[0010]取孵化後的溶液，以PBS為透析外液於37°C溫度下透析2_3h，直到外液中莫西沙星含量不再增加；透析外液轉移至IOOmL容量瓶中定容，即可獲得高包封率，穩定，粒徑均勻的脂質體。
[0011]所述的硫酸銨溶液濃度分別為70mg/mL ;硫酸銨溶液的加入量為ImL硫酸銨溶液/50mgHSPC。
[0012]所述的高壓均質壓力800bar，高壓均質溫度60°C，高壓均質循環次數為3次，空白脂質體粒徑為IlOnm左右。
[0013]所述的透析溫度為25°C，透析時間5h。
[0014]所述藥物為粉末形式直接加入到空白脂質體溶液中，每mL空白脂質體溶液加入莫西沙星的量為30mg。
[0015]所述的孵化溫度和時間:40°C下孵育30min。
[0016]所述孵化後的溶液，以PBS為透析外液於37°C溫度下透析2.5h。
[0017]本發明提供的用硫酸銨梯度法結合高壓均質法製備莫西沙星脂質體的綜合製備方法，通過本發明所獲得的脂質體包封率高，穩定，粒徑均勻，同時製備工藝簡單易於工業化生產。
【專利附圖】
【附圖說明】
圖1為硫酸銨濃度對包封率影響曲線圖
圖2為孵化溫度對包封率影響曲線圖
圖3為孵化時間對包封率影響曲線圖
圖4為空白脂質體透析時間對包封率影響曲線圖
圖5莫西沙星脂質體粒徑分布圖
圖6莫西沙星脂質體室溫放置粒徑變化圖
圖7莫西沙星脂質體體外藥物釋放圖
【具體實施方式】
實施例1:用燒杯稱取50mg氫化大豆磷脂、1/5量的膽固醇、1/20量的DSPE-PEG2000在500C加熱條件下高速攪拌均勻分散到不同濃度(30、50、70、80mg/mL)硫酸銨水溶液中，持續加熱lh，若有泡沫超聲除去，得到白色乳狀溶液；將溶液在60°C加熱並一定壓力下經高壓均質機循環均質三次得脂質體溶液；以160mmolNaCl為透析介質透析5h,製造硫酸銨梯度，得空白脂質體；取5!^空白脂質體中加入150mg莫西沙星粉末，攪拌均勻後在40°C孵化30min ;取孵化後的溶液，以PBS為透析外液於37`°C溫度下透析2.5h，直到外液中莫西沙星含量不再增加；透析外液轉移至IOOmL容量瓶中定容，經高效液相測定其中莫西沙星含量，根據標準曲線算出不同硫酸銨濃度製備脂質體的包封率，考察最優條件。(見圖1)。
實施例2:用燒杯稱取一定量50mg氫化大豆磷脂、1/5氫化大豆磷脂質量的膽固醇、1/20氫化大豆磷脂質量的卞澤-78在50°C加熱條件下高速攪拌均勻分散到70mg/mL硫酸銨水溶液中，持續加熱lh，若有泡沫超聲除去，得到白色乳狀溶液；將溶液在60°C加熱並一定壓力下經高壓均質機循環均質三次得脂質體溶液；以160mmolNaCl為透析介質透析5h,製造硫酸銨梯度，得空白脂質體；取5mL空白脂質體中加入150mg莫西沙星粉末，攪拌均勻後分別在30、40、50、60°C孵化30min ;取孵化後的溶液，以PBS為透析外液於37°C溫度下透析2.5h，直到外液中莫西沙星含量不再增加；透析外液轉移至IOOmL容量瓶中定容，經高效液相測定其中莫西沙星含量，根據標準曲線算出不同孵化溫度下製備脂質體的包封率，考察最優條件。(見圖2)
實施例3:用燒杯稱取一定量50mg氫化大豆磷脂、1/5氫化大豆磷脂質量的膽固醇、1/20氫化大豆磷脂質量的卞澤-78在50°C加熱條件下高速攪拌均勻分散到70mg/mL硫酸銨水溶液中，持續加熱lh，若有泡沫超聲除去，得到白色乳狀溶液；將溶液在60°C加熱並一定壓力下經高壓均質機循環均質三次得脂質體溶液；以160mmolNaCl為透析介質透析5h,製造硫酸銨梯度，得空白脂質體；取5mL空白脂質體中加入150mg莫西沙星粉末，攪拌均勻後在40°C條件下分別孵化20、30、40、60min ;取孵化後的溶液，以PBS為透析外液於37°C溫度下透析2.5h，直到外液中莫西沙星含量不再增加；透析外液轉移至IOOmL容量瓶中定容，經高效液相測定其中莫西沙星含量，根據標準曲線算出不同孵化時間製備脂質體的包封率，考察最優條件。(見圖3)
實施例4:用燒杯稱取一定量50mg氫化大豆磷脂、1/5氫化大豆磷脂質量的膽固醇、1/20氫化大豆磷脂質量的卞澤-78在50°C加熱條件下高速攪拌均勻分散到70mg/mL硫酸銨水溶液中，持續加熱lh，若有泡沫超聲除去，得到白色乳狀溶液；將溶液在60°C加熱並一定壓力下經高壓均質機循環均質三次得脂質體溶液；以ieOmmolNaCl為透析介質分別透析
l、3、5、8、16、48h，製造硫酸銨梯度，得空白脂質體；取5mL空白脂質體中加入150mg莫西沙星粉末，攪拌均勻後在40°C條件下分別孵化30min ;取孵化後的溶液，以PBS為透析外液於37°C溫度下透析2.5h，直到外液中莫西沙星含量不再增加；透析外液轉移至IOOmL容量瓶中定容，經高效液相測定其中莫西沙星含量，根據標準曲線算出不同透析時間製備脂質體的包封率， 考察最優條件。(見圖4)
【權利要求】
1.一種高載藥量的緩釋莫西沙星納米粒的製備方法，步驟如下: 1)將1份氫化卵磷脂、0.1-0.5份兒膽固醇、0-0.3份兒添加劑(均為重量比)在50-60°C加熱條件下高速攪拌均勻分散到硫酸銨水溶液中，持續加熱lh，得到白色乳狀溶液； 2)將溶液在60°C加熱並一定壓力下經高壓均質機循環均質若干次得脂質體溶液； 3)以一定濃度NaCl水溶液為透析介質透析4-6h,製造硫酸銨梯度,得空白脂質體； 4)空白脂質體中加入莫西沙星粉末，在40°C孵化20-30min； 5)取孵化後的溶液，以PBS為透析外液於37°C溫度下透析2-3h，直到外液中莫西沙星含量不再增加；透析液轉移、定容，即獲得包封率高、高載藥量的脂質體納米粒。
2.按照權利要求1所述的一種高載藥量的緩釋莫西沙星納米粒的製備方法，其特徵在於，所製備的納米粒對莫西沙星具有較高的載藥量(高達30%)、包封率(在30%載藥量時包封率高達75-80% )。
3.按照權利要求1、2所述的一種高載藥量的緩釋莫西沙星納米粒的製備方法，其特徵還在於，為提高莫西沙星的包封率和載藥量，在製備空白脂質體時，使用高濃度的硫酸銨溶液(濃度最高可達80mg/mL)，並使用高壓均質控制空白脂質體的粒徑在合適大小。
4.按照權利要求1、2、3所述的一種高載藥量的緩釋莫西沙星納米粒的製備方法，其特徵還在於，為進一步提高莫西沙星的包封率和載藥量和成品中莫西沙星的濃度，在用空白脂質體硫酸銨梯度法主動裝載莫西沙星時，將莫西沙星以藥物固體粉末的形式直接加入到空白脂質體中孵育載藥。`
5.按照權利要求1、2、3、4所述的一種高載藥量的緩釋莫西沙星納米粒的製備方法，其特徵還在於，所製備的納米粒對莫西沙星具有顯著的緩釋作用。用透析袋法進行的體外釋放試驗中，17天釋放不到60%。
6.按照權利要求1、2、3、4、5所述的一種高載藥量的緩釋莫西沙星納米粒的製備方法，其特徵還在於，所製備的納米粒對莫西沙星具有顯著的緩釋作用。用透析袋法進行的體外釋放試驗中，17天釋放大約50%。
7.按照權利要求1、2、3、4、5、6所述的一種高載藥量的緩釋莫西沙星納米粒的製備方法，其特徵還在於，所製備的納米粒尤其適合於與透明質酸等肺部相容性凝膠材料製備成脂質體凝膠，在支氣管鏡導引下介入給藥到肺部病患部位(如肺結核病灶部位)，實現長效緩釋作用，改善治療效果。
8.按照權利要求1、2、3、4、5所述的一種高載藥量的緩釋莫西沙星納米粒的製備方法，其特徵還在於: 所述的氫化磷脂可以用豆磷脂、卵磷脂等不飽和磷脂代替，此時製備空白脂質體和高壓均質時，在室溫或低於室溫下進行； 所述的添加劑可以為卞澤-78、DSPE-PEG2000、膽固醇-PEG1000、膽固醇-PEG2000 ； 所述的硫酸銨溶液濃度分別為30-80mg/mL，硫酸銨溶液的加入量為0.5-2.0mL硫酸銨溶液 /50mgHSPC ； 所述的高壓均質壓力200-2000bar，高壓均質溫度40_70°C，高壓均質循環次數為1_10次，製得空白脂質體粒徑為50-500nm左右； 所述的透析介質NaCl濃度為50-200mmol/L，透析溫度為25°C，透析時間2_24小時；所述藥物為粉末形式直接加入或以濃溶液加入到空白脂質體溶液中，莫西沙星用量為10-50mg/lmL空白脂質體溶液； 所述的孵化溫度和時間:35-45 °C下孵育20-60min ； 所述孵化後的溶液，以PBS為透析`外液於37°C溫度下透析後的溶液。
【文檔編號】A61K31/4709GK103768021SQ201310676878
【公開日】2014年5月7日 申請日期:2013年12月13日 優先權日:2013年12月13日
【發明者】王向濤, 張珺, 韓美華 申請人:中國醫學科學院藥用植物研究所