一種用於教槽料的生物飼料及教槽料的製作方法
2023-06-29 09:36:36
本發明屬於動物飼料領域，特別涉及一種用於教槽料的生物飼料以及添加有該生物飼料的教槽料。
背景技術：
：生物飼料即發酵飼料是目前國內外畜牧工作者研究與開發的熱點，目前就合理應用我國飼料原料資源、加強飼料和畜產品安全生產，促進養殖場減排、降低環境汙染等諸多方面都顯示出了很好的前景，因此發展生物飼料對於國內外的畜牧行業具有重大的戰略意義。據悉國外的生物飼料研究從20世紀80年代就已經開始起步，但是真正發展起來卻是在20世紀90年代之後。我國對於生物飼料的研究起步較晚，開始於近幾年的時間。國外生物的活性飼料添加劑研究開發進展迅速，目前而言行業內的總體水平高於國內，尤其在飼用生物活性添加劑的生理生化研究方面國外研究者的水平相對較高。而我國生物飼料的研究除少數傳統發酵產品外，普遍存在生產技術水平不夠完善、品種少、應用技術不配套等諸多問題。然而隨著行業的發展與進步，目前我國生物飼料的開發無論是理論研究還是實際應用都呈現出高速發展的態勢。隨著現代生物技術的大量廣泛應用，在酶製劑的發酵菌種選育、發酵工藝的改良和生產水平的進步等方面已經趕上甚至部分領域已經超過發達國家的相應水平，如耐高溫植酸酶裸酶生產技術等都已經走在世界前列。目前抗生素替代品益生菌、益生元和天然植物提取物等方面的研究開發也是進行的如火如荼，目前取得了一定的成績。隨著全社會對畜產品安全關注的進一步提升，發酵飼料原料，甚至是全價飼料發酵的研究與應用成為行業發展的大趨勢。然而，諸如益生素的應用技術、抗菌肽的 生產應用技術等還存在許多問題。發酵飼料是指在人工控制條件下，微生物通過自身的代謝活動，將植物性、動物性和礦物性物質中的抗營養因子分解或轉化，產生更能被畜禽採食、消化、吸收的養分並且無毒害作用的飼料原料，發酵飼料具有改善飼料的適口性、刺激畜禽採食、提高飼料中營養物質消化率及利用率的功能，還有益於畜禽腸道健康和增強免疫力，降解飼料中的有毒物質，產生促生長因子，有效地抑制消化道中的大腸桿菌、沙門氏菌及一些致病性細菌與病原體的繁殖與生長。教槽料是乳豬階段的飼料產品，也是乳豬從出生後至4周齡這一階段的一種含有高營養成分的專用飼料產品。優質教槽料至少應該具備適於消化和營養吸收；適口性好；營養全面均衡；豬只發病率低；無斷奶應激現象。而現在的教槽料通常含有許多蛋白源飼料，成本較高，因此迫切需要一種成本較低，適口性好，教槽效果優異的教槽料。技術實現要素：為解決上述問題，本發明的目的在於提供一種用於教槽料的生物飼料及教槽料。本發明提供的用於教槽料的生物飼料，由含水量20-50％的飼料原料在15℃-35℃的溫度下，發酵3-10d製得，所述活性飼料中，活菌數≥1×109個/g，含有機酸≥2％，所述飼料原料含有下述重量配比的組分：酵母菌0.05-0.2g/kg，乳酸菌0.05-0.2g/kg，芽孢桿菌0.05-0.2g/kg，膨化去皮豆粕500-800g/kg，玉米粉50-100g/kg，小麥麩100-300g/kg。在本發明一個實施方案中，所述的用於教槽料的生物飼料由含水量30％的飼料原料在30℃的溫度下，密封發酵72製得，所述飼料原料含有下述重量配比的組分：酵母菌0.1g/kg，乳酸菌0.1g/kg，芽孢桿菌0.1g/kg，膨化去皮豆粕525g/kg，玉米粉75g/kg，小麥麩225g/kg，水175g/kg。其中所述的酵母菌，乳酸菌，芽孢桿菌的活菌數為20-30億個/g。其中，所述的酵母菌為釀酒酵母菌CGMCCNo.6560(公開於CN201210430095.1)，所述的芽孢桿菌為枯草芽孢桿菌CGMCCNo.8148，所述乳酸菌為植物乳桿菌CGMCCNo.8150。其中，膨化去皮豆粕發酵前經粉碎，粉碎篩片為0.8×0.8mm，玉米粉碎篩片為0.8×0.8mm，小麥麩粉碎篩片為0.8×0.8mm。本發明還提供一種豬教槽料，在教槽料全價料中用佔全價料5％-10％質量百分比的生物飼料替代魚粉作為蛋白質原料。在本發明優選的實施方案中，所述的豬教槽料含有如下重量配比的組分：玉米30％、膨化玉米20％、豆粕17％、蔗糖3％、葡萄糖3％、生物飼料6％、發酵豆粕8％、血漿蛋白粉6％、磷酸二氫鈣2％、石粉2％、飼料用鹽1％、98.5％賴氨酸0.3％、蛋氨酸0.2％、色氨酸0.01％、酸化劑0.5％、乳豬預混料1.5％。本發明中，所述的枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)、植物乳桿菌(Lactobacillusplantarum)具有良好的耐胃酸、耐腸液、耐膽鹽(芽孢桿菌耐高溫)等抗逆性能和產酸、產酶、抑制病原菌等益生功能，為申請人從健康動物腸道中分離、選育得到，並於2013年9月11日保藏於中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，簡稱CGMCC，地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所，保藏編號分別為：CGMCCNo.8148、CGMCCNo.8150。本發明所選育的枯草芽孢桿菌CGMCCNo.8148在人工模擬胃液(pH2.0～4.0)中處理3h，存活率在65.8％以上；在人工模擬腸液中處理3h，存活率在74.7％；在豬膽鹽溶液(濃度0.3～3g/kg)處理24h，存活率為51.2％以上；85～100℃處理3min，存活率為11.2％以上；對鏈黴素、多粘菌素B、林可黴素3種抗生素有耐藥性；可以產生一定量的蛋白酶、脂肪酶、澱粉酶、纖維素酶、木聚糖酶，且效果均優於 申請號201110116641.X中所用的枯草芽孢桿菌CGMCCNo.4628。本發明所選育的植物乳桿菌CGMCCNo.8150在人工模擬胃液(pH2.0～4.0)中處理3h，存活率在31.3％以上；在人工模擬腸液中處理3h，存活率在33.0％；在豬膽鹽溶液(濃度0.3～3g/kg)處理24h，存活率為3.7％以上；對頭孢吡肟、慶大黴素、大觀黴素、鏈黴素、多粘菌素B、環丙沙星、萬古黴素7種抗生素有耐藥性；對大腸桿菌K88、K99均有很好的抑制作用，抑菌圈直徑分別為18.60mm、15.43mm。本發明的技術方案，具有以下優點：1、本發明當中的乳酸菌活性強，可以耐受高溫及酸性環境，因此在發酵過程中會抑制雜菌的生長，並產生大量的有機酸及小肽，提高仔豬的適口性，還有大量的活菌可以進入到仔豬的腸道，在仔豬的胃腸環境中發揮抗菌功能，提高仔豬的免疫力，降低仔豬腹瀉率，提高仔豬成活率。2、本發明當中的酵母菌可以產生大量的B族維生素及小肽，提高仔豬的免疫能力。3、本發明當中的芽孢桿菌，可以產生大量的蛋白酶、澱粉酶等，在進入仔豬胃腸道後提高仔豬對營養物質的消化率。4、本發明中抗營養因子大大降低，減少了飼料的浪費。5、本發明中蛋白質溶解度提高，提高了真蛋白質的消化利用率。具體實施方式通過下列實施例將更具體的說明本發明，但是應理解所述實施例僅是為了說明本發明，而不是以任何方式限制本發明的範圍。實施例1優良菌種的的分離、篩選、選育及鑑定1)菌種擴繁：採集健康豬只的新鮮腸道內容物樣品接種於LB液體培養基中，接種後的培養基在37℃恆溫箱中培養擴繁48h；2)枯草芽孢桿菌的分離純化：對步驟1)擴繁培養物在80℃水浴鍋中加熱20min，然後取出處理液，進行稀釋、並塗布於LB培養基中，在37℃恆溫培養箱中培養24h，在從培養物中挑取各個具有特徵形態的菌落，再劃線培養和分離，最終到純菌落為止，結果進行革蘭氏染色鏡檢，並將分離出來的疑似純菌落接種到試管斜面中擴繁，然後保存於4℃冰箱中，備用；菌落形態：菌落圓整，表面光滑，呈乳白色，大小1～3mm；細胞圓形或卵圓形，直徑0.5～1.0um，大多數成短鏈或對，革蘭氏染色陽性。經鑑定，分離出的菌株為枯草芽孢桿菌，並於2013年9月11日保藏於中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心簡稱CGMCC，地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所，保藏號為CGMCCNo.8148。3)植物乳桿菌的分離純化：對步驟1)增菌培養基倍比稀釋、塗布於MRS培養基中，在37℃條件下培養36～48h，從中挑取各個具有特徵形態的菌落再劃線培養和分離，直至到純菌落為止，革蘭氏染色鏡檢，將分離的疑似純菌落接種試管斜面中增殖，然後保存於4℃冰箱中，備用；菌落形態：菌落為軟而溼潤，乳酪色、有光澤、平坦或稍凸起、邊緣整齊；細胞為球形或卵形，直徑5～10μm，繁殖方式芽殖。經鑑定，分離出的菌株為植物乳桿菌，並於2013年9月11日保藏於中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心簡稱CGMCC，地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所，保藏號為CGMCCNo.8150。實施例22株優良菌種的抗逆性和生物學性能測定2株菌種：枯草芽孢桿菌CGMCCNo.8148和植物乳桿菌CGMCCNo.8150的生物學性能和抗逆性能測定：1)枯草芽孢桿菌CGMCCNo.8148和地衣芽孢桿菌CGMCCNo.2383培養物的製備：將冰箱保藏的斜面菌種接種到LB種子培養基中活化，35℃、100rpm培養16h，即得；2)植物乳桿菌CGMCCNo.8150培養物的製備：將冰箱保藏的斜面菌種接種到MRS種子培養基中活化，30℃、150rpm培養16h，即得；3)耐酸性測定：將上述製備的培養物按10％接種量分別接種於pH值2.0、3.0、4.0的人工模擬胃液中，重新調pH值為2.0、3.0、4.0，0h計數作對照，3h取樣用0.85％生理鹽水按10倍系列稀釋，進行平板活菌計數，計算存活率。本發明選育的2株菌種：枯草芽孢桿菌CGMCCNo.8148和植物乳桿菌CGMCCNo.8150在胃酸中存活率結果見表1。人工模擬胃液的製備：量取9.5％～10.5％濃鹽酸16.4毫升，加蒸餾水至1000毫升，做基礎人工胃液，用鹽酸或氫氧化鈉調pH值2.0、3.0、4.0，121℃下蒸汽滅菌15分鐘，按1％添加量添加胃蛋白酶，通過0.22μm無菌濾膜，製成人工胃液，取5mL(4.5mL)分裝於試管中。表12株菌種在人工模擬胃液中的存活率4)耐腸液測定：將上述製備的培養物按5％接種量分別接種於人工模擬腸液中，0h計數作對照，3h取樣用0.85％的生理鹽水按10倍系列稀釋，進行平板活菌計數，計算存活率。本發明選育的2株菌種：枯草芽孢桿菌CGMCCNo.8148、植物乳桿菌CGMCCNo.8150，及實驗室保存的地衣芽孢桿菌CGMCCNo.2383在腸液中存活率結果見表2。人工模擬腸液的製備：稱取6.8g，加蒸餾水至1000毫升，做基礎人工腸液，121℃下蒸汽滅菌15分鐘，按1％添加量添加胰蛋白酶，通過0.22μm無菌濾膜，製成人工胃液，取5mL(4.5mL)分裝於試管中。表22株菌種在人工模擬腸液中的存活率存活率/％處理時間3h枯草芽孢桿菌CGMCCNo.814874.7植物乳桿菌CGMCCNo.815033.05)耐膽鹽測定：將上述製備的3株菌種的培養物，按10％接種量分別接種於0.03％、0.1％、0.2％、0.3％不同濃度豬膽鹽的LB溶液中，0h計數作對照，24h取樣用0.85％生理鹽水按10倍系列稀釋計數，進行平板活菌計數，計算存活率。本發明所選育的2株菌種：枯草芽孢桿菌CGMCCNo.8148、植物乳桿菌CGMCCNo.8150，及實驗室保存的地衣芽孢桿菌CGMCCNo.2383在膽鹽中存活率結果見表3。膽鹽的製備：在配好的LB液體培養基中添加0.03％、0.1％、0.2％、0.3％不同濃度的豬膽鹽，121℃下蒸汽滅菌30分鐘，在無菌條件下，分別取5mL0.03％、0.1％、0.2％、0.3％不同濃度的豬膽鹽溶液分裝於試管中。表32株菌種在不同濃度豬膽鹽中處理24h的存活率6)芽孢桿菌耐高溫測定：將上述製備的2株芽孢桿菌菌種的培養物，分別於85℃、90℃、95℃、100℃水浴處理3min，計算存活率。表4枯草芽孢桿菌在不同高溫處理3min的存活率/％7)耐藥性測定：採用藥敏紙片法。表52株菌種的耐藥性測定結果8)芽孢桿菌的產酶測定：採用平板透明圈法。分別在纖維素酶培養基、蛋白酶培養基、澱粉酶培養基、木聚糖酶培養基和脂肪酶培養基上點種分離的芽孢桿菌，每種處理設3個重複,37℃培養36h,觀察平板透明圈的有無及大小，若在菌落周圍形成透明的菌落或者模糊圈，則證明芽孢桿菌可以產生相應的酶，用遊標卡尺分別測量透明圈直徑(H)和菌落直徑(C)，計算兩者比值(H/C)。將申請號201110116641.X中所用的枯草芽孢桿菌CGMCCNo.4628作為對照，同時檢測以上這5個酶的H/C比值。表6枯草芽孢桿菌菌種的產酶測定結果9)產酸測定：採用碳酸鈣平板對植物乳桿菌CGMCCNo.8150進行有機酸產量測定；表7植物乳桿菌菌種的產酸測定結果10)抑菌試驗：採用牛津杯法對常見致病菌進行抑菌測定。a、在裝有10mL營養肉汁培養基的試管中活化兩株致病菌：K88、K99，37℃恆溫培養20h；b、雙層平板的製備：取直徑90mm的平板，注入滅菌的營養瓊脂15～20mL，水平放置使之凝固，作為底層，另取營養瓊脂(冷至50℃左右)與37℃24h培養的指示菌液適量(50mL培養基加8mL左右)混勻，吸取10mL澆在底層培養基上，水平放置使之凝固，作為菌層；c、加樣品：用無菌鑷子夾取已滅菌的牛津杯，打開皿蓋，放在培養基上。在牛津杯中加滿相同量的發酵液上清液(約200uL)，每個樣品2個重複。將加完樣的雙碟小心放入37℃恆溫箱內，培養16～18h後，取出測量抑菌圈大小。表8植物乳桿菌對常見致病菌的抑菌結果實施例3發酵溫度和發酵時間的篩選在實驗室條件下，進行了生物飼料發酵溫度的篩選。發酵原料中含有：酵母菌0.1g/kg，乳酸菌0.1g/kg，芽孢桿菌0.1g/kg，膨化去 皮豆粕525g/kg，玉米粉75g/kg，小麥麩225g/kg，水175g/kg。其中膨化去皮豆粕發酵前經粉碎，粉碎篩片為0.8×0.8mm，玉米粉碎篩片為0.8×0.8mm，小麥麩粉碎篩片為0.8×0.8mm。取混合均勻的10份樣品各200g，放在大培養皿中均勻鋪放，之後用膠帶進行密封，將黴菌培養箱分別調到15℃，20℃，25℃，30℃，35℃下，每一個溫度條件下放進兩個培養皿進行發酵培養，每一天都觀察發酵的進度，如若培養皿表面開始有水氣產生，證明發酵已經開始。從第一天開始，每隔24h取出5g樣品進行觀察與測定。在結果中，隨著實驗室溫度從15℃，20℃，25℃，30℃，35℃升高，發酵完成所需時間逐漸縮短，15℃需發酵10d,20℃需發酵8d，25℃需發酵5d，30℃需發酵3d，35℃需發酵3d。由於工廠化生產，提高溫度就意味著提高能量消耗，延長發酵時間就意味著降低生產效率，因此綜合考慮了多方因素之後，選擇在30℃條件下發酵3d即72h為最優條件。實施例4發酵含水量的篩選在工廠條件下，進行了水加入量的篩選。發酵原料中含有：酵母菌0.1g/kg，乳酸菌0.1g/kg，芽孢桿菌0.1g/kg，膨化去皮豆粕525g/kg，玉米粉75g/kg，小麥麩225g/kg。其中膨化去皮豆粕發酵前經粉碎，粉碎篩片為0.8×0.8mm，玉米粉碎篩片為0.8×0.8mm，小麥麩粉碎篩片為0.8×0.8mm。取14個塑料桶，將混合均勻的乾物料水分按照12％計算，添加自來水，使其含水量分別達到20％，25％，30％，35％，40％，45％，50％，每一個含水量裝入兩個桶，作為平行組。裝滿後壓實密封，在30℃條件下發酵72h。在結果中發現，隨著含水量的不斷上升，發酵效果越來越好，但是隨著含水量的升高，生物飼料的流動性卻越來越差，流動性差就意味著無法在全價料裡添加。因此綜合考慮了流動性及發酵效果之後，得出含水量30％組為最好，即加入水的百分比為25％。實施例5本發明在最優條件下生產出的生物飼料測定在工廠條件下，在篩選的最佳條件溫度為30℃，含水量30％的條件下用生物飼料發酵袋發酵72h，其中發酵原料中含有：酵母菌0.1g/kg，乳酸菌0.1g/kg，芽孢桿菌0.1g/kg，膨化去皮豆粕525g/kg，玉米粉75g/kg，小麥麩225g/kg。其中膨化去皮豆粕發酵前經粉碎，粉碎篩片為0.8×0.8mm，玉米粉碎篩片為0.8×0.8mm，小麥麩粉碎篩片為0.8×0.8mm。發酵完成後取三份平行樣品送至北京大北農生物飼料檢測中心進行檢測，檢測結果如表9所示。表9在最優條件下生產的生物飼料檢測結果檢測結果顯示，其中，發酵產物中，含活菌數≥1×109個/g，含有機酸≥2％實施例6本發明用於教槽料生產的飼餵效果材料與方法試驗樣品：用6％的本發明實施例5製備的生物飼料配製無魚粉教槽料。對照組：玉米30％、膨化玉米20％、豆粕17％、蔗糖3％、葡萄糖3％、超級進口魚粉6％、發酵豆粕8％、血漿蛋白粉6％、磷酸二氫鈣2％、石粉2％、飼料用鹽1％、98.5％賴氨酸0.3％、蛋氨酸0.2％、色氨酸0.01％、酸化劑0.5％、大北農乳豬預混料1.5％。試驗組：玉米30％、膨化玉米20％、豆粕17％、蔗糖3％、葡萄糖3％、實施例5製備的生物飼料6％、發酵豆粕8％、血漿蛋白粉6％、磷酸二氫鈣2％、石粉2％、飼料用鹽1％、98.5％賴氨酸0.3％、蛋氨酸0.2％、色氨酸0.01％、酸化劑0.5％、大北農乳豬預混料1.5％。日糧採用冷制粒方式進行生產。試驗時間：2014年11月7日-11月28日試驗設計：選用1周齡的杜長大仔豬24窩，採用單因子完全隨機試驗設計，分為兩個處理組，每組12個重複，每個重複仔豬8-12頭。初始體重經統計分析，組間差異不顯著(P>0.05)。飼養管理仔豬從出生第7天始，開始飼餵教槽料，人工餵料，少餵多餐，自由飲水，自由採食，溫度26℃，每天早晨觀察仔豬的腹瀉狀況，計算採食量，21日齡斷奶後在分娩床上呆7天，試驗結束，在試驗結束時稱重。試驗測定指標：以重複為單位，記錄窩重、死亡只數、腹瀉只數、耗料量等，計算平均體重、日耗料量、死亡率、料肉比等。統計分析採用統計軟體SPSS13.0軟體對試驗數據進行統計分析。2試驗結果見表10。從表10中可以看出：試驗組與對照組相比，從試驗開始到第21天日齡仔豬日增重和採食量無顯著差異(P>0.05)。在7日齡-第28日齡生長階段，試驗組仔豬採食量和日增重均高於對照組，但差異不顯著(P>0.05)。仔豬在各階段腹瀉率差異顯著(P<0.05),死亡率差異顯著(P0.0528日齡窩均重(kg)57.665.9P<0.05窩均耗料量(kg)19.6424.13P<0.05腹瀉率(％)6.012.39P＜0.05死亡率(％)1.90.72P<0.05以上所述僅是本發明的優選實施方式，應當指出，對於本
技術領域：
的普通技術人員來說，在不脫離本發明技術原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應視為本發明的保護範圍。當前第1頁1 2 3