腎炎清片中鹽酸益母草鹼含量的檢測方法
2023-06-20 13:31:11
腎炎清片中鹽酸益母草鹼含量的檢測方法
【專利摘要】本發明公開了一種腎炎清片中鹽酸益母草鹼含量的檢測方法，採用反相離子對色譜法測定腎炎清片中鹽酸益母草鹼的含量，色譜條件採用C18柱，流動相為乙腈—0.2-0.6%辛烷磺酸鈉的0.1%磷酸溶液，檢測波長260-290nm。該方法操作簡便、靈敏度高，重現性好，可為腎炎清片質量標準的制定提供了依據。
【專利說明】腎炎清片中鹽酸益母草鹼含量的檢測方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及中成藥有效成分的檢測，特別涉及腎炎清片中鹽酸益母草鹼的檢測方法。
【背景技術】
[0002]腎炎清片是由益母草、黃芪、白茅根、篇蓄、瞿麥、小薊、石韋、地榆炭、土大黃、甘草等製成的中藥複方製劑。益母草作為方中臣藥，其化學成分主要有生物鹼類、二萜類、甾醇、黃酮類、有機酸等(張嫻，彭國平.益母草屬化學成分研究進展[J].天然產物研究與開發，2003,15 (2): 162-166.)，其中生物喊以水蘇喊(stachydrine)和益母草喊(Ieonurine)為主，藥理作用研究證明，益母草中的主要有效成分益母草鹼能夠抑制血小板的聚集，防止血栓的形成(周遠鵬，劉文化，邵國賢.益母草鹼、丁香醯胍醇及丁香酸氨基醇酯類化合物抗血小板聚集活性及其與結構的關係[J].中國藥學雜誌，1996，31 (5):271.);可擴張外周血管，降低血管阻力，具有一定的抗高血壓，降低冠脈阻力，增加冠脈血流量，保護心臟等藥理作用(鄭虎佔，董澤宏，餘靖.中藥現代研究與應用[M].北京:學苑出版社，1998:3803.；丁伯平，熊鶯，徐朝陽，等.益母草鹼對急性血瘀證大鼠血液流變學的影響[J].中國中醫藥科技，2004，11(1):36.)。雖然《中國藥典》2010年版一部對益母草藥材的質量控制增加了鹽酸益母草鹼的含量測定標準(國家藥典委員會.《中國藥典》2010年版.一部
[S], 2010:272.)，但在《中國藥典》及各級藥品標準中，對含益母草製劑的質量控制多是以水蘇鹼為指標，對於益母草鹼的含量測定方法卻罕有研究，這樣不能保證益母草複方製劑的安全、有效。
【發明內容】
[0003]本發明的目的在於提供一種簡便、快速、準確的檢測腎炎清片中鹽酸益母草鹼含量的方法，為腎炎清片質量標準的制定提供依據。
[0004]本發明提供的腎炎清片中鹽酸益母草鹼含量的檢測方法，包括以下步驟:
[0005]I)以鹽酸益母草鹼為對照品，製成一定含量的溶液，通過高效液相色譜法測定其圖譜，由吸收峰峰面積和對照品進樣量繪製標準曲線；
[0006]2)將待測腎炎清片研細，加溶劑超聲處理，然後過濾取濾液，製得供試品；
[0007]3)在與步驟I)相同的色譜條件下測定步驟2)製得的供試品的高效液相色譜圖譜，並計算鹽酸益母草鹼相應吸收峰的峰面積，根據步驟I)繪製的標準曲線得到待測腎炎清片中鹽酸益母草鹼的含量。
[0008]上述步驟I)優選用40-100 %乙醇溶解鹽酸益母草鹼製成濃度為20-50 μ g/ml的對照品溶液，然後上樣進行高效液相色譜。當鹽酸益母草鹼進樣量在33.6-672.0ng範圍內特徵吸收峰峰面積與進樣量呈良好的線性關係。
[0009]上述步驟2)腎炎清片研細後加入50-90%乙醇中，超聲處理20分鐘以上，冷卻，搖勻，過濾，取濾液。優選的，2.0g研細的腎炎清片粉末加入25mL70 %乙醇中，超聲處理30分鐘，提取其中的鹽酸益母草鹼。提取液冷卻後搖勻，優選用0.45 μ m的微孔濾膜過濾。
[0010]上述步驟I)和3)中，所述高效液相色譜法是反相離子對色譜法，其色譜條件是:採用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑的色譜柱；流動相是體積比為1:1.5^1:9的乙腈一0.2-0.6%辛烷磺酸鈉的0.1 %磷酸溶液；檢測波長為260-290nm。在此條件下，色譜峰可以得到較好的分離。
[0011]上述十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑的色譜柱優選為Agilent SB-C18柱；流速:
0.8-1.5mL/min ;柱溫:25-40°C;流動相:乙腈-0.4%辛烷磺酸鈉的0.1%磷酸溶液(體積比24: 76);檢測波長為277nm。
[0012]上述Agilent SB-C18 柱的體積為 4.6 X 250mm,粒度為 5 μ m。
[0013]本發明目的在於檢測中藥腎炎清片中的藥物有效成分鹽酸益母草鹼的含量，並通過該有效成分的含量了解腎炎清片在生產過程中是否達到生產要求。根據本發明的檢測方法，所得供試品中按乾燥品計算，每片含鹽酸益母草鹼不得少於0.1Omgo
[0014]本發明採用反相離子對色譜法對腎炎清片中的有效成分鹽酸益母草鹼的含量進行測定，所提供的色譜條件可以使得色譜峰得到較好的分離，操作簡便、靈敏度高，重現性好。並且，通過該有效成分的含量了解腎炎清片在生產過程中是否達到生產要求，為腎炎清片質量標準的制定提供了依據。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0015]圖1是本發明方法獲得的檢測樣品的HPLC圖譜，其中a為鹽酸益母草鹼對照品HPLC圖譜；b為腎炎清片供試品HPLC圖譜；c為陰性樣品HPLC圖譜。
【具體實施方式】
[0016]實驗例I腎炎清片中鹽酸益母草鹼含量測定的方法學研究
[0017]I儀器與試驗用藥
[0018]儀器:Agilentl200高效液相色譜儀。試驗用藥:乙腈為色譜純(MERCK)，水為二純水；鹽酸益母草鹼對照品(上海鼎瑞化工有限公司，純度> 98%);腎炎清片為天士力製藥集團股份有限公司依據上述方法製備的中試樣品。
[0019]2方法與結果
[0020]2.1色譜條件
[0021]色譜柱:AgilentSB-C18柱(4.6X 250mm, 5 μ m);流速:1.0mL/min ;柱溫:30°C;流動相:乙腈-0.4%辛烷磺酸鈉的0.1 %磷酸溶液(體積比24: 76);檢測波長為277nm。
[0022]2.2對照品溶液的製備
[0023]取鹽酸益母草鹼對照品適量，精密稱定，加70%乙醇製成每Iml中含30 μ g的溶液，即得。
[0024]2.3供試品溶液的製備
[0025]取腎炎清片適量，研細，取約2.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇25ml，稱重，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液即得。
[0026]2.5方法專屬性試驗[0027]取缺益母草的陰性樣品，按供試品溶液製備方法操作，依法進樣測定，記錄色譜圖。結果如圖1c所示，陰性樣品在對照品相同保留時間(28.8min)處無吸收峰,表明陰性樣品中無幹擾鹽酸益母草鹼的成分存在。
[0028]2.6線性關係考察
[0029]分別精密吸取鹽酸益母草鹼對照品溶液(33.61^/1111) I，2，5，10，15，20 μ I注入液相色譜儀，測定，由峰面積(Y)和對照品進樣量(X)繪製標準曲線，得回歸方程y=l.82x+0.2996，r=l。結果表明鹽酸益母草鹼進樣量在33.6-672.0ng時，與其峰面積呈良好的線性關係。
[0030]2.7精密度試驗
[0031]精密吸取對照品溶液10 μ 1，重複進樣6次，測定，記錄峰面積，計算RSD值為0.63%,說明該儀器的精密度良好。
[0032]2.8溶液穩定性試驗
[0033]取同一供試品溶液，室溫放置，分別在0，4，8，12，24，36，48h各進樣10 μ 1，記錄峰面積，計算RSD值為0.79%，結果表明供試品溶液在48小時內穩定。
[0034]2.9重複性試驗
[0035]精密稱取同一批號(批號為20111201)的腎炎清片樣品6份，依法測定鹽酸益母草鹼含量，計算其RSD值2.46%。結果表明，本法重複性好。
[0036]2.10加樣回收試驗
[0037]精密稱取已知含量的同一批腎炎清片樣品6份，分別精密加入相同量的鹽酸益母草鹼對照品溶液，按供試品溶液製備方法製備，測定，計算回收率，結果如表1所示:鹽酸益母草鹼的平均回收率為99.70%, RSD為2.56%。
[0038]表1
【權利要求】
1.一種腎炎清片中鹽酸益母草鹼含量的檢測方法，包括以下步驟: 1)以鹽酸益母草鹼為對照品，製成一定含量的溶液，通過高效液相色譜法測定其圖譜，由吸收峰峰面積和對照品進樣量繪製標準曲線； 2)將待測腎炎清片研細，加溶劑超聲處理，然後過濾取濾液，製得供試品； 3)在與步驟I)相同的色譜條件下測定步驟2)製得的供試品的高效液相色譜圖譜，並計算鹽酸益母草鹼相應吸收峰的峰面積，根據步驟I)繪製的標準曲線得到待測腎炎清片中鹽酸益母草鹼的含量。
2.如權利要求1所述的檢測方法，其特徵在於，所述步驟I)用40-100%乙醇溶解鹽酸益母草鹼，製成濃度為20-50 μ g/ml的對照品溶液，然後上樣進行高效液相色譜。
3.如權利要求1所述的檢測方法，其特徵在於，所述步驟2)將腎炎清片研細後加入50-90%乙醇中，超聲處理20分鐘以上，冷卻，搖勻，過濾，取濾液作為供試品。
4.如權利要求3所述的檢測方法，其特徵在於，所述步驟2)取2.0g研細的腎炎清片粉末加入25mL70 %乙醇中，超聲處理30分鐘，冷卻，搖勻，用0.45 μ m的微孔濾膜過濾，取濾液作為供試品。
5.如權利要求1所述的檢測方法，其特徵在於，步驟I)和3)中採用的高效液相色譜法是反相離子對色譜法。
6.如權利要求5所述的檢測方法，其特徵在於，步驟I)和3)進行高效液相色譜的色譜條件是:採用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑的色譜柱；流動相是體積比為1:1.5^1:9的乙腈一0.2-0.6%辛烷磺酸鈉的0.1 %磷酸溶液；檢測波長為260-290nm。
7.如權利要求6所述的檢測方法，其特徵在於，所述十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑的色譜柱是Agilent SB-C18柱,柱體積為4.6 X 250mm,粒度為5 μ m ;流速:0.8-1.5mL/min ；柱溫:25-40°C。
8.如權利要求6所述的檢測方法，其特徵在於，步驟I)和3)進行高效液相色譜的流動相是體積比為24: 76的乙腈一0.4%辛烷磺酸鈉的0.1%磷酸溶液；檢測波長為277nm。
9.如權利要求1-8任意一項所述的檢測方法，其特徵在於，按照所述方法檢測出腎炎清片中，按乾燥品計算，每片含鹽酸益母草鹼不得少於0.10mg 。
【文檔編號】G01N30/02GK103575816SQ201210266259
【公開日】2014年2月12日 申請日期:2012年7月30日 優先權日:2012年7月30日
【發明者】周桂榮, 鄂秀輝, 李晴川, 張蘭蘭, 周水平 申請人:天士力製藥集團股份有限公司