一種複合益生菌噴施劑的製備方法
2023-06-10 15:09:11 1
專利名稱：一種複合益生菌噴施劑的製備方法
技術領域：
本發明涉及的是微生物領域，具體的說是一種複合益生菌噴施劑的製備方法。
背景技術：
微生物葉面肥是微生物肥料的一種，是噴施於植物表面的含有活微生物的特定製品，使用的目的在於增加肥料來源、調節植物體環境微生物平衡、改善植物體營養代謝水平，促進植物的生長，提高抗病蟲害的能力。隨著人們對可用作微生物肥料的微生物種類的逐漸探明，固氮菌、芽孢桿菌、光合細菌以及纖維分解菌、乳酸菌、酵母菌、放線菌等多種微生物均可用作開發微生物肥料。並且，不同微生物種類在作為微生物肥料的促生長機理不同，功能也有所差異，因此，探討複合菌群用作微生物肥料是有效的解決途徑。但是，在複合微生物的生產過程中，由於菌種複雜，條件限制因素多，因此，開發安全有效的生產方法是解決複合微生物生產的重要研究課題。本發明針對上述問題，基於目前有關生物肥料的有效微生物研究結果，開發了多種功能性微生物複合組合的針對性生產方法，解決複合微生物肥料生產困難的問題。其產品具有功能效果穩定、全面的特性，生產方法具有成本低、效果好、可操作性強的特定。
發明內容
本發明的目的在於提供一種複合益生菌噴施劑的製備方法。為實現上述目的，本發明採用的技術方案為一種複合益生菌噴施劑的製備方法1)複合菌種的增值培養將產朊假絲酵母、乳酸鏈球菌、嗜酸乳桿菌、枯草芽孢桿菌、慢生大豆根瘤菌、生脂固氮螺菌、沼澤紅假單孢菌、巨大芽孢桿菌、膠質芽孢桿菌和圓褐固氮菌分別按重量百分比-4%的接種量分別在各自的培養基中進行增殖培養，直至對數生長期。2)複合微生物的發酵物將上述分別增殖培養的產朊假絲酵母、乳酸鏈球菌、嗜酸乳桿菌、枯草芽孢桿菌混合，而後將混合後菌種按照重量百分比3% -4%接種於液體發酵培養基中，在25-37°C下，發酵培養48-7池，所得發酵物再與分別上述培養至對數生長期的慢生大豆根瘤菌、生脂固氮螺菌、沼澤紅假單孢菌、巨大芽孢桿菌、膠質芽孢桿菌和圓褐固氮菌混合得複合微生物的發酵物，混合比例為共同發酵物佔40%，每單一培養細菌分別佔 10% ；3)噴施劑將上述所得複合微生物的發酵物稀釋後即為噴施劑。所述步驟1)中各菌種的培養基分別為產朊假絲酵母的培養基馬鈴薯浸粉3g，葡萄糖20g，瓊脂粉15g，蒸餾水加至 IOOOmL, 121 °C高壓滅菌20分鐘；乳酸鏈球菌的培養基葡萄糖2%，蛋白腖1%，牛肉膏1%，酵母膏0.5%，磷酸氫二鉀0. 2 %，乙酸鈉0. 5 %，檸檬酸銨0. 2 %，硫酸鎂0. 058 %，硫酸錳0. 025 %，瓊脂1. 5-2%, pH6. 5ο 121°C高壓滅菌 20 分鐘;嗜酸乳桿菌的培養基葡萄糖2%，蛋白腖1%，牛肉膏1%，酵母膏0.5%，磷酸氫二鉀0. 2 %，乙酸鈉0. 5 %，檸檬酸銨0. 2 %，硫酸鎂0. 058 %，硫酸錳0. 025 %，瓊脂 1. 5-2%, pH6. 5ο 121°C高壓滅菌 20 分鐘;枯草芽孢桿菌的培養基蛋白腖10g，瓊脂20g，氯化鈉5g，肉浸粉10g，水加至 IOOOmL, pH7. 2。121°C 高壓滅菌 20 分鐘；生脂固氮螺菌的培養基甘露醇10g，酵母膏lg, K2HPO4 0. 15g，NaClO. llg, Rh溶液 4ml，瓊脂 20g,蒸餾水 IOOOmL, ρΗ6· 8 7. 0 ；巨大芽孢桿菌的培養基牛肉膏5g，蛋白腖5g，氯化鈉(NaCl) 5g，蒸餾水IOOOmL, ρΗ6· 8 7· 2 ；慢生大豆根瘤菌培養基甘露醇10g、K2HP04 0. 5g、酵母粉0. 4g、MgS04 ·7Η20 0. 2g、 NaCl 0. lg、CaCl2 · 6H20 0. lg、蒸溜水 1000mL、pH6. 8-7. 0。121°C高壓滅菌 20 分鐘。沼澤紅假單孢菌培養基酵母粉0. 3%，蛋白腖0. 3%，硫酸鎂0. 05%，氯化鈣 0. 03%，蒸餾水 IOOOmL, pH6. 8-7.0 ；121°C高壓滅菌 20 分鐘。膠質芽孢桿菌培養基蔗糖10g，酵母膏0. 2g，(NH4) SO4 0. 5g，MgSO4 0. lg, KC10. lg, Na2HPO4 0. lg, CaCO3 1. 0g，蒸餾水 IOOOmL, ρΗ7· 0。121°C 高壓滅菌 20 分鐘；圓褐固氮菌培養基葡萄糖10g, KH2PO4 0. 2g，MgSO4 · 7H20 0. 2g，NaCl 0. 2g， CaSO4 · 7H20 0. 2g, CaCO3 5. 0g，蒸溜水 lOOOmL，pH7. 0-7. 2，113°C滅菌 30 分鐘。所述1 溶液為NaMo045g，H3B045g,蒸餾水lOOOmL，pH3. 0。所述步驟2~)中的液體發酵培養基為葡萄糖？^，蛋白腖丨^，牛肉膏丨^，酵母膏0.5%。上述菌株均購自中國農業微生物菌種保藏中心，其產朊假絲酵母於中國農業微生物菌種保藏中心的編號為ACCC20060 ；乳酸鏈球菌於中國農業微生物菌種保藏中心的編號為ACCC10653 ；嗜酸乳桿菌於中國工業微生物菌種保藏中心的編號為CICC6005 ；枯草芽孢桿菌於中國工業微生物菌種保藏中心的編號為CICC20037 ；慢生大豆根瘤菌於中國農業微生物菌種保藏中心的編號為ACCC15402 ；生脂固氮螺菌於中國農業微生物菌種保藏中心的編號為ACCC10481 ；沼澤紅假單孢菌於中國農業微生物菌種保藏中心的編號為ACCC10649 ； 巨大芽孢桿菌於中國農業微生物菌種保藏中心的編號為ACCC(^991 ；膠質芽孢桿菌於中國農業微生物菌種保藏中心的編號為ACCC02983 ；圓褐固氮菌於中國農業微生物菌種保藏中心的編號為ACCC10098。本發明所具有的優點1.本發明葉面噴施劑採用複合微生物肥料的菌種複合組合，該組合可協調發揮促生長作用，具有功能互補性；2.本發明葉面噴施劑有利於發酵，pH值在4. 5-7. 5之間，活微生物數量在30億/ mL以上，微生物活力穩定；3.本發明葉面噴施劑的效果良好，效果試驗表明，可提高蔬菜的品味、產量，其產量可以提高5. 0% -10. 0% ；同時可延長花卉的觀賞期和草坪綠期8-10天。
具體實施例方式實施例1
1)複合菌種的增值培養將產朊假絲酵母、乳酸鏈球菌、嗜酸乳桿菌、枯草芽孢桿菌、慢生大豆根瘤菌、生脂固氮螺菌、沼澤紅假單孢菌、巨大芽孢桿菌、膠質芽孢桿菌和圓褐固氮菌分別按重量百分比3%的接種量分別在各自的培養基中進行增殖培養，直至對數生長期。2)複合微生物的發酵物將上述分別增殖培養的產朊假絲酵母、乳酸鏈球菌、嗜酸乳桿菌、枯草芽孢桿菌按體積比1 :1:1: 1混合，而後將混合後菌種按照重量百分比 4%接種於液體發酵培養基中，在30°C下，發酵培養70h，發酵物pH值為4. 5-7. 5，每毫升培養基中的有益菌總量達到30億以上，其中液體發酵培養基為葡萄糖2 %，蛋白腖1 %，牛肉膏1%，酵母膏0. 5%，餘量為蒸餾水，然後將發酵產物分別與慢生大豆根瘤菌、生脂固氮螺菌、沼澤紅假單孢菌和巨大芽孢桿菌混合，發酵產物佔40%、慢生大豆根瘤菌佔10%、生脂固氮螺菌佔10%、沼澤紅假單孢菌佔10%、巨大芽孢桿菌佔10%、膠質芽孢桿菌佔10%和圓褐固氮菌佔10%，混合後得到複合微生物的發酵物。上述菌株均可分別按照常規方法培養，本實施例給出的知識眾多培養條件中的一種，分別為產朊假絲酵母的培養基馬鈴薯浸粉3g，葡萄糖20g，瓊脂粉15g，蒸餾水加至 IOOOmL, 121°C高壓滅菌20分鐘。產朊假絲酵母增殖培養條件培養Μ_4 ι。乳酸鏈球菌的培養基葡萄糖2%，蛋白腖1%，牛肉膏1%，酵母膏0.5%，磷酸氫二鉀0. 2 %，乙酸鈉0. 5 %，檸檬酸銨0. 2 %，硫酸鎂0. 058 %，硫酸錳0. 025 %，瓊脂 1. 5-2%, pH6. 5。121°C高壓滅菌20分鐘。乳酸鏈球菌增殖培養條件30°C培養48-7 。嗜酸乳桿菌的培養基葡萄糖2%，蛋白腖1%，牛肉膏1%，酵母膏0.5%，磷酸氫二鉀0. 2 %，乙酸鈉0. 5 %，檸檬酸銨0. 2 %，硫酸鎂0. 058 %，硫酸錳0. 025 %，瓊脂 1. 5-2%, pH6. 5。121°C高壓滅菌20分鐘。嗜酸乳桿菌增殖培養條件37°C培養48-72h0枯草芽孢桿菌的培養基蛋白腖10g，瓊脂20g，氯化鈉5g，肉浸粉10g，水加至 IOOOmL, ρΗ7· 2。121°C高壓滅菌20分鐘。枯草芽孢桿菌增殖培養條件30°C培養48-72h0慢生大豆根瘤菌的培養基甘露醇10g、K2HPO4 0. 5g、酵母粉0. 4g、 MgSO4 · 7Η200· 2g、NaC10. lg、CaCl2 · 6H200. lg、蒸餾水 1000mL、pH6. 8-7. 0。121°C 高壓滅菌 20分鐘。慢生大豆根瘤菌增殖培養條件培養48-7 。生脂固氮螺菌的培養基蔗糖10g，K2HPO4 0. 5g，NaClO. lg,酵母膏lg，檸檬酸鐵 (1% ) ImLjCaSO4O. 2g, MgSO4 ·7Η20 0. 2g, MnSO4 (1 % ) ImL，NaMoO4 (1 % ) lmL，硼酸(1% ) ImL, 蒸餾水1000mL，pH6. 8-7. 0 ； 121°C高壓滅菌20分鐘。生脂固氮螺菌增殖培養條件在25_30°C 條件下，培養48-7 。嗜沼澤紅假單孢菌的培養基酵母粉0. 3%，蛋白腖0. 3%，硫酸鎂0. 05%，氯化鈣 0. 03%，蒸餾水lOOOmL，pH6. 8-7. 0 ；121°C高壓滅菌20分鐘。嗜沼澤紅假單孢菌增殖培養條件在30°C條件下，培養72-%h。巨大芽孢桿菌的培養基蛋白腖0. 5 %，牛肉膏0. 3 %，氯化鈉0. 5 %，蒸餾水 IOOOmL, pH7. 0 ；121°C高壓滅菌20分鐘。巨大芽孢桿菌增殖培養條件在30°C條件下，培養 24-48h0膠質芽孢桿菌培養基蔗糖IOg,酵母膏0. 2g，(NH4) SO4 0. 5g，MgSO4 0. lg, KC10. lg, Na2HPO4 0. lg, CaCO3 1. 0g，蒸餾水 IOOOmL, ρΗ7· 0。121°C 高壓滅菌 20 分鐘；增殖培養條件在32-36 °C條件下，培養20-40h。圓褐固氮菌培養基葡萄糖10g, KH2PO4 0. 2g，MgSO4 · 7Η200· 2g，NaClO. 2g， CaSO4 · 7H200. 2g, CaCO3 5. Og,蒸餾水 lOOOmL，pH7. 0-7. 2，113°C滅菌 30 分鐘。增殖培養條件在條件下，培養Μ-4 ι。上述菌株均購自中國農業微生物菌種保藏中心，其產朊假絲酵母於中國農業微生物菌種保藏中心的編號為ACCC20060 ；乳酸鏈球菌於中國農業微生物菌種保藏中心的編號為ACCC10653 ；嗜酸乳桿菌於中國工業微生物菌種保藏中心的編號為CICC6005 ；枯草芽孢桿菌於中國工業微生物菌種保藏中心的編號為CICC20037 ；慢生大豆根瘤菌於中國農業微生物菌種保藏中心的編號為ACCC15402 ；生脂固氮螺菌於中國農業微生物菌種保藏中心的編號為ACCC10481 ；沼澤紅假單孢菌於中國農業微生物菌種保藏中心的編號為ACCC10649 ； 巨大芽孢桿菌於中國農業微生物菌種保藏中心的編號為ACCC(^991 ；膠質芽孢桿菌於中國農業微生物菌種保藏中心的編號為ACCC02983 ；圓褐固氮菌於中國農業微生物菌種保藏中心的編號為ACCC10098。3)噴施劑將上述所得複合微生物的發酵物稀釋後即為噴施劑。使用方法將所述噴施劑按1 1000水稀釋後，噴施於植物葉片上。試驗材料溫室內栽培的番茄，按照常規管理。試驗設計試驗設計對照組和微生物葉面噴施劑施用組(用量為1. 5mL/m2，水稀釋1000倍)，每個處理組4個重複，每個重複15m2。產量測定測定試驗期內採收的可上市番茄總重量。試驗結果對照組的番茄產量為5. 3kg/m2，噴施組為6. 2kg/m2，產量提高了 16. 9%。實施例21)複合菌種的增值培養將產朊假絲酵母、乳酸鏈球菌、嗜酸乳桿菌、枯草芽孢桿菌、慢生大豆根瘤菌、生脂固氮螺菌、沼澤紅假單孢菌、巨大芽孢桿菌、膠質芽孢桿菌和圓褐固氮菌分別按重量百分比的接種量分別在各自的培養基中進行增殖培養，直至對數生長期。2)複合微生物的發酵物將上述分別增殖培養的產朊假絲酵母、乳酸鏈球菌、嗜酸乳桿菌、枯草芽孢桿菌混合，而後將混合後菌種按照重量百分比3%接種於液體發酵培養基中，在25°C下，發酵培養72h，所得發酵物再與分別上述培養至對數生長期的慢生大豆根瘤菌、生脂固氮螺菌、沼澤紅假單孢菌、巨大芽孢桿菌、膠質芽孢桿菌和圓褐固氮菌混合得複合微生物的發酵物，混合比例為共同發酵物佔40%，每單一培養細菌分別佔10% ；3)噴施劑將上述所得複合微生物的發酵物稀釋後即為噴施劑。實施例21)複合菌種的增值培養將產朊假絲酵母、乳酸鏈球菌、嗜酸乳桿菌、枯草芽孢桿菌、慢生大豆根瘤菌、生脂固氮螺菌、沼澤紅假單孢菌、巨大芽孢桿菌、膠質芽孢桿菌和圓褐固氮菌分別按重量百分比2%的接種量分別在各自的培養基中進行增殖培養，直至對數生長期。2)複合微生物的發酵物將上述分別增殖培養的產朊假絲酵母、乳酸鏈球菌、嗜酸乳桿菌、枯草芽孢桿菌混合，而後將混合後菌種按照重量百分比3%接種於液體發酵培養基中，在37°C下，發酵培養48h，所得發酵物再與分別上述培養至對數生長期的慢生大豆根瘤菌、生脂固氮螺菌、沼澤紅假單孢菌、巨大芽孢桿菌、膠質芽孢桿菌和圓褐固氮菌混合得複合微生物的發酵物，混合比例為共同發酵物佔40%，每單一培養細菌分別佔10% ；
3)噴施劑將上述所得複合微生物的發酵物稀釋後即為噴施劑。
權利要求
1.一種複合益生菌噴施劑的製備方法，其特徵在於1)複合菌種的增值培養將產朊假絲酵母、乳酸鏈球菌、嗜酸乳桿菌、枯草芽孢桿菌、 慢生大豆根瘤菌、生脂固氮螺菌、沼澤紅假單孢菌、巨大芽孢桿菌、膠質芽孢桿菌和圓褐固氮菌分別按重量百分比-4%的接種量分別在各自的培養基中進行增殖培養，直至對數生長期。2)複合微生物的發酵物將上述分別增殖培養的產朊假絲酵母、乳酸鏈球菌、嗜酸乳桿菌、枯草芽孢桿菌混合，而後將混合後菌種按照重量百分比3% -4%接種於液體發酵培養基中，在25-37°C下，發酵培養48-72h，所得發酵物再與分別上述培養至對數生長期的慢生大豆根瘤菌、生脂固氮螺菌、沼澤紅假單孢菌、巨大芽孢桿菌、膠質芽孢桿菌和圓褐固氮菌混合得複合微生物的發酵物，混合比例為共同發酵物佔40%，每單一培養細菌分別佔 10% ；3)噴施劑將上述所得複合微生物的發酵物稀釋後即為噴施劑。
2.按權利要求1所述的複合益生菌噴施劑的製備方法，其特徵在於所述步驟1)中各菌種的培養基分別為產朊假絲酵母的培養基馬鈴薯浸粉3g，葡萄糖20g，瓊脂粉15g，蒸餾水加至IOOOmL, 121°C高壓滅菌20分鐘；乳酸鏈球菌的培養基葡萄糖2%，蛋白腖1%，牛肉膏1%，酵母膏0. 5 %，磷酸氫二鉀0. 2 %，乙酸鈉0. 5 %，檸檬酸銨0.2%，硫酸鎂0. 058 %，硫酸錳0. 025 %，瓊脂1. 5-2 %， ρΗ6· 5。121°C高壓滅菌20分鐘；嗜酸乳桿菌的培養基葡萄糖2%，蛋白腖1%，牛肉膏1%，酵母膏0.5%，磷酸氫二鉀0. 2 %，乙酸鈉0. 5 %，檸檬酸銨0.2%，硫酸鎂0. 058 %，硫酸錳0. 025 %，瓊脂1. 5-2 %， pH6. 5。121°C高壓滅菌20分鐘;枯草芽孢桿菌的培養基蛋白腖10g，瓊脂20g，氯化鈉5g，肉浸粉10g，水加至IOOOmL, pH7. 2。121°C高壓滅菌20分鐘;生脂固氮螺菌的培養基甘露醇10g，酵母膏lg，K2HPO4 0. 15g,NaC10. llg，Rh溶液4ml， 瓊脂20g，蒸餾水IOOOmL, ρΗ6· 8 7· 0 ； 121°C高壓滅菌20分鐘；巨大芽孢桿菌的培養基牛肉膏5g，蛋白腖5g，氯化鈉(NaCl)5g，蒸餾水IOOOmL, ρΗ6· 8 7. 2 ； 121°C高壓滅菌20分鐘；慢生大豆根瘤菌培養基甘露醇10g、K2HPO4 0. 5g、酵母粉0. 4g、MgSO4 · 7Η200· 2g、 NaClO. lg、CaCl2 · 6H200. lg、蒸溜水 1000mL、pH6. 8-7. 0。121°C 高壓滅菌 20 分鐘；沼澤紅假單孢菌培養基酵母粉0. 3%，蛋白腖0. 3%，硫酸鎂0. 05%，氯化鈣0. 03%， 蒸餾水IOOOmL, ρΗ6· 8-7. 0 ；121°C高壓滅菌20分鐘。膠質芽孢桿菌培養基蔗糖10g，酵母膏0. 2g，(NH4) SO4 0. 5g，MgSO4 0. lg, KC10. lg, Na2HPO4 0. lg, CaCO3 1. 0g，蒸餾水 IOOOmL, ρΗ7· 0。121°C 高壓滅菌 20 分鐘；圓褐固氮菌培養基葡萄糖 10g, KH2PO4 0. 2g，MgSO4 · 7Η200· 2g，NaClO. 2g， CaSO4 · 7Η200· 2g, CaCO3 5. 0g，蒸溜水 lOOOmL，pH7. 0-7. 2，113°C滅菌 30 分鐘。
3.按權利要求2所述的複合益生菌噴施劑的製備方法，其特徵在於所述Rh溶液為 NaMo045g, H3B045g，蒸餾水 lOOOmL，ρΗ3· 0。
4.按權利要求1所述的複合益生菌噴施劑的製備方法，其特徵在於所述步驟2)中的液體發酵培養基為葡萄糖2%，蛋白腖1% ，牛肉膏1%，酵母膏0.5%。
全文摘要
本發明涉及的是微生物領域，具體的說是一種複合益生菌噴施劑的製備方法。按重量百分比1％-4％的接種量分別在各自的培養基中進行增殖培養，而後混合按照重量百分比3％-4％接種於液體發酵培養基中，最後在溫度25-37℃下，發酵培養48-72h。本發明葉面噴施劑可延長蔬菜生長期、提高蔬菜產量、品味，蔬菜產量可以提高5.5-10.0％；延長花卉觀賞期，花卉觀賞期可以延長8-10天。
文檔編號C05F11/08GK102153380SQ20101058877
公開日2011年8月17日 申請日期2010年12月15日 優先權日2010年12月15日
發明者于波, 劉麗麗, 單立秋, 吳瓊, 宋良敏, 朱天勇, 王守峰, 白子金, 白志超, 白春生, 邵中金, 陳德民, 陳思, 高忠武, 高林 申請人:瀋陽科豐牧業科技有限公司