含有矢車菊素3-o-葡萄糖苷的有效部位及製備方法及應用的製作方法

2023-06-20 10:36:01 4

專利名稱：：含有矢車菊素3-o-葡萄糖苷的有效部位及製備方法及應用的製作方法
技術領域：
：本發明涉及一種中藥提取物，特別是涉及一種含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位及製備方法及在製備防治類風溼性關節炎藥物或食品的應用。技術背景類風溼性關節炎(rheumatoidarthritis,RA)是一種以關節病變為主的慢性全身性自身免疫性疾病，屬中醫痺證範疇，與"歷節病"、"白虎歷節"、"頑痺"等相似。RA具有反覆發作、致殘率高等特點，是常見而難治性疾病，目前國內外尚無特效治療方法[l]。西藥治療副作用大，有些患者不能耐受，而且不適當的西藥治療所致藥源性疾病的發病率更高。中藥不僅來源廣泛、種類數量眾多、毒副反應小，而且具有多環節、多層次、多靶點綜合作用的特點，因此治療RA有著獨特的優勢。近幾十年來，我國在RA的臨床和實驗研究中，取得了長足的進展，初步顯示了中藥對RA具有較好的臨床療效和抗炎、鎮痛、改善血液流變性、改善關節滑膜超微結構及免疫調節等藥理作用[2]。從傳統的中藥及天然產物中尋找有效部位或有效成分治療RA已成為研究熱點。佐劑性關節炎動物模型在臨床上類似類風溼性關節炎，常用於評價天然藥物對RA的治療作用及可能的作用機理研究[3-4]。1.張銀玲，陳文，彭雪芹，王甫英，江發壽，治療類風溼性關節炎的中藥研究概況，中國藥業，2007,16(15):1-3.2.楊景峰，中醫藥治療類風溼性關節炎的試驗研究進舉，現代中醫藥，2003，3:55-57.3.陸生，梁崇禮，林月秋，類風溼性關節炎動物模型研究應用進展，中國實驗動物學雜誌，2001，11(2):112-114.4.李萬瑤，林錦泉，賴秀麗，賴先娥，尹利華，峰針對佐劑性關節炎動物模型的試驗研究，中國中醫基礎醫學雜誌，2001，7(8):620-622.
發明內容本發明的目的是提供一種含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位。本發明的第二個目的是提供一種含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位的製備方法。本發明的第三個目的是提供一種含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位在製備防治類風溼性關節炎藥物或食品的應用。本發明的技術方案概述如下一種含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位'，用下述方法製成(1)提取提取的方法為下述步驟之一種①以黑豆皮、黑米、紫胡蘿蔔、紫玉米須、紫玉米皮、紫玉米粒、紫玉米棒、紫甘薯、桑椹果、藍莓果、歐洲越桔或藍靛果為原料，加入所述原料質量3—12倍的水或酸水溶液為提取溶劑，在20—50。C提取l-6次，每次l-8小時，過80-120目篩，得提取液，所述酸水溶液中的酸的體積百分比濃度為1%~5%;②以黑豆皮、黑米、紫胡蘿蔔、紫玉米須、紫玉米皮、紫玉米粒、紫玉米棒、紫甘薯、桑椹果、藍莓果、歐洲越桔或藍靛果為原料，加入所述原料質量3—12倍的體積百分比濃度為10%~95%的乙醇水溶液或甲醇水溶液或乙醇酸水溶液或甲醇酸水溶液為提取溶劑，在20一50。C提取1-6次，每次1-8小時，過80-120目篩，在溫度56(TC，真空度為0.060.08MPa減壓濃縮至糖度2-40，得到提取物，將所述提取物以質量比為1:1~10的比例分散至水中，所述酸水溶液中的酸的體積百分比濃度為1%~5%;(2)將所述歩驟(1)獲得的產物經大孔樹脂吸附，用水及體積百分比濃度為10%95%的乙醇水溶液或水及體積百分比濃度為10%~95%的甲醇水溶液梯度洗脫，洗脫液通過薄層層析方法並結合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將其合併，在溫度《(TC，真空度為0.06~0.08MPa減壓濃縮，得糖度為1040的濃縮物；(3)將所述濃縮物按質量比為1:3-5的比例分散至水中進行聚醯胺樹脂吸附，用水及體積百分比濃度為5%-75%的乙醇水溶液或水及體積百分比濃度為5%-75%的甲醇水溶液梯度洗脫，通過薄層層析結合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將洗脫液在溫度560。C，真空度為0.060.08MPa減壓濃縮，至糖度為10-40，乾燥，得矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位。所述步驟(1)的提取優選的是以黑豆皮、黑米、紫胡蘿蔔、紫玉米須、紫玉米皮、紫玉米粒、紫玉米棒、紫甘薯、桑椹果、藍莓果、歐洲越桔或藍靛果為原料，加入所述原料質量10倍的酸水溶液為提取溶劑，在40—45'C提取3-5次，每次4-6小時，過100目篩，得提取液，所述酸水溶液中的酸的體積百分比濃度為1%~3%。所述歩驟(1)的提取優選的還可以是以黑豆皮、黑米、紫胡蘿蔔、紫玉米須、紫玉米皮、紫玉米粒、紫玉米棒、紫甘薯、桑椹果、藍莓果、歐洲越桔或藍靛果為原料，加入所述原料質量10倍的體積百分比濃度為40%~60%的乙醇酸水溶液為提取溶劑，在20—30。C提取3-5次，每次4-6小時，過100目篩，在溫度S60'C，真空度為0.060.08MPa減壓濃縮至糖度2-40，得到提取物，將所述提取物以質量比為1:4~5的比例分散至水中，所述酸水溶液中的酸的體積百分比濃度為1%~3%。所述酸水溶液中的酸為鹽酸、硫酸、磷酸、乙酸或檸檬酸。所述大孔樹脂的型號為AB-8型、HP20型、HPD100型、HPD100A型、HPD300型、X-5型、NKA-II型、D101型或DA201型。一種含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位的製備方法，包括如下歩驟(1)提取提取的方法為下述歩驟之一種①以黑豆皮、黑米、紫胡蘿蔔、紫玉米須、紫玉米皮、紫玉米粒、紫玉米棒、紫甘薯、桑提取溶劑，在20—50'C提取l-6次，每次l-8小時，過80-120目篩，得提取液，所述酸水溶液中的酸的體積百分比濃度為1%~5%;②以黑豆皮、黑米、紫胡蘿蔔、紫玉米須、紫玉米皮、紫玉米粒、紫玉米棒、紫甘薯、桑椹果、藍莓果、歐洲越桔或藍靛果為原料，加入所述原料質量3—12倍的體積百分比濃度為10%~95%的乙醇水溶液或甲醇水溶液或乙醇酸水溶液或甲醇酸水溶液為提取溶劑，在20一50。C提取1-6次，每次1-8小時，過80-120目篩，在溫度560。C，真空度為0.06~0.08MPa減壓濃縮至糖度2-40，得到提取物，將所述提取物以質量比為1:110的比例分散至水中，所述酸水溶液中的酸的體積百分比濃度為1%~5%;(2)將所述步驟(1)獲得的產物經大孔樹脂吸附，用水及體積百分比濃度為10%~95%的乙醇水溶液或水及體積百分比濃度為10%~95%的甲醇水溶液梯度洗脫，洗脫液通過薄層層析方法並結合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將其合併，在溫度^60。C，真空度為0.060.08MPa減壓濃縮，得糖度'為10~40的濃縮物；(3)將所述濃縮物按質量比為1:3-5的比例分散至水中進行聚醯胺樹脂吸附，用水及體積百分比濃度為5%-75%的乙醇水溶液或水及體積百分比濃度為5%-75°/。的甲醇水溶液梯度洗脫，通過薄層層析結合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將洗脫液在溫度56(TC，真空度為0.060.08MPa減壓濃縮，至糖度為10-40，乾燥，得矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位。所述步驟(1)的提取優選的是以黑豆皮、黑米、紫胡蘿蔔、紫玉米須、紫玉米皮、紫玉米粒、紫玉米棒、紫甘薯、桑椹果、藍莓果、歐洲越桔或藍靛果為原料，加入所述原料質量10倍的體積百分比濃度為40%~60%的乙醇酸水溶液為提取溶劑，在20—30。C提取3-5次，每次4-6小時，過100自篩，在溫度^6(TC，真空度為0.06~0.08MPa減壓濃縮至糖度2-40，得到提取物，將所述提取物以質量比為1:4~5的比例分散至水中，所述酸水溶液中的酸的體積百分比濃度為1%~3%。所述步驟(1)的提取優選的還可以是以黑豆皮、黑米、紫胡蘿蔔、紫玉米須、紫玉米皮、紫玉米粒、紫玉米棒、紫甘薯、或桑椹果、藍莓果、歐洲越桔或藍靛果為原料，加入所述原料質量10倍的體積百分比濃度為40%~60%的乙醇酸水溶液為提取溶劑，在20_30。C提取3-5次，每次4-6小時，過100目篩，在溫度560。C，真空度為0.06~0.08MPa減壓濃縮至糖度2-40,得到提取物，將所述提取物以質量比為1:4~5的比例分散至水中，所述酸水溶液中的酸的體積百分比濃度為1%~3%。所述酸水溶液中的酸為鹽酸、硫酸、磷酸、乙酸或擰檬酸。所述大孔樹脂的型號為AB-8型、HP20型、HPD100型、HPD100A型、HPD300型、X-5型、NKA-II型、D101型或DA201型。一種含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位在製備防治類風溼性關節炎藥物或食品的應用。本發明的一種含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位利用液相色譜-質譜聯用儀分析，其主要成分有矢車菊素3-0-半乳糖苷，矢車菊素3-0-葡萄糖苷，飛燕草素3-0-葡萄糖苷，且矢車菊素3-0-葡萄糖苷的含量大於50%。在此分析基礎上，我們通過實驗獲知含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位具有較好的鎮痛、抗急性炎症的作用，同時更重要的是具有抗佐劑性類風溼性關節炎的作用。本發明的含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位來自於天然食物中，高效無毒，安全性極高，在防治類風溼性關節炎疾病方面的優勢明顯。因此在臨床防治類風溼性關節炎疾病中具有廣闊的應用前景，也可以應用於食品中用於預防類風溼性關節炎及其相關的急性炎症。i1為本發明的一種含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位的HPLC檢測圖譜。具體實施方式下面結合具體實施例對本發明作進一步的說明。實施例1含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位，用下述方法製成(1)提取500g黑豆皮中加入5000g的水常壓5(TC溫浸提取5次，提取時間分別為5、4、3、2、1小時，過濾，濾網的目數為120，得上清液；(2)大孔樹脂吸附分離將(1)中提取液經HP20型大孔樹脂吸附，用水和體積百分比濃度為10%、30%、50%、70%、95%的乙醇水溶液梯度洗脫，每250ml作為一個接收體積，通過薄層層析方法並結合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將其合併，在溫度《(TC，真空度為0.060.08MPa減壓濃縮，得糖度為40的濃縮物，矢車菊素3-0-葡萄糖苷的含量為31.7%;(3)聚醯胺樹脂分離將濃縮物按質量比為l:4的比例分散至水中進行聚醯胺樹脂吸附，用水及體積百分比濃度為5%、20%、70%的乙醇水溶液，通過薄層層析等方法並結合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將洗脫液在溫度560'C，真空度為0.060.08MPa減壓濃縮至糖度為10，得矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位，矢車菊素3-0-葡萄糖苷的含量為54.3%。利用HPLC進行矢車菊素3-0-葡萄糖苷含量測定，並利用HPLC-MS進行組分分析(結果見表6)。矢車菊素-3-0-葡萄糖苷、矢車菊素-3-0-半乳糖苷、牽牛花色素-3-0-葡萄糖苷和飛燕草素3-0-葡萄糖苷標準品購自挪威Polyphenol公司。矢車菊素3-0-葡萄糖苷含量HPLC檢測方法色譜柱C-18250x4.6mm檢測波長520nm流速1.0ml/min流動相A:5%甲酸水溶液；B:甲醇tableseeoriginaldocumentpage8實施例2含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位，用下述方法製成(1)以黑米為原料，加入原料質量3倍的鹽酸水溶液為提取溶劑，鹽酸水溶液的體積百分比濃度為1%，在45。C提取6次，每次8小時，過80目篩，得提取液；.(2)將提取液經AB-8型大孔樹脂吸附，用水和體積百分比濃度為10%、30%、50%、70%、95%的乙醇水溶液梯度洗脫，洗脫液通過薄層層析方法並結合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將其合併，在溫度56(TC，真空度為0.060.08MPa減壓濃縮，得糖度為10的濃縮物；(3)將所述濃縮物按質量比為1:3的比例分散至水中進行聚醯胺樹脂吸附，用水及體積百分比濃度為5%、20%、50%、75%的乙醇水溶液梯度洗脫，通過薄層層析結合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將洗脫液在溫度^6(TC，真空度為0.060.08MPa減壓濃縮，至糖度為10-40，乾燥，得矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位。實施例3含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位，用下述方法製成(1)以紫胡蘿蔔為原料，加入原料質量10倍的硫酸水溶液為提取溶劑，硫酸水溶液的體積百分濃度為2%，在40。C提取1次，4小時，過100目篩，得提取液；(2)將提取液經HPD100型大孔樹脂吸附，用水及體積百分比濃度為10%、30%、50%、70%、95%的甲醇水溶液梯度洗脫，洗脫液通過薄層層析方法並結合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將其合併，在溫度^6(TC，真空度為0.060.08MPa減壓濃縮，得糖度為40的濃縮物；(3)將所述濃縮物按質量比為l:4的比例分散至水中進行聚醯胺樹脂吸附，用水及體積百分比濃度為5%、20%、50%、75%的甲醇水溶液梯度洗脫，通過薄層層析結合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將洗脫液在溫度S6(TC，真空度為0.060.08MPa減壓濃縮，至糖度為10-40，乾燥，得矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位。實施例4含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位，用下述方法製成(1)以紫玉米須為原料，加入原料質量12倍的水溶液為提取溶劑，在2(TC提取5次，每次1小時，過120目篩，得提取液；(2)將提取液經HPD100A型大孔樹脂吸附，用水及體積百分比濃度為10%、30%、50%、70%、95%的乙醇水溶液梯度洗脫，洗脫液通過薄層層析方法並結合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將其合併，在溫度56(TC，真空度為0.060.08MPa減壓濃縮，得糖度為30的濃縮物；(3)將所述濃縮物按質量比為1:5的比例分散至水中進行聚醯胺樹脂吸附，用水及體積百分比濃度為5%、20%、50%、75%的乙醇水溶液梯度洗脫，通過薄層層析結合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將洗脫液在溫度56(TC，真空度為0.060.08MPa減壓濃縮，至糖度為10-40，乾燥，得矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位。200810052526.9說明書第6/13頁實施例5含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位，用下述方法製成(1)以紫玉米皮為原料，加入原料質量8倍的水溶液為提取溶劑，在5(TC提取3次，每次6小時，過100目篩，得提取液；(2)將提取液經HPD300型大孔樹脂吸附，用水和體積百分比濃度為10%、30%、50%、70%、95%的乙醇水溶液梯度洗脫，洗脫液通過薄層層析方法並結合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將其合併，在溫度S6(TC，真空度為0.06~0.08MPa減壓濃縮，得糖度為20的濃縮物；(3)將所述濃縮物按質量比為1:3的比例分散至水中進行聚醯胺樹脂吸附，用水及體積百分比濃度為5%、20%、50%、75%的乙醇水溶液梯度洗脫，通過薄層層析結合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將洗脫液在溫度56(TC，真空度為0.060.08MPa減壓濃縮，至糖度為10-40，乾燥，得矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位。實施例6含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位，用下述方法製成(1)以紫玉米粒為原料，加入原料質量3倍的體積百分比濃度為95%的乙醇水溶液為提取溶劑，在20。C提取6次，每次1小時，過80目篩，在溫度^60。C,真空度為0.06~0.08MPa減壓濃縮至糖度2，得到提取物，將所述提取物以質量比為1:1的比例分散至水中；(2)將所述步驟(1)獲得的產物經X-5型大孔樹脂吸附，用水和體積百分比濃度為10%、30%、50%、70%、95%的甲醇水溶液梯度洗脫，洗脫液通過薄層層析方法並結合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將其合併，在溫度^6(TC，真空度為0.06~0.08MPa減壓濃縮，得糖度為40的濃縮物；(3)將所述濃縮物按質量比為l:4的比例分散至水中進行聚醯胺樹脂吸附，用水及體積百分比濃度為5%、20%、50%、75%的甲醇水溶液梯度洗脫，通過薄層層析結合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將洗脫液在溫度《(TC，真空度為0.060.08MPa減壓濃縮，至糖度為10-40，乾燥，得矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位。實施例7含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位，用下述方法製成(1)以紫玉米棒為原料，加入所述原料質量10倍的體積百分比濃度為40%的甲醇水溶液為提取溶劑，在3(TC提取3次，每次4小時，過120目篩，在溫度^6(TC，真空度為0.060.08MPa減壓濃縮至糖度40，得到提取物，將所述提取物以質量比為1:4的比例分散至水中；(2)將所述步驟(1)獲得的產物經NKA-II型大孔樹脂吸附，用水和體積百分比濃度為10%、30%、50%、70%、95%的乙醇水溶液梯度洗脫，洗脫液通過薄層層析方法並結合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將其合併，在溫度56(TC，真空度為0.06~0.08MPa減壓濃縮，得糖度為40的濃縮物；(3)將所述濃縮物按質量比為l:4的比例分散至水中進行聚醯胺樹脂吸附，用水及體積百分比濃度為5%、20%、50%、75%的乙醇水溶液梯度洗脫，通過薄層層析結合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將洗脫液在溫度《(TC，真空度為0.060.08MPa減壓濃縮，至糖度為10-40，乾燥，得矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位。實施例8含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位，用下述方法製成(1)以紫甘薯為原料，加入所述原料質量12倍的體積百分比濃度為10%的乙醇酸水溶液提取溶劑，所述酸水溶液中的酸為鹽酸，鹽酸水溶液的體積百分比濃度為1%，在50'C提取1次，每次8小時，過100目篩，在溫度560。C，真空度為0.06~0.08MPa減壓濃縮至糖度10，得到提取物，將所述提取物以質量比為1:10的比例分散至水中；(2)將所述步驟(1)獲得的產物經D101型大孔樹脂吸附，用水和體積百分比濃度為10%、30%、50%、70%、95%的乙醇水溶液梯度洗脫，洗脫液通過薄層層析方法並結合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將其合併，在溫度S6(TC，真空度為0.060.08MPa減壓濃縮，得糖度為40的濃縮物；(3)將所述濃縮物按質量比為1:5的比例分散至水中進行聚醯胺樹脂吸附，用水及體積百分比濃度為5%、15%、30%、50%的乙醇水溶液梯度洗脫，通過薄層層析結合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將洗脫液在溫度56(TC，真空度為0.06~0.08MPa減壓濃縮，至糖度為10-40，乾燥，得矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位。實施例9,含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位，用下述方法製成(1)以桑椹果為原料，加入所述原料質量5倍的體積百分比濃度為60%的甲醇酸水溶液為提取溶劑，所述酸水溶液中的酸為檸檬酸，檸檬酸水溶液的體積百分比濃度為5%;在4(TC提取5次，每次6小時，過100目篩，在溫度^6(TC，真空度為0.06~0.08MPa減壓濃縮至糖度IO，得到提取物，將所述提取物以質量比為l:5的比例分散至水中；(2)將所述步驟(1)獲得的產物經DA201型大孔樹脂吸附，用水和體積百分比濃度為10%、30%、50%、70%、95%的乙醇水溶液梯度洗脫，洗脫液通過薄層層析方法並結合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將其合併，在溫度^6(TC，真空度為0.060.08MPa減壓濃縮，得糖度為30的濃縮物；(3)將所述濃縮物按質量比為1:3的比例分散至水中進行聚醯胺樹脂吸附，用水及體積百分比濃度為5%、20%、50%、75%的乙醇水溶液梯度洗脫，通過薄層層析結合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將洗脫液在溫度《(TC，真空度為0.060.08MPa減壓濃縮，至糖度為10-40，乾燥，得矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位。實施例10含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位，用下述方法製成(1)以藍莓果為原料，加入所述原料質量IO倍的體積百分比濃度為60%的乙醇酸水溶液為提取溶劑，所述酸水溶液中的酸為乙酸，其體積百分比濃度為3%，在20'C提取5次，每次4小時，過100目篩，在溫度^6(TC，真空度為0.06~0.08MPa減壓濃縮至糖度2，得到提取物，將所述提取物以質量比為l:4的比例分散至水中；(2)將所述步驟(1)獲得的產物經HP20型大孔樹脂吸附，用水和體積百分比濃度為10%、30%、50%、70%、95%的甲醇水溶液梯度洗脫，洗脫液通過薄層層析方法並結合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將其合併，在溫度S60'C，真空度為0.060.08MPa減壓濃縮，得糖度為30的濃縮物；(3)將所述濃縮物按質量比為1:5的比例分散至水中進行聚醯胺樹脂吸附，用水及體積百分比濃度為5%、15%、30%、50%的甲醇水溶液梯度洗脫，通過薄層層析結合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將洗脫液在溫度^6(TC，真空度為0.060.08MPa減壓濃縮，至糖度為10-40，乾燥，得矢車菊素3-Q-葡萄糖苷的有效部位。實施伊lll含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位，用下述方法製成(1)以歐洲越桔為原料，加入所述原料質量10倍的體積百分比濃度為40%的乙醇酸水溶液為提取溶劑，所述酸水溶液中的酸為檸檬酸，其體積百分比濃度為1%，在3(TC提取3次，每次6小時，過100目篩，在溫度^6(TC，真空度為0.06~0.08MPa減壓濃縮至糖度40，得到提取物，將所述提取物以質量比為1:5的比例分散至水中；(2)將所述步驟(l)獲得的產物經AB-8型大孔樹脂吸附，用水和體積百分比濃度為10%、30%、50%、70%、95%的乙醇水溶液梯度洗脫，洗脫液通過薄層層析方法並結合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將其合併，在溫度56(TC，真空度為0.06~0.08MPa減壓濃縮，得糖度為40的濃縮物；(3)將所述濃縮物按質量比為l:5的比例分散至水中進行聚醯胺樹脂吸附，用水及體積百分比濃度為5%、15%、30%、50%的乙醇水溶液梯度洗脫，通過薄層層析結合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將洗脫液在溫度S6(TC，真空度為0.060.08MPa減壓濃縮，至糖度為10-40,乾燥，得矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位。實施例12含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位，用下述方法製成(1)以歐洲越桔為原藍靛果為原料，加入所述原料質量10倍的體積百分比濃度為40%的磷酸水溶液為提取溶劑，在3(TC提取3次，每次6小時，過100目篩，在溫度^60'C，真空度為0.06~0.08MPa減壓濃縮至糖度40，得到提取物；(2)將所述步驟(1)獲得的產物AB-8型經大孔樹脂吸附，用水和體積百分比濃度為10%、30%、50%、70%、95%的乙醇水溶液梯度洗脫，洗脫液通過薄層層析方法並結合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將其合併，在溫度S6(TC，真空度為0.06~0.08MPa減壓濃縮，得糖度為40的濃縮物；(3)將所述濃縮物按質量比為1:3的比例分散至水中進行聚醯胺樹脂吸附，用水及體積百分比濃度為5%、20%、50%、75%的乙醇水溶液梯度洗脫，通過薄層層析結合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將洗脫液在溫度56(TC，真空度為0.060.08MPa減壓濃縮，至糖度為10-40，乾燥，得矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位。實施例13含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位的最大耐受量試驗及抗炎活性測試1.試驗材料動物ICR小鼠，18~22g，雌雄兼用；SD大鼠，體重180~200g，雄性，北京試驗動物研究中心提供。2.試劑含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位(矢車菊素3-0-葡萄糖苷含量大於50%);阿司匹林購自湖南永可輕工業品進出口有限公司；角叉菜膠購自中國聯星實業有限公司；電子分析天平，旋渦混勻器。3.試驗方法(1)最大耐受量試驗將40隻ICR小鼠分為兩組，第1組，常水對照組；第2組，含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位組。每組20隻，雌雄各半，禁食12h後，l天內給小鼠灌胃給藥的含有矢車菊素3-O-葡萄糖苷的有效部位最大濃度0.4g/mL溶液，間隔4h給藥l次。1天共給藥3次，每次0.30ml/10g，連續觀察7天。給藥後正常顆粒料飼養，自由飲水，自然光照12h/12h，室溫2024。C，溼度60%。觀察動物反應。(2)二甲苯致小鼠耳廓腫脹試驗小鼠50隻，雌雄各半，隨機分5組，灌服含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位溶液、阿司匹林水溶液或等容水後lh，於小鼠右耳用微量注射器滴二甲苯0.02ml並令二甲苯浸滿鼠耳兩齒，40min後小鼠拉頸處死，沿鼠耳根部基線用眼科剪剪下兩耳，稱取左、右耳片重量，以右耳與左耳重量差的mg數表示炎症反應強度。(3)角叉菜膠致大鼠足腫脹試驗大鼠40隻隨機分成5組，灌胃給藥後lh，於每隻大鼠右後腳足蹠皮下注射1%角叉菜膠5(VL致炎，玻璃容積法測量致炎前及致炎後1、3和5h足容積，計算腫脹度和各組的腫脹抑制率。4.試驗結果(1)灌胃給藥7天內小鼠無一死亡，給藥第3、8天分別稱重，體重變化兩組沒有差異，動物均增重。8天稱重後逐只處死解剖，肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎等各器官均無異常。含有矢車菊素-3-0-葡萄糖苷的有效部位灌胃給藥的最大給藥量為36g/kg，說明該提取物安全無毒。(2)測試結果顯示含有矢車菊素-3-0-葡萄糖苷的有效部位能夠顯著抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹，且呈現量效依賴關係，其高劑量組與阿司匹林組的抗炎作用相當。表1含有矢車菊素-3-0-葡萄糖苷的有效部位對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響tableseeoriginaldocumentpage13與對照組比較，**P<0.01;採用T檢驗(n=10)(3)結果各藥物組於致炎後lh與對照組比較均有顯著性差異，致炎後3h和5h，高劑量組與對照組比較仍具有顯著性差異，且與陽性藥阿司匹林組作用相當，提示含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位對角叉菜膠所致大鼠足腫脹有明顯抑制作用，結果見表3。表2組合物對角叉菜膠所致大鼠足腫脹的影響組別角叉菜膠致炎後(mg/kg)lh3h5hEV(mL)EI%EV(mL)EI%EV(mL)EI%對照組阿司匹林實施例l1001000.47±0.030.68±0.070.77±0.040.21±0.07a55.320.34±0.06a50.000.43±0,07a44.160.24±0.06a48.940.28±0.06a58.820.41±0.05a46.75實施例l500.33±0.0429.790.48±0.0529.410.59±0.0423.38實施例l250.39±0.0717.020.55±0.0519.120.64±0.0616,88與對照組比較，"PO.Ol;T檢驗(n=8);EV:腫脹程度；EI:腫脹抑制率。實施例14一種含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位的鎮痛活性測試1.試驗材料動物ICR小鼠，18~22g，雌雄兼用；北京試驗動物研究中心提供。2.試劑含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位(矢車菊素3-0-葡萄糖苷含量大於50%);阿司匹林購自湖南永可輕工業品進出口有限公司；醋酸為分析純，電子分析天平，旋渦混勻器。3.試驗方法(1)醋酸扭體試驗小鼠50隻，雌雄各半，隨機分為5組，分別灌胃藥物或等量水，藥後lh，各鼠腹腔注射0.7XHAC生理鹽水溶液0.2ml，觀察注射HAC後20min內小鼠扭體反應的次數，並計算鎮痛抑制百分率。對照組扭體反應數-給藥組扭體反應數鎮痛百分率(％)=-xlOO%對照組扭體反應數(2)小鼠熱板法試驗按趙一法進行試驗，雌性小鼠於60士0.5'C熱板測定小鼠舔後爪反應的潛伏期，選取於熱板儀內不跳躍、於515s內出現反應的小鼠60隻隨機分5組，灌胃藥物或等容水，藥後lh,2h將小鼠置熱板測定痛閾一次，超過60s不反應者立刻取出，反應時間按60s計。4.試驗結果(l)醋酸扭體法試驗結果顯示含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的提取物能夠一定程度抑制醋酸所致小鼠扭體反應。結果見表3。表3含有矢車菊素3-0葡萄糖苷的有效部位對醋酸所致小鼠扭體的鎮痛作用tableseeoriginaldocumentpage15與對照組比較，**P<0.01;*P<0.05;T檢驗(n=10)。(2)熱板法測試結果顯示該含有矢車菊素3-0葡萄糖苷的有效部位具有一定的鎮痛作用，且低劑量隨著作用時間延長，作用效果越發顯著。詳細結果見表4表4組合物對熱板試驗小鼠舔足反應時間的影響(x±s，n=12)tableseeoriginaldocumentpage15實施例15含有矢車菊素3-0葡萄糖苷的有效部位抗佐劑性類風溼性關節炎的作用1.試驗材料動物ICR小鼠，18~22g，雌雄兼用；SD大鼠，體重180~200g，雄性，北京試驗動物研究中心提供。2.試劑含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位(矢車菊素3-0-葡萄糖苷含量大於50%);弗氏完全佐劑，Sigma公司產品；地塞米松注射液，江蘇蘇星製藥有限公司。電子分析天平，旋渦混勻器。3.試驗方法取雄性大鼠48隻，體重160180g，按體重隨機分為6組，分別為對照組(NS10mL/kg);模型組(NS10ml/kg);地塞米松組(0.85mg/kg);含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位低、中、高劑量(25、50、100mg/kg)組。各組每Rig給藥l次，連續24d。實驗開始後，先用容積法測量左、右後足蹠容積，然後於第l天給藥後lh，除對照組外，各組大鼠右後足蹠SC弗氏完全佐劑0.1mL致炎。此後每3天測量大鼠右後足蹠容積，並觀察鼠耳紅斑、尾部結節等出現情況及體重變化。計算並比較各組動物在不同時間的足蹠腫脹度(足蹠腫脹度=致炎後足蹠容積一致炎前足蹠容積)。4.試驗結果給佐劑後模型組大鼠右後足足蹠腫脹度明顯增加，且與對照組比較差異顯著(PO.01);而地塞米松組、含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位中、高劑量組大鼠右後足足蹠腫脹度明顯減小(P0.05、0.01)。表明含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位對佐劑誘發的原發性足蹠腫脹具有良好的對抗作用。結果見表5。tableseeoriginaldocumentpage16實施例16表6含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位中各花青素的液質分析結果(保留時間、紫外吸tableseeoriginaldocumentpage17權利要求1.一種含有矢車菊素3-O-葡萄糖苷的有效部位，其特徵是用下述方法製成(1)提取提取的方法為下述步驟之一種①以黑豆皮、黑米、紫胡蘿蔔、紫玉米須、紫玉米皮、紫玉米粒、紫玉米棒、紫甘薯、桑椹果、藍莓果、歐洲越桔或藍靛果為原料，加入所述原料質量3-12倍的水或酸水溶液為提取溶劑，在20-50℃提取1-6次，每次1-8小時，過80-120目篩，得提取液，所述酸水溶液中的酸的體積百分比濃度為1％～5％；②以黑豆皮、黑米、紫胡蘿蔔、紫玉米須、紫玉米皮、紫玉米粒、紫玉米棒、紫甘薯、桑椹果、藍莓果、歐洲越桔或藍靛果為原料，加入所述原料質量3-12倍的體積百分比濃度為10％～95％的乙醇水溶液或甲醇水溶液或乙醇酸水溶液或甲醇酸水溶液為提取溶劑，在20-50℃提取1-6次，每次1-8小時，過80-120目篩，在溫度≤60℃，真空度為0.06～0.08MPa減壓濃縮至糖度2-40，得到提取物，將所述提取物以質量比為1∶1～10的比例分散至水中，所述酸水溶液中的酸的體積百分比濃度為1％～5％；(2)將所述步驟(1)獲得的產物經大孔樹脂吸附，用水及體積百分比濃度為10％～95％的乙醇水溶液或水及體積百分比濃度為10％～95％的甲醇水溶液梯度洗脫，洗脫液通過薄層層析方法並結合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-O-葡萄糖苷的組分，將其合併，在溫度≤60℃，真空度為0.06～0.08MPa減壓濃縮，得糖度為10～40的濃縮物；(3)將所述濃縮物按質量比為1∶3-5的比例分散至水中進行聚醯胺樹脂吸附，用水及體積百分比濃度為5％-75％的乙醇水溶液或水及體積百分比濃度為5％-75％的甲醇水溶液梯度洗脫，通過薄層層析結合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-O-葡萄糖苷的組分，將洗脫液在溫度≤60℃，真空度為0.06～0.08MPa減壓濃縮，至糖度為10-40，乾燥，得矢車菊素3-O-葡萄糖苷的有效部位。2.根據權利要求l所述的一種含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位，其特徵是所述步驟(1)提取為以黑豆皮、黑米、紫胡蘿蔔、紫玉米須、紫玉米皮、紫玉米粒、紫玉米棒、紫甘薯、桑椹果、藍莓果、歐洲越桔或藍靛果為原料，加入所述原料質量10倍的酸水溶液為提取溶劑，在40—45'C提取3-5次，每次4-6小時，過100目篩，得提取液，所述酸水溶液中的酸的體積百分比濃度為1%~3%。3.根據權利要求l所述的一種含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位，其特徵是所述步驟(1)提取為以黑豆皮、黑米、紫胡蘿蔔、紫玉米須、紫玉米皮、紫玉米粒、紫玉米棒、紫甘薯、桑椹果、藍莓果、歐洲越桔或藍靛果為原料，加入所述原料質量10倍的體積百分比濃度為40%~60%的乙醇酸水溶液為提取溶劑，在20—30'C提取3-5次，每次4-6小時，過100目篩，在溫度《(TC，真空度為0.06~0.08MPa減壓濃縮至糖度2-40，得到提取物，將所述提取物以質量比為1:4~5的比例分散至水中，所述酸水溶液中的酸的體積百分比濃度為1%~3%。4.根據權利要求1至3之一所述的一種含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位，其特徵是所述酸水溶液中的酸為鹽酸、硫酸、磷酸、乙酸或檸檬酸。5.根據權利要求1至3之一所述的一種含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位，其特徵是所述大孔樹脂的型號為AB-8型、HP20型、HPD100型、HPD100A型、HPD300型、X-5型、NKA-II型、D101型或DA201型。6.—種含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位的製備方法，其特徵是包括如下步驟(1)提取提取的方法為下述歩驟之一種①以黑豆皮、黑米、紫胡蘿蔔、紫玉米須、紫玉米皮、紫玉米粒、紫玉米棒、紫甘薯、桑椹果、藍莓果、歐洲越桔或藍靛果為原料，加入所述原料質量3—12倍的水或酸水溶液為提取溶劑，在20—50。C提取l-6次，每次l-8小時，過80-120目篩，得提取液，所述酸水溶液中的酸的體積百分比濃度為1%~5%;②以黑豆皮、黑米、紫胡蘿蔔、紫玉米須、紫玉米皮、紫玉米粒、紫玉米棒、紫甘薯、桑椹果、藍莓果、歐洲越桔或藍靛果為原料，加入所述原料質量3—12倍的體積百分比濃度為10%~95%的乙醇水溶液或甲醇水溶液或乙醇酸水溶液或甲醇酸水溶液為提取溶劑，在20—50。C提取1-6次，每次1-8小時，過80-120目篩，在溫度^6(TC，真空度為0.06~0.08MPa減壓濃縮至糖度2-40，得到提取物，將所述提取物以質量比為1:110的比例分散至水中，所述酸水溶液中的酸的體積百分比濃度為1%~5%;(2)將所述步驟(1)獲得的產物經大孔樹脂吸附，用水及體積百分比濃度為10%~95%的乙醇水溶液或水及體積百分比濃度為10%~95%的甲醇水溶液梯度洗脫，洗脫液通過薄層層析方法並結合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將其合併，在溫度S6(TC，真空度為0.060.08MPa減壓濃縮，得糖度為10~40的濃縮物；(3)將所述濃縮物按質量比為1:3-5的比例分散至水中進行聚醯胺樹脂吸附，用水及體積百分比濃度為5%-75%的乙醇水溶液或水及體積百分比濃度為5%-75%的甲醇水溶液梯度洗脫，通過薄層層析結合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將洗脫液在溫度56(TC，真空度為0.060.08MPa減壓濃縮，至糖度為10-40，乾燥，得矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位。7.根據權利要求6所述的一種含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位的製備方法，其特徵是所述步驟(1)提取為以黑豆皮、黑米、紫胡蘿蔔、紫玉米須、紫玉米皮、紫玉米粒、紫玉米棒、紫甘薯、桑椹果、藍莓果、歐洲越桔或藍靛果為原料，加入所述原料質量10倍的體積百分比濃度為40%~60%的乙醇酸水溶液為提取溶劑，在20—3(TC提取3-5次，每次4-6小時，過100目篩，在溫度S6(TC，真空度為0.06~0.08MPa減壓濃縮至糖度2-40，得到提取物，將所述提取物以質量比為1:4~5的比例分散至水中，所述酸水溶液中的酸的體積百分比濃度為1%~3%。8.根據權利要求6或7所述的一種含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位的製備方法，其特徵是所述酸水溶液中的酸為鹽酸、硫酸、磷酸、乙酸或檸檬酸。9.根據權利要求6或7所述的一種含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位的製備方法，其特徵是所述大孔樹脂的型號為AB-8型、HP20型、HPD100型、HPD100A型、HPD300型、X-5型、NKA-II型、D101型或DA201型。10.權利要求1至3之一所述的一種含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位在製備防治類風溼性關節炎藥物或食品的應用。全文摘要本發明公開了一種含有矢車菊素3-O-葡萄糖苷的有效部位及製備方法及應用，其製備方法為(1)提取以黑豆皮為原料，加水常溫提取，過篩，得提取液；(2)將提取液經大孔樹脂吸附，用水及乙醇水溶液梯度洗脫，洗脫液通過檢測，收集富含矢車菊素3-O-葡萄糖苷的組分，減壓濃縮，得濃縮物；(3)將濃縮物進行聚醯胺樹脂吸附，用水及乙醇水溶液梯度洗脫，通過檢測，收集富含矢車菊素3-O-葡萄糖苷的組分，將洗脫液減壓濃縮，乾燥，得到矢車菊素3-O-葡萄糖苷的含量大於50％的有效部位，實驗證明，矢車菊素3-O-葡萄糖苷的有效部位高效無毒並具有較好的鎮痛、抗急性炎症及抗佐劑性類風溼性關節炎的作用。文檔編號A61K31/7048GK101250206SQ20081005252公開日2008年8月27日申請日期2008年3月26日優先權日2008年3月26日發明者丹劉,劉岱琳,於洪建申請人:天津市尖峰天然產物研究開發有限公司