內醯胺酶檢測試紙條的製作方法
2023-06-13 12:04:26 2
內醯胺酶檢測試紙條的製作方法
【專利摘要】一種內醯胺酶檢測試紙條，由納米金微孔試劑(8)、試紙條(9)和青黴素G微孔試劑(10)組成，其特徵在於：所述的納米金微孔試劑(8)包括背板(1)，所述的背板(1)上從左至右分別貼有帶標記的保護膜貼紙(5-1)、樣品墊(2)、纖維素膜(3)、吸水墊(4)和保護膜貼紙(5-2)，所述的纖維素膜(3)上分別設有控制線C線(7)和檢測線T線(6)，所述的C線(7)標記的是青黴素結合蛋白6特異性單克隆抗體，所述的T線(6)標記的是氨苄青黴素-牛血清白蛋白結合物。本實用新型靈敏度高，檢測範圍廣，檢測速度快，操作方便。
【專利說明】內醯胺酶檢測試紙條
【技術領域】
[0001]本發明涉及生物檢測領域，具體為一種內醯胺酶檢測試紙條。
【背景技術】
[0002]P -內醯胺酶抗生素(P-Lactam antibiotics)是一大類含有0內醯胺環結構的抗生素，主要包括青黴素類、頭孢菌素類、頭黴素類、碳青黴烯類和單環(6-內醯胺等，在畜牧業生產中有廣泛應用。尤其是在奶牛生產中，該類藥物常被用來治療奶牛乳房炎和其他細菌性感染等，由此就導致了藥物可能殘留在牛奶中，可能會對人體健康造成威脅。
[0003](6-內醯胺酶是一種天然存在的蛋白質，具有分解多種抗生素使其效用降低或者無效的作用。動物體內往往含量極低。由於基因工程技術的出現，不法分子將人工合成的^ -內醯胺酶添加到牛奶中，以分解其中的抗生素殘留，製造所謂的「無抗奶」來欺騙下遊企業和消費者，給乳業產業造成了嚴重後果。我國衛生部2009年的《全國打擊違法添加非食用物質和濫用食品添加劑專項整治近期工作重點及要求》中就明確提出了嚴厲打擊在牛奶中人工添加違法添加(6-內醯胺酶。
[0004]檢測0 -內醯胺酶的方法較多，有碘量法、微生物培養抑制法以及液相色譜法等，其原理均是利用3-內醯胺酶可以分解抗生素的特性。這些方法雖然檢測準確性較好，但檢測耗時長，在基層奶站收奶時難以迅速給出檢測結果，無法滿足實際需要。因此有必要開發出快速方便的檢測(6-內醯胺酶的方法。
【發明內容】
[0005]本申請的目的在於提供一種內醯胺酶檢測試紙條，以解決試紙條不能對牛奶中 內醯胺酶的大規模篩選進行檢測的問題。
`[0006]為了達到上述目的，本發明採用以下技術方案:
[0007]一種內醯胺酶檢測試紙條，由納米金微孔試劑(8)、試紙條(9)和青黴素G微孔試劑(10)組成，其特徵在於:所述的納米金微孔試劑(8)包括背板(I)，所述的背板(I)上從左至右分別貼有帶標記的保護膜貼紙(5-1)、樣品墊(2)、纖維素膜(3)、吸水墊(4)和保護膜貼紙(5-2)，所述的纖維素膜(3)上分別設有控制線C線(7)和檢測線T線(6)，所述的C線(7)標記的是青黴素結合蛋白6特異性單克隆抗體，所述的T線(6)標記的是氨苄青黴素-牛血清白蛋白結合物，所述的納米金微孔試劑(8)內設有青黴素結合蛋白6層(8-1)，所述的青黴素G微孔試劑(10)內設有青黴素G層(10-1)。
[0008]進一步，所述的青黴素G微孔試劑(10)還包括青黴素G微孔試劑塑料微孔(10-2)，以及蓋在青黴素G微孔試劑塑料微孔(10-2)上的青黴素G微孔試劑塑料蓋(10-3)。
[0009]進一步，所述的青黴素G微孔試劑塑料微孔(10-2)上設有作為加樣體積的青黴素G微孔試劑加樣刻度線(10-4)。
[0010]進一步，8個青黴素G微孔試劑(10)組成一排。[0011]進一步，所述的納米金微孔試劑(8)還包括塑料微孔(8-2)，以及蓋在塑料微孔(8-2)上的塑料蓋(8-3)。
[0012]進一步，所述的塑料微孔(8-2)上設有作為加樣體積的加樣刻度線(8-4)。
[0013]進一步,8個納米金微孔試劑(8)組成一排。
[0014]進一步，所述的試紙條(9)的寬度為0.8cm，偏差範圍為0.78^0.82cm。
[0015]進一步，所述的納米金微孔試劑(8)、試紙條(9)和青黴素G微孔試劑(10)的個數按照1:1:1的比例密封於包裝袋或者包裝瓶中，保存在4-8°C溫度下。
[0016]本實用新型專利檢測方便，操作簡單，耗時僅8分鐘，成本低廉，可用於牛奶中^ -內醯胺酶摻假的大規模篩選檢測，為牛奶質量安全提供保障。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0017]圖1本實用新型的試紙條(9)結構平面俯視圖
[0018]圖2本實用新型的試紙條(9)結構剖面示意圖
[0019]圖3本實用新型的納米金微孔試劑⑶示意圖
[0020]圖4是納米金微孔試劑(8)或青黴素G微孔試劑(10)成排的示意圖
[0021]圖5本實用新型的檢測結果判定示意圖
[0022]圖6本實用新型的青黴素G微孔試劑(10)示意圖
`[0023]背板I ;樣品墊2 ;纖維素膜3 ;吸水墊4 ;帶標記的保護膜貼紙5-1 ;保護膜貼紙5-2 ;!'線6 ;C線7 ;納米金微孔試劑8 ;青黴素結合蛋白6層8-1 ;塑料微孔8_2 ;塑料蓋8_3 ；加樣刻度線8-4 ;試紙條9 ;青黴素G微孔試劑10 ;青黴素G層10-1 ;青黴素G微孔試劑塑料微孔10-2 ;青黴素G微孔試劑塑料蓋10-3 ;青黴素G微孔試劑加樣刻度線10-4
【具體實施方式】
[0024]為了使本實用新型的目的、技術方案及優點更加清楚明白，以下結合附圖及實施例，對本實用新型進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本實用新型，並不用於限定本實用新型。
[0025]內醯胺酶檢測試紙條的組裝
[0026]1.粘貼:將樣品墊⑵、纖維素膜(3)、吸水墊⑷、帶標記的保護膜貼紙(5-1)和保護膜貼紙(5-2)參照圖2的順序逐一貼在支持背板(I)上。樣品墊(2)與纖維素膜(3)相接，纖維素膜(3)與吸水墊(4)相接，同時在樣品墊(2)和吸水墊(4)上分別貼有帶標記的保護膜貼紙(5-1)和保護膜貼紙(5-2)，其中樣品墊(2)的帶標記的保護膜貼紙(5-1)印有「MAX」標記，方便檢測使用。纖維素膜(3)上分別標記了控制線C線(7)和檢測線T線
(6)。C線(7)標記的是青黴素結合蛋白6特異性單克隆抗體，而T線(6)標記的是氨苄青黴素-牛血清白蛋白結合物。
[0027]2.切條:將粘貼好的試紙條(9)大板用切條機進行切割，每個試紙條(9)的寬度為0.8cm，偏差範圍為0.78、.82cm，切割好的試紙條(9)儲藏在室溫下備用。
[0028]3.納米金微孔試劑(8)的組裝:採用自動化加樣裝置定量的將納米金顆粒標記的青黴素結合蛋白6加到塑料微孔(8-2)中形成青黴素結合蛋白6層(8-1)，置於凍幹機冷凍乾燥。冷凍乾燥的納米金微孔試劑(8)用塑料蓋(8-3)蓋好，儲藏於4-8°C備用，在塑料微孔(8-2)上設有作為加樣體積的加樣刻度線(8-4)，一般為了方便使用8個納米金微孔試劑
(8)組成一排，供檢測使用。
[0029]4.青黴素G微孔試劑(10)的組裝:將青黴素G標準品溶解至:T4U/L，採用自動化加樣裝置定量的將青黴素G標準品加到塑料微孔(10-2)，用凍幹機冷凍乾燥後呈現白色或者淺白色，如圖6所示，存放於青黴素G微孔試劑塑料微孔(10-2)中形成青黴素G層(10-1)。青黴素G微孔試劑塑料微孔(10-2)用合適的青黴素G微孔試劑塑料蓋(10-3)密封。一般而言，如圖4所示，8個微孔練成一排，與相應數量的檢測試紙條、相應數量的青黴素結合蛋白6納米金微孔試劑一起配套作為小包裝密封。每個青黴素G微孔試劑(10)上有青黴素G微孔試劑加樣刻度線(10-4)，作為加樣體積的標記。
[0030]5.試紙條(9)、納米金微孔試劑(8)和青黴素G微孔試劑(10)的組裝:將製備好的試紙條(9)和納米金微孔試劑(8)以及青黴素G微孔試劑(10)的個數按照1:1:1的數量比例密封於包裝袋或者包裝瓶中，密封好後存放於4-8°C備用，常規方法是將一條青黴素G微孔試劑(10) (8孔)、一條納米金微孔試劑(8) (8孔)和8條試紙條(9)放置在單個獨立包裝中。
[0031]內醯胺酶檢測試紙條的使用
[0032]1.樣品的準備:
[0033]將待檢測的生鮮乳取樣後恢復至室溫，樣品應無沉澱和雜質，不能太粘稠。現場採集的樣本最佳。
[0034]2.試紙條(9)的準備:
[0035]根據樣品數量將需要使用的試紙條(9)從冷藏環境中突出後，靜置30分鐘使之恢復到室溫，然後從密封包裝中取出相應數量的試紙條(9)和納米金微孔試劑(8)。所有實驗操作應在水平的實驗臺或者相應環境上操作，環境溫度無特殊限制。
[0036]3.檢測操作:
[0037](I)準備陽性對照:將準備好的樣品用一次性塑料吸管或者微量移液器吸取200 yl，加入到已經去掉蓋的納米金微孔試劑(8)中。注意:一個納米金微孔試劑(8)對應一個試紙條(9)，只能檢測一個樣品，不能重複使用。
[0038](I)準備樣品:將準備好的樣品用一次性塑料吸管或者微量移液器吸取250 Ul牛奶樣品，加入到已經去掉蓋的青黴素G微孔試劑(10)中。注意:一個青黴素G微孔試劑(10)對應一個試紙條(9)，只能檢測一個樣品，不能重複使用。
[0039](2)混勻:用移液器將牛奶樣本上下吸打若干次，使之與青黴素G微孔試劑(10)中的青黴素G標準品充分混勻。
[0040](3)加樣品:將準備好的含有青黴素G的樣品用一次性塑料吸管或者微量移液器吸取200 iU，加入到已經去掉蓋的納米金微孔試劑⑶中。注意:一個納米金微孔試劑(8)對應一個試紙條，只能檢測一個樣品，不能重複使用。
[0041](4)混合:用微量移液器或者一次性塑料吸管上下吸打納米金微孔試劑(8)中的液體使之充分混勻，室溫靜置3min。混勻後的微孔應呈現粉紅色或者淺粉色等。
[0042](5)插條:取出試紙條，並將其的帶標記的保護膜貼紙(5-1)插入微孔中。請不要用手指或者其他物體觸碰試紙條(9)的中段，即含有T線(6)和C線(7)的纖維素膜(3)。
[0043](6)計時:插條後開始計時5分鐘,觀察C線(7)是否出現,如果5min內C線(7)已經出現，即可判讀結果；如果C線(7)沒有出現，請延長2分鐘使液體爬升至C線(7)出現後判讀結果。
[0044]4.結果判定:圖5
[0045]陰性:如圖5第I個所示，C線(7)顯色，而T線(6)也顯色，且T線(6)顏色較C線(7)深；
[0046]陽性:C線(7)顯色，T線(6)顏色與C線(7)顏色相比較:
[0047]無效:如圖5中的第4和5個所示，C線(7)不顯示。
[0048]以上所述僅為本實用新型的較佳實施例而已，並不用以限制本實用新型，本實用新型涉及的材料均為已知材料，凡在本實用新型的精神和原則之內所作的任何修改、等同替換和改進等，均應包含在本實用新型的保護範圍之內。
【權利要求】
1.一種內醯胺酶檢測試紙條，由納米金微孔試劑(8)、試紙條(9)和青黴素G微孔試劑(10)組成，其特徵在於:所述的納米金微孔試劑(8)包括背板(I)，所述的背板(I)上從左至右分別貼有帶標記的保護膜貼紙(5-1)、樣品墊(2)、纖維素膜(3)、吸水墊(4)和保護膜貼紙(5-2)，所述的纖維素膜(3)上分別設有控制線C線(7)和檢測線T線(6)，所述的C線(7)標記的是青黴素結合蛋白6特異性單克隆抗體，所述的T線(6)標記的是氨苄青黴素-牛血清白蛋白結合物，所述的納米金微孔試劑(8)內設有青黴素結合蛋白6層(8-1)，所述的青黴素G微孔試劑(10)內設有青黴素G層(10-1)。
2.根據權利要求1所述的一種內醯胺酶檢測試紙條，其特徵在於:所述的青黴素G微孔試劑(10)還包括青黴素G微孔試劑塑料微孔(10-2)，以及蓋在青黴素G微孔試劑塑料微孔(10-2)上的青黴素G微孔試劑塑料蓋(10-3)。
3.根據權利要求2所述的一種內醯胺酶檢測試紙條，其特徵在於:所述的青黴素G微孔試劑塑料微孔(10-2)上設有作為加樣體積的青黴素G微孔試劑加樣刻度線(10-4)。
4.根據權利要求3所述的一種內醯胺酶檢測試紙條，其特徵在於:8個青黴素G微孔試劑(10)組成一排。
5.根據權利要求4所述的一種內醯胺酶檢測試紙條，其特徵在於:所述的納米金微孔試劑(8)還包括塑料微孔(8-2)，以及蓋在塑料微孔(8-2)上的塑料蓋(8-3)。
6.根據權利要求5所述的一種內醯胺酶檢測試紙條，其特徵在於:所述的塑料微孔(8-2)上設有作為加樣體積的加樣刻度線(8-4)。
7.根據權利要求6所述的一種內醯胺酶檢測試紙條，其特徵在於:8個納米金微孔試劑(8)組成一排。
8.根據權利要求7所述的一種內醯胺酶檢測試紙條，其特徵在於:所述的試紙條(9)的寬度為0.8cm，偏差範圍為0.78?0.82cm。
9.根據權利要求1-8任一所述的一種內醯胺酶檢測試紙條，其特徵在於:所述的納米金微孔試劑(8)、試紙條(9)和青黴素G微孔試劑(10)的數量按照1:1:1的比例密封於包裝袋或者包裝瓶中，保存在4-8 °C溫度下。
【文檔編號】G01N33/577GK203385734SQ201320541341
【公開日】2014年1月8日 申請日期:2013年9月2日 優先權日:2013年9月2日
【發明者】楊春江, 張曉燕, 李妍, 袁永欣, 馬孝斌 申請人:北京納百景弈生物科技有限公司