糜子抗旱調控基因myb類轉錄因子基因及其用途的製作方法

2023-06-02 12:41:21 1

專利名稱：糜子抗旱調控基因myb類轉錄因子基因及其用途的製作方法
技術領域：
本發明屬於植物基因工程技術領域。特別涉及一個來源於糜子的抗旱調控基因MYB類轉錄因子基因，其編碼蛋白及其在培育抗旱和水分高效利用植物中的用途。
背景技術：
目前作物抗旱性與水分利用效率的遺傳改良研究主要通過從多種生物(包括微生物、植物和動物)分離與生物水分缺失反應及其調節有關的蛋白質合成酶的相應基因。已成功地將克隆自微生物、昆蟲及植物的脯胺酸合成酶基因、海藻糖合成酶基因、傳遞信號和調控基因表達的轉錄因子等基因與不同的啟動子結合導入植物(如甜菜、菸草、擬楠芥菜等)，獲得有效表達，「工程植物」的耐旱性和耐寒性有一定增強，展示了十分誘人的前景，目前仍在進行深入研究。
糜子(Panicum miliaceum L.)屬禾本科黍屬(Panicum)，是起源於我國的一種古老的禾本科作物，在華夏民族的發展中發揮過重要的作用。具有耐旱、抗逆、水分利用效率高等特點，是禾穀類作物中最抗旱的作物之一，是植物抗旱性改良的優異基因資源，經檢索，未發現任何公開或報導糜子抗旱和水分高效利用相關調控基因克隆的相關文獻。

發明內容
本發明的目的在於，提供糜子抗旱調控基因MYB類轉錄因子基因及其用途。本發明採用抑制減法雜交技術分別構建了糜子抗旱種質復水與乾旱、復水與正常灌水的cDNA文庫，對文庫中所獲克隆進行了大量的隨機測序，從中篩選獲得了糜子抗旱調控基因MYB轉錄因子基因的部分序列，進而利用3』RACE和電子克隆技術相結合，獲得該基因的基因組DNA序列和cDNA序列。獲得的糜子MYB類轉錄因子基因的基因組序列為1739bp(見附圖1)，該基因包含兩個內含子，分別為121bp(347-467bp)和93bp(599-691bp)，三個外顯子。獲得的糜子MYB類轉錄因子基因PmMYB的全長cDNA為1525bp(見附圖2)，其中3』非翻譯區為212bp，5』非翻譯區為41bp，編碼區為1272bp，共編碼424個胺基酸。其C-端存在一個絲氨酸(Ser，S)豐富區，具有轉錄活性。
本發明的糜子抗旱調控基因MYB類轉錄因子基因的RT-PCR表達分析表明，該基因在在正常情況下有一定量的表達，在乾旱脅迫下(土壤相對含水量為36％)誘導表達，重度脅迫下(土壤相對含水量24％)表達受到抑制，復水後2h表達量最高，隨後下降到比正常生長還低的水平。說明該基因主要參與乾旱脅迫初期信號傳導過程，調控相關乾旱防禦的功能基因。該基因是糜子抗旱與水分高效利用的關鍵調控基因，利用它轉化小麥、玉米等植物，啟動相應的下遊基因，提高其抗旱性和水分利用效率，具有很大的應用潛力。


圖1是糜子MYB類轉錄因子基因的基因組序列；圖2是糜子MYB類轉錄因子基因的全長cDNA序列；圖3是糜子MYB類轉錄因子基因全長cDNA序列及推導的胺基酸序列，其中陰影部分為R2、R3重複； 為推測的轉錄激活區；圖4是糜子MYB類轉錄因子基因編碼胺基酸序列的疏水性分析；圖5是糜子MYB類轉錄因子基因編碼胺基酸序列的結構保守域分析；圖6是幾種植物MYB類轉錄因子基因胺基酸序列R2R3重複序列的多重比較；圖7是基於胺基酸序列構建的MYB類轉錄因子基因的系統進化樹；
圖8是糜子MYB類轉錄因子基因在不同水分處理和復水條件下表達的RT-PCR分析。
以下結合附圖和發明人給出的實施例對本發明作進一步的詳細說明。
具體實施例方式
1.糜子抗旱調控基因MYB類轉錄因子基因的克隆MYB類轉錄因子家族是植物轉錄因子中最大的家族之一，在植物的轉錄調控中起著非常重要的作用。MYB類轉錄因子基因的共同特徵是含有1-3個由51-53個胺基酸組成的、不完全重複的MYB結構域(R1，R2，R3)。在每個MYB結構域中一般含有3個保守的色氨酸(W)殘基，在植物R2R3-MYB蛋白中R3MYB結構域的第一個色氨酸常被疏水胺基酸(I，L，F)取代。
本發明通過抑制減法雜交(SSH)技術分別構建了糜子復水與乾旱、復水與正常灌水的cDNA文庫，對文庫中所獲克隆進行了隨機測序，從中篩選獲得了糜子抗旱調控基因MYB類轉錄因子基因的部分序列(RS366，GenBank收錄號DW177353)，與水稻MYB類轉錄因子基因(MYB18)具有較高的同源性，根據水稻MYB18的核酸序列，設計了兩對引物(eRS366-1正向5-AGTTGCTGCCGTTCTCCCA，反向5-CTGGTGACCTATTGAGCCCTGT；eRS366-2正向5-TTTCCACTGTGATGGCA，反向5-ATCTGGTGCTCTGTTCC)，對糜子抗旱種質的基因組DNA進行擴增，第一對引物擴增出一個1267bp的片段，第二對引物擴增出541bp的片段，兩條序列經過拼接，獲得糜子MYB基因的基因組序列為1739bp(序列見附圖1)，對其結構分析表明，該基因包含有兩個內含子，分別為121bp(347-467bp)、93bp(599-619bp)，三個外顯子。
20μL反應體系中包括cDNA第一鏈模板1μL，10×PCR Buffer 2μL，dNTP(2mmol/L)2μL，正向引物(10mmol/L)1μL，反向引物(10mmol/L)1μL，Taq DNA polymerase(5U/μL)0.2μL，ddH2O補齊至20μL。
PCR反應程序為95℃預變性3min，接著進行95℃40s，52-55℃(第一對引物55℃，第二對引物52℃)40s，72(90s，共35個循環；最後於72℃延伸8min，反應後於4℃保溫。1％瓊脂糖凝膠電泳檢測擴增產物。
利用引物(5-AGTTGCTGCCGTTCTCCCA-3和5-ATCTGGTGCTCTGTTCC-3)，採用RT-PCR方法從糜子乾旱後復水條件下的cDNA中擴增得到了糜子抗旱調控基因MYB類轉錄因子基因的全長cDNA序列(見附圖2)，全長cDNA為1525bp，其中3』非翻譯區為212bp，5』非翻譯區為41bp，編碼區為1272bp，共編碼424個胺基酸(見附圖3)。
2.糜子抗旱調控基因MYB類轉錄因子基因編碼胺基酸序列的初步分析大多數MYB轉錄因子具有轉錄激活功能，轉錄激活功能域一般存在於蛋白的中間或C-端，常以富含酸性胺基酸，脯氨酸、穀氨醯胺或絲氨酸/蘇氨酸為特徵。分析糜子抗旱調控基因MYB類轉錄因子基因，發現在其C-端存在一個絲氨酸(Ser，S)豐富區，推測該MYB基因具有轉錄活性。
軟體預測，該蛋白PI為6.71，MW為47273.90，存在一個小的疏水性區域(70-90位胺基酸，見附圖4)。該蛋白被定位在細胞核裡，這與其參與基因轉錄的功能相一致。
該基因編碼胺基酸的保守結構域分析顯示(見附圖5)，該基因具有兩個典型的MYB類轉錄因子基因的DNA結合區(DNA-binding domain)，分別為13-63、66-114位胺基酸，該基因屬於典型的R2R3-MYB轉錄因子。其R3結構域的第一個色氨酸殘基(Trp，W)被苯丙氨酸(Phe，F)取代。
對來源於水稻(Oryza sativa)、糜子(Panicum miliaceum)、玉米(Zeamays)、火炬松(Pinus taeda)、擬南芥(Arabidopsis thaliana)、辣椒(Capsicum annuum)、陸地棉(Gossypium hirsutum)、大麥(Hordeumvulgare)及茄子(Lycopersicon esculentum)等九種植物的MYB基因的R2、R3重複區進行了胺基酸的序列多重比較(見附圖6)，可以看出在這些物種中R2R3重複序列具有較高的一致性。
基於胺基酸序列的系統進化樹分析表明(見附圖7)，不同植物的MYB基因遺傳分化很大，糜子的MYB基因與水稻的相似程度最高，同是單子葉植物，大麥和玉米與糜子的MYB基因相似性分別只有46％和41％。
3.糜子抗旱調控基因MYB類轉錄因子基因表達模式的RT-PCR分析根據文獻合成了一對擴增珍珠粟(Pennisetum glaucum(L.)R.Br，pearlmillet)組成型表達的肌動蛋白(actin)基因片段的引物，對糜子的mRNA進行RT-PCR擴增，獲得一個171bp的產物，測序後的序列比對表明，該片段與水稻肌動蛋白(actin)具有較高的同源性，獲得的片段為糜子actin基因片段，以此基因作為內參確定不同處理的模板量。
採用根據該糜子MYB類轉錄因子基因序列設計的引物(5-CTGGTGACCTATTGAGCCC-3和5-CGGCAGAAAGGCATTGAC-3)，對糜子抗旱種質材料植株分別在土壤相對含水量為75％、36％、24％和復水後2h、6h、12h的葉片樣品提取的mRNA進行RT-PCR分析。
20μL反應體系中包括經內參調整的適宜體積的cDNA模板，10×PCRBuffer 2μL，dNTP(2mmol/L)2μL，正向引物(10mmol/L)0.5μL，反向引物(10mmol/L)0.5μL，Taq DNA polymerase(5U/μL)0.2μL，ddH2O補齊至20μL。
PCR反應程序為95℃預變性3min，接著進行95℃40s，55℃45s，72℃40s，共35個循環；72℃延伸8min，反應後於4℃保溫。1.5％瓊脂糖凝膠電泳檢測擴增產物。
RT-PCR表達模式分析表明(見附圖8)，該糜子抗旱調控基因MYB類轉錄因子基因在正常情況下有一定量的表達，在乾旱脅迫下(土壤相對含水量為36％)誘導表達，重度脅迫下(土壤相對含水量24％)表達受到抑制，復水後2h表達量最高，隨後下降到比正常生長還低的水平。說明該基因主要受乾旱脅迫初期和復水初期的信號的誘導，從而調控與乾旱防禦和復水快速生長相關的功能基因的表達。
本發明的糜子抗旱調控基因MYB類轉錄因子基因來源於最抗旱的禾本科作物糜子，為改良禾本科作物的抗旱性和水分利用效率提供了更好的選擇。且該基因屬於調控基因，可以啟動下遊一系列基因的表達，更便於應用到植物抗旱性和水分利用效率的改良，有效地提高植物的抗旱性和水分利用效率。
以下是發明人給出的實施例實施例1以該基因與含有相應植物啟動子(如CaMV 35等)的表達載體連接，構建糜子抗旱調控基因MYB類轉錄因子基因的表達載體，轉化大腸桿菌等獲得含有該基因的菌株；或者將該基因與含有相應植物啟動子(如CaMV 35等)的T-DNA雙元載體等連接，構建糜子抗旱調控基因MYB類轉錄因子基因的T-DNA表達載體，轉化大腸桿菌等獲得含有該基因的菌株，與相應的農桿菌株系進行融合，獲得含有該基因的農桿菌菌株。
實施例2對實施例1中獲得的大腸桿菌菌株或農桿菌菌株進行繁殖，提取含有糜子抗旱調控基因MYB類轉錄因子基因的表達載體的DNA或直接利用繁殖獲得的菌液，採用本領域工作人員共知的方法(如花粉管通道法、基因槍法、農桿菌介導法等)轉化小麥、玉米等作物或其它植物；篩選獲得該基因恰當表達的轉基因植株，改良現有作物或植物品種的抗旱性和水分利用效率。
序列表糜子抗旱調控基因MYB類轉錄因子基因的基因組DNA序列和cDNA序列基因組DNA序列AGTTGCTGCCGTTCTCCCACAAGTTCTACTCTATCAGACACCACTATATGAGCCCATATA 60AGCAGTTCGTCCACAATAATCCCACCCTTAAGCCATAAATTGCTGAGAGGTGTTCTTAGA 120ACCAGAGGATTACCTGCAGAGTTCTGTGCTGCTCCCCAAGGTGTGAGCTGTGCAGATTGC 180AGAGCTCAGCTTCAGCTTCTGCATTGCTTTCAATGGGGAGGCACTCCTGCTGTTACAAGC 240AGAAGCTGAGGAAGGGGCTCTGGTCTCCTGAGGAAGATGAGAAGCTCATGAACCACATAA 300CCAAACATGGGCATGGCTGCTGGAGCACTGTCCCAAAGCTTGCAGGTATAATCAAAATCC 360TGCACACTTTATTCTTCTCCATAATCAATTTCCACTGCTTCGTGTTCCTCTCCAAGGCAA 420CTTCTTTCTCCCAGTCTTCTCATAACGGCCCAATTAATGGTTGCAGGGCTTCAGAGATGT 480GGAAAGAGCCGCAGGCTGAGATGGATAAATTACCTGAGGCCTGACCTCAAAAGAGGTGCA 540TTCTCTCAGGAAGAGGAAGACCTTATCATTGAACTCCATGCTGTTTTGGGCAACAGGTAA 600ATTTTATCCCAAGTTGCACTGTCAGAATTTTGCACCAATTGCTTTAAAGCAAGCTTTCCT 660TAACTATGCCTTTTTCACGTAAATGACAGGTGGTCTCAGATTGCAACACGGTTGCCTGGA 720AGAACTGATAACGAGATCAAGAATCTCTGGAACTCAAGCATCAAGAAGAAGCTCCGGCAG 780AAAGGCATTGACCCCAACACCTACAAGCCCCTTGCCGAGGTTTTTCGCAAAGCAGCTCCC 840ACAATCAGTACTGAAAGAACCTCCGAGTCCAGTGATGTTGACCCTTCAAGTGGTGGCGCA 900CTTGGCAACTTGAGCCATATTCTCAGTGAGACAGCACAATCACCAGAGCTGCTGCCAGTG 960CTCGGTAAGCATCGCAAAGAAACTACTAGTTTGGCGCATCTAAGGGTGCCACCGAAGGAG 1020CTATTCCTTGATCAGCTTGTTTCTAGTCATGATAACCTGCCCGGCTGCCGCTCAACTGGC 1080CCAATCCCAAATTTCCCTTTCCAGCAGTTGATGTGCTACAGCAACGAACTTGGCAGCAAG 1140CATGGTGGCAGCACGAATTACCTCTGGTTTAACCAGAATGAGTCAAGCTGCAGCACCGTT 1200TCCACTGTGATGGCACCAGTTTCGCCGTCAACTCTCTCAACATCAACAGGGCTCAATAGG 1260TCACCAGAGAATCCACACTCTGGAGGTACTGGCATTCAGAGTACCCAATTCTATTGGGAT 1320ACGACTAATCCTAGCAGCAGCAGCAGTAAAGGAAGCAGTGGAAGCAACAGCTTGGGATTC 1380GAGCTGCAAAGCACAAGCTCAATTCTGGAGAATAGTATCTTCCCATGGACAGATTTATCA 1440CCAGATAAAAATAGCCACCTAGAGGAAGAACTCAAGTGGCCTGACTTGCTCCATGGAACC 1500TTTACAGATACACCAGCAACCATGCAGAATCTTAGCCAATCACTGTATGAAGATGTGGTC 1560AAAGCCGAGAGCCAATTCAACATGGAGGGCCTCTGTGCCGCTTGGTCTCAAAATCTGCAG 1620
CCACAGCAACATCTGCAGGTAGTATCCGATTTGTATGACAAGGATTTGCAGAGAATGTCC 1680TTGTCTTTTGAGAATATCTAGGCCACATGTTTCAGCATGAAGGGAACAGAGCACCAGAT 1740基因的cDNA序列AGTTGCTGCCGTTCTCCCACAAGTTCTACTCTATCAGACACCACTATATGAGCCCATATA 60AGCAGTTCGTCCACAATAATCCCACCCTTAAGCCATAAATTGCTGAGAGGTGTTCTTAGA 120ACCAGAGGATTACCTGCAGAGTTCTGTGCTGCTCCCCAAGGTGTGAGCTGTGCAGATTGC 180AGAGCTCAGCTTCAGCTTCTGCATTGCTTTCAATGGGGAGGCACTCCTGCTGTTACAAGC 240AGAAGCTGAGGAAGGGGCTCTGGTCTCCTGAGGAAGATGAGAAGCTCATGAACCACATAA 300CCAAACATGGGCATGGCTGCTGGAGCACTGTCCCAAAGCTTGCAGGGCTTCAGAGATGTG 360GAAAGAGCCGCAGGCTGAGATGGATAAATTACCTGAGGCCTGACCTCAAAAGAGGTGCAT 420TCTCTCAGGAAGAGGAAGACCTTATCATTGAACTCCATGCTGTTTTGGGCAACAGGTGGT 480CTCAGATTGCAACACGGTTGCCTGGAAGAACTGATAACGAGATCAAGAATCTCTGGAACT 540CAAGCATCAAGAAGAAGCTCCGGCAGAAAGGCATTGACCCCAACACCTACAAGCCCCTTG 600CCGAGGTTTTTCGCAAAGCAGCTCCCACAATCAGTACTGAAAGAACCTCCGAGTCCAGTG 660ATGTTGACCCTTCAAGTGGTGGCGCACTTGGCAACTTGAGCCATATTCTCAGTGAGACAG 720CACAATCACCAGAGCTGCTGCCAGTGCTCGGTAAGCATCGCAAAGAAACTACTAGTTTGG 780CGCATCTAAGGGTGCCACCGAAGGAGCTATTCCTTGATCAGCTTGTTTCTAGTCATGATA 840ACCTGCCCGGCTGCCGCTCAACTGGCCCAATCCCAAATTTCCCTTTCCAGCAGTTGATGT 900GCTACAGCAACGAACTTGGCAGCAAGCATGGTGGCAGCACGAATTACCTCTGGTTTAACC 960AGAATGAGTCAAGCTGCAGCACCGTTTCCACTGTGATGGCACCAGTTTCGCCGTCAACTC 1020TCTCAACATCAACAGGGCTCAATAGGTCACCAGAGAATCCACACTCTGGAGGTACTGGCA 1080TTCAGAGTACCCAATTCTATTGGGATACGACTAATCCTAGCAGCAGCAGCAGTAAAGGAA 1140GCAGTGGAAGCAACAGCTTGGGATTCGAGCTGCAAAGCACAAGCTCAATTCTGGAGAATA 1200GTATCTTCCCATGGACAGATTTATCACCAGATAAAAATAGCCACCTAGAGGAAGAACTCA 1260AGTGGCCTGACTTGCTCCATGGAACCTTTACAGATACACCAGCAACCATGCAGAATCTTA 1320GCCAATCACTGTATGAAGATGTGGTCAAAGCCGAGAGCCAATTCAACATGGAGGGCCTCT 1380GTGCCGCTTGGTCTCAAAATCTGCAGCCACAGCAACATCTGCAGGTAGTATCCGATTTGT 1440ATGACAAGGATTTGCAGAGAATGTCCTTGTCTTTTGAGAATATCTAGGCCACATGTTTCA 1500GCATGAAGGGAACAGAGCACCAGAT 1560
權利要求
1.糜子抗旱調控基因MYB類轉錄因子基因，其特徵在於該基因的基因組DNA序列和cDNA序列分別為(1)基因組序列全長為1739bp，包含121bp和93bp的兩個內含子，三個外顯子，其DNA序列為AGTTGCTGCCGTTCTCCCACAAGTTCTACTCTATCAGACACCACTATATGAGCCCATATA60AGCAGTTCGTCCACAATAATCCCACCCTTAAGCCATAAATTGCTGAGAGGTGTTCTTAGA 120ACCAGAGGATTACCTGCAGAGTTCTGTGCTGCTCCCCAAGGTGTGAGCTGTGCAGATTGC 180AGAGCTCAGCTTCAGCTTCTGCATTGCTTTCAATGGGGAGGCACTCCTGCTGTTACAAGC 240AGAAGCTGAGGAAGGGGCTCTGGTCTCCTGAGGAAGATGAGAAGCTCATGAACCACATAA 300CCAAACATGGGCATGGCTGCTGGAGCACTGTCCCAAAGCTTGCAGGTATAATCAAAATCC 360TGCACACTTTATTCTTCTCCATAATCAATTTCCACTGCTTCGTGTTCCTCTCCAAGGCAA 420CTTCTTTCTCCCAGTCTTCTCATAACGGCCCAATTAATGGTTGCAGGGCTTCAGAGATGT 480GGAAAGAGCCGCAGGCTGAGATGGATAAATTACCTGAGGCCTGACCTCAAAAGAGGTGCA 540TTCTCTCAGGAAGAGGAAGACCTTATCATTGAACTCCATGCTGTTTTGGGCAACAGGTAA 600ATTTTATCCCAAGTTGCACTGTCAGAATTTTGCACCAATTGCTTTAAAGCAAGCTTTCCT 660TAACTATGCCTTTTTCACGTAAATGACAGGTGGTCTCAGATTGCAACACGGTTGCCTGGA 720AGAACTGATAACGAGATCAAGAATCTCTGGAACTCAAGCATCAAGAAGAAGCTCCGGCAG 780AAAGGCATTGACCCCAACACCTACAAGCCCCTTGCCGAGGTTTTTCGCAAAGCAGCTCCC 840ACAATCAGTACTGAAAGAACCTCCGAGTCCAGTGATGTTGACCCTTCAAGTGGTGGCGCA 900CTTGGCAACTTGAGCCATATTCTCAGTGAGACAGCACAATCACCAGAGCTGCTGCCAGTG 960CTCGGTAAGCATCGCAAAGAAACTACTAGTTTGGCGCATCTAAGGGTGCCACCGAAGGAG 1020CTATTCCTTGATCAGCTTGTTTCTAGTCATGATAACCTGCCCGGCTGCCGCTCAACTGGC 1080CCAATCCCAAATTTCCCTTTCCAGCAGTTGATGTGCTACAGCAACGAACTTGGCAGCAAG 1140CATGGTGGCAGCACGAATTACCTCTGGTTTAACCAGAATGAGTCAAGCTGCAGCACCGTT 1200TCCACTGTGATGGCACCAGTTTCGCCGTCAACTCTCTCAACATCAACAGGGCTCAATAGG 1260TCACCAGAGAATCCACACTCTGGAGGTACTGGCATTCAGAGTACCCAATTCTATTGGGAT 1320ACGACTAATCCTAGCAGCAGCAGCAGTAAAGGAAGCAGTGGAAGCAACAGCTTGGGATTC 1380GAGCTGCAAAGCACAAGCTCAATTCTGGAGAATAGTATCTTCCCATGGACAGATTTATCA 1440CCAGATAAAAATAGCCACCTAGAGGAAGAACTCAAGTGGCCTGACTTGCTCCATGGAACC 1500TTTACAGATACACCAGCAACCATGCAGAATCTTAGCCAATCACTGTATGAAGATGTGGTC 1560AAAGCCGAGAGCCAATTCAACATGGAGGGCCTCTGTGCCGCTTGGTCTCAAAATCTGCAG 1620CCACAGCAACATCTGCAGGTAGTATCCGATTTGTATGACAAGGATTTGCAGAGAATGTCC 1680TTGTCTTTTGAGAATATCTAGGCCACATGTTTCAGCATGAAGGGAACAGAGCACCAGAT 1740(2)cDNA序列全長為1525bp，其中3』非翻譯區為212bp，5』非翻譯區為41bp，編碼區為1272bp，共編碼424個胺基酸，C-端存在一個絲氨酸豐富區；該基因的cDNA序列為AGTTGCTGCCGTTCTCCCACAAGTTCTACTCTATCAGACACCACTATATGAGCCCATATA60AGCAGTTCGTCCACAATAATCCCACCCTTAAGCCATAAATTGCTGAGAGGTGTTCTTAGA 120ACCAGAGGATTACCTGCAGAGTTCTGTGCTGCTCCCCAAGGTGTGAGCTGTGCAGATTGC 180AGAGCTCAGCTTCAGCTTCTGCATTGCTTTCAATGGGGAGGCACTCCTGCTGTTACAAGC 240AGAAGCTGAGGAAGGGGCTCTGGTCTCCTGAGGAAGATGAGAAGCTCATGAACCACATAA 300CCAAACATGGGCATGGCTGCTGGAGCACTGTCCCAAAGCTTGCAGGGCTTCAGAGATGTG 360GAAAGAGCCGCAGGCTGAGATGGATAAATTACCTGAGGCCTGACCTCAAAAGAGGTGCAT 420TCTCTCAGGAAGAGGAAGACCTTATCATTGAACTCCATGCTGTTTTGGGCAACAGGTGGT 480CTCAGATTGCAACACGGTTGCCTGGAAGAACTGATAACGAGATCAAGAATCTCTGGAACT 540CAAGCATCAAGAAGAAGCTCCGGCAGAAAGGCATTGACCCCAACACCTACAAGCCCCTTG 600CCGAGGTTTTTCGCAAAGCAGCTCCCACAATCAGTACTGAAAGAACCTCCGAGTCCAGTG 660ATGTTGACCCTTCAAGTGGTGGCGCACTTGGCAACTTGAGCCATATTCTCAGTGAGACAG 720CACAATCACCAGAGCTGCTGCCAGTGCTCGGTAAGCATCGCAAAGAAACTACTAGTTTGG 780CGCATCTAAGGGTGCCACCGAAGGAGCTATTCCTTGATCAGCTTGTTTCTAGTCATGATA 840ACCTGCCCGGCTGCCGCTCAACTGGCCCAATCCCAAATTTCCCTTTCCAGCAGTTGATGT 900GCTACAGCAACGAACTTGGCAGCAAGCATGGTGGCAGCACGAATTACCTCTGGTTTAACC 960AGAATGAGTCAAGCTGCAGCACCGTTTCCACTGTGATGGCACCAGTTTCGCCGTCAACTC 1020TCTCAACATCAACAGGGCTCAATAGGTCACCAGAGAATCCACACTCTGGAGGTACTGGCA 1080TTCAGAGTACCCAATTCTATTGGGATACGACTAATCCTAGCAGCAGCAGCAGTAAAGGAA 1140GCAGTGGAAGCAACAGCTTGGGATTCGAGCTGCAAAGCACAAGCTCAATTCTGGAGAATA 1200GTATCTTCCCATGGACAGATTTATCACCAGATAAAAATAGCCACCTAGAGGAAGAACTCA 1260AGTGGCCTGACTTGCTCCATGGAACCTTTACAGATACACCAGCAACCATGCAGAATCTTA 1320GCCAATCACTGTATGAAGATGTGGTCAAAGCCGAGAGCCAATTCAACATGGAGGGCCTCT 1380GTGCCGCTTGGTCTCAAAATCTGCAGCCACAGCAACATCTGCAGGTAGTATCCGATTTGT 1440ATGACAAGGATTTGCAGAGAATGTCCTTGTCTTTTGAGAATATCTAGGCCACATGTTTCA 1500GCATGAAGGGAACAGAGCACCAGAT。
1560
2.權利要求1所述的糜子抗旱調控基因MYB類轉錄因子基因，用於與相應的植物啟動子連接，構建糜子MYB類轉錄因子基因的表達載體或轉化獲得的糜子MYB類轉錄因子基因的宿主菌的用途。
3.如權利要求2所述的用途，其特徵在於，通過基因槍、農桿菌介導或花粉管通道等方法將糜子抗旱調控基因MYB類轉錄因子基因的表達載體導入小麥、玉米等作物或其它植物，獲得的抗旱性和水分利用效率提高的轉基因植物細胞系及轉基因植株。
全文摘要
本發明公開了糜子抗旱調控基因MYB類轉錄因子基因及其用途，該基因的基因組序列為1739bp，包含121bp(347－467bp)和93bp(599－691bp)的兩個內含子，三個外顯子；全長cDNA序列為1525bp，其中3』非翻譯區為212bp，5』非翻譯區為41bp，編碼區為1272bp，共編碼424個胺基酸，C－端存在一個絲氨酸(Ser，S)豐富區。該基因的RT－PCR表達分析表明，該基因在正常情況下有一定量的表達，在乾旱脅迫下(土壤相對含水量為36％)誘導表達，重度脅迫下(土壤相對含水量24％)表達受到抑制，復水後2h表達量最高，隨後下降到比正常生長還低的水平。利用該基因轉化小麥、玉米等作物和其它植物，提高其抗旱性和水分利用效率，具有很大的應用潛力。
文檔編號C07K14/415GK1908172SQ200610104478
公開日2007年2月7日 申請日期2006年8月7日 優先權日2006年8月7日
發明者胡銀崗, 林凡雲 申請人:西北農林科技大學