抑制低密度脂蛋白氧化和動脈粥樣硬化的方法
2023-06-02 15:39:36
專利名稱:抑制低密度脂蛋白氧化和動脈粥樣硬化的方法
動脈粥樣硬化,正如在其主要的臨床併發症-局部缺血性心臟病中所顯示的情況那樣,它仍然是工業化國家中造成死亡的一個主要原因。目前普遍可接受的觀點是,動脈粥樣硬化可開始於動脈內皮的局部損傷,隨之而來的是動脈平滑肌細胞從中間層到內膜層的增生,並同時出現導致損傷區內海綿狀細胞形成的脂質沉積和巨噬細胞累積。隨著動脈粥樣硬化病變蝕斑的發展,所包括的受影響的血管逐漸地越來越多,最後導致局部缺血或者梗塞形成。因此,希望提供抑制需治療病人動脈粥樣硬化發展的方法。
根據動物實驗和實驗室研究的發現,有證據表明,低密度脂蛋白(LDL)脂質的過氧化作用,例如LDL的膽固醇酯和磷脂的不飽和脂肪酸部分的過氧化作用,會促進在單核細胞(monoctye)/巨噬細胞內膽固醇的累積作用,並且這些細胞最後將被轉變成海綿狀細胞並沉積在血管壁內皮下空隙內。血管壁內海綿狀細胞的累積被認為是動脈粥樣硬化病變蝕斑形成的一個早期過程。因此相信,LDL脂質過氧化作用對被促進的膽固醇在血管壁內的累積和隨後形成動脈粥樣硬化病變蝕斑是一個重要的先決條件。例如,已有證據顯示,單核細胞/巨噬細胞均以相當低的速率吸收和降解正常自然形成的LDL,並沒有明顯的膽固醇累積。相反,已被氧化的LDL卻被這些單核細胞/巨噬細胞以非常高的速率吸收,並伴有明顯的膽固醇累積(Parthasarathy等,J.ClinInvest.77,641(1986))。因此希望能為需要治療的病人提供抑制LDL脂質過氧化作用的方法。
已有證據表明,一種已知的抗氧化劑,2,2′-雙(3,5-二叔丁基-4-羥基苯硫基)丙烷(也被稱為普羅布考),可以某種方式阻止動脈粥樣硬化的發展,這種方式與其對降低血漿膽固醇水平的作用無關[見Kita等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA84,5928(1987);Carew等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA84,7725,(1987)]。據信某些抗氧化劑(例如普羅布考)可通過抑制LDL的過氧化作用並進而通過阻止膽固醇在單核細胞/巨噬細胞(所述細胞最終將被轉變成海綿狀細胞,並沉積在血管壁的內皮下空隙中)中的加速累積來阻止或抑制動脈粥樣硬化的發展(見Parthasarathy等,J.Clin.Invest.77,641(1986)]。因此希望能提供抑制LDL過氧化作用的方法。
本發明涉及某些化合物,它們可用作LDL脂質氧化作用、動脈粥樣硬化、高度糖基化最終產物(AGE)或AGE蛋白質的糖化作用(glycation),以及超氧化物陰離子和其他活性氧中間體的抑制劑。
本發明提供了抑制人或其他哺乳動物受試對象LDL氧化作用、動脈粥樣硬化、AGE,以及超氧化物陰離子和其他活性氧中間體的方法,該方法包含給上述受試對象施用藥學上有效劑量的下式化合物及其可藥用鹽和溶劑化物,
其中R1和R3獨立地為氫、-CH3、 (C1-C6烷基)、或 ,在此Ar是可以任意取代的苯基;R2可以是 本發明涉及如下的發現經選擇的一些化合物,即式Ⅰ化合物可用於抑制LDL氧化作用、動脈粥樣硬化、AGE,以及超氧化物陰離子和其他活性氧中間體。本發明所提供的治療方法是通過對需要治療的病人或其他哺乳動物給藥抑制上述作用有效劑量的式Ⅰ化合物或其可藥用鹽或溶劑化物來實施的。術語「抑制」的含義包括其通常可接受的意義,即包括對易患上述損害過程之一的患者進行預防性治療以及控制和/或治療已經存在的上述所列舉的問題。因此,該方法包括醫學治療和/或預防性治療。
一般來講,本發明化合物可以與常用的賦形劑、稀釋劑或載體進行配製並且可壓製成片劑,或者也可以配製成方便口服給藥的酏劑或溶液,或者通過肌內注射或靜脈注射途徑給藥。本發明化合物還可以經皮給藥,並且可以配製成緩釋劑型等。
可以按照已有的方法製備本發明方法中所用的式Ⅰ化合物,如按美國專利4,133,814、4,418,068和4,380,635中所述方法進行製備,所有這些文獻均收編在本發明中作為參考。一般來講,該方法從帶有6-羥基和2-(4-羥基苯基)的苯並[b]噻吩開始。起始化合物被保護、醯化和脫保護,生成式Ⅰ化合物。以上討論的美國專利提供了製備上述化合物的實施例。任意取代的苯基包括苯基和用C1~C6烷基、C1~C4烷氧基、羥基、硝基、氯、氟或三(氯或氟)甲基一次或二次取代的苯基。
本發明包括使用稱為雷洛昔芬的下式化合物, 用於本發明方法中的化合物可以與各種有機和無機酸、鹼生成可藥用的酸和鹼加成鹽,可藥用的酸和鹼加成鹽包括通常用於藥物化學上的生理上適用的鹽。所述鹽也是本發明的一部分。用於生成上述鹽的典型的無機酸包括鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硝酸、硫酸、磷酸、連二磷酸等。還可以應用由有機酸生成的鹽,所述有機酸有脂肪族一和二羧酸、苯基取代的鏈烷酸、羥基鏈烷酸和羥基鏈烷二酸,芳香族酸、脂肪族酸和芳香族磺酸。因此所述可藥用鹽包括乙酸鹽、苯乙酸鹽、三氟乙酸鹽、丙烯酸鹽、抗壞血酸鹽、苯甲酸鹽、氯代苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、羥基苯甲酸鹽、甲氧基苯甲酸鹽、甲基苯甲酸鹽、鄰-乙醯氧基苯甲酸鹽、萘-2-苯甲酸鹽、溴化物、異丁酸鹽、苯丁酸鹽、β-羥基丁酸鹽、丁炔-1,4-二酸鹽、己炔-1,4-二酸鹽、癸酸鹽、辛酸鹽、氯化物、肉桂酸鹽、檸檬酸鹽、甲酸鹽、富馬酸鹽、羥基乙酸鹽、庚酸鹽、馬尿酸鹽、乳酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、羥基馬來酸鹽、丙二酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、煙酸鹽、異煙酸鹽、硝酸鹽、草酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、對苯二酸鹽、磷酸鹽、磷酸一氫鹽、磷酸二氫鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、丙炔酸鹽、丙酸鹽、苯丙酸鹽、水楊酸鹽、癸二酸鹽、琥珀酸鹽、辛二酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、焦硫酸鹽、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、磺酸鹽、苯磺酸鹽、對溴苯磺酸鹽、氯代苯磺酸鹽、乙磺酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、甲磺酸鹽、萘-1-磺酸鹽、萘-2-磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、二甲苯磺酸鹽、酒石酸鹽等。優選的鹽是鹽酸鹽。
可藥用的酸加成鹽一般可通過使式Ⅰ化合物與等摩爾或過量的酸反應製得。反應物通常於互溶劑如乙醚或苯中進行反應。鹽一般在約1小時~10天內從溶液中析出,並且可以經過濾分離,或者可按常規方法除去溶劑。
通常用於生成鹽的鹼包括氫氧化銨、鹼金屬和鹼土金屬氫氧化物、碳酸鹽和碳酸氫鹽,以及脂肪族和芳香族的胺,脂肪族二胺和羥基烷基胺。尤其用於製備加成鹽的鹼包括氫氧化銨、碳酸鉀、碳酸氫鈉、氫氧化鈣、甲胺、二乙胺、乙二胺、環己胺和乙醇胺。
與衍生它們的化合物相比較,可藥用鹽一般具有提高溶解度的性質,因此它們通常更適用於配製成液體或乳劑。
藥物製劑可以按本技術領域已知的方法製備。例如,將所述化合物與常用的賦形劑、稀釋劑或載體一起配製,並可配製成片劑、膠囊劑、懸浮液、粉劑等。適用於上述製劑的賦形劑、稀釋劑和載體的實例包括如下填充劑和增量劑如澱粉、糖類、甘露糖醇以及矽衍生物;粘合劑如羧甲基纖維素和其他的纖維素衍生物,藻酸鹽、明膠和聚乙烯吡咯烷酮;溼潤劑如甘油;崩解劑如瓊脂、碳酸鈣和碳酸氫鈉;阻滯溶解劑如石蠟;吸收促進劑如季銨化合物;表面活性劑如鯨蠟醇、單硬脂酸甘油酯;吸附載體如高嶺土和膨潤土;以及潤滑劑如滑石、硬脂酸鈣和硬脂酸鎂以及固體聚乙二醇類。
本發明化合物也可以配製成方便口服的酏劑或溶液,或者配製成適於非經胃腸道(如經肌內、皮下或靜脈途徑)給藥的溶液。另外,本發明化合物還非常適用於配製成緩釋劑型等。緩釋製劑可以這樣構成,以使它們僅僅或最好在腸道的特定部位並可能在一定時間內釋放活性成分。包衣、包袋和保護基質可以由例如聚合物質或蠟製得。
動脈粥樣硬化疾病的特徵在於動脈粥樣硬化損傷或病變蝕斑的發展和增長。對那些需要進行動脈粥樣硬化治療的病人作鑑別診斷主要取決於專業醫生的能力和知識。例如,患有臨床顯著的動脈粥樣硬化的病人,或者是有發展成臨床顯著的動脈粥樣硬化危險的病人都是需要進行動脈粥樣硬化治療的病人。一個精於專業的臨床醫生藉助於臨床檢驗、身體檢查以及醫療史/家族史,可以容易地決定某個病人是否是需要進行動脈粥樣硬化治療的病人。
式(Ⅰ)化合物的抗動脈粥樣硬化的有效量,就是對需要治療的病人抑制其動脈粥樣硬化發展或增長有效的量。因此,對一個動脈粥樣硬化病人成功的治療指標應該包括能有效地減緩、中斷、阻止或者停止動脈粥樣硬化損傷或病變蝕斑的發展或增長,並不一定要顯示動脈粥樣硬化完全被消除。此外不言而喻並且為精於專業的醫生所了解的是,成功地治療動脈粥樣硬化還可以包括阻止動脈粥樣硬化損傷或病變蝕斑形成的預防性治療。
因為所述化合物能抑制由銅或者由基於巨噬細胞的氧化作用而誘發的LDL氧化作用,所以本發明的應用範圍包括抑制形成高度糖基化最終產物(AGE)(包括某些蛋白質,如AGE-白蛋白、AGE-膠原和AGE-LDL的糖化作用)。例如,在糖尿病患者中所觀察到的心血管併發症,據信是由於,或者至少部分地由於AGE-修飾的蛋白質的量的增加。因此,本發明還包括抑制由於AGE修飾蛋白質含量的增高而導致的疾病。
本發明也包括抑制超氧化物陰離子以及其它活性氧中間體(ROI)的含量/用量,這類化合物由於它們具有清除自由基的能力,因此認為它們可用於抑制諸如在心肺分流術、胰腺炎、以及與高氧含量有關的長期呼吸療法問題之後所常觀察到的急性呼吸窘迫症候群、全身性炎性反應等情況。
已經知道LDL脂質過氧化作用,例如LDL膽固醇酯和磷脂的不飽和脂肪酸部分的過氧化作用會促進膽固醇在巨噬細胞內沉積,這些巨噬細胞繼而將沉積在血管壁內,並轉變成海綿狀細胞。對需要抑制LDL脂質過氧化作用的那些病人的鑑別診斷,主要取決於精通專業的醫生的能力和知識。例如,在上述所定義的需要對動脈粥樣硬化進行治療的病人,也是需要抑制LDL脂質過氧化作用的病人。式Ⅰ化合物的有效抗氧化劑的用量也就是抑制病人血中LDL脂質過氧化作用的有效量。
所述化合物用於治療所列舉的併發症的有效劑量可以通過使用常規的技術並通過觀察在類似的情況下所得到的結果來確定。在確定有效劑量的過程中,應該考慮到多種因素,它們包括(但是並不僅僅局限於此)病人的性別、體重、年齡和一般的健康狀況、所患的具體病症、所患疾病發展的程度或其嚴重性、個別病人的反應、所施用的特定化合物、給藥方案、給藥製劑的生物利用度特徵、所選擇的給藥劑量範圍及配伍藥物的使用。
一般來講,每日可接受的且有效的劑量可從每日大約0.1mg到約1000mg,更通常是每日大約50mg到約200mg。對於需要治療的受試對象,將以這樣的劑量給藥從每日一次到大約每日三次,或更經常地給藥以有效地抑制所列舉的某種病症。
通常式Ⅰ化合物以酸加成鹽的形式給藥較好,正如施用帶有鹼性基團(例如哌啶子基環)的藥物所慣用的那樣。通過口服途徑給予所述化合物也是有利的。為此,提供下述口服劑型。
製劑在下述製劑中「活性成分」是指式Ⅰ化合物。
製劑1明膠膠囊劑硬明膠膠囊按下面方法製備成分用量(mg/膠囊)活性成分0.1-1000
澱粉,NF0-650可流動的澱粉粉末0-650聚矽氧烷流體(350釐沲)0-15將上述成分混合,通過美國45號篩並將其裝入硬明膠膠囊。
式Ⅰ化合物(這裡為雷洛昔芬)具體的膠囊劑的實施例包括下述製劑2雷洛昔芬膠囊劑成分用量(mg/膠囊)雷洛昔芬1澱粉,NF112可流動的澱粉粉末225.3聚矽氧烷流體(350釐沲)1.7製劑3雷洛昔芬膠囊劑成分用量(mg/膠囊)雷洛昔芬5澱粉,NF108可流動的澱粉粉末225.3聚矽氧烷流體(350釐沲)1.7
製劑4雷洛昔芬膠囊劑成分用量(mg/膠囊)雷洛昔芬10澱粉,NF103可流動的澱粉粉末225.3聚矽氧烷流體(350釐沲)1.7製劑5雷洛昔芬膠囊劑成分用量(mg/膠囊)雷洛昔芬50澱粉,NF150可流動的澱粉粉末397聚矽氧烷流體(350釐沲)3.0按照所提供的合理的改變,還可以將上述具體的製劑進行變化。
用下述成分製備片劑製劑6片劑成分用量(mg/片)
活性成分0.1-1000微晶纖維素0-650煅制二氧化矽0-650硬脂酸0-15將上述成分混合併壓製成片劑。
另外,每片含0.1~1000mg活性成分的片劑可以按下法製備製劑7片劑成分用量(mg/片)活性成分0.1-1000澱粉45微晶纖維素35聚乙烯吡咯烷酮(為10%的水溶液)4羧甲基纖維素鈉4.5硬脂酸鎂0.5滑石1將活性成分、澱粉和纖維素通過美國45號篩,並充分地混合。使聚乙烯吡咯烷酮溶液與得到的粉末混合,然後再通過美國14號篩。得到的顆粒於50~60℃乾燥並通過美國18號篩。然後將預先通過美國60號篩的羧甲基纖維素鈉、硬脂酸鎂和滑石加到顆粒中,在混合以後將其在壓片機上壓製成片劑。
每5ml劑量含0.1-1000mg藥物的各個懸浮液可按下法製備製劑8懸浮液成分用量(mg/5ml)活性成分0.1-1000mg羧甲基纖維素鈉50mg糖漿1.25mg苯甲酸溶液0.10ml調味劑適量著色劑適量純化水加至5ml將所述藥物通過美國45號篩並與羧甲基纖維素鈉和糖漿混合,得到調勻的糊狀物。用一些水將苯甲酸溶液、調味劑和著色劑稀釋,並於攪拌下加入。再加入足量的水至所需體積。
試驗方法測定法1硫巴比土酸測定法用於測定雌二醇和本發明化合物A抑制LDL過氧化作用的程度。此測定法由Schuh等(PNAS 753173,1978)描述過,並被Morel等(Lab Invest 55419,1986)進行過改進。將1mL LDL溶液(含LDL 250微克(μg))與1-30μM不同量的雌二醇或本發明化合物A一道,在有5μM CuSO4存在下於37℃共同溫育5-18小時。溫育完成後,加入1mL25%三氯乙酸和1mL1%硫巴比土酸,然後將全部樣品煮沸45分鐘,並在515nm激發波長和553nm發射波長下測定產生的螢光。
(化合物A是式Ⅰ化合物,其中R1和R3是氫,R2是吡咯烷子基)TBAR單位條件25μM5μM1μM0μM化合物A78109142356雌二醇160153259356對照物(無銅)90909090測定法2將取自小白鼠腹膜腔內的固有巨噬細胞用無血清F10培養基稀釋,加入細胞培養板內,每孔1×106個細胞。將已經過透析和過濾(通過0.2微米濾器)處理的LDL加入培養板的每個孔內(每孔加入500μg),LDL的最終濃度為1mg/ml,然後加入1-5μM化合物A或對照物處理巨噬細胞24小時。標明只有培養基的各孔是在同一塊培養板與沒有巨噬細胞的F10培養基溫育過夜的LDL。這些孔的測定值將從存在固有巨噬細胞時所得到的TBAR值中減去,測定值反映LDL引起巨噬細胞改變的程度。
條件TBAR單位對照物130化合物A5μM30化合物A2.5μM75化合物A1μM129雌二醇25μM30
權利要求
1.適用於抑制LDL氧化作用的藥用組合物,該藥用組合物包含作為活性成分的下式化合物或其可藥用的鹽或溶劑化物, 其中R1和R3獨立地為氫、-CH3、 (C1-C6烷基)或 ,這裡Ar是任意取代的苯基;R2系選自吡咯烷子基(pyrrolidino)、六亞甲基亞氨基和哌啶子基。
2.適用於抑制動脈粥樣硬化的藥用組合物,該藥用組合物包含作為活性成分的下式化合物或其可藥用的鹽或溶劑化物, (Ⅰ)其中R1和R3獨立地為氫、-CH3、 (C1-C6烷基)、或 ,這裡Ar是任意取代的苯基;R2系選自吡咯烷子基、六亞甲基亞氨基和哌啶子基。
3.適用於抑制局部缺血性心臟病的藥用組合物,該藥用組合物包含作為活性成分的下式化合物或其可藥用的鹽或溶劑化物, 其中R1和R3獨立地為氫、-CH3、 (C1-C6烷基)、或 ,這裡Ar是任意取代的苯基;R2系選自吡咯烷子基、六亞甲基亞氨基和哌啶子基。
4.適用於抑制超氧化物陰離子和其他活性氧中間體的藥用組合物,該藥用組合物包含作為活性成分的下式化合物或其可藥用的鹽或溶劑化物, 其中R1和R3獨立地為氫,-CH3、 (C1-C6烷基)、或 ,這裡Ar是任意取代的苯基;R2系選自吡咯烷子基、六亞甲基亞氨基和哌啶子基。
5.適用於抑制高度糖基化作用最終產物的藥用組合物,該藥用組合物包含作為活性成分的下式化合物或其可藥用的鹽或溶劑化物, 其中R1和R3獨立地為氫、-CH3、 (C1-C6烷基)、或 ,這裡Ar是任意取代的苯基;R2系選自吡咯烷子基、六亞甲基亞氨基和哌啶子基。
全文摘要
用於抑制LDL氧化作用、動脈粥樣硬化、高度糖基化作用最終產物、超氧化物陰離子和其他活性氧中間體的方法,該方法包括給需要治療的人或其他哺乳動物給藥有效量的式I化合物及其可藥用的鹽和溶劑化物,其中R
文檔編號A61K31/445GK1108090SQ9411927
公開日1995年9月13日 申請日期1994年12月19日 優先權日1993年12月21日
發明者S·H·朱克曼 申請人:伊萊利利公司