一種同時分析食品中多種芳香類有害物質的方法
2023-06-24 20:25:11 1
一種同時分析食品中多種芳香類有害物質的方法
【專利摘要】本發明的目的是提供一種同時分析食品中多種芳香類有害物質的方法，即一種同時提取製備食品中PAHs、酚類化合物和芳香胺的方法。本發明的方法只需一次取樣，減少了樣品消耗量，縮短了檢驗時間，節約了試劑的使用量，同時減少二次汙染，延長了HPLC色譜柱的使用壽命；採用有機溶劑超聲萃取的方法提取目標檢測物，大大縮短了目標檢測物提取時間；簡化了在食品中PAHs樣品液提取製備的步驟，?PAHs檢測過程使用有機溶劑液液萃取-反萃取脫脂，大大縮減了脫脂時間，簡化了實驗操作。
【專利說明】—種同時分析食品中多種芳香類有害物質的方法
【技術領域】
[0001]本發明屬於食品安全檢測【技術領域】，具體涉及一種同時分析食品中多種芳香類有害物質的方法，即一種同時提取、製備和檢測食品中多環芳烴、酚類化合物和芳香胺三類樣品的方法。
【背景技術】
[0002]食品在高溫加工過程中發生極為複雜的化學、物理變化，成分極為複雜。在這些化合物中存在對人體有害和/或有毒的組分，其中的芳香類有害物質主要有多環芳烴、酚類化合物和芳香胺三類。多環芳烴、酚類化合物、芳香胺三類物質具有不同的化學性質，其提取製備檢測樣品的方法也各不相同。
[0003]多環芳經(polycyclic aromatichydrocarbons,以下簡稱PAHs)是指兩個以上苯環以稠環形式相連的化合物，是有機化合物不完全燃燒和地球化學過程中產生的一類致癌物質。目前食品中PAHs檢測樣品的提取製備方法主要是有機溶劑萃取後皂化脫脂，而後進行檢測。其中GB/T 24893-2010採用的方法為有機溶劑萃取後,使用C18固相萃取柱進行富集純化，最後採用高效液相色譜分析。
[0004]酚類化合物是指芳香烴中苯環上的氫原子被羥基取代所生成的化合物，是芳烴的含羥基衍生物。目前食品中酚類化合物檢測樣品的製備方法主要是有機溶劑萃取或蒸餾萃取，最後採用光譜分析測定法或色譜分析測定法等方法進行檢測。其中蒸餾萃取存在耗時長，製備工作量大的缺點。
[0005]芳香胺是指胺基上的N與苯的同系物的苯環直接相連的胺類物質，能通過呼吸道、胃腸道和皮膚進入人體，導致人致病甚至致癌。目前，芳香胺在食品行業中，僅在包裝材料上有部分研究，其檢測樣品的提取製備主要是使用有機溶劑萃取，在未經固相萃取柱富集純化的情況下，檢測幹擾雜質較多。在食品中的提取製備及檢測尚未有太多相關研究。
[0006]綜上，目前食品中多環芳烴、酚類化合物和芳香胺的提取檢測存在的問題有:
[0007]I)三類物質的檢測需獨立提取後再分別檢測，需要多次取樣，樣品消耗量大，製備樣品的工作量大；
[0008]2)PAHs獨立提取檢測的方法步驟繁瑣，工作量較大；PAHs檢測過程的脫脂多為皂化脫脂，操作複雜，時間較長；
[0009]因此，開發一種同時分析食品中PAHs、酚類化合物和芳香胺的方法具有重要意義。
【發明內容】
[0010]本發明的目的是提供一種同時分析食品中多種芳香類有害物質的方法，即一種同時提取製備食品中PAHs、酚類化合物和芳香胺的方法，以解決現有技術方法繁瑣，樣品消耗量大等問題。
[0011]本發明的方法，其步驟如下:
[0012]I) PAHs樣品液的提取製備:待檢測樣品到碎後放入維形瓶，加入內標物質，使用有機溶劑A超聲萃取l(T60min，提取需檢測的物質，靜止，過濾膜，取1-5ml萃取液上樣到活化後的正相固相萃取柱A，收集流出液；並用有機溶劑A淋洗固相萃取柱A，收集淋洗液，將流出液和淋洗液混合後，加入DMSO進行萃取,取下層的液體加入硫酸鈉溶液,放置數分鐘至試管冷卻；使用環己烷分兩次對冷卻後的溶液進行反萃取，合併萃取後的溶液即為PAHs樣品液；
[0013]2)PAHs檢測:氣相色譜質譜聯用(GC/MS-SIM)來檢測步驟I)中得到的PAHs樣品液；
[0014]3)酚類化合物和芳香胺樣品液的提取製備:將淋洗後的固相萃取柱A用水二次洗脫，收集洗脫液；
[0015]4)芳香胺樣品液的提取製備:將3)中所得洗脫液上樣到活化後的反相固相萃取B柱進行富集純化；採用水溶液進行洗脫，收集得到芳香胺樣品液；
[0016]5)芳香胺的檢測:採用氣相色譜質譜聯用(GC/MS-SIM)檢測步驟4)中得到的芳香胺樣品液；
[0017]6)酚類化合物樣品液的提取製備:將洗脫後的C18固相萃取柱用甲醇進行洗脫，將得到的有機洗脫液作為酚類化合物樣品液；
[0018]7)酚類化合物 的檢測:用高效液相色譜-螢光檢測器(HPLC-FL)檢測步驟6得到的酚類化合物樣品液。
[0019]所述步驟I)中有機溶劑A優選為環己烷；超聲萃取時間優選範圍為20-40min ；正相固相萃取柱A優選為Si相固相萃取柱；硫酸鈉溶液濃度為0.01-0.03g/ml ；
[0020]所述步驟3)中洗脫 用水優選為超純水；
[0021]所述步驟4)中反相固相萃取柱B優選為C18固相萃取柱
[0022]所述步驟6)中有機溶劑B優選為甲醇。
[0023]本發明的方法只需一次取樣，減少了樣品消耗量，縮短了檢驗時間，節約了試劑的使用量，同時減少二次汙染，延長了 HPLC色譜柱的使用壽命；採用有機溶劑超聲萃取的方法提取目標檢測物，大大縮短了目標檢測物提取時間；簡化了在食品中PAHs樣品液提取製備的步驟，PAHs檢測過程使用有機溶劑液液萃取-反萃取脫脂，大大縮減了脫脂時間，簡化了實驗操作。
【具體實施方式】
[0024]本發明提供一種同時分析食品中PAHs、酚類化合物和芳香胺的方法，具體包括如下的步驟:
[0025]l)PAHs樣品液的提取製備:向錐形瓶中加入Iml多環芳烴標準溶液(其中苯並[a]花濃度為5ng/ml,萘濃度為3ng/ml, 二氫危1.8ng/nl,蒽lng/ml), Iml酹類化合物標準溶液(其中苯酹0.lug/ml, 二甲基苯酹0.3ug/ml), Iml芳香胺標準溶液(其中1_氨基萘濃度為15ng /m,2-氨基萘濃度為8ng /ml, 3-氨基聯苯濃度為3ng /ml, 4-氨基聯苯濃度為2ng /ml) ；lml內標(氘代苯並芘濃度為3ng/ml，氘代屈濃度為lng/ml，氘代苊濃度為2ng/ml，氘代-1-氨基萘濃度為2Pg/ml和氘代-4-氨基聯苯濃度為0.4 μδ/πι1 ；)，26ml環己烷，水浴中超聲萃取20min，靜置5min， 取IOml萃取液過濾膜後，取3ml萃取液上樣到活化後的Si相固相萃取柱富集純化，收集流出液①；使用Iml環己烷萃取液淋洗固相萃取柱，收集淋洗液②；將流出液①和淋洗液②合併後裝入試管，加入DMSO進行液液萃取,而後用吸管取出下層溶液待用，繼續向試管內加入DMSO進行液液萃取，同樣用吸管取出下層溶液待用；合併兩次萃取用吸管取出的下層溶液於試管中，加入硫酸鈉溶液，放置數分鐘至試管冷卻；使用環己燒分兩次對冷卻後的溶液進行反萃取，合併萃取後的溶液即為PAHs樣品液；整個PAHs樣品液的提取製備歷時60min ；
[0026]2)氣相色譜質譜聯用(GC/MS-SM)檢測PAHs:按GB/T21130-2007的方法檢測步驟I)中得到的PAHs樣品液的回收率為87.5% ;標準曲線R2為0.9994，RSD=2.10% ；
[0027]3)酚類化合物和芳香胺樣品液的提取製備:將淋洗後的Si相固相萃取柱用5ml超純水洗脫，收集洗脫液；
[0028]4)芳香胺樣品液的提取製備:將3)中所得洗脫液上樣到C18固相萃取柱富集純化；採用水溶液進行C18柱洗脫，收集得到芳香胺樣品液；
[0029]5)氣相色譜質譜聯用(GC/MS-SIM)檢測芳香胺:檢測步驟4)中得到的芳香胺樣品液，回收率為82.6% ;標準曲線R2為0.9993，RSD=2.15% ；
[0030]6)酚類化合物樣品液的提取製備:將洗脫後的C18固相萃取柱用甲醇二次洗脫，將得到的有機洗脫液作為酚類化合物樣品液；
[0031]7)高效液相色譜-螢光檢測器(HPLC-FL)檢測酚類化合物:將步驟6)得到的酚類化合物樣品液進行高效液相色譜-螢光檢測器(HPLC-FL)檢測酚類化合物含量，回收率為88.3% ;標準曲線R2為0.9997，RSD=2.23% ;檢測條件為=LUNAC18色譜柱，柱溫為30。。，螢光激發波長為272nm，發射波長為310nm，流動相A為1% (v/v)醋酸溶液，流動相B為醋酸、乙腈和水的混合液，三者體積比為1:30:69，流動相流速為lml/min，進樣量為10un，以A、B為洗脫劑進行洗脫(體積濃度A相40%，B相60%)。
[0032]該檢測方法對樣品進行一次提取，多成分檢測。超聲萃取時間(20mirTlh)僅為傳統皂化時間(2tT5h)的1/4左右；且同時檢測了 3類化合物的多種物質，樣品消耗量成倍降低(3類化合物分離簡單快速，每步IOmin以內可以完成)，單種化合物的平均檢測時間進一步降低；也節約了固相萃取柱及萃取液(如環己烷)的用量；減少了有機試劑使用量；通過固相萃取柱對樣品進行淨化，有效延長了 HPLC色譜柱的使用壽命。
[0033]下面對本發明方法的實際應用效果進行描述。
[0034]實施例1
[0035]I) PAHs樣品液的提取製備:將15g烤肉樣品剪碎後放入錐形瓶中，Iml內標(氘代苯並芘濃度為3ng/ml，氘代屈濃度為lng/ml，氘代苊濃度為2ng/ml，氘代_1_氨基萘濃度為2Pg/ml和氣代-4-氨基聯苯濃度為0.4 Pg/ml ;), 29ml環己燒,水浴中超聲萃取20min,靜置5min，取IOml萃取液過濾膜後，取3ml萃取液上樣到活化後的Si相固相萃取柱富集純化，收集流出液①；使用Iml環己烷萃取液淋洗固相萃取柱，收集淋洗液②；將流出液①和淋洗液②合併後裝入試管，加入DMSO進行液液萃取，而後用吸管取出下層溶液待用，繼續向試管內加入DMSO進行液液萃取，同樣用吸管取出下層溶液待用；合併兩次萃取用吸管取出的下層溶液於試管中，加入硫酸鈉溶液，放置數分鐘至試管冷卻；使用環己烷分兩次對冷卻後的溶液進行反萃取，合併萃取後的溶液即為PAHs樣品液；整個PAHs樣品液的提取製備歷時40min ；
[0036]2)氣相色譜質譜聯用(GC/MS-SM)檢測PAHs:按GB/T21130-2007的方法檢測步驟I)中得到的PAHs樣品液各物質濃度，計算後得烤肉中PAHs含量。其中苯並[a]芘為
8.5ug/kg，RSD=3.95% ;二苯並[a，h]蒽為 25.3ug/kg, RSD=4.93% 苯並[g, h, i]芘為 16.7ug/kg, RSD=3.36%ο
[0037]3)酚類化合物和芳香胺樣品液的提取製備:將淋洗後的Si相固相萃取柱用5ml超純水洗脫，收集洗脫液；
[0038]4)芳香胺樣品液的提取製備:將3)中所得洗脫液上樣到C18固相萃取柱富集純化；採用水溶液進行C18柱洗脫，收集得到芳香胺樣品液；
[0039]5)氣相色譜質譜聯用(GC/MS-SIM)檢測芳香胺:檢測步驟4)中得到的芳香胺樣品液，計算後得烤肉中芳香胺含量。其中1-氨基萘為2.5ug/kg，RSD=5.43%，3-氨基聯苯為
0.5ug/kg, RSD=3.25%。
[0040]6)酚類化合物樣品液的提取製備:將洗脫後的C18固相萃取柱用甲醇二次洗脫，將得到的有機洗脫液作為酚類化合物樣品液；
[0041]7)高效液相色譜-螢光檢測器(HPLC-FL)檢測酚類化合物:將步驟6)得到的酚類化合物樣品液進行高效液相色譜-螢光檢測器(HPLC-FL)檢測酚類化合物。計算後得烤肉中酚類化合物含量。其中苯酚為0.63ug/g，RSD=L 95% ;鄰苯二酚為0.31ug/g，RSD=3.54% ；對苯二酚為 0.45ug/g，RSD=4.25% ;對甲酚為 0.14ug/g, RSD=5.25%。檢測條件為=LUNAC18 色譜柱，柱溫為30°C，螢光激發波長為272nm，發射波長為310nm，流動相A為1% (v/v)醋酸溶液，流動相B為醋酸、乙腈和水的混合液，三者體積比為1:30:69，流動相流速為lml/min，進樣量為10un，以A、B為洗脫劑進行等度洗脫(體積濃度A相40%，B相60%)。
[0042]實施例2
[0043]DPAHs樣品液的提取製備:將15g煙燻魚樣品剪碎後放入錐形瓶中，加入Iml內標(氘代苯並芘濃度為3ng/ml，氘代屈濃度為lng/ml，氘代苊濃度為2ng/ml，氘代-1-氨基萘濃度為2Pg/ml和氘代-4-氨基聯苯濃度為0.4 μδ/πι1 ；),29ml環己烷，水浴中超聲萃取20min，靜置5min，取IOml萃取液過濾膜後，取3ml萃取液上樣到活化後的Si相固相萃取柱富集純化，收集流出液①；使用Iml環己烷萃取液淋洗固相萃取柱，收集淋洗液②；將流出液①和淋洗液②合併後裝入試管，加入DMSO進行液液萃取,而後用吸管取出下層溶液待用，繼續向試管內加入DMSO進行液液萃取，同樣用吸管取出下層溶液待用；合併兩次萃取用吸管取出的下層溶液於試管中，加入硫酸鈉溶液，放置數分鐘至試管冷卻；使用環己烷分兩次對冷卻後的溶液進行反萃取，合併萃取後的溶液即為PAHs樣品液；整個PAHs樣品液的提取製備歷時80min ；
[0044]2)氣相色譜質譜聯用(GC/MS-SM)檢測PAHs:按GB/T21130-2007的方法檢測步驟I)中得到的PAHs樣品液各物質濃度，計算後得煙燻魚中PAHs含量。其中苯並[a]芘為
6.5ug/kg，RSD=3.63% ;二苯並[a，h]蒽為 23.2ug/kg, RSD=4.64% 苯並[g, h, i]芘為 15.3ug/kg, RSD=3.24%ο
[0045]3)酚類化合物和芳香胺樣品液的提取製備:將淋洗後的Si相固相萃取柱用5ml超純水洗脫，收集洗脫液；
[0046]4)芳香胺樣品液的提取製備:將3)中所得洗脫液上樣到C18固相萃取柱富集純化；採用水溶液進行C18柱洗脫，收集得到芳香胺樣品液；
[0047]5)氣相色譜質譜聯用(GC/MS-SIM)檢測芳香胺:檢測步驟4)中得到的芳香胺樣品液，計算後得煙燻魚中芳香胺含量。其中1-氨基萘為1.9ug/kg，RSD=5.64%，3-氨基聯苯為0.4ug/kg, RSD=3.33%。
[0048]6)酚類化合物樣品液的提取製備:將洗脫後的C18固相萃取柱用甲醇二次洗脫，將得到的有機洗脫液作為酚類化合物樣品液；
[0049]7)高效液相色譜-螢光檢測器(HPLC-FL)檢測酚類化合物:將步驟6)得到的酚類化合物樣品液進行高效液相色譜-螢光檢測器(HPLC-FL)檢測酚類化合物。計算後得煙燻魚中酚類化合物含量。其中苯酚為0.87ug/g，RSD=L 75% ;鄰苯二酚為0.42ug/g，RSD=3.73% ;對苯二酚為 0.47ug/g，RSD=4.46% ;對甲酚為 0.21ug/g, RSD=5.64%。檢測條件為=LUNAC18色譜柱，柱溫為30°C，螢光激發波長為272nm，發射波長為310nm，流動相A為1%(v/v)醋酸溶液，流動相B為醋酸、乙腈和水的混合液，三者體積比為1:30:69，流動相流速為lml/min，進樣量為10un，以A、B為洗脫劑進行等度洗脫(體積濃度A相40%，B相60%)。
[0050]實施例3
[0051]I )PAHs樣品液的提取製備:將15g油jt!彳蛋樣品到碎後放入維形瓶中，加入29ml環己烷，Iml內標(氘代苯並芘濃度為3ng/ml，氘代屈濃度為lng/ml，氘代苊濃度為2ng/ml，氘代-1-氨基萘濃度為2Pg/ml和氘代-4-氨基聯苯濃度為0.4 μδ/πι1 ；)，水浴中超聲萃取20min，靜置5min，取IOml萃取液過濾膜後，取3ml萃取液上樣到活化後的Si相固相萃取柱富集純化，收集流出 液①；使用Iml環己烷萃取液淋洗固相萃取柱，收集淋洗液②；將流出液①和淋洗液②合併後裝入試管，加入DMSO進行液液萃取,而後用吸管取出下層溶液待用，繼續向試管內加入DMSO進行液液萃取，同樣用吸管取出下層溶液待用；合併兩次萃取用吸管取出的下層溶液於試管中，加入硫酸鈉溶液，放置數分鐘至試管冷卻；使用環己烷分兩次對冷卻後的溶液進行反萃取，合併萃取後的溶液即為PAHs樣品液；整個PAHs樣品液的提取製備歷時60min ；
[0052]2)氣相色譜質譜聯用(GC/MS-SM)檢測PAHs:按GB/T21130-2007的方法檢測步驟I)中得到的PAHs樣品液各物質濃度，計算後得油煎蛋中PAHs含量。其中苯並[a]芘為7.6ug/kg，RSD=4.12% ;二苯並[a，h]蒽為 19.8ug/kg, RSD=5.67% 苯並[g, h, i]芘為 6.98ug/kg, RSD=3.87%。
[0053]3)酚類化合物和芳香胺樣品液的提取製備:將淋洗後的Si相固相萃取柱用5ml超純水洗脫，收集洗脫液；
[0054]4)芳香胺樣品液的提取製備:將3)中所得洗脫液上樣到C18固相萃取柱富集純化；採用水溶液進行C18柱洗脫，收集得到芳香胺樣品液；
[0055]5)氣相色譜質譜聯用(GC/MS-SIM)檢測芳香胺:檢測步驟4)中得到的芳香胺樣品液，計算後得油煎蛋中芳香胺含量。其中1-氨基萘為3.lug/kg, RSD=4.34%，3-氨基聯苯為0.5ug/kg, RSD=4.32%。
[0056]6)酚類化合物樣品液的提取製備:將洗脫後的C18固相萃取柱用甲醇二次洗脫，將得到的有機洗脫液作為酚類化合物樣品液；
[0057]7)高效液相色譜-螢光檢測器(HPLC-FL)檢測酚類化合物:將步驟6)得到的酚類化合物樣品液進行高效液相色譜-螢光檢測器(HPLC-FL)檢測酚類化合物含量，檢測酚類化合物。計算後得油煎蛋中酚類化合物含量。其中苯酚為0.45ug/g，RSD=L 97%;鄰苯二酚為 0.24ug/g，RSD=3.69% ;對苯二酚為 0.31ug/g，RSD=4.78% ;對甲酚為 0.19ug/g，RSD=5.44%。檢測條件為=LUNAC18色譜柱，柱溫為30°C，螢光激發波長為272nm，發射波長為310nm，流動相A為1% (v/v)醋酸溶液，流動相B為醋酸、乙腈和水的混合液，三者體積比為1:30:69，流動相流速為lml/min，進樣量為10un，以A、B為洗脫劑進行等度洗脫(體積濃度A 相 40%, B 相 60%) ο
[0058]實施例4
[0059]I) PAHs樣品液的提取製備:將15g油炸雞翅(無骨)樣品剪碎後放入錐形瓶中，力口入29ml環己烷，Iml內標(氘代苯並芘濃度為3ng/ml，氘代屈濃度為lng/ml，氘代苊濃度為2ng/ml，氘代-1-氨基萘濃度為2Pg/ml和氘代-4-氨基聯苯濃度為0.4 μδ/πι1 ；，水浴中超聲萃取20min，靜置5min，取IOml萃取液過濾膜後，取3ml萃取液上樣到活化後的Si相固相萃取柱富集純化，收集流出液①；使用Iml環己烷萃取液淋洗固相萃取柱，收集淋洗液②；將流出液①和淋洗液②合併後裝入試管，加入DMSO進行液液萃取,而後用吸管取出下層溶液待用，繼續向試管內加入DMSO進行液液萃取，同樣用吸管取出下層溶液待用；合併兩次萃取用吸管取出的下層溶液於試管中，加入硫酸鈉溶液，放置數分鐘至試管冷卻；使用環己燒分兩次對冷卻後的溶液進行反萃取，合併萃取後的溶液即為PAHs樣品液；整個PAHs樣品液的提取製備歷時60min ；
[0060]2)氣相色譜質譜聯用(GC/MS-SM)檢測PAHs:按GB/T21130-2007的方法檢測步驟I)中得到的PAHs樣品液各物質濃度，計算後得油炸雞翅中PAHs含量。其中苯並[a]芘為 10.2ug/kg，RSD=3.12% ;二苯並[a, h]蒽為 23.6ug/kg，RSD=5.77% 苯並[g, h, i]芘為
7.65ug/kg, RSD=3.99%。
[0061]3)酚類化合物和芳香胺樣品液的提取製備:將淋洗後的Si相固相萃取柱用5ml超純水洗脫，收集洗脫液；
[0062]4)芳香胺樣品液的提取製備:將3)中所得洗脫液上樣到C18固相萃取柱富集純化；採用水溶液進行C18柱洗脫，收集得到芳香胺樣品液；
[0063]5)氣相色譜質譜聯用(GC/MS-SIM)檢測芳香胺:檢測步驟4)中得到的芳香胺樣品液，計算後得油炸雞翅中芳香胺含量。其中1-氨基萘為3.4ug/kg，RSD=4.23%，3-氨基聯苯為 0.6ug/kg, RSD=4.54%ο
[0064]6)酚類化合物樣品液的提取製備:將洗脫後的C18固相萃取柱用甲醇二次洗脫，將得到的有機洗脫液作為酚類化合物樣品液；
[0065]7)高效液相色譜-螢光檢測器(HPLC-FL)檢測酚類化合物:將步驟6)得到的酚類化合物樣品液進行高效液相色譜-螢光檢測器(HPLC-FL)檢測酚類化合物。計算後得油炸雞翅中酚類化合物含量。其中苯酚為0.63ug/g，RSD=L 86% ;鄰苯二酚為0.34ug/g，RSD=3.66% ;對苯二酚為 0.37ug/g，RSD=4.88% ;對甲酚為 0.25ug/g，RSD=3.55%。檢測條件為=LUNAC18色譜柱，柱溫為30°C，螢光激發波長為272nm，發射波長為310nm，流動相A為1%(v/v)醋酸溶液，流動相B為醋酸、乙腈和水的混合液，三者體積比為1:30:69，流動相流速為lml/min，進樣量為10un，以A、B為洗脫劑進行等度洗脫(體積濃度A相40%，B相60%)。
[0066]實施例5
[0067]I) PAHs樣品液的提取製備:將18g烤肉樣品剪碎後放入錐形瓶中，加入Iml內標(氘代苯並芘濃度為3ng/ml，氘代屈濃度為lng/ml，氘代苊濃度為2ng/ml，氘代-1-氨基萘濃度為2Pg/ml和氘代-4-氨基聯苯濃度為0.4 μδ/πι1 ；29ml環己烷，水浴中超聲萃取40min，靜置5min，取IOml萃取液過濾膜後，取3ml萃取液上樣到活化後的Si相固相萃取柱富集純化，收集流出液①；使用Iml環己烷萃取液淋洗固相萃取柱，收集淋洗液②；將流出液①和淋洗液②合併後裝入試管，加入DMSO進行液液萃取,而後用吸管取出下層溶液待用，繼續向試管內加入DMSO進行液液萃取，同樣用吸管取出下層溶液待用；合併兩次萃取用吸管取出的下層溶液於試管中，加入硫酸鈉溶液，放置數分鐘至試管冷卻；使用環己烷分兩次對冷卻後的溶液進行反萃取，合併萃取後的溶液即為PAHs樣品液；整個PAHs樣品液的提取製備歷時40min ；
[0068]2)氣相色譜質譜聯用(GC/MS-SM)檢測PAHs:按GB/T21130-2007的方法檢測步驟I)中得到的PAHs樣品液各物質濃度，計算後得烤肉中PAHs含量。其中苯並[a]芘為
8.2ug/kg，RSD=4.12% ;二苯並[a，h]蒽為 23.3ug/kg, RSD=4.87% 苯並[g, h, i]芘為 19.3ug/kg, RSD=3.56%ο
[0069]3)酚類化合物和芳香胺樣品液的提取製備:將淋洗後的Si相固相萃取柱用5ml超純水洗脫，收集洗脫液；
[0070]4)芳香胺樣品液的提取製備:將3)中所得洗脫液上樣到C18固相萃取柱富集純化；採用水溶液進行C18柱洗脫，收集得到芳香胺樣品液；
[0071]5)氣相色譜質譜聯用(GC/MS-SIM)檢測芳香胺:檢測步驟4)中得到的芳香胺樣品液，計算後得烤肉中芳香胺含量。其中1-氨基萘為3.4ug/kg，RSD=3.64%，3-氨基聯苯為0.2ug/kg, RSD=3.25%。
[0072]6)酚類化合物樣品液的提取製備:將洗脫後的C18固相萃取柱用甲醇二次洗脫，將得到的有機洗脫液作為酚類化合物樣品液；
[0073]7)高效液相色譜-螢光檢測器(HPLC-FL)檢測酚類化合物:將步驟6)得到的酚類化合物樣品液進行高效液相色譜-螢光檢測器(HPLC-FL)檢測酚類化合物。計算後得烤肉中酚類化合物含量。其中苯酚為0.54ug/g，RSD=2.48% ;鄰苯二酚為0.25ug/g，RSD=4.65% ；對苯二酚為 0.39ug/g,RSD=5.27% ;對甲酚為 0.llug/g, RSD=6.28%。檢測條件為=LUNAC18 色譜柱，柱溫為30°C，螢光激發波長為272nm，發射波長為310nm，流動相A為1% (v/v)醋酸溶液，流動相B為醋酸、乙腈和水的混合液，三者體積比為1:30:69，流動相流速為lml/min，進樣量為10un，以A、B為洗脫劑進行等度洗脫(體積濃度A相40%，B相60%)。
[0074]實施例6
[0075]DPAHs樣品液的提取製備:將26g煙燻魚樣品剪碎後放入錐形瓶中，加入Iml內標(氘代苯並芘濃度為3ng/ml，氘代屈濃度為lng/ml，氘代苊濃度為2ng/ml，氘代-1-氨基萘濃度為2Pg/ml和氘代-4-氨基聯苯濃度為0.4 μδ/πι1 ;)，29ml環己烷，水浴中超聲萃取20min，靜置5min，取IOml萃取液過濾膜後，取3ml萃取液上樣到活化後的Si相固相萃取柱富集純化，收集流出液①；使用Iml環己烷萃取液淋洗固相萃取柱，收集淋洗液②；將流出液①和淋洗液②合併後裝入試管，加入DMSO進行液液萃取,而後用吸管取出下層溶液待用，繼續向試管內加入DMSO進行液液萃取，同樣用吸管取出下層溶液待用；合併兩次萃取用吸管取出的下層溶液於試管中，加入硫酸鈉溶液，放置數分鐘至試管冷卻；使用環己烷分兩次對冷卻後的溶液進行反萃取，合併萃取後的溶液即為PAHs樣品液；整個PAHs樣品液的提取製備歷時80min ；
[0076]2)氣相色譜質譜聯用(GC/MS-SM)檢測PAHs:按GB/T21130-2007的方法檢測步驟I)中得到的PAHs樣品液各物質濃度，計算後得煙燻魚中PAHs含量。其中苯並[a]芘為
7.2ug/kg，RSD=3.24% ;二苯並[a，h]蒽為 25.7ug/kg, RSD=3.92% 苯並[g, h, i]芘為 17.5ug/kg, RSD=2.99%ο
[0077]3)酚類化合物和芳香胺樣品液的提取製備:將淋洗後的Si相固相萃取柱用5ml超純水洗脫，收集洗脫液；
[0078]4)芳香胺樣品液的提取製備:將3)中所得洗脫液上樣到C18固相萃取柱富集純化；採用水溶液進行C18柱洗脫，收集得到芳香胺樣品液；
[0079]5)氣相色譜質譜聯用(GC/MS-SIM)檢測芳香胺:檢測步驟4)中得到的芳香胺樣品液，計算後得煙燻魚中芳香胺含量。其中1-氨基萘為1.8ug/kg，RSD=5.25%，3-氨基聯苯為
0.5ug/kg,RSD=3.56%ο
[0080]6)酚類化合物樣品液的提取製備:將洗脫後的C18固相萃取柱用甲醇二次洗脫，將得到的有機洗脫液作為酚類化合物樣品液；
[0081]7)高效液相色譜-螢光檢測器(HPLC-FL)檢測酚類化合物:將步驟6)得到的酚類化合物樣品液進行高效液相色譜-螢光檢測器(HPLC-FL)檢測酚類化合物。計算後得煙燻魚中酚類化合物含量。其中苯酚為0.78ug/g，RSD=L 65% ;鄰苯二酚為0.39ug/g，RSD=3.55% ;對苯二酚為 0.39ug/g，RSD=4.68% ;對甲酚為 0.37ug/g，RSD=5.78%。檢測條件為=LUNAC18色譜柱，柱溫為30°C，螢光激發波長為272nm，發射波長為310nm，流動相A為1%(v/v)醋酸溶液，流動相B為醋酸、乙腈和水的混合液，三者體積比為1:30:69，流動相流速為lml/min，進樣量為10un，以A、B為洗脫劑進行等度洗脫(體積濃度A相40%，B相60%)。
[0082]實施例7 [0083]I )PAHs樣品液的提取製備:將15g油jt!彳蛋樣品到碎後放入維形瓶中，加入29ml環己烷，Iml內標(氘代苯並芘濃度為3ng/ml，氘代屈濃度為lng/ml，氘代苊濃度為2ng/ml，氘代-1-氨基萘濃度為2Pg/ml和氘代-4-氨基聯苯濃度為0.4 μδ/πι1 ；)，水浴中超聲萃取20min，靜置5min，取IOml萃取液過濾膜後，取3ml萃取液上樣到活化後的Si相固相萃取柱富集純化，收集流出液①；使用Iml環己烷萃取液淋洗固相萃取柱，收集淋洗液②；將流出液①和淋洗液②合併後裝入試管，加入DMSO進行液液萃取,而後用吸管取出下層溶液待用，繼續向試管內加入DMSO進行液液萃取，同樣用吸管取出下層溶液待用；合併兩次萃取用吸管取出的下層溶液於試管中，加入硫酸鈉溶液，放置數分鐘至試管冷卻；使用環己烷分兩次對冷卻後的溶液進行反萃取，合併萃取後的溶液即為PAHs樣品液；整個PAHs樣品液的提取製備歷時60min ；
[0084]2)氣相色譜質譜聯用(GC/MS-SM)檢測PAHs:按GB/T21130-2007的方法檢測步驟I)中得到的PAHs樣品液各物質濃度，計算後得油煎蛋中PAHs含量。其中苯並[a]芘為
8.3ug/kg，RSD=4.05 ;二苯並[a，h]蒽為 20.4ug/kg, RSD=5.88% 苯並[g, h, i]芘為 7.32ug/kg, RSD=3.59%ο
[0085]3)酚類化合物和芳香胺樣品液的提取製備:將淋洗後的Si相固相萃取柱用5ml超純水洗脫，收集洗脫液；
[0086]4)芳香胺樣品液的提取製備:將3)中所得洗脫液上樣到C18固相萃取柱富集純化；採用水溶液進行C18柱洗脫，收集得到芳香胺樣品液；
[0087]5)氣相色譜質譜聯用(GC/MS-SIM)檢測芳香胺:檢測步驟4)中得到的芳香胺樣品液，計算後得油煎蛋中芳香胺含量。其中1-氨基萘為3.8ug/kg，RSD=4.84%，3-氨基聯苯為
0.4ug/kg, RSD=4.52%。
[0088]6)酚類化合物樣品液的提取製備:將洗脫後的C18固相萃取柱用甲醇二次洗脫，將得到的有機洗脫液作為酚類化合物樣品液；
[0089]7)高效液相色譜-螢光檢測器(HPLC-FL)檢測酚類化合物:將步驟6)得到的酚類化合物樣品液進行高效液相色譜-螢光檢測器(HPLC-FL)檢測酚類化合物含量，檢測酚類化合物。計算後得油煎蛋中酚類化合物含量。其中苯酚為0.33ug/g，RSD=2.78%;鄰苯二酚為 0.21ug/g，RSD=3.94% ;對苯二酚為 0.28ug/g，RSD=4.86% ;對甲酚為 0.15ug/g，RSD=5.22%。檢測條件為=LUNAC18色譜柱，柱溫為30°C，螢光激發波長為272nm，發射波長為310nm，流動相A為1% (v/v)醋酸溶液，流動相B為醋酸、乙腈和水的混合液，三者體積比為1:30:69，流動相流速為lml/min，進樣量為10un，以A、B為洗脫劑進行等度洗脫(體積濃度A 相 40%, B 相 60%) ο
[0090]實施例8
[0091]I) PAHs樣品液的提取製備:將15g油炸雞翅(無骨)樣品剪碎後放入錐形瓶中，力口入29ml環己烷，Iml內標(氘代苯並芘濃度為3ng/ml，氘代屈濃度為lng/ml，氘代苊濃度為2ng/ml，氘代-1-氨基萘濃度為2Pg/ml和氘代-4-氨基聯苯濃度為0.4 μδ/πι1 ;)，水浴中超聲萃取20min，靜置5min，取IOml萃取液過濾膜後，取3ml萃取液上樣到活化後的Si相固相萃取柱富集純化，收集流出液①；使用Iml環己烷萃取液淋洗固相萃取柱，收集淋洗液②；將流出液①和淋洗液②合併後裝入試管，加入DMSO進行液液萃取,而後用吸管取出下層溶液待用，繼續向試管內加入DMSO進行液液萃取，同樣用吸管取出下層溶液待用；合併兩次萃取用吸管取出的下層溶液於試管中，加入硫酸鈉溶液，放置數分鐘至試管冷卻；使用環己燒分兩次對冷卻後的溶液進行反萃取，合併萃取後的溶液即為PAHs樣品液；整個PAHs樣品液的提取製備歷時60min ；
[0092]2)氣相色譜質譜聯用(GC/MS-SM)檢測PAHs:按GB/T21130-2007的方法檢測步驟I)中得到的PAHs樣品液各物質濃度，計算後得油炸雞翅中PAHs含量。其中苯並[a]芘為 11.6ug/kg，RSD=3.53% ;二苯並[a, h]蒽為 26.2ug/kg，RSD=5.46% 苯並[g, h, i]芘為7.8ug/kg, RSD=3.68%。
[0093]3)酚類化合物和芳香胺樣品液的提取製備:將淋洗後的Si相固相萃取柱用5ml超純水洗脫，收集洗脫液；
[0094]4)芳香胺樣品液的提取製備:將3)中所得洗脫液上樣到C18固相萃取柱富集純化；採用水溶液進行C18柱洗脫，收集得到芳香胺樣品液；
[0095]5)氣相色譜質譜聯用(GC/MS-SIM)檢測芳香胺:檢測步驟4)中得到的芳香胺樣品液，計算後得油炸雞翅中芳香胺含量。其中1-氨基萘為3.7ug/kg，RSD=4.44%，3-氨基聯苯為 0.8ug/kg, RSD=4.93%。
[0096]6)酚類化合物樣品液的提取製備:將洗脫後的C18固相萃取柱用甲醇二次洗脫，將得到的有機洗脫液作為酚類化合物樣品液；
[0097]7)高效液相色譜-螢光檢測器(HPLC-FL)檢測酚類化合物:將步驟6)得到的酚類化合物樣品液進行高效液相色譜-螢光檢測器(HPLC-FL)檢測酚類化合物。計算後得油炸雞翅中酚類化合物含量。其中苯酚為0.52ug/g，RSD=L 97% ;鄰苯二酚為0.36ug/g，RSD=3.77% ;對苯二酚為 0.35ug/g，RSD=5.03% ;對甲酚為 0.23ug/g，RSD=3.28%。檢測條件為=LUNAC18色譜柱，柱溫為30°C，螢光激發波長為272nm，發射波長為310nm，流動相A為1%(v/v)醋酸溶液，流動相B為醋酸、乙腈和水的混合液，三者體積比為1:30:69，流動相流速為lml/min，進樣量為10un，以A、B為洗脫劑進行等度洗脫(體積濃度A相40%，B相60%)。
[0098]上述的結果表明本發明的方法可以一次性的來檢測食品中PAHs、酚類化合物和芳香胺的殘留量。
【權利要求】
1.一種同時分析食品中多種芳香類有害物質的方法，其特徵在於，所述的方法包含有如下的步驟: 1)PAHs樣品液的提取製備:待檢測樣品剪碎後放入錐形瓶，加入內標物質，使用有機溶劑A超聲萃取l(T60min，提取需檢測的物質，靜止，過濾膜，取I飛ml萃取液上樣到活化後的正相固相萃取柱A，收集流出液；並用有機溶劑A淋洗固相萃取柱A，收集淋洗液，將流出液和淋洗液混合後，加入DMSO進行萃取，取下層的液體加入硫酸鈉溶液，放置數分鐘至試管冷卻；使用環己烷分兩次對冷卻後的溶液進行反萃取，合併萃取後的溶液即為PAHs樣品液； 2)PAHs檢測:氣相色譜質譜聯用來檢測步驟I)中得到的PAHs樣品液； 3)酚類化合物和芳香胺樣品液的提取製備:將淋洗後的固相萃取柱A用水二次洗脫，收集洗脫液； 4)芳香胺樣品液的提取製備:將3)中所得洗脫液上樣到活化後的反相固相萃取B柱進行富集純化；採用水溶液進行洗脫，收集得到芳香胺樣品液； 5)芳香胺的檢測:採用氣相色譜質譜聯用檢測步驟4)中得到的芳香胺樣品液； 6)酚類化合物樣品液的提取製備:將洗脫後的C18固相萃取柱用甲醇進行洗脫，將得到的有機洗脫液作為酚類化合物樣品液； 7)酚類化合物的檢測:用高效液相色譜-螢光檢測器檢測步驟6)得到的酚類化合物樣品液。
2.如權利要求1所述的方法，其特徵在於所述的步驟I)中有機溶劑A為環己烷。
3.如權利要求1所述的方法，其特徵在於所述的步驟I)中超聲萃取時間為2(T40min。
4.如權利要求1所述的方法，其特徵在於所述的步驟I)中的正相固相萃取柱A為Si相固相萃取柱。
5.如權利要求1所述的方法，其特徵在於所述的步驟I)中硫酸鈉溶液濃度為0.01 ?0.03g/ml。
6.如權利要求1所述的方法，其特徵在於所述步驟3)中洗脫用水為超純水。
7.如權利要求1所述的方法，其特徵在於所述的步驟4)中反相固相萃取柱B為C18固相萃取柱。
8.如權利要求1所述的方法，其特徵在於所述的步驟6)中有機溶劑B為甲醇。
【文檔編號】G01N30/06GK103439431SQ201310390268
【公開日】2013年12月11日 申請日期:2013年8月31日 優先權日:2013年8月31日
【發明者】齊祥明, 陳玉新, 鄧雅婧, 鞏文萍 申請人:中國海洋大學