萬古黴素苯異氰酸酯手性色譜固定相填料及其製備方法

2023-06-13 18:55:06

專利名稱：萬古黴素苯異氰酸酯手性色譜固定相填料及其製備方法
技術領域：
本發明是涉及一種萬古黴素苯異氰酸酯手性色譜固定相填料及其製備方法。該固定相在極性有機相條件下拆分了佐米曲坦和拉米夫定藥物對映體，屬於分析化學領域。
背景技術：
互為對映異構體的兩個手性化合物，在生物活性、藥理動力學、藥物潛在的毒副作用等方面往往有較大的差別，目前市場上出售的西藥有半數左右含手性中心，這其中又有大約一半是以外消旋體的形式出售，為此美國、歐共體及日本、加拿大等國衛生管理部門對新的外消旋藥提出了極為嚴格的要求，要求對其對映體的代謝和藥動力學有明確的說明，規定今後凡是發展具有不對稱中心的藥物，必須給出手性拆分結果。在分離分析藥物對映體的方法中，高效液相色譜手性固定相法具有快速、簡單、高效的優點，對手性固定相的研製，是手性色譜發展的前沿，也是手性色譜發展的關鍵和核心。
自1994年Armstrong等首次將糖肽類抗生素作為手性選擇劑應用於高效液相色譜手性固定相以來，由於這類抗生素的對映體選擇性高，具有較廣泛的手性識別能力，被稱之為新一代的手性選擇劑，成為目前最具發展潛力的一類新型手性固定相。
佐米曲坦(Zolmitriptan，311C90)化學名(S)-4-{[3-[2-(二甲氨基)乙基-1H-吲哚-5-基]甲基]-2-噁唑烷酮，是一種5-HT1B/1D受體激動劑，廣泛的應用於臨床治療偏頭痛症狀，不僅能夠迅速的緩解頭痛，還能緩解畏光、懼聲、噁心等併發症，其結構中存在1個手性碳原子，具有右旋光性。在合成過程中必須進行手性分離分析，以便控制將其左旋對映體分離。目前只有少數文獻報導了其拆分，如以β-環糊精及其為流動相添加劑，利用毛細管電泳[何梅，夏之寧，劉毅，項順鋒，李根榮.佐米曲普坦與其左旋對映體的毛細管電泳分離方法研究.藥物分析雜誌，2002，22438-440；楊更亮，劉妍，宋秀榮，陳義.毛細管電泳手性分離佐米曲坦及其對映體.分析化學，2003，311149]和利用纖維素衍生物AD-H手性固定相[L.S.Yu；T.W.Yao，S.Q.Ni，S.Zeng，Determination ofzolmitriptan enantiomers in rat liver microsomes by chiral high performance liquidchromatography with fluorescence detection.Biomed.Chromatogr.2005，19191-195；M.K.Srinivasu，B.M.Rao，G.Sridhar，P.R.Kumar，K.B.Chandrasekhar，A.Islam.A validated chiral LC method for the determination of Zolmitriptan and itspotential impurities.J.Pharm.Biomed.Anal.2005，37453-460]，以及去甲萬古黴素鍵合手性固定相[丁國生，劉鶯，叢潤滋，王俊德.去甲萬古黴素鍵合手性固定相拆分β-受體阻滯劑類藥物及其結構類似物的研究.色譜，2004，22386-389]拆分了佐米曲坦對映體。
拉米夫定(Lamivudine，3TC)，即(2R-順式)-4-氨基-1-(2-羥甲基-1，3-氧硫雜環戊-5-基)-1H-嘧啶-2-酮，是核苷類抗病毒藥，開始用於治療愛滋病，1995年後逐漸發現其對HBV DNA的抑制作用，並在全球先後進行了拉米夫定治療B型肝炎的II期和III期臨床試驗，是迄今為止唯一經歷長期慢性B型肝炎治療試驗的核苷類藥物，其R-對映體比S-對映體更加具有生物毒性作用。文獻中有關拉米夫定的對映體的分離報導較少，目前僅發現利用環糊精衍生物作為手性添加劑或手性固定相及生物酶催化法進行過分離[Manus M.Rogan，ChristopherDrake，David M.Goodall，Kevin D.Altria.Enantioselective EnzymaticBiotransformation of 2`-Deoxy-3`-thiacytidine(BCH 189)Monitored by CapillaryElectrophoresis.Anal.Biochem.，1993，208343-347；Jonathan A.V.Coates，NicholasCammack，Helen J.Jenkinson，Ian M.Mutton，Bridget A.Pearson，Richard Storer，Janet M.Cameron，Charles R.Penn.The Separated Enantiomers of2`-Deoxy-3`-Thiacytidine(BCH 189)Both Inhibit Human Immunodeficiency VirusReplication In Vitro.Antimicrob.Agents Chemiother.1992，36202-205；Jonathan A.V.Coates，Nicholas Cammack，Helen J.Jenkinson，Amanda J.Jowett，Michael I.Jowett，Bridget A.Pearson，Charles R.Penn，Philippa L.Rouse，K.Claire Viner，Janet M.Cameron.(-)-2`-Deoxy-3`-Thiacytidine Is a Potent，Highly Selective Inhibitor ofHuman Immunodeficincy Virus Type 1 and Type 2 Replication In Vitro.Antimicrob.Agents Chemiother.1992，36733-739]，但是分離效果並沒有達到基線分離，而拉米夫定作為中間體出口時需要將另一對映體控制在0.3％以下，美國藥典推薦使用環糊精手性色譜柱進行拆分，但是由於不能基線分離，對檢測低含量的組分誤差較大。

發明內容
本發明提供了一種萬古黴素苯異氰酸酯手性色譜固定相填料及其製備方法。
萬古黴素苯異氰酸酯手性色譜固定相填料是將糖肽類大環抗生素-萬古黴素化學鍵合到矽膠載體上，再與苯異氰酸酯進行衍生化反應製成的手性色譜固定相填料。
所述化學鍵合是指使用間隔臂來實現手性選擇劑與載體的連接。矽膠載體為球形和無定形矽膠載體。
萬古黴素苯異氰酸酯手性色譜固定相填料的製備方法的步驟如下1)載體矽膠的矽烷化矽膠載體用3～5mol L-1鹽酸回流4～6小時後水洗至中性，真空乾燥，以無水甲苯做溶劑，加入3-氨丙基三乙氧基矽烷，回流反應8～10小時，冷卻至室溫過濾，用甲苯和甲醇洗滌，真空乾燥得3-氨丙基矽膠；2)鍵合手性固定相的合成取3克上述乾燥的3-氨丙基矽膠，加入無水甲苯，在冰浴及氮氣保護下滴加2～4ml的1，6-二異氰酸酯正己烷(或1，3-二異氰酸酯苯)，混合物加熱至65～75℃反應2～3小時，冷卻至室溫後除去溶劑及1，6-二異氰酸酯正己烷(或1，3-二異氰酸酯苯)，加入100ml含1～2g萬古黴素無水吡啶溶液，氮氣保護下65～75℃攪拌反應10～12小時，過濾，用吡啶、水、甲醇、乙腈、二氯甲烷洗滌，減壓乾燥後與苯基異氰酸酯在無水吡啶溶液中110～120℃反應2～3小時，過濾後，用吡啶、水、甲醇、丙酮、二氯甲烷洗滌乾燥，得萬古黴素苯異氰酸酯手性色譜固定相填料。
本發明通過化學鍵合的方法製備的萬古黴素苯異氰酸酯手性固定相，在常用的極性有機相條件下實現藥物佐米曲坦和拉米夫定對映體的基線分離，分離效果明顯優於文獻報導。
該手性固定相製備方法簡單，並可在正相、反相和極性有機相等色譜模式下使用，而色譜柱的手性識別能力不受影響。該手性固定相在極性有機相條件下可以快速、簡單地拆分藥物佐米曲坦和拉米夫定對映體，適合於臨床研究和質量控制的需要。


圖1是佐米曲坦對映體在甲醇/冰醋酸/三乙胺體系中的分離譜圖，圖中流動相甲醇/冰醋酸/三乙胺(100/0.1/0.1，v/v/v)；流速1.0ml/min；柱溫25℃；檢測波長286；圖2是拉米夫定對映體在甲醇體系中的分離譜圖，圖中流動相甲醇；流速1.0ml/min；柱溫25℃；檢測波長276nm。
具體實施例方式
本發明以糖肽類大環抗生素-萬古黴素為原料，通過間隔臂化學鍵合至用3-(氨丙基)-三乙氧基矽烷進行矽烷化的矽膠載體上，再與苯異氰酸酯進行衍生化反應製成。
本發明中所述化學鍵合是指用間隔臂來實現萬古黴素與載體的連接，其中間隔臂包括化學鍵合固定相中常用的所有間隔臂。
本發明中所述載體是指色譜用矽膠填料，包括球形和無定形矽膠。
本發明所述的固定相的具體實施步驟如下1)載體矽膠的矽烷化矽膠載體用3～5mol L-1鹽酸回流4～6小時後水洗至中性，真空乾燥，以無水甲苯做溶劑，加入3-氨丙基三乙氧基矽烷，回流反應8～10小時，冷卻至室溫過濾，用甲苯和甲醇洗滌，真空乾燥得3-氨丙基矽膠；2)鍵合手性固定相的合成取3克上述乾燥的3-氨丙基矽膠，加入無水甲苯，在冰浴及氮氣保護下滴加2～4ml的1，6-二異氰酸酯正己烷(或1，3-二異氰酸酯苯)，混合物加熱至65～75℃反應2～3小時，冷卻至室溫後除去溶劑及1，6-二異氰酸酯正己烷(或1，3-二異氰酸酯苯)，加入100ml含1～2g萬古黴素無水吡啶溶液，氮氣保護下65～75℃攪拌反應10～12小時，過濾，用吡啶、水、甲醇、乙腈、二氯甲烷洗滌，減壓乾燥後與苯基異氰酸酯在無水吡啶溶液中110～120℃反應2～3小時，過濾後，用吡啶、水、甲醇、丙酮、二氯甲烷洗滌乾燥，得萬古黴素苯異氰酸酯手性色譜固定相填料。
3)佐米曲坦對映體在甲醇/冰醋酸/三乙胺體系中的分離流動相組成為甲醇/冰醋酸/三乙胺(100/0.1/0.1，v/v/v)，手性分離因子α＝1.53，分離度Rs＝3.14，此條件下的分離譜圖見圖1。
4)拉米夫定對映體在甲醇條件下的分離流動相組成為純甲醇，手性分離因子為α＝1.42，分離度Rs＝2.61，此條件下的分離譜圖見圖2。
實施例11)載體矽膠的矽烷化稱取10克Kromasil球形矽膠載體(粒徑5μm，孔徑10nm)用3mol L-1鹽酸回流4小時後水洗至中性，真空乾燥，以無水甲苯做溶劑，加入10ml的3-氨丙基三乙氧基矽烷，回流反應8小時，冷卻至室溫過濾，用甲苯和甲醇洗滌，真空乾燥得3-氨丙基矽膠；
2)鍵合手性固定相的合成取3克上述乾燥的3-氨丙基矽膠，加入無水甲苯中，在冰浴及氮氣保護下滴加2ml的1，6-二異氰酸酯正己烷，混合物加熱至65℃反應2小時，冷卻至室溫後除去溶劑及1，6-二異氰酸酯正己烷，加入100ml含1g萬古黴素無水吡啶溶液，氮氣保護下65℃攪拌反應10小時，過濾，用吡啶、水、甲醇、乙腈、二氯甲烷洗滌，減壓乾燥後與苯基異氰酸酯在無水吡啶溶液中110℃反應2小時，過濾後，用吡啶、水、甲醇、丙酮、二氯甲烷洗滌乾燥，得萬古黴素苯異氰酸酯手性色譜固定相填料。
實施例21)載體矽膠的矽烷化稱取10克Lichrosorb無定形矽膠載體(粒徑5μm，孔徑10nm)用5mol L-1鹽酸回流6小時後水洗至中性，真空乾燥，以無水甲苯做溶劑，加入3-氨丙基三乙氧基矽烷，回流反應10小時，冷卻至室溫過濾，用甲苯和甲醇洗滌，真空乾燥得3-氨丙基矽膠；2)鍵合手性固定相的合成取3克上述乾燥的3-氨丙基矽膠，加入無水甲苯中，在冰浴及氮氣保護下滴加3ml的1，6-二異氰酸酯正己烷，混合物加熱至70℃反應3小時，冷卻至室溫後除去溶劑及1，6-二異氰酸酯正己烷，加入100ml含2g萬古黴素無水吡啶溶液，氮氣保護下70℃攪拌反應10小時，過濾，用吡啶、水、甲醇、乙腈、二氯甲烷洗滌，減壓乾燥後與苯基異氰酸酯在無水吡啶溶液中110℃反應3小時，過濾後，用吡啶、水、甲醇、丙酮、二氯甲烷洗滌乾燥，得萬古黴素苯異氰酸酯手性色譜固定相填料。
實施例31)載體矽膠的矽烷化稱取10克Lichrospher球形矽膠載體(粒徑5μm，孔徑10nm)用5mol L-1鹽酸回流4小時後水洗至中性，真空乾燥，以無水甲苯做溶劑，加入3-氨丙基三乙氧基矽烷，回流反應8小時，冷卻至室溫過濾，用甲苯和甲醇洗滌，真空乾燥得3-氨丙基矽膠；2)鍵合手性固定相的合成取3克上述乾燥的3-氨丙基矽膠，加入無水甲苯中，在冰浴及氮氣保護下滴加4ml的1，6-二異氰酸酯正己烷，混合物加熱至75℃反應3小時，冷卻至室溫後除去溶劑及1，6-二異氰酸酯正己烷，加入100ml含2g萬古黴素無水吡啶溶液，氮氣保護下75℃攪拌反應12小時，過濾，用吡啶、水、甲醇、乙腈、二氯甲烷洗滌，減壓乾燥後與苯基異氰酸酯在無水吡啶溶液中120℃反應3小時，過濾後，用吡啶、水、甲醇、丙酮、二氯甲烷洗滌乾燥，得萬古黴素苯異氰酸酯手性色譜固定相填料。
實施例41)載體矽膠的矽烷化稱取10克Kromasil球形矽膠載體(粒徑5μm，孔徑20nm)用5mol L-1鹽酸回流4小時後水洗至中性，真空乾燥，以無水甲苯做溶劑，加入3-氨丙基三乙氧基矽烷，回流反應8小時，冷卻至室溫過濾，用甲苯和甲醇洗滌，真空乾燥得3-氨丙基矽膠；2)鍵合手性固定相的合成取3克上述乾燥的3-氨丙基矽膠，加入無水甲苯中，在冰浴及氮氣保護下滴加4ml的1，6-二異氰酸酯正己烷，混合物加熱至75℃反應3小時，冷卻至室溫後除去溶劑及1，6-二異氰酸酯正己烷，加入100ml含2g萬古黴素無水吡啶溶液，氮氣保護下75℃攪拌反應12小時，過濾，用吡啶、水、甲醇、乙腈、二氯甲烷洗滌，減壓乾燥後與苯基異氰酸酯在無水吡啶溶液中120℃反應3小時，過濾後，用吡啶、水、甲醇、丙酮、二氯甲烷洗滌乾燥，得萬古黴素苯異氰酸酯手性色譜固定相填料。
實施例51)鍵合手性固定相的合成稱取3克乾燥的Kromasil-NH2球形矽膠載體(粒徑5μm，孔徑10nm)，加入無水甲苯中，在冰浴及氮氣保護下滴加4ml的1，6-二異氰酸酯正己烷，混合物加熱至75℃反應3小時，冷卻至室溫後除去溶劑及1，6-二異氰酸酯正己烷，加入100ml含2g萬古黴素無水吡啶溶液，氮氣保護下75℃攪拌反應12小時，過濾，用吡啶、水、甲醇、乙腈、二氯甲烷洗滌，減壓乾燥後與苯基異氰酸酯在無水吡啶溶液中120℃反應3小時，過濾後，用吡啶、水、甲醇、丙酮、二氯甲烷洗滌乾燥，得萬古黴素苯異氰酸酯手性色譜固定相填料。
實施例61)載體矽膠的矽烷化稱取10克Kromasil球形矽膠載體(粒徑5μm，孔徑10nm)用3mol L-1鹽酸回流4小時後水洗至中性，真空乾燥，以無水甲苯做溶劑，加入10ml的3-氨丙基三乙氧基矽烷，回流反應8小時，冷卻至室溫過濾，用甲苯和甲醇洗滌，真空乾燥得3-氨丙基矽膠；2)鍵合手性固定相的合成取3克上述乾燥的3-氨丙基矽膠，加入無水甲苯中，在冰浴及氮氣保護下滴加4ml的1，3-二異氰酸酯苯，混合物加熱至65℃反應2小時，冷卻至室溫後除去溶劑及1，3-二異氰酸酯苯，加入100ml含1g萬古黴素無水吡啶溶液，氮氣保護下65℃攪拌反應10小時，過濾，用吡啶、水、甲醇、乙腈、二氯甲烷洗滌，減壓乾燥後與苯基異氰酸酯在無水吡啶溶液中110℃反應2小時，過濾後，用吡啶、水、甲醇、丙酮、二氯甲烷洗滌乾燥，得萬古黴素苯異氰酸酯手性色譜固定相填料。
權利要求
1.一種萬古黴素苯異氰酸酯手性色譜固定相填料，其特徵在於它是將糖肽類大環抗生素—萬古黴素化學鍵合到矽膠載體上，再與苯異氰酸酯進行衍生化反應製成的手性色譜固定相填料。
2.根據權利要求1所述的一種萬古黴素苯異氰酸酯手性色譜固定相填料，其特徵在於所述矽膠載體為球形和無定形矽膠載體。
3.一種萬古黴素苯異氰酸酯手性色譜固定相填料的製備方法，其特徵在於方法的步驟如下1)載體矽膠的矽烷化矽膠載體用3～5mol L-1鹽酸回流4～6小時後水洗至中性，真空乾燥，以無水甲苯做溶劑，加入-氨丙基三乙氧基矽烷，回流反應8～10小時，冷卻至室溫過濾，依次用甲苯、甲醇洗滌，真空乾燥得-氨丙基矽膠；2)鍵合手性固定相的合成取3克上述乾燥的3-氨丙基矽膠，加入無水甲苯，在冰浴及氮氣保護下滴加2～4ml的1，6-二異氰酸酯正己烷(或1，3-二異氰酸酯苯)，混合物加熱至65-75℃反應2～3小時，冷卻至室溫後除去溶劑及1，6-二異氰酸酯正己烷(或1，3-二異氰酸酯苯)，加入100ml含1～2g萬古黴素無水吡啶溶液，氮氣保護下65～75℃攪拌反應10～12小時，過濾，用吡啶、水、甲醇、乙腈、二氯甲烷洗滌，減壓乾燥後與苯基異氰酸酯在無水吡啶溶液中110～120℃反應2～3小時，過濾後，依次用吡啶、水、甲醇、丙酮、二氯甲烷洗滌乾燥，得萬古黴素苯異氰酸酯手性色譜固定相填料。
4.根據權利要求3所述的一種萬古黴素苯異氰酸酯手性色譜固定相填料的製備方法，其特徵在於所述矽膠載體為球形和無定形矽膠載體。
全文摘要
本發明公開了一種萬古黴素苯異氰酸酯手性色譜固定相填料及其製備方法。它是將糖肽類大環抗生素－萬古黴素化學鍵合到矽膠載體上，再與苯異氰酸酯進行衍生化反應製成的手性色譜固定相填料。採用矽膠為載體，載體與3－氨丙基三乙氧基矽烷進行矽烷化反應；矽烷化後的載體與間隔臂進行活化，活化後的矽膠載體與糖肽類大環抗生素萬古黴素鍵合，再與苯異氰酸酯進行衍生化反應完成。用這種方法合成的萬古黴素苯異氰酸酯手性色譜固定相填料裝柱後，可以在正相、反相及極性有機相色譜條件下使用。本發明可在簡單的極性有機相模式下拆分佐米曲坦和拉米夫定等藥物對映體。
文檔編號B01J20/30GK1772371SQ20051006110
公開日2006年5月17日 申請日期2005年10月14日 優先權日2005年10月14日
發明者張大同, 徐秀珠 申請人:浙江大學