pH敏感的1,4‑二取代酞菁鋅配合物及其製備方法和在醫藥上的應用與流程
2023-06-13 15:40:26
本發明屬於醫藥領域，涉及酞菁鋅配合物及其製備方法及其在醫藥上的應用，本發明公開了其作為光敏劑，用於治療癌症的用途。技術背景光動力治療(PhotodynamicTherapy，簡稱PDT)，又稱光輻射療法(PhotoradiationTherapy，簡稱PRT)或稱光化學療法(Photochemotherapy)，是一種基於特定化學物質的光化學反應原理的治療方法。所用的化學物質稱為腫瘤化學診治藥物(也稱光敏劑，Photosensitizer，簡稱PS)。PDT療法過程是通過靜脈注射將光敏劑注入體內(對於皮膚也可以將其塗於患處)，經過一定時間後用特定波長的光照射腫瘤組織，富集在腫瘤組織的光敏劑在光的激發下，產生一系列光物理化學反應，產生細胞毒性的活性氧，從而殺死癌細胞破壞腫瘤組織。1996年被美國FDA批准用於臨床,1997年FDA將其列入腫瘤治療的五類基本方法(手術、放療、化療、光動力、生化免疫)之一。和傳統的療法相比，PDT療法具有創傷很小、毒性低微、選擇性好、適用性好、可重複治療、可姑息治療、可協同手術提高療效、可消滅隱性癌病灶、可保護容貌及重要器官功能、治療時間短等優勢。光動力療法還可以有效地治療細菌感染、口腔感染、黃斑變性眼病、動脈硬化、創傷感染以及皮膚病等非癌症疾病。光敏劑還可以用於光動力消毒，最主要的是用於血液和血液衍生物的滅菌消毒。同時，利用光敏劑的螢光性質進行光動力診斷，也是醫用光敏劑的一個重要用途。光動力治療的關鍵在於光敏劑，光動力療效取決於光敏劑的優劣。基於光動力治療在治療腫瘤和其他疾病方面的潛力，科學界普遍認為，光動力治療將成為21世紀的重要醫療方法。現在臨床主要應用的光敏劑為卟非姆納(Porfimersodium，Photofin),該藥先後在荷蘭、加拿大、日本、美國、法國、德國、英國等28個國家和地區上市。我國在光動力治療(PDT)方面的研究較美國、日本等國起步較遲,但進步較快。20世紀80年代初至今,為發展光動力治療做了大量工作,與國外報導的成果相比,其深度和廣度並無太大差距。重慶華鼎現代生物製藥有限責任公司研製、生產用以治療腫瘤的血卟啉(Hematoporphyrin，喜泊分),已經由國家食品藥品管理局(SFDA)正式批准生產、銷售並應用於臨床。喜泊分是我國唯一上市的抗癌光敏劑，是國外上市的卟非姆納類似物，均是血卟啉衍生物，同屬於第一代抗癌光敏藥物。儘管卟非姆納和喜泊分在臨床上取得了成功，但其組分複雜，各種成分在光動力損傷中的作用至今也未弄清，佔藥物總量20％以上的非活性成分不僅不能對病變的靶組織產生有效的光動力損傷作用，反而成為導致正常組織發生光敏反應的禍首。另外第一代光敏藥物對腫瘤的靶向作用不強，研究高效、低毒的具有腫瘤靶向性的光敏藥物是最近的研究熱點。腫瘤實體組織部位存在的缺氧微環境導致該部位腫瘤細胞外的pH值較低(在6.5左右)，而正常組織細胞外pH值為7.4左右。腫瘤實體組織和正常組織之間的pH值差異為腫瘤靶向藥物的設計提供了新的策略。本專利發明人近年報導了多個系列的pH敏感的光敏化合物，比如軸向氨基衍生物取代矽酞菁，通過氨基在不同pH環境下的離子化程度不同影響光敏活性(Jiang,X.-J.et.al,Chem.Commun.,2010,46,3188–3190)；軸向苯基衍生物取代矽酞菁，通過pH環境下酞菁分子的聚集程度不同影響光敏活性(Jiang,X.-J.et.al,Chem.Eur.J.,2010,16,4777–4783)；通過pH敏感的縮酮鍵連接的氟硼二吡咯衍生物和二茂鐵衍生物，由於二茂鐵為螢光淬滅劑，可以通過光誘導電子轉移(photoinducedelectrontransfer,PET)過程淬滅氟硼二吡咯衍生物的光敏活性，但在微酸環境下，縮酮發生水解反應，供電子特性的二茂鐵基團脫落，二吡咯衍生物的光敏活性得到恢復(Jiang,X.-J.et.al,Chem.Eur.J.2016,22,8273–8281)。但這些化合物和目前報導的大多數pH敏感的藥物均不是腫瘤細胞外微酸環境靶向藥物，這是由於腫瘤細胞和正常細胞的亞細胞組織如線粒體、溶酶體等均顯酸性，溶酶體的pH值更可以低至5。這些化合物在被腫瘤細胞和正常細胞攝取後，可以被亞細胞組織中的酸激發光敏活性，損傷腫瘤細胞和正常細胞。技術實現要素：本發明公開了一系列腫瘤細胞外微酸環境靶向光敏藥物。公開了一系列縮酮連接的酞菁鋅配合物和膽固醇衍生物的結構、合成及應用。在酞菁鋅1，4位引入膽固醇基團，酞菁鋅配合物和膽固醇之間用酸敏感的縮酮鍵連接，由於膽固醇的非極性特性和大位阻作用，酞菁鋅-膽固醇配合物很難被癌細胞和正常細胞攝取，但在腫瘤實體組織癌細胞外的微酸環境下，縮酮鍵發生水解反應，膽固醇基團脫落，酞菁鋅水解衍生物能被癌細胞攝取並展現極高的光敏活性，它們是腫瘤細胞外微酸環境靶向光敏藥物。本發明提供的一種通式(I)所示的化合物：其中：n＝1,2,3,或4；X＝O或NH；或其藥學上可接受的鹽。通式(I)所示的化合物在微酸環境下的水解反應化學式(1)通式(I)的所示化合物的水解產物為通式(V)化合物的結構與已有文獻報導的化合物結構相同和類似(Liu,J.-Y.,Jiang,X.-J.et.al.,Org.Biomol.Chem.,2008,6,4560–4566；Liu,J.-Y.,lo,P.-C.,Jiang,X.-J.,et.al.,DaltonTrans.,2009,4129–4135),這些化合物在腫瘤細胞攝取率高，在很低的濃度下展現非常高的光敏活性。本發明典型的化合物包括，但不限於：或其藥學上可接受的鹽，其中本發明還提供一種製備通式(I)所示的化合物的方法，該方法包括：其中：n＝1,2,3,或4；X＝O或NH；第1步，所述溶劑選自N,N-二甲基甲醯胺、二甲基亞碸、二氯甲烷、三氯甲烷和四氫呋喃；所述反應在-5～80℃溫度下進行；所述鹼性條件由選自吡啶、三乙胺、氫化鈉和4-N,N-二甲基吡啶等試劑提供；所述通式(II)化合物與膽固醇甲醯氯的摩爾比為1:0.2～2。第2步，所述溶劑選自N,N-二甲基甲醯胺、二甲基亞碸、二氯甲烷、三氯甲烷和四氫呋喃；所述反應在-5～80℃溫度下進行；所述鹼性條件由選自吡啶、三乙胺、氫化鈉和4-N,N-二甲基吡啶等試劑提供；所述通式(IV)化合物與通式(III)化合物的摩爾比為1:0.5～5。如果有必要，通過本領域技術人員熟知的方法，如通過蒸餾、通過矽膠柱色譜法或者通過高效液相色譜法(HPLC)也可以純化化合物。本發明還提供一種藥物組合物，其含有治療有效量的通式(I)所示的化合物或或其藥學上可接受的鹽，以及藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。本發明還涉及通式(I)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，或包含其的藥物組合物在製備光動力藥物或光敏藥物中的用途。本發明還涉及通式(I)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，或包含其的藥物組合物在製備治療癌症的藥物中的用途。其中所述的癌症選自其中所述的癌症選自肺癌、胃癌、食管癌、乳腺癌、膀胱癌、前列腺癌、胰腺癌、膽管癌、直腸癌、結腸癌、皮膚癌、頭頸部癌症、眼腫瘤、子宮癌和卵巢癌，優乳腺癌。本發明還涉及通式(I)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，或包含其的藥物組合物，其用作光動力藥物或光敏藥物。本發明還涉及通式(I)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，或包含其的藥物組合物，其用於治療癌症。其中所述的癌症選自肺癌、胃癌、食管癌、乳腺癌、膀胱癌、前列腺癌、胰腺癌、膽管癌、直腸癌、結腸癌、皮膚癌、頭頸部癌症、眼腫瘤、子宮癌和卵巢癌，優選乳腺癌。本發明還涉及一種治療癌症的方法，其包括給予所需患者治療有效量的通式(I)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，或包含其的藥物組合物，然後用適宜的光源照射。所述適宜的光源可以由普通光源連接合適的濾光片來提供或由特定波長的雷射來提供，光源的波長範圍為550～900nm，優選620～720nm。根據本發明的化合物可以被口服施用、舌下施用、腸胃外施用、皮下施用、肌內施用、靜脈內施用、經皮施用、局部施用或直腸施用。在本發明的藥用化合物中，對於口服施用、舌下施用、腸胃外施用、皮下施用、肌內施用、靜脈內施用、經皮施用、局部施用或直腸施用而言，活性成分可以與常規的藥用載體混合在一起，以施用單位的形式施用於動物或人類。適合的施用單位形式包含口服形式如片劑、凝膠膠囊劑、粉劑、顆粒劑和口服的溶液劑或混懸劑，舌下或口腔施用形式，腸胃外、皮下、肌內、靜脈內、鼻內或眼內施用形式和直腸施用形式。當固體組合物被製備成片劑形式時，主要活性成分與藥用載體如明膠、澱粉、乳糖、硬脂酸鎂、滑石、阿拉伯膠等混合。片劑可以採用蔗糖或其他適合的材料包衣或者以如此的方式處理以至於其具有延長的或延遲的活性並且連續釋放預定量的活性成分。通過將活性成分與稀釋劑混合併通過將獲得的混合物傾倒入軟質或硬質膠囊中來獲得凝膠膠囊製劑。糖漿劑或酊劑形式的製劑可以包含活性成分連同甜味劑、防腐劑以及芳香劑和適當的著色劑。可分散於水中的粉劑或顆粒劑可以包含活性成分，其與分散劑、表面活性劑、潤溼劑或懸浮劑以及與矯味劑或甜味劑混合在一起。其藥物組合中含有聚氧乙烯蓖麻油及其衍生物、二甲亞碸、乙醇、甘油、N，N-二甲基甲醯胺、聚乙二醇300-3000、環糊精、葡萄糖、吐溫、聚乙二醇單硬脂酸酯中的一種或幾種。栓劑用於直腸施用，其採用在直腸溫度下熔化的粘合劑，例如，可可脂或聚乙二醇來製備。水性混懸劑、等滲的生理鹽水溶液劑或無菌的且可注射的溶液劑(其包含藥理學上可兼容的分散劑和/或潤溼劑)用於腸胃外、鼻內或眼內施用。其藥物組合中含有聚氧乙烯蓖麻油及其衍生物、二甲亞碸、乙醇、甘油、N，N-二甲基甲醯胺、聚乙二醇300-3000、環糊精、葡萄糖、吐溫、聚乙二醇單硬脂酸酯中的一種或幾種。活性成分(可能與一種或多種添加劑載體一起)也可以被配製成微囊劑。本發明的化合物能夠以介於0.01mg/天和5000mg/天之間的劑量來使用，以單一劑量/天的方式來提供或者以全天內若干劑量的方式來施用，例如，相同劑量每天兩次。所施用的日劑量有利地介於0.1mg和200mg之間，甚至更有利地介於2.5mg和50mg之間。使用超出這些範圍的劑量可能是需要的，本領域技術人員自身將會意識到這一點。在本發明的一個特定實施方案中，藥物組合物也可以被配製用於外部施用。它可以被引入到該施用類型的常用形式(即，特別是洗劑、泡沫劑、凝膠劑、分散劑、噴霧劑)中，所述常用形式具有賦形劑，所述賦形劑特別地能夠穿透皮膚，以便於改善活性成分的性質和可接近性。除了根據本發明的組合物之外，這些組合物通常進一步包含生理上可接受的介質，所述介質通常包含水或溶劑，例如，醇、醚或乙二醇。所述組合物還可以包含表面活性劑、防腐劑、穩定劑、乳化劑、增稠劑、產生互補效果或可能的協同效果的其他活性成分、微量元素、精油、香料、著色劑、膠原蛋白、化學或礦物過濾劑。定義除非有相反陳述，否則下列用在說明書和權利要求書中的術語具有下述含義。在本發明中，「藥學上可接受的」被理解為是指其用於製備藥物組合物，所述組合物一般是安全的，無毒的，在生物學或其他方面滿足需要並且所述組合物可以被接受用於獸類和人類藥物用途。在本發明中，化合物的「藥學上可接受的鹽」被理解為指代下列鹽，其是藥學上可接受的(如本文所定義的)鹽並且其具備預期的母體化合物的藥理活性。這種鹽包括：(1)與無機酸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等形成的酸加成鹽，或與有機酸如乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟腦磺酸、檸檬酸、乙磺酸、富馬酸、葡庚糖酸、葡糖酸、穀氨酸、乙醇酸、羥萘酸、2-羥基乙磺酸、乳酸、馬來酸、蘋果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘康酸、2-萘磺酸、丙酸、水楊酸、琥珀酸、二苯甲醯基-L-酒石酸、酒石酸、對甲苯磺酸、三甲基乙酸、三氟乙酸等形成的酸加成鹽；和(2)當母體化合物中存在的酸質子被金屬離子，例如，鹼金屬離子(例如，Na+、K+或Li+)，鹼土金屬離子(如Ca2+或Mg2+)或鋁離子代替；或者與有機鹼或無機鹼配位時形成的鹽。可接受的有機鹼包括二乙醇胺、乙醇胺、N-甲基葡糖胺、三乙醇胺、氨丁三醇等。可接受的無機鹼包括氫氧化鋁、氫氧化鈣、氫氧化鉀、碳酸鈉和氫氧化鈉。「藥物組合物」表示含有一種或多種本文所述化合物或其生理學上/可藥用的鹽或前體藥物與其他化學組分的混合物，以及其他組分例如生理學/可藥用的載體和賦形劑。藥物組合物的目的是促進對生物體的給藥，利於活性成分的吸收進而發揮生物活性。「Ts」為對甲基苯磺酸基。具體實施方式通過閱讀下列實施例，本領域技術人員將會更好地理解本發明。這些實施例僅用於解釋本發明。本發明實施例中未註明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件，或按照原料或商品製造廠商所建議的條件。未註明具體來源的試劑，為市場購買的常規試劑。通式化合物(IV)參考文獻方法很容易合成得到(NewJ.Chem.,2013,37,1746-1752；Org.Biomol.Chem.,2008,6,4560–4566；DaltonTrans.,2009,4129–4135)。核磁共振儀：BrukerARX-300型高分辨高分辨核磁共振儀。質譜：QSTARElite串聯四級杆飛行時間質譜儀。MTT檢測儀器：ThermoScientificMultiskanGO全波長酶標儀PBS緩衝液：磷酸鹽緩衝液化合物的結構是通過核磁共振(NMR)或/和質譜(MS)來確定的。NMR化學位移(δ)以10-6(ppm)的單位給出。測定溶劑為氘代二甲亞碸(DMSO-d6)，內標為四甲基矽烷(TMS)。使用下列縮寫：s為單峰，bs為寬單峰，d為二重峰，t為三重峰，qdt為四重峰，m為多重峰或大量峰，dd為雙二重峰等。薄層層析矽膠板使用青島GF254矽膠板，薄層色譜法(TLC)使用的矽膠板採用的規格是0.15mm～0.2mm，薄層層析分離純化產品採用的規格是0.4mm～0.5mm。柱層析一般使用煙臺黃海矽膠200～300目矽膠為載體。實施例中如無特殊說明，反應均在氬氣氛或氮氣氛下進行。實施例中如無特殊說明，反應中的溶液是指水溶液。實施例中如無特殊說明，反應的溫度為室溫。實施例中的反應進程的監測採用薄層色譜法(TLC)。實施例1化合物1的合成第1步在冰水浴中，把化合物1-1(1.62g,10mmol)，膽固醇醯氯(2.2g,4.9mmol)和三乙胺(2g,20mmol)加入二氯甲烷(50mL),繼續攪拌反應2小時，停止反應，向反應液中加入水(100mL),攪拌靜置，收集有機相，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓蒸餾，粗產品用矽膠層析柱分離純化，洗脫劑為三氯甲烷/甲醇(9:1)，得到白色固體1-2(1.53g,55％)。MS(ESI):m/z＝598[M+Na]+。第2步在冰水浴中，把化合物1-3(1.27g,1mmol)，1-2(1.55g,2.7mmol)和吡啶(0.8g,10.1mmol)加入三氯甲烷(25mL),繼續攪拌反應2小時，停止反應，向反應液中加入水(120mL),攪拌靜置，收集有機相，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓蒸餾，粗產品用矽膠層析柱分離純化，洗脫劑為三氯甲烷/甲醇(20:1)，得到綠色固體1(1.18g,57％)。1HNMR(300MHz,DMSO-d6):δ9.33-9.37(m,4H，Pc-Hα),9.21-9.25(m,2H，Pc-Hα),8.15-8.20(m,6H,Pc-Hβ),7.53(s,2H,Pc-Hβ),5.28-5.37(m,2H,chol-6-CH),4.82-4.90(m,4H,CH2),4.35-4.49(m,6H,CH2,chol-3-CH),3.85-4.10(m,8H,CH2),3.41-3.75(m,32H,CH2),1.72-2.35(m,16H,chol),0.85-1.58(s,76H,chol,CH3),0.68(s,6H,chol-18-CH3)。MS(ESI):m/z＝2077[M+H]+。實施例2化合物2的合成第1步在冰水浴中，把化合物2-1(1.64g,10mmol)，膽固醇醯氯(1.55g,3.5mmol)和吡啶(0.8g,10.1mmol)加入二氯甲烷(25mL)，溫度升到室溫，繼續攪拌反應2小時，停止反應，向反應液中加入水(100mL)，攪拌靜置，收集有機相，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓蒸餾，粗產品用矽膠層析柱分離純化，洗脫劑為三氯甲烷/甲醇(15:1)，得到白色固體2-2(1.02g,49％)。MS(ESI):m/z＝599[M+Na]+。第2步在冰水浴中，把化合物2-3(0.7g,0.6mmol)，2-2(1.6g,2.8mmol)加入四氫呋喃(30mL),緩慢向反應液中加入氫化鈉(0.1g,4.2mmol)，繼續攪拌反應2小時，緩慢加入2毫升水淬滅反應，向反應液中加入水(100mL)，攪拌靜置，收集有機相，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓蒸餾，粗產品用矽膠層析柱分離純化，洗脫劑為三氯甲烷/甲醇(20:1)，得到藍色固體2(0.25g,22％)。1HNMR(300MHz,DMSO-d6):δ9.32-9.36(m,4H，Pc-Hα),9.20-9.25(m,2H，Pc-Hα),8.12-8.2(m,6H,Pc-Hβ),7.51(s,2H,Pc-Hβ),5.30-5.37(m,2H,chol-6-CH),4.81-4.91(m,4H,CH2),4.32-4.48(m,10H,CH2,chol-3-CH),3.85-4.12(m,8H,CH2),3.41-3.75(m,20H,CH2),1.70-2.35(m,16H,chol),0.83-1.57(s,76H,chol,CH3),0.67(s,6H,chol-18-CH3)。MS(ESI):m/z＝1992[M]+。實施例3化合物3的合成在冰水浴中，把化合物3-3(0.6g,5.5mmol)，2-2(0.8g,1.4mmo)加入四氫呋喃(30mL),緩慢向反應液中加入氫化鈉(0.1g,4.2mmol)，繼續攪拌反應2小時，緩慢加入2毫升水淬滅反應，向反應液中加入水(100mL),攪拌靜置，收集有機相，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓蒸餾，粗產品用矽膠層析柱分離純化，洗脫劑為三氯甲烷/甲醇(20:1)，得到藍色固體3(0.22g,21％)。1HNMR(300MHz,DMSO-d6):δ9.35-9.49(m,6H，Pc-Hα),8.12-8.2(m,6H,Pc-Hβ),7.58(s,2H,Pc-Hβ),5.31-5.35(m,2H,chol-6-CH),4.81-4.98(m,4H,CH2),4.32-4.56(m,10H,CH2,chol-3-CH),4.10-4.20(m,4H,CH2),3.41-3.75(m,12H,CH2),1.70-2.35(m,16H,chol),0.80-1.62(s,76H,chol,CH3),0.66(s,6H,chol-18-CH3)。MS(ESI):m/z＝1904[M]+。實施例4化合物4的合成在冰水浴中，把化合物4-3(0.7g,0.7mmol)，1-2(1.33g,2.1mmol)和三乙胺(2g,20mmol)加入三氯甲烷(30mL)，繼續攪拌反應2小時，停止反應，向反應液中加入水(100mL)，攪拌靜置，收集有機相，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓蒸餾，粗產品用矽膠層析柱分離純化，洗脫劑為三氯甲烷/甲醇(20:1)，得到藍色固體4(0.25g,20％)。1HNMR(300MHz,DMSO-d6):δ9.33-9.53(m,6H，Pc-Hα),8.10-8.18(m,6H,Pc-Hβ),7.58(s,2H,Pc-Hβ),5.36-5.40(m,2H,chol-6-CH),4.73-4.80(m,4H,CH2),4.38-4.60(m,2H,chol-3-CH),3.35-3.85(m,20H,CH2),1.73-2.40(m,16H,chol),0.84-1.65(s,76H,chol,CH3),0.68(s,6H,chol-18-CH3)。MS(ESI):m/z＝1813[M+H]+。測試例：體外抗腫瘤細胞光敏實驗供試品：本發明化合物2陽性對照品：血卟啉注射液(英文名：HematoporphyrinInjection；商品名：喜泊分，重慶市華鼎現代生物製藥有限責任公司生產)。測試細胞：人乳腺癌細胞MCF-7主要試劑：1)RPMI-1640完全培養液：於500mLRPMI-1640液體培養液(GIBCO公司)中加入青黴素/鏈黴素10萬U，胎牛血清56mL，混勻。2)MTT溶液(MTT：3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽，購於美國MP公司)：將粉狀MTT以5mg/mL的濃度溶於PBS溶液，過濾滅菌，現配現用。實驗方法：1)供試品配製方法：將供試品用DMSO配成濃度為1mM的母液；實驗時取100μL1mg/mL的母液，加入1.15mL0.5％(w/w)聚氧乙烯蓖麻油pH7.4PBS和pH6.5PBS緩衝液，配製成80μg/mL藥液，並用相對應的PBS緩衝液稀釋成不同濃度的藥液，稀釋過程中保持藥液pH值不變，藥液配製後馬上進行細胞加藥培養。各藥物和陰性對照組中DMSO的終濃度是≤1％。喜泊芬為5mL液體溶液含25mg製劑，濃度5mg/mL。取100μL5mg/mL的製劑，加入4.90mLpH7.4PBS或pH6.5PBS緩衝液，並用相對應的PBS緩衝液稀釋成不同濃度的藥液，稀釋過程中保持藥液pH值不變，藥液配製後馬上進行細胞加藥培養。2)選用對數生長期的貼壁腫瘤細胞，用胰酶消化後，用含10％胎牛血清的RPMIl640培養基配成適合濃度的細胞懸液，接種在96孔培養板中。每孔接種100μL，每加完一排將細胞懸液搖一下，加完細胞後輕輕水平轉動培養板使細胞均勻地分散在皿孔表面，96孔板周圍一圈孔加入無菌PBS，37℃，5％CO2培養24小時。然後分別加入不同濃度的受試藥物、陽性藥物、溶劑和培養液各100μL，每組3個平行孔。混勻後分為光照和避光兩組，均在加藥共培養2小時後，棄去培養基，重新加入不含供試品的培養基置37℃、5％CO2條件下繼續培養24小時。24小時後，每孔加入5mg/mLMTT，20μL，37℃、5％CO2條件下孵育4小時後，仔細吸棄上清液，每孔加入200μLDMSO，振蕩10分鐘，使形成的甲臢顆粒充分溶解後，酶標儀檢測吸光值，測定波長570nm，參考波長630nm。光源通過200W的滷素燈連接隔熱水槽加大於610nm的濾光片提供，光劑量為48Jcm-2。3)藥物對腫瘤細胞生長的抑制率的計算方法：腫瘤細胞生長抑制率(％)＝[(陰性對照組OD均值－給藥組OD均值)/陰性對照組OD均值]×100％。半數抑制濃度IC50的計算，採用logit回歸法測定。實驗結果：表1化合物2和喜泊分在照光時人乳腺癌細胞MCF-7的IC50(ng/mL)值光敏藥物細胞pH7.4藥液培養細胞pH6.5藥液培養化合物2>800095喜泊分38004100實驗結果顯示，在避光環境下，所有測試的化合物在濃度高達5000ng/mL時，沒有顯示細胞毒性，但在照光情況下喜泊分在pH6.5和pH7.4時對人乳腺癌細胞MCF-7的半致死濃度IC50值相差不大，在3800-4100ng/mL之間。但化合物2在pH7.4的藥液培養細胞時，濃度高達8000ng/mL，在照光時完全沒有光敏活性，但化合物2在pH6.5的藥液進行培養細胞時，展現非常高的光敏活性，IC50值為95ng/mL，展現非常明顯的腫瘤細胞外微酸環境靶向性。目前已知，幾乎所有的實體腫瘤都存在微酸環境，如肺癌、胃癌、食管癌、乳腺癌、膀胱癌、前列腺癌、胰腺癌、膽管癌、直腸癌、結腸癌、皮膚癌、頭頸部癌症、眼腫瘤、子宮癌和卵巢癌等實體腫瘤均存在微酸環境，本專利公開的化合物或其藥學上可接受的鹽，或包含其的藥物組合物均可以製備成光敏藥物治療上述癌症。以上所述僅為本發明的實施例而已，並不用以限制本發明，凡在本發明的精神和原則之內所作的任何修改、等同替換和改進等，均應包含在本發明的保護範圍之內。當前第1頁1 2 3