細胞克隆分離裝置的製作方法
2023-06-13 05:28:16
專利名稱：細胞克隆分離裝置的製作方法
技術領域：
本實用新型屬於細胞培養技術領域，具體涉及一種細胞克隆分離裝置。
背景技術：
隨著生物高科技術的飛速發展，從真核細胞基因轉染、單克隆工程、細胞株分離、胚胎工程到幹細胞技術，都離不開細胞克隆，從眾多的細胞中提取陽性細胞克隆(單個細胞無性生殖形成的生物性狀完全一致的細胞群)。傳統方式是將細胞培養皿中的培養液棄掉，迅速用玻璃吸管吸取少量胰酶，將貼壁生長的細胞或細胞團消化脫離細胞培養皿，挑取出細胞或細胞團。在通常一個細胞培養容器內有若干細胞的情況下，極易因消化液體擴散，造成細胞之間交叉汙染，使提取的細胞中含有不需要的細胞，導致不能成功地提取克隆細胞。另外，胰酶消化細胞需要一定時間，其他細胞或細胞團在無培養液體狀態下的細胞會很快死亡。故傳統提取克隆細胞的方式，操作繁雜，克隆細胞的回收率極低。
實用新型內容本實用新型的目的是提供一種細胞克隆分離裝置，以解決傳統提取克隆細胞的方式的不足。 為此，本實用新型提供了一種細胞克隆分離裝置，其特徵在於其主體中空且上、下均設有開口端，其側壁為封閉狀，下開口端為能與細胞培養皿密封貼合的平面，其主體高度略低於標準培養皿的深度。 在一些實施方式中，所述主體可為方形、圓柱形或橢圓形中之一，優選為圓柱形，其內徑大小為0. 5-5cm，最優選其內徑要恰巧將一個細胞克隆圈進，且不與鄰近克隆接觸。[0006] 在一實施方式中，所述主體為圓柱形時，其上開口端的直徑小於下開口端的直徑，以有利於細胞克隆分離裝置的穩固性。 在一實施方式中，所述主體為圓柱形時，其上開口端的直徑大於下開口端的直徑，以便於細胞克隆分離時操作者進行加液操作。 在一實施方式中，所述主體為圓柱形，其上開口端的直徑大於下開口端的直徑時，所述主體還具有至少3個支撐穩定結構等間距固定於側壁外側，其中所述支撐穩定結構可為方塊形、圓球形或三角形。 在一些實施方式中，所述主體下開口端還可外包一層韌性材料層，所述韌性材料為可耐受無菌處理無細胞毒性的橡膠、塑料或樹脂，以加強下開口端與細胞培養皿密封貼合，減少裝置內腔的液體外露。 本實用新型所述裝置結構簡單、使用方便，細胞克隆的回收率高，並避免細胞克隆間的交叉混雜或汙染。
圖1為一優選實施例中細胞克隆分離裝置結構正面示意圖。
3[0012] 圖2為一優選實施例中細胞克隆分離裝置結構側面示意圖。
具體實施方式
以下結合附圖和實施例對本實用新型作進一步詳述。 —種細胞克隆分離裝置，其主體為圓柱形，中空且上、下均設有開口端la、lc，其上開口端la的直徑大於下開口端lc的直徑，其側壁lb為封閉狀，下開口端lc為能與細胞培養皿密封貼合的平面，3個三角形支撐穩定結構2等間距固定於側壁lb外側，所述主體下開口端lc外包一層橡膠層3，其主體高度略低於標準培養皿的深度。[0015] 本實施例中細胞克隆分離裝置簡稱克隆杯。[0016]"克隆杯"從原代羊水分離幹細胞的過程 1實驗材料克隆杯、醫用凡士林、PBS平衡鹽溶液，0. 25% Trypsin-EDTA，O. 2%明膠溶液(PBS平衡鹽溶液配製)、玻璃培養皿、彎鑷子、24孔培養板、200ul、1000ul Tip槍頭等。以上均消毒滅菌，並將醫用凡士林置於玻璃培養皿中備用。[0018] 2 "克隆杯"分離法過程 1)取已形成細胞克隆的60mm培養皿，倒置顯微鏡下觀察，並用標記筆將性狀良好的細胞克隆在培養皿底部對側圈標記號。 2)將培養皿移入超淨臺，用lOOOul Tip槍頭吸去培養液，用3ml無菌PBS平衡鹽
溶液輕輕漂洗，儘量洗去殘餘培養液，棄平衡鹽溶液。再向培養皿內加入2ml無菌PBS平衡鹽溶液。 3)用無菌的彎鑷子取一個克隆杯，將克隆杯底部輕輕壓到醫用凡士林上，使凡士林均勻塗至克隆杯的底部。然後將塗有凡士林的克隆杯準確放到標記好的克隆上，將細胞克隆隔離。 4)用200ul Tip槍頭吸去克隆杯內的PBS平衡鹽溶液，加入預熱至37t:的0. 25%Trypsin-EDTA 30_50ul，緩慢移至倒置相差顯微鏡下觀察，見細胞突起縮回，細胞間隙增加，細胞近乎縮成圓形，部分懸浮時加入適量培養液(以不溢出克隆杯為準)終止消化。用200ul Tip槍頭在克隆杯內輕輕吹打皿底，儘量使細胞完全脫離皿底。將細胞懸液移入預先0. 2%明膠溶液包被的24孔板的一個孔內。再用新鮮培養液洗杯內剩餘細胞，合併放入同一孔內。 5)重複3)、4)步驟挑選其餘克隆。上述整個操作過程務必保證克隆杯固定。[0024] 6)最後將24孔板靜置於37°C ， 5% C02的恆溫培養箱中12_24小時以利於細胞貼壁。 7)待細胞貼壁後每2-3天更換新鮮培養液，即完成分離過程。 所述培養液為a -MEM+20% FBS+1 %穀氨醯胺+1 %青黴素/鏈黴素+1 %非必須氨
基酸+ P巰基乙醇。 本實用新型的範圍不受所述具體實施方案的限制，所述實施方案只欲作為闡明本實用新型各個方面的單個例子，本實用新型範圍內還包括功能等同的方法和組分。實際上，除了本文所述的內容外，本領域技術人員參照上文的描述和附圖可以容易地掌握對本實用新型的多種改進。所述改進也落入所附權利要求書的範圍之內。
權利要求一種細胞克隆分離裝置，其特徵在於其主體中空且上、下均設有開口端，其側壁為封閉狀，下開口端為能與細胞培養皿密封貼合的平面，其主體高度略低於標準培養皿的深度。
2. 如權利要求1細胞克隆分離裝置，其特徵在於所述主體可為方形、圓柱形或橢圓形中之一。
3. 如權利要求1所述的細胞克隆分離裝置，其特徵在於所述主體為圓柱形。
4. 如權利要求3所述的細胞克隆分離裝置，其特徵在於所述圓柱形內徑大小為0. 5-5cm。
5. 如權利要求3所述的細胞克隆分離裝置，其特徵在於所述主體為圓柱形時，其上開口端的直徑小於下開口端的直徑。
6. 如權利要求3所述的細胞克隆分離裝置，其特徵在於所述主體為圓柱形時，其上開口端的直徑大於下開口端的直徑。
7. 如權利要求6所述的細胞克隆分離裝置，其特徵在於所述主體為圓柱形，其上開口端的直徑大於下開口端的直徑時，所述主體還具有至少3個支撐穩定結構等間距固定於側壁外側。
8. 如權利要求7所述的細胞克隆分離裝置，其特徵在於所述支撐穩定結構可為方塊形、圓球形或三角形。
9. 如權利要求1所述的細胞克隆分離裝置，其特徵在於所述主體下開口端還具有一層韌性材料層。
10. 如權利要求9所述的細胞克隆分離裝置，其特徵在於所述韌性材料為可耐受無菌處理無細胞毒性的橡膠、塑料或樹脂。
專利摘要本實用新型屬於細胞培養技術領域，具體涉及一種細胞克隆分離裝置。本實用新型公開了一種細胞克隆分離裝置，其特徵在於其主體中空且上、下均設有開口端，其側壁為封閉狀，下開口端為能與細胞培養皿密封貼合的平面，其主體高度略低於標準培養皿的深度。本實用新型所述裝置結構簡單、使用方便，克隆細胞的回收率高，並避免細胞克隆間的交叉混雜或汙染。
文檔編號C12M1/00GK201545829SQ200920211479
公開日2010年8月11日 申請日期2009年10月29日 優先權日2009年10月29日
發明者周君梅, 張勝利, 陳方 申請人:上海市兒童醫院