糖基血紅蛋白濃度測定方法和濃度測定裝置的製作方法

2023-06-01 06:28:36

專利名稱：：糖基血紅蛋白濃度測定方法和濃度測定裝置的製作方法
技術領域：
：本發明涉及測定在血液等的試樣中含有的糖基血紅蛋白的濃度的技術。
背景技術：
：在採用血液等的機體試樣，對機體成分分離分析的情況下，廣泛地使用採用了高速液相色譜法(HPLC)的高速液相色譜圖裝置(HPLC裝置)(例如，參照專利文獻1)。如圖13所示的那樣，一般的HPLC裝置9按照下述方式構成，該方式為在試樣調製單元90中，調製包括機體成分的試樣，然後，將該試樣導入分析柱91中，使機體成分吸附於分析柱91的填充劑中。在試樣採用全血來測定糖基血紅蛋白的情況下，對分析柱91，使從全血中採取的紅血球溶血後，稀釋溶血液，將該狀態的機體試樣導入。另一方面，吸附於填充劑中的機體成分通過將洗提液藉助送液泵92，從洗提液瓶93供給分析柱91的方式洗提。包括來自分析柱91的機體成分的洗提液導入測光機構94，在該測光機構94中，連續地測定包括機體成分的洗提液的吸光度，由此，進行機體成分的分析。如圖14所示的那樣，測光機構94在包括機體成分的洗提液在測光單元95的流路96中流通的期間，照射來自光源97的光，在此時的透射光在感光部98中感光。在感光部98中感光的光的波長在幹涉濾波器99中選擇，另一方面，從感光部98輸出與感光量相對應的輸出電平的信號。由於測光機構94中的洗提液的測光連續地進行，故洗提時間和感光量(吸光度)之間的關係作為圖15所示的色譜圖而獲得。在HPLC裝置9中，還根據作為吸光度隨時間的變化的色譜圖，對血紅蛋白總量進行運算，並且運算在該血紅蛋白總量中糖基血紅蛋白所佔的比例(由圖15中的交叉影線表示的部分)的糖基血紅蛋白濃度。但是，由於洗提液中的氧等的氣體的溶解量隨洗提液的溫度而不同，故在裝置外部的溫度(環境溫度)改變的情況下，或在於環境溫度不同的狀態進行機體成分的分析的情況下，洗提液中的溶解氣體的狀態(溶解量)不同。由此，在洗提液中的溶解氧濃度隨環境溫度的變化等而改變的情況下，血紅蛋白中的氧合血紅蛋白與脫氧血紅蛋白的比例變化。另外，即使在導入分析柱91中的機體試樣中，針對每次的測定，血紅蛋白中的氧合血紅蛋白和脫氧血紅蛋白的比例改變。另一方面，由於導入分析柱91中的機體試樣採用稀釋溶血液而氧較多的狀態的式試樣，在測光機構94中，將氧合血紅蛋白的最大吸收波長415nm用作測定波長。由此，在環境溫度的變化較大的環境下等的條件下，由於氧合血紅蛋白和脫氧血紅蛋白的比例不同，故在同一波長測定它們的情況下，難以進行正確的測定。專利文獻l:日本特開平7—120447號文獻
發明內容本發明的課題在於即使在氧合血紅蛋白和脫氧血紅蛋白的比例不同的情況下，仍可適當地測定糖基血紅蛋白的濃度。本發明的第1方面所提供的糖基血紅蛋白濃度測定方法為利用在對試樣照射光時從試樣傳過來的光來測定糖基血紅蛋白濃度的方法，其中，利用在400450nm的波長範圍內具有峰值波長的多個測定波長的光來測定糖基血紅蛋白的濃度。優選的是，連續地或間歇地感光從試樣傳過來的光中的、至少在415430nm的波長範圍內的不同的峰值波長的光，從而測定糖基血紅蛋白濃度。本發明可適用於採用液相色譜法的糖基血紅蛋白濃度的測定方法。在這種情況下，糖基血紅蛋白濃度根據例如將測定波長、洗提時間和檢測量作為變量的3維色譜圖而運算。更具體地說，例如，糖基血紅蛋白濃度作為如下比例運算得到，該比例為在所述3維色譜圖中，與糖基血紅蛋白對應的體積或累計值在與血紅蛋白總量對應的體積或累計值中所佔的比例。糖基血紅蛋白濃度也可以通過如下運算得出根據各測定波長中的以洗提時間和檢測量作為變量的色譜圖，對糖基血紅蛋白的比例進行運算，並且，對各測定波長的糖基血紅蛋白的比例進行平均。糖基血紅蛋白濃度也可以作為如下比例運算得到，該比例為在各測定波長的血紅蛋白檢測量的峰值和洗提時間的2維色譜圖中，與糖基血紅蛋白對應的面積在與血紅蛋白總量對應的面積中所佔的比例。還可以根據從試樣傳過來的在400420nm的波長範圍內具有峰值波長的光的量即第一光量以及從試樣傳過來的在420440nm的波長範圍內具有峰值波長的光的量即第二光量，對糖基血紅蛋白濃度進行測定。在這種情況下，糖基血紅蛋白濃度可通過下述方式進行運算，該方式為根據所述第一光量來計算氧合血紅蛋白濃度或與該濃度相關的值，另一方面，根據所述第二光量來計算脫氧血紅蛋白濃度或與該濃度相關的值，並且，對所述氧合血紅蛋白濃度和所述脫氧血紅蛋白濃度進行合計，或對與所述氧合血紅蛋白濃度相關的值和與所述脫氧血紅蛋白濃度相關的值進行合計，將該合計而運算的值作為血紅蛋白濃度。本發明的糖基血紅蛋白濃度測定方法採用液相色譜法的情況下，利用第1色譜圖和第2色譜圖重疊的色譜圖來對糖基血紅蛋白濃度進行運算，所述第1色譜圖為表示基於所述第一光量獲得的洗提時間和檢測量的關係並與氧合血紅蛋白相對應的色譜圖，所述第2色譜圖為表示基於所述第二光量獲得的洗提時間和檢測量的關係並與脫氧血紅蛋白相對應的色譜圖。上述試樣例如為將血球進行溶血的試樣。本發明的第2方面提供一種糖基血紅蛋白濃度測定裝置，其具備測光機構，該測光機構將來自光源的光照射於試樣，並在感光部對此時從試樣傳過來的光進行感光，其中，所述測光機構以區分在400450nm的波長範圍內具有峰值波長的多個測定波長的光，使其在感光部感光的方式構成。優選的是，所述感光部以能夠連續或間歇地感光至少在415430nm的波長範圍內的不同峰值波長的光的方式構成。本發明可適用於利用液相色譜法的糖基血紅蛋白濃度的測定裝置。該這種情況下，還包括運算部，該運算部以根據將測定波長、洗提時間7和檢測量作為變量的3維色譜圖，對糖基血紅蛋白濃度進行運算的方式構成。運算部例如以將糖基血紅蛋白濃度作為如下比例運算的方式構成，該比例為在所述3維色譜圖中，與糖基血紅蛋白對應的體積或累計值在與血紅蛋白總量對應的體積或累計值中所佔的比例。更具體地說，運算部例如以運算如下比例作為糖基血紅蛋白濃度的方式構成在將從上述3維色譜圖中獲得的洗提時間和檢測量的峰值作為變量的2維色譜圖中，與糖基血紅蛋白對應的面積在與血紅蛋白總量對應的面積中所佔的比例。運算部也可以按照由如下過程運算糖基血紅蛋白濃度的方式構成根據各測定波長中的以洗提時間和檢測量作為變量的色譜圖中，對糖基血紅蛋白的比例進行運算，並且，對各測定波長的糖基血紅蛋白的比例進行平均。所述運算部還可以以將如下比例作為糖基血紅蛋白濃度運算的方式構成，該比例為在各測定波長的血紅蛋白檢測量的峰值和洗提時間的2維色譜圖中，與糖基血紅蛋白對應的面積在與血紅蛋白總量對應的面積中所佔的比例。本發明的糖基血紅蛋白濃度測定裝置還可包括運算部，該運算部根據從試樣傳過來的在400420nm的波長範圍內具有峰值波長的光的量即第一光量以及從試樣傳過來的在420440nm的波長範圍內具有峰值波長的光的量即第二光量，對糖基血紅蛋白濃度進行運算。所述運算部例如構成為根據所述第一光量來計算氧合血紅蛋白濃度或與該濃度相關的值，另一方面，根據所述第二光量來計算脫氧血紅蛋白濃度或與該濃度相關的值，並且，對所述氧合血紅蛋白濃度和所述脫氧血紅蛋白濃度進行合計，或對與所述氧合血紅蛋白濃度相關的值和與所述脫氧血紅蛋白濃度相關的值進行合計，將通過該合計而運算得出的值作為血紅蛋白濃度。在本發明的糖基血紅蛋白濃度測定裝置採用液相色譜法的情況下，所述運算部還可以利用第1色譜圖和第2色譜圖重疊的色譜圖來對糖基血紅蛋白濃度進行運算，所述第1色譜圖為表示基於所述第一光量獲得的洗提時間和檢測量的關係並與氧合血紅蛋白相對應的色譜圖，所述第2色譜圖為表示基於所述第二光量獲得的洗提時間和檢測量的關係並與脫氧血紅蛋白相對應的色譜圖。上述試樣例如為將血球進行溶血的試樣。圖1為表示本發明的第1實施方式的糖基血紅蛋白測定裝置的一例的HPLC裝置的概略結構圖2為用於說明圖1所示的HPLC裝置中的測光機構的剖視圖；圖3為表示圖1所示的HPLC裝置的主要部分的方框圖；圖4為用於說明圖1所示的HPLC裝置的動作的流程圖；圖5為用於說明圖1所示的HPLC裝置的運算電路的濃度測定處理的流程圖6為在運算電路中獲得的3維色譜圖的一例；圖7為用於說明本發明的第2實施方式的運算電路的濃度測定處理的流程圖8A為表示特定時間的測定波長和吸光度之間的關係的曲線圖，圖8B為通過特定時間的最大吸光度製作的2維色譜圖9為用於說明本發明的第3實施方式的運算電路的濃度測定處理的流程圖10為測定波長為415nm的情況(1點劃線)，測定波長為430nm的情況(虛線)，將測定波長為415rnn時的吸光度和430nm時的吸光度合計的情況(實線)的2維色譜圖11為表示實施例1的環境溫度與糖基血紅蛋白濃度之間的關係的曲線圖12為比較例1的環境溫度與糖基血紅蛋白濃度之間的關係的曲線圖13為表示現有的糖基血紅蛋白測定裝置的一例的HPLC裝置的概略結構圖14為用於說明圖13所示的HPLC裝置的測光機構的剖視圖；圖15為在圖13所示的HPLC裝置中獲得的色譜圖的一例。符號說明符號X表示HPLC裝置(糖基血紅蛋白測定裝置)；標號5表示測光機構；標號51表示(測光機構)光源；標號53B表示(測光機構)感光元件(感光部)標號61表示運算部。具體實施例方式下面參照附圖，對本發明的第1第3實施方式進行具體說明。首先，參照圖1圖6，對本發明的第1實施方式進行說明。圖1所示的HPLC裝置X相當於本發明的糖基血紅蛋白濃度測定裝置的一例，按照採用全血來測定糖基血紅蛋白濃度的方式構成。該HPLC裝置X包括多個洗提液瓶10、11、12(在圖面上為3個)，脫氣裝置2，試樣調製單元3，分析單元4，測光機構5和運算電路6。各洗提液瓶10、11、12保持應供給後述的分析柱40的洗提液。作為洗提液，例如採用pH，氯濃度不同的緩衝液。脫氣裝置2用於在將洗提液供給到分析單元4(分析柱40)之前，從洗提液中去除溶解氣體，經由管70A，70B，70C而與洗提液瓶10、11、12連接，經由管71A，71B，71C而與分析單元4的集管41連接。如圖1所示的那樣，試樣調製單元3用於利用從採血管13採取的血球成分，調製導入分析柱40的試樣。該試樣調製單元3包括試樣噴嘴30，調製液箱31和稀釋槽32。試樣噴嘴30用於採取以採血管13的血液試樣14為主的各種液體，可進行液體的吸引排出，並且可沿上下方向和水平方向移動。該試樣噴嘴30的動作通過圖外的控制機構進行控制。調製液箱31用於保持利用血液試樣14調製導入分析柱40的導入用試樣的調製液。在調製液箱31中，保持作為調製液的溶解有紅血球的溶血液、用於稀釋溶血液的稀釋液等。稀釋槽32用於提供溶有血液試樣14中的紅血球並且稀釋溶血液來調製導入用試樣的場所。該稀釋槽32經由管72連接於後述的分析單元4中的注射閥43，並且以在稀釋槽32中調製的導入用試樣可經由注射閥43導入分析柱40中的方式構成。分析單元4用於控制對分析柱40的填充劑的機體成分的吸附、洗提，並將各種機體成分供給測光機構5，通過圖外的調溫機構進行溫度控制。分析單元4中的設定溫度例如為4(TC的程度。分析柱40保持用於有選擇地吸附試樣中的血紅蛋白的填充劑。作為填充劑採用例如甲基丙烯酸酯共聚物。分析單元4不僅包括分析柱40,還包括集管41，送液泵42和注射閥43。分析單元41用於從多個洗提液瓶10、11、12中的特定的洗提液瓶10、11、12，有選擇地將洗提液供給注射閥43。該集管41經由管71A，71B，71C與脫氣裝置2連接，經由管73與注射閥43連接。送液泵42用於提供經由注射閥43將洗提液移動到分析柱40用的動力，設置於管73中的途中。送液泵42按照例如洗提液的流量在1.02.0ml/min的方式動作。注射閥43可採取一定量的導入用試樣並且將該導入用試樣導入分析柱40中，包括多個導入口和排出口(圖示省略)。注射環44連接於該注射閥43。該注射環44可保持一定量(例如，數(iL)的液體，可以通過適當切換注射閥43來選擇如下狀態注射環44與稀釋槽32連通，從稀釋槽32將導入用試樣供給注射環44的狀態；注射環44經由管74與分析柱40連通，從注射環44將導入用試樣導入分析柱40中的狀態；或從圖外的清洗槽，將清洗液供給到注射環44的狀態。這樣的注射閥43可採用例如6通閥。如圖2所示的，測光機構5以光學方式檢測來自分析柱40的洗提液中包括的血紅蛋白，包括測光單元50，光源51，分光器52，測定用感光系統53和參照用感光系統54。測光單元50用於規定測光區域。該測光單元50包括導入流路50A，測光流路50B和排出流路50C，這些流路50A，50B，50C—串地連通。導入流路50A用於將來自分析柱40(參照圖1)的洗提液導入測光流路50B，經由管75而與分析柱40連接。測光流路50B流通有構成測光對象的洗提液，並且提供用於對洗提液進行測光的場所，呈直線狀而形成。在該測光流路50B兩端開放，並且兩端部通過透明蓋55塞住。排出流路50C用於排出測光流路50B的洗提液，經由管76而與廢液槽15連接(參照圖1)。光源51用於對在測光流路50B中流通的洗提液照射光。該光源51以光軸L通過測光流路50B的中心的方式設置為面對測光流路50B的端面50Ba(透明蓋55)的狀態。光源51也可對應於後述的運算部61(參照圖3)的濃度運算方式選擇可射出的波長範圍，但是，通常為可射出400500nm的波長範圍的光，例如採用滷燈。顯然，光源51也可採用滷燈以外的類型，例如具有1個或多個LED元件的類型。分光器52用於分割從光源51射出的光中的、透過測光流路50B的光並使該光射入測定用感光系統53和參照用感光系統54，在光軸L上，以45度傾斜的狀態設置。分光器52可採用半透半反鏡等的公知的各種類型。測定用感光系統53對透射了分光器52的光中的、作為目的波長的光有選擇地進行感光，並且該測定用感光系統53設置於光軸L上。該測定用感光系統53包括波長選擇部53A、以及用於感光透射該波長選擇部53A的光的感光元件53B。波長選擇部53A選擇對應於後述的運算部61(參照圖3)中的濃度運算方法而應該透射的光的波長。該波長選擇部53A可採用幹涉濾波器、銳截止濾波器和衍射光柵等的公知的分光機構。感光元件53B可採用光電二極體。參照用感光系統54用於取得抑制來自分析柱40(參照圖1)的洗提液的濁度、散射的影響用的數據，有選擇地感光在分光器52中反射而光路改變的光中的、作為參照波長的500nm的光。該測定用感光系統74包括有選擇地使500nm的光透射的幹涉濾波器54A;用於感光透射幹涉濾波器54A的光的感光元件54B。感光元件54B可採用光電二極體。如圖3所示的那樣，運算電路6包括控制部60和運算部61。控制部60用於控制各部分的動作。更具體地說，控制部60控制光源51的點亮、熄滅，控制波長選擇部53A而選擇在感光元件53B中感光的光的波長，或控制運算部61中的濃度運算處理。運算部61用於對根據感光元件53B，54B的感光結果，全血中的血12紅蛋白濃度迸行運算。該運算部61存儲運算所需要的程序，該動作通過控制部60而控制。接著，參照圖1圖3，以及圖4所示的流程圖，對HPLC裝置X的動作進行說明。在HPLC裝置X中，在確認測定開始的指示的情況下(Sl)，向分析柱40供給洗提液(S2)。洗提液利用送液泵42的動力，從洗提液瓶IO、11、12經由脫氣器2、集管41供給於注射閥43，另外，供給多個洗提液瓶10、11、12中的哪個洗提液瓶10、11、12的洗提液是通過控制集管41的方式選擇。供給到注射閥43的洗提液經由管74供給分析柱40。在HPLC裝置X中，還調製須導入分析柱40中的導入用試樣(S3)。當進行導入用試樣的調製時，首先，從採血管13採取血液試樣14。來自採血管13的血液試樣14的採取通過使試樣噴嘴30動作進行。通過試樣噴嘴30採取的血液試樣14通過使試樣噴嘴30動作，供給稀釋槽32。稀釋槽32從調製液箱31，依次供給溶血劑和稀釋液，通過採用試樣噴嘴30的吸移操作，混合稀釋槽32內的液體，由此，調製導入用試樣。導入用試樣導入分析柱40中(S4)。相對分析柱40的導入用試樣的導入進行注射閥43的切換操作，由此，注射環44的導入用試樣與洗提液一起導入分析柱40中。在分析柱40中，通過導入導入用試樣，將糖基血紅蛋白吸附於填充劑上。在將糖基血紅蛋白吸附於填充劑上之後，通過集管41，適當切換供給分析柱40的洗提液的種類，洗提吸附於填充劑上的糖基血紅蛋白。另一方面，在從導入用試樣的導入開始起，經過一定時間的情況下，通過進行注射閥43的切換操作，接著，將洗提液供給分析柱40，並且進行注射環44的清洗(S5)。另一方面，在注射環44的清洗的同時，與在先說明的情況相同，從與先前不同的採血管13的血液試樣14，調製導入用試樣(S3),在注射環44的清洗之後，再次將導入用試樣導入注射環44(S4)。這樣的導入用試樣的調製(S3)，導入(S4)，清洗(S5)在適當切換注射閥43的同時，對應於構成測定對象的採血管13(血液試樣14)的數量而反覆進行。含有從分析柱40排出的糖基血紅蛋白的洗提液經由管76供給測光機構5的測光單元50，進行測光(S6)。對測光單元50，經由管75和導入管路50A導入洗提液，洗提液在通過測光流路50B和排出流路50C之後，經由管76導入廢液槽15。在測光機構5中，在來自分析柱40的洗提液通過測光流路50B時，利用光源51對洗提液連續照射光。另一方面，透射測光流路50B的光在分光器52中分割之後，在測定用感光系統53和參照用感光系統54中感光。在測定用感光系統53中，透射波長選擇部53A的特定波長的光在感光元件53B中有選擇地被感光。另一方面，在參照用感光系統54中，作為透射幹涉濾波器54A的參照波長為500nm的光有選擇地由感光元件54B感光。感光元件53B，54B的感光結果輸出給運算電路6，在該運算電路6中，對糖基血紅蛋白的濃度進行運算(S7)。運算電路6的濃度運算處理按照圖5所示的流程圖的順序而進行。首先，對從400450nm，優選415430nm的波長範圍選擇的多個波長，就每各波長、每各特定時間，進行測光(SIO)。更具體地說，從光源51連續地射出光，另一方面，通過控制部60控制波長選擇部53A，在感光元件53B感光的光的波長在上述波長範圍內經時變化。即，在感光元件53B感光的光的波長連續地或間歇地變化。另外，在上述波長範圍內，波長變化的測光反覆地進行。圖6表示波長間歇變化的情況的實例，但是，在將上述時間範圍作為同一時間處理的情況下，針對每各測定波長獲得2維色譜圖，如果還使測定波長成為變量，則獲得以洗提時間、吸光度和測定波長為變量的3維色譜圖。另外，在圖6中，較大地設定測定波長的間隔，但是，實際上，測定波長的間隔極小(例如，0.12nm)，以波長為變量的情況下的坐標(plot)點不是離散的，而是很連續的。接著，對相當於同一時間的各波長的血紅蛋白的吸光度進行累計(Sll)。S卩，相當於圖6的3維色譜圖的血紅蛋白的部分的體積，作為相當於各測定波長的2維色譜圖的血紅蛋白的部分的面積的累計(積算)值而運算。然後，對相當於同一時間的各波長的糖基血紅蛋白的吸光度進行累14計(S12)。gp，將相當於圖6的3維色譜圖的糖基血紅蛋白的部分的體積，作為相當於各測定波長的2維色譜圖的血紅蛋白的部分的面積的累計值而運算。然後，運算糖基血紅蛋白相對血紅蛋白總量的比例(S13)。g卩，在相當於圖6中3維血紅蛋白總量的體積(累計值)中的、相當於糖基血紅蛋白的體積(累計值)所佔的比例進行運算，將其作為糖基血紅蛋白濃度(％)。在S13中的運算結束的情況，返回圖4的S7(S14)。g卩，運算電路6的運算結果顯示於圖外的顯示板中，另外，通過自動的或使用者的按鈕操作，進行列印輸出(S8)。在本實施方式中，在包括氧合血紅蛋白的最大吸收波長的415nm和作為脫氧血紅蛋白的最大吸收波長的430nm的波長範圍，根據連續地或間歇地改變波長時的吸光度變化，對糖基血紅蛋白濃度進行運算。艮P，本發明不是從主體上著眼於氧合血紅蛋白而對糖基血紅蛋白的濃度進行運算，而是還考慮了脫氧血紅蛋白的影響而對糖基血紅蛋白的濃度進行運算。由此，即使在洗提液中的溶解氣體的狀態改變，血紅蛋白中的氧合血紅蛋白與脫氧血紅蛋白的比例改變，或導入分析柱40的導入用試樣的氧合血紅蛋白和脫氧血紅蛋白的比例改變的情況下，仍不受到影響。其結果是，在本實施方式中，即使在於HPLC裝置X的外部的溫度(環境溫度)改變的環境下，在環境溫度不同的狀態測定糖基血紅蛋白的情況下，或產生導入分析柱中的試樣的氧濃度的差異的情況下，也能夠與洗提液的氧合血紅蛋白與脫氧血紅蛋白的比例無關地測定穩定的糖基血紅蛋白濃度。另外，糖基血紅蛋白濃度的計算例如，可根據各測定波長的2維色譜圖，分別計算在血紅蛋白總量中糖基血紅蛋白所佔的比例，並且計算各測定波長的糖基血紅蛋白的比例的平均值，將該平均值作為糖基血紅蛋白濃度。下面參照圖3，圖7和圖8，對本發明的第2實施方式進行說明。如圖7所示，本實施方式中的運算電路6中的濃度運算處理的方法不同於在先的實施方式。首先，在400450nm，優選415430nm的波長範圍選擇的多個波長中，每特定時間進行測光(S20)。此方面與第1實施方式的S10(參照圖5)相同。在連續地或間歇地改變測定波長的情況下，如圖8A所示，獲得表示每各時間測定波長和吸光度的關係的曲線圖。接著，選擇同一時間的最大吸光度(max)，獲得表示圖8B所示的那樣的洗提時間和最大吸光度的關係的2維色譜圖(S21)。然後，根據圖8B所示的2維色譜圖，作為與糖基血紅蛋白量相對應的面積相對於與血紅蛋白總量相對應的面積，對糖基血紅蛋白量濃度(％)進行運算(S22)。在S22的處理結束的情況下，返回圖4的S7(S23)，運算電路6的運算結果輸出給圖外的顯示板等(S8)。在本實施方式中，測定波長採用包括作為氧合血紅蛋白的最大吸收波長的415nm和作為脫氧血紅蛋白的最大吸收波長的430nm的波長範圍，並且通過在這些測定波長中測定的最大吸光度，對糖基血紅蛋白濃度進行運算。由此，與本發明的第1實施方式的情況相同，可與來自分析柱40的洗提液中的氧合血紅蛋白和脫氧血紅蛋白的比例無關地進行穩定的氧合血紅蛋白濃度的測定。下面參照圖3，圖9和圖10，對本發明的第3實施方式進行說明。在本實施方式中，如圖9所示，運算電路6的濃度運算處理的方法不同於在先實施方式。首先，在415nm和430nm中，每特定時間進行測光(S30)。更具體地說，從光源51連續地射出光，另一方面，通過控制部60控制波長選擇部53A，在415nm和430nm之間交替地切換由感光元件53B感光的光的波長。這樣的測定波長的切換反覆地進行。其結果是，如圖10所示，測定波長為415nm時的氧合血紅蛋白基準的2維色譜圖(圖10的點劃線)，與測定波長為430nm時的脫氧血紅蛋白基準的2維色譜圖(參照圖IO的虛線)作為洗提時間和吸光度的關係而獲得。接著，根據測定波長為415nm時的氧合血紅蛋白基準的2維色譜圖(圖10的點劃線)，對糖基血紅蛋白濃度進行運算(S31)。接著，根據測定波長為430nm時的脫氧血紅蛋白基準的2維色譜圖16(圖10的虛線)，對糖基血紅蛋白濃度進行運算(S32)。然後，對測定波長為415nm時的濃度運算結果和測定波長為430rnn時的濃度運算結果進行合計，將其作為糖基血紅蛋白濃度(S33)。在S33的處理結束的情況下，返回圖4的S7(S34)，運算電路6的運算結果輸出給圖外的顯示板等(S8)。在本實施方式中，作為測定波長，在氧合血紅蛋白的最大吸收波長的415nm和脫氧血紅蛋白的最大吸收波長430nm的測定結果進行合計，對糖基血紅蛋白量濃度進行運算。由此，與本發明的第1實施方式的情況相同，可與來自分析柱40的洗提液的氧合血紅蛋白與脫氧血紅蛋白的比例無關地進行穩定的糖基血紅蛋白濃度的測定。在本實施方式中，糖基血紅蛋白濃度也可根據將測定波長為415nm時的色譜圖和430nm時的色譜圖合計而獲得的色譜圖(圖IO的實線)而運算。另外，獲得氧合血紅蛋白基準的色譜圖時的測定波長並不限於415nm，可從400420nm的波長範圍選擇，獲得脫氧血紅蛋白基準的色譜圖時的測定波長並不限於430nm，可從420440nm的範圍選擇。本發明並不限於在先說明的實施方式，可按照各種方式變更。例如，在先描述的濃度運算處理中，血紅蛋白量作為吸光度而獲得，但是，血紅蛋白量不必一定作為吸光度而獲得，也可作為透過度，或單純作為感光量而獲得。此外，作為在測定機構5中區別多個測定波長的光而對其識別的方法，除了在通過1個感光元件53B而進行的情況，也可設置與測定波長的數量相對應的感光元件或釆用具有感光區域的發光元件的方法。作為選擇由作為測光機構5中的測定用感光系統53的感光元件53B感光的光的波長(測定波長)的方法，採用在測定用感光元件53中設置波長選擇部53A的方案，但是，也可採用波長選擇部設置於光源51和測光單元50之間的方案。還有，本發明並不限於測定血液中的糖基血紅蛋白濃度用的HPLC裝置，也可適用於採用血液以外的標本的情況，或HPLC裝置以外的液相色譜圖裝置以及其它的糖基血紅蛋白量濃度測定裝置。實施例(實施例1)在本實施例中，在改變測定波長測定糖基血紅蛋白濃度的情況下，對環境溫度對測定值造成的影響進行分析。將環境溫度為10。C，2(TC和30。C的情況下，對於糖基血紅蛋白的濃度，使用在糖基血紅蛋白測定裝置("ADAMSAleHA—8160":愛科來(7—夕k一)株式會社制)採用光電二極體陣列("紫外線可視多波長檢測器MD—910";日本分光株式會社制)作為感光元件的裝置而進行測定。糖基血紅蛋白濃度以如下方法測定在415430nm的波長範圍內，分別測定每lnm處的血紅蛋白總量和糖基血紅蛋白量，在此基礎上，計算在上述的波長範圍內的糖基血紅蛋白的累計值相對於血紅蛋白的累計值的比例作為糖基血紅蛋白濃度。標本採用從健康人採取的血液(健康人標本)和從糖尿病患者採取的血液(糖尿患者血液)。關於糖基血紅蛋白的測定結果，在下面的表1和圖11中給出。表ltableseeoriginaldocumentpage18(比較例1)在本比較例中，在將測定波長固定為作為氧合血紅蛋白的最大吸收波長的415nm，測定糖基血紅蛋白濃度的情況下，對環境溫度對於測定值造成的影響進行了分析。除了將測定波長固定以外，與實施例1基本相同的條件下測定糖基血紅蛋白的濃度，運算出糖基血紅蛋白量在血紅蛋白量總量中的比例。關於糖基血紅蛋白的測定結果，在下面的表2和圖12中給出。表2糖基血紅蛋白測定值10°C20°C30。C健康人標本4.33%4.73%5.10%糖尿病患者標本8.41%8.83%9.68%如比較例1，在將測定波長固定在作為氧合血紅蛋白的最大吸收波長的415nm，測定糖基血紅蛋白的情況下，根據表2和圖12可知，環境溫度越高，測定值越大，測定值大大受到環境溫度的影響。相對該情況，如實施例1，根據使測定波長從氧合血紅蛋白的最大吸收波長(415nm)到脫氧血紅蛋白的最大吸收波長(430nm)之間變化時的累計值，對血紅蛋白濃度進行運算的情況下，從表l和圖ll可知，即使環境溫度在103(TC的範圍內變化的情況下，測定值幾乎不受到環境溫度的影響，基本為一定值。從上述情況可知，根據使測定波長從氧合血紅蛋白的最大吸收波長(415nm)到脫氧血紅蛋白的最大吸收波長(430nm)之間變化時的累計值，對糖基血紅蛋白量濃度進行運算的情況下，不受環境溫度(洗提液的溶解氧濃度)或試樣的溶解氧濃度的影響，可進行正確而穩定的糖基血紅蛋白濃度的測定。19權利要求1.一種糖基血紅蛋白濃度測定方法，其特徵在於，利用在對試樣照射光時從試樣傳過來的光來測定糖基血紅蛋白濃度，其中，利用在400～450nm的波長範圍內具有峰值波長的多個測定波長的光來測定糖基血紅蛋白的濃度。2.根據權利要求1所述的糖基血紅蛋白濃度測定方法，其中，連續地或間歇地感光從試樣傳過來的光中的、至少在415430nm的波長範圍內的不同峰值波長的光，從而測定糖基血紅蛋白濃度。3.根據權利要求1所述的糖基血紅蛋白濃度測定方法，其為利用液相色譜法的糖基血紅蛋白濃度的測定方法，其特徵在於，根據將測定波長、洗提時間和檢測量作為變量的3維色譜圖，對糖基血紅蛋白濃度進行運算。4.根據權利要求3所述的糖基血紅蛋白濃度測定方法，其中，糖基血紅蛋白濃度作為如下比例運算得到，該比例為在所述3維色譜圖中，與糖基血紅蛋白對應的體積或累計值在與血紅蛋白總量對應的體積或累計值中的比例。5.根據權利要求3所述的糖基血紅蛋白濃度測定方法，其中，糖基血紅蛋白濃度通過如下運算得出根據各測定波長中的以洗提時間和檢測量作為變量的色譜圖，對糖基血紅蛋白的比例進行運算，並且，對各測定波長的糖基血紅蛋白的比例進行平均。6.根據權利要求3所述的糖基血紅蛋白濃度測定方法，其中，糖基血紅蛋白濃度作為如下比例運算得到，該比例為在各測定波長的血紅蛋白檢測量的峰值和洗提時間的2維色譜圖中，與糖基血紅蛋白對應的面積在與血紅蛋白總量對應的面積中所佔的比例。7.根據權利要求1所述的糖基血紅蛋白濃度測定方法，其中，根據從試樣傳過來的在400420nm的波長範圍內具有峰值波長的光的量即第一光量以及從試樣傳過來的在420440nm的波長範圍內具有峰值波長的光的量即第二光量，對糖基血紅蛋白濃度進行測定。8.根據權利要求7所述的糖基血紅蛋白濃度測定方法，其中，根據所述第一光量來計算氧合血紅蛋白濃度或與該濃度相關的值，另一方面，根據所述第二光量來計算脫氧血紅蛋白濃度或與該濃度相關的值；並且對所述氧合血紅蛋白濃度和所述脫氧血紅蛋白濃度進行合計，或對與所述氧合血紅蛋白濃度相關的值和與所述脫氧血紅蛋白濃度相關的值進行合計，將通過該合計而運算得出的值作為血紅蛋白濃度。9.根據權利要求7所述的糖基血紅蛋白濃度測定方法，其為利用液相色譜法的糖基血紅蛋白濃度的測定方法，其中，利用第1色譜圖和第2色譜圖重疊的色譜圖，對糖基血紅蛋白濃度進行運算，所述第1色譜圖為表示基於所述第一光量獲得的洗提時間和檢測量的關係並與氧合血紅蛋白相對應的色譜圖；所述第2色譜圖為表示基於所述第二光量獲得的洗提時間和檢測量的關係並與脫氧血紅蛋白相對應的色譜圖。10.根據權利要求1所述的糖基血紅蛋白濃度測定方法，其特徵在於，所述試樣為使血球溶血的試樣。11.一種糖基血紅蛋白濃度測定裝置，其具備測光機構，該測光機構將來自光源的光照射於試樣，並在感光部對此時從試樣傳過來的光進行感光，其中，所述測光機構以區分在400450nm的波長範圍內具有峰值波長的多個測定波長的光，並使其在感^部感光的方式構成。12.根據權利要求11所述的糖基血紅蛋白濃度測定裝置，其中，所述感光部以能夠連續或間歇地感光至少在415430nm的波長範圍內的不同峰值波長的光的方式構成。13.根據權利要求11所述的糖基血紅蛋白濃度測定裝置，其為利用液相色譜法的糖基血紅蛋白濃度的測定裝置，其中，還包括運算部，該運算部以根據將測定波長、洗提時間和檢測量作為變量的3維色譜圖，對糖基血紅蛋白濃度進行運算的方式構成。14.根據權利要求13所述的糖基血紅蛋白濃度測定裝置，其中，所述運算部以將糖基血紅蛋白濃度作為如下比例運算的方式構成，該比例為在所述3維色譜圖中，與糖基血紅蛋白對應的體積或累計值在與血紅蛋白總量對應的體積或累計值中所佔的比例。315.根據權利要求13所述的糖基血紅蛋白濃度測定裝置，其中，所述運算部以由如下過程運算糖基血紅蛋白濃度的方式構成根據各測定波長中的以洗提時間和檢測量作為變量的色譜圖，對糖基血紅蛋白的比例進行運算，並且，對各測定波長的糖基血紅蛋白的比例進行平均。16.根據權利要求13所述的糖基血紅蛋白濃度測定裝置，其中，所述運算部以將糖基血紅蛋白濃度作為如下比例運算的方式構成，該比例為在各測定波長的血紅蛋白檢測量的峰值和洗提時間的2維色譜圖中，與糖基血紅蛋白對應的面積在與血紅蛋白總量對應的面積中所佔的比例。17.根據權利要求11所述的糖基血紅蛋白濃度測定裝置，其中，還包括運算部，該運算部根據從試樣傳過來的在400420nm的波長範圍內具有峰值波長的光的量即第一光量以及從試樣傳過來的在420440nm的波長範圍內具有峰值波長的光的量即第二光量，對糖基血紅蛋白濃度進行運算。18.根據權利要求7所述的糖基血紅蛋白濃度測定裝置，其中，所述運算部被構成為根據所述第一光量來計算氧合血紅蛋白濃度或與該濃度相關的值，另一方面，根據所述第二光量來計算脫氧血紅蛋白濃度或與該濃度相關的值，並且，對所述氧合血紅蛋白濃度和所述脫氧血紅蛋白濃度進行合計，或對與所述氧合血紅蛋白濃度相關的值和與所述脫氧血紅蛋白濃度相關的值進行合計，將通過該合計而運算得出的值作為血紅蛋白濃度。19.根據權利要求17所述的糖基血紅蛋白濃度測定裝置，其為利用液相色譜法的糖基血紅蛋白濃度的測定裝置，其中，所述運算部利用第1色譜圖和第2色譜圖重疊的色譜圖來對糖基血紅蛋白濃度進行運算，所述第1色譜圖為表示基於所述第一光量獲得的洗提時間和檢測量的關係'並與氧合血紅蛋白相對應的色譜圖，所述第2色譜圖為表示基於所述第二光量獲得的洗提時間和檢測量的關係並與脫氧血紅蛋白相對應的色譜圖。20.根據權利要求11所述的糖基血紅蛋白濃度測定裝置，其中，所述試樣為使血球溶血的試樣。全文摘要在測定糖基血紅蛋白濃度的情況下，從400～450nm的波長範圍中選擇多個波長作為測定波長。優選利用液相色譜法，連續地或間歇地感光至少在415～430nm的波長範圍內的不同的峰值波長的光，從而獲得以波長、洗提時間和檢測量作為變量的3維色譜圖，並根據該3維色譜圖，對糖基血紅蛋白濃度進行運算。文檔編號G01N21/27GK101484792SQ200780018788公開日2009年7月15日申請日期2007年3月23日優先權日2006年3月24日發明者杉山幸司,酒井敏克申請人:愛科來株式會社