聚乙二醇化渥曼青黴素軛合物的製作方法

2023-05-29 17:32:21

專利名稱：聚乙二醇化渥曼青黴素軛合物的製作方法
背景技術：
渥曼青黴素是一種真菌代謝物，已發現為信號轉導途徑中磷脂醯肌醇-3(OH)-激酶(PI3K)和TOR激酶作用的有效催化抑制劑。(Norman，Bryan H.等，(1996)″Studies on the Mechanism of thePhosphatidylinositol 3-Kinase Inhibition by Wortmannin and RelatedAnalogs(渥曼青黴素及相關類似物抑制磷脂醯肌醇3-激酶的機理研究)″、J.Med.Chem.，39，1106-111和Creemer，Lawrence C.(1996)″Synthesis and in Vitro Evaluation of New Wortmannin EstersPotentInhibitors of Phosphatidylinositol 3-Kinase(新渥曼青黴素酯磷脂醯肌醇3-激酶活性抑制劑的合成及體外評價)″，J.Med.Chem，39，5021-5024)。
1a類PI3K(稱為PI3K)是由p85調節亞單位和p110催化亞單位組成的異二聚體酶。響應生長因子受體的刺激，PI3K催化產生細胞膜中的脂質第二信使磷脂醯肌醇-3，4，5-三磷酸(PIP3)。PIP3又幫助激活寬範圍的下遊細胞底物。PI3K下遊最重要的信號介質包括絲氨酸/蘇氨酸激酶AKT和雷帕黴素(mTOR)的哺乳動物靶。AKT通過多細胞死亡/凋亡蛋白和細胞周期因子的直接磷酸化而獲得顯性存活信號並促進增殖。mTOR通過控制細胞蛋白質翻譯而成為細胞生長的中心調控因子。因此，PI3K/AKT/TOR途徑對細胞增殖、生長、存活和血管生成至關重要。人類癌症中，PI3K/AKT/TOR途徑下調是發生在所有成年人腫瘤中最常見的事件之一。腫瘤抑制基因PTEN是一種PIP3磷酸酶和一種PI3K信號的負向調節因子，據估計30-50％的所有人類癌症中發生腫瘤抑制基因PTEN的遺傳損失，這些癌症包括肺癌、前列腺癌、乳腺癌、腦癌、腎癌、黑素瘤、卵巢癌、子宮內膜癌、甲狀腺癌和淋巴癌。另外，已發現PI3K表達的結構性提高與肺癌、卵巢癌和胰腺癌有關。最後，細胞表面的致癌基因如Her-2、EGFR和Ras引起乳腺、前列腺、結腸和肺腫瘤中結構性PI3K信號。這些臨床數據為開發PI3K抑制劑為新的抗癌藥提供有力的理論依據。(Cantley，L.and Neel，B.(1999)″New Insights into TumorSuppressionPTEN Suppresses Tumor Formation by Restraining thePhosphoinositide 3-kinase/AKT pathway(腫瘤抑制的新觀點PTEN通過抑制磷酸肌醇3-激酶/AKT路徑抑制腫瘤形成)″，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，96，4240-4245)。PI3激酶和TOR激酶在癌症(Vivanco，I.andSawyer，C.(2002)″The phosphatidylinositol 3-kinase-AKT Pathway inHuman Cancer(人癌症中的磷脂醯肌醇3-激酶-AKT路徑)″，NatureReviews Cancer，2，489-501)、缺血性心臟病和再狹窄(Shiojima，I.AndWalsh，K.(2002)″Role of Akt Signaling in Vascular Homeostasis andAngiogenesis(血管內環境穩定和血管生成中Akt信號的作用)″，Circulation Research，90，1243-1250和Ruygrok P.等，(2003)″Rapamycinin Cardiovascular Medicine(心血管藥物中雷帕黴素)″，Intern Med J.，33，103-109)、炎症(Wymann，M.等，(2003)″Phosphoinostide 3-kinasegammaA Key Modulator in Inflammation and Allergy(γ磷酸肌醇(Phosphoinostide)3-激酶炎症和變態反應中重要的調節劑)″BiochemSoc Trans，31，275-280和Kwak，Yong-Geun等，(April 2003)″Involvement of PTEN in airway hyperresponsiveness and inflammationin bronchial asthma(支氣管哮喘中氣道高反應性和炎症中涉及PTEN)″，The Journal of Clinical Investigation，1117，1083-1092)、血小板凝集(Watanabe，N.等，(2003年3月)″Functional Phenotype ofPhosphoinositide 3-kinase p85(alpha)Null Platelets Characterized by anImpaired Response to GP VI Stimulation(以對GP VI刺激減少反應為特徵的磷酸肌醇3-激酶p85(α)無效血小板功能性表型)″，Blood(epub))、硬化症(Kenerson，H.等，(2002)″Activated Mammalian Target ofRapamycin in the Pathogenesis of Tuberous Sclerosis Complex RenalTumors(雷帕黴素在結節性硬化複合性腎瘤發病中的活化哺乳動物靶)″，Cancer Res.，62，5645-5650)、呼吸性疾病(Kitaura，J.等，(2000)″AKT-dependent Cytokine Production in Mast Cells(肥大細胞中AKT-依賴性細胞因子的產生)″，J.Exp.Med.，192，729-739和Stewart A.(2001)″Airway Wall Remodeling and Hyper-responsivenessModelingRemodeling in vitro and in vivo(氣道壁改變和高反應性體外和體內模型化改變)″，Pulm Pharmacol Ther，14，255-265)、HIV (Francois，F.and Klotman，M.″Phosphatidylinositol 3-Kinase Regulates HumanImmunodeficiency Virus Type-1Replication Following Viral Entry inPrimary CD4(+)T Lymphocytes and Macrophages(病毒進入初級CD4(+)T淋巴細胞和巨噬細胞後磷脂醯肌醇3-激酶調節1型人免疫缺陷病毒複製)″，J.Virol.，77，2539-2549)和骨吸收疾病(Pilkington，M.等，(1998)″Wortmannin Inhibits Spreading and Chemotaxis of RatOsteoclasts in vitro(體外渥曼青黴素抑制大鼠破骨細胞擴散和趨化性)″，J Bone Miner Res，13，688-694)中已顯示出活性。
PI 3-激酶以85kDa調節亞單位和110kDa催化亞單位緊密結合的異二聚體存在，並在由幾乎所有配基活化生長因子受體和致癌基因蛋白酪氨酸激酶組成的細胞複合物中發現(Cantley，L.C.等，Cell，64281-302(1991))。顯然，85kDa調節亞單位作為PI 3-激酶的接合物與生長因子受體和酪氨酸磷酸化蛋白質相互作用(Margolis，C.CellGrowth Differ.，373-80(1992))。
儘管PI 3-激酶看起來是信號轉導中重要的酶，與細胞的有絲分裂和惡性轉化有特定關聯，但是已確定只有少數水溶性藥物-聚合物軛合物對PI 3-激酶有抑制活性(見，如Matter，W.F.等，Biochem.Biophys，Res.Commun.，186624-631(1992))。與本發明方法中使用的水溶性藥物-聚合物軛合物的選擇性PI 3-激酶活性相反，Matter等使用的生物類黃酮素(bioflavinoid)水溶性藥物-聚合物軛合物特別是槲皮苷及其某些類似物抑制PI 3-激酶和其它激酶如蛋白質激酶C和PI 4-激酶(同上)。
1995年1月3日頒布的美國專利號5,378,725提供了使用渥曼青黴素或其某些類似物之一抑制哺乳動物中PI 3-激酶的方法。渥曼青黴素的缺點之一是其對活體生物的毒性。即使在低劑量時，純品渥曼青黴素全身劑量也常常限於實驗動物使用。
本領域熟知渥曼青黴素的生物合成產物，其衍生物由渥曼青黴素合成。(Dewald，Beatrice等，(1988)″Two Transduction Sequences AreNecessary for Neutrophil Activation by Receptor Agonists(受體激動劑活化嗜中性粒細胞需要兩種轉導序列)″，The Journal of BiologicalChemistry，Vol.263，11月5日發行，pp 16179-16184；Norman，Bryan H.等，(1996)″Studies on the Mechanism of Phosphatidylinositol 3-KinaseInhibition by Wortmannin and Related Analogs(渥曼青黴素及相關類似物抑制磷脂醯肌醇3-激酶機理的研究)″，J.Med.Chem.，39，pp 1106-1111；Varticovski，L.等(2001)″Water-soluble HPMA copolymer-wortmannin conjugate retains phosphoinositide 3-kinase inhibitoryactivity in vitro and in vivo(水溶性HPMA共聚物-渥曼青黴素軛合物在體外和體內保留磷酸肌醇-3激酶抑制活性)″，Journal of ControlledRelease，74，pp 275-281)，所有文獻通過引用結合到本文中。
由渥曼青黴素用乙硼烷還原製備的渥曼青黴素衍生物17β-羥基渥曼青黴素顯示出的活性比渥曼青黴素大10倍，其IC50為0.50nM，使得PI3K IC50在亞納摩爾級。然而，17β-羥基渥曼青黴素在C3H乳腺模型中的抗腫瘤活性顯示出劑量為0.5(mg/kg)時無抑制作用，而劑量為1.0mg/kg時有毒性。這些發現使作者作出推斷「親核加成至渥曼青黴素及相關類似物的親電性C-21位，對於抑制能力和抗腫瘤活性是必需的。遺憾的是，這種機制看來與觀察到的毒性相關」(Norman，Bryan H.等，(1996)″Studies on the Mechanism ofPhosphatidylinositol 3-Kinase Inhibition by Wortmannin and RelatedAnalogs(渥曼青黴素及相關類似物抑制磷脂醯肌醇3-激酶機理的研究)″，J.Med.Chem.，39，1106-1111，1109-1110)。
在C-17羥基乙醯化的渥曼青黴素衍生物顯示出的活性大大降低，作者據此推斷「C-17位活性位點不能容納親脂性或空間大基團」(Creemer，Lawrence C.等，(1996)″Synthesis and in Vitro Evaluationof New Wortmannin EstersPotent Inhibitors of Phosphatidylinositol 3-Kinase(磷脂醯肌醇3-激酶活性抑制劑新渥曼青黴素酯的合成及體外評價)″，J.Med.Chem.，39，5021-5024，5022)。這個結論與隨後闡述的PI3K結合渥曼青黴素的X-射線晶體結構一致(Walker，Edward H.等(2000)″Structural Determinants of Phosphoinositide 3-KinaseInhibition by Wortmannin，LY294002，Quercetin，Myricetin，andStaurosporine(渥曼青黴素、LY294002、槲皮苷、大麻雙酮和星孢素抑制磷脂醯肌醇3-激酶的結構決定因素)″，Molecular Cell 6(4)，909-919)。
連接聚乙二醇(PEG)已成功地應用於藥物化學以改善藥物的水溶性和給藥。(同上)然而，共價連接的PEG不一定會改善所連接藥物的水溶性和有效性(Bebbington，David等，(2002)″Prodrug andCovalent Linker Strategies for the Solubilization of Dual-ActionAntioxidants/Iron Chelators(用於雙重作用抗氧化劑/鐵螯合劑增溶的前藥和共價連接策略)″，Bioorganic Medicinal Chemistry Letters，12，3297-3300，3299)和(Feng，Xia等，(2002)″Synthesis and Evaluation ofWater-Soluble Paclitaxel Prodrugs(水溶性紫杉醇前藥的合成及評價)″，Bioorganic Medicinal Chemistry Letters，12，3301-3303，3302)。
總觀PEG藥物，20年來製備的低分子量(＜20,000)PEG小分子藥物軛合物還沒有成為臨床批准產品(Greenwald，R.B.(2001)″PEGdrugsan overview(PEG藥物概述)″，Journal of Controlled Release，74，pp 159-171，摘要)。事實上，只有少數小有機分子抗癌藥已經通過固定鍵軛合至PEG上，但那些也沒有成為臨床上更優的水溶性藥物-聚合物軛合物(Greenwald，R.B.等，(2003)″Effective Drug Delivery byPEGylated Drug Conjugates(通過PEG化藥物軛合物有效釋放藥物)″，Advanced Drug Delivery Reviews，55，pp 217-250，220)。使用PEG-CPT，證明了PEG-CPT 40,000、20,000和8,000結構的致死率分別為約50％、10％和0％。顯然，用聚合物Mw5000軛合藥物得到快速排洩的藥物類型，該類藥物在體內的作用小或無作用(同上，225)。並不是說連接PEG 40,000加上它在腫瘤中積聚的能力便會自動使藥物具有更好的抗腫瘤活性(同上，235)。
在本發明中，為了以水溶性形式自結合渥曼青黴素衍生物的水溶性聚合物釋放渥曼青黴素衍生物，所得到聚合物-藥物軛合物為可溶的。將水溶性聚合物如PEG結合到本發明水不溶性分子或水溶性差的分子上使其變成水溶性分子，並降低它們的毒性。
發明概述本發明涉及利用水溶性聚合物為藥物載體的可溶性渥曼青黴素衍生物。
本發明提供式P-X-D的水溶性藥物-聚合物軛合物，其中P為水溶性聚合物；D為渥曼青黴素衍生物；X為水溶性聚合物與渥曼青黴素衍生物之間的共價鍵。
在本發明的一個實施方案中，利用水溶性聚合物的渥曼青黴素衍生物具有式I結構 其中
R1為烷基或式(A)藥物-聚合物軛合物 R2為O、NH或S；R3為烷基、環烷基或芳基；R6為＝O或OR7；R7為H、COR9或烷基；R8為烷基或H；R9為烷基、H、芳基或-CH2Ar；且n為1-1000。
在本發明的一個實施方案中，利用水溶性聚合物的渥曼青黴素衍生物具有式I結構 其中
R1為烷基或式(B)藥物-聚合物軛合物 R2為O、NH或S；R3為烷基、環烷基或芳基；R4為H、＝O、-O-COC4H9或OR7；R6為＝O或OR7；R7為H、COR9或烷基；R8為烷基或H；R9為烷基、H、芳基或-CH2Ar；且n為1-1000。
在本發明的另一個實施方案中，利用水溶性聚合物的渥曼青黴素衍生物具有式II結構 其中
R1為烷基或式(B)水溶性藥物-聚合物軛合物 R2為O、NH或S；R3為烷基、環烷基或芳基；R4為H、＝O、-O-COC4H9或OR7；R7為H、COR9或烷基；R8為烷基或H；R9為烷基、H、芳基或-CH2Ar；且n為1-1000。
在本發明的一個實施方案中，利用水溶性聚合物的渥曼青黴素衍生物具有式III結構 n為1-1000。
在本發明的一個實施方案中，利用水溶性聚合物的渥曼青黴素衍生物具有式IV結構 其中n＝1-1000。
在本文中使用時，下面部分 表示結構 或 如 在本文中使用時，下面部分
表示結構 或 或 或 在本發明另一個實施方案中，公開了一種製備式(III)水溶性藥物-聚合物軛合物的方法，該方法包括a).將溶劑加至17-二氫-17-(1-碘乙醯基)-渥曼青黴素以得到溶液；b).向該溶液中加叔胺或碳酸氫鈉；c).向步驟(b)的溶液加mPEG-巰基5000；d).攪拌步驟(c)的溶液30分鐘；e).向所攪拌的溶液中加醚；f).收集固體；和g).用醚洗滌所收集的固體得到聚乙二醇化渥曼青黴素衍生物。
在本發明另一個實施方案中，公開了一種製備式(IV)水溶性藥物-聚合物軛合物的方法，該方法包括a)向11-去乙醯基-11-(1-碘乙醯基)-渥曼青黴素中加溶劑得到溶液；b)向該溶液加叔胺或碳酸氫鈉；c)向步驟(b)的溶液加mPEG-巰基5000；d)攪拌步驟(c)的溶液30分鐘；e)向所攪拌的溶液加醚；f)收集固體；和g)用醚洗滌所收集的固體得到聚乙二醇化渥曼青黴素衍生物。
在本發明的一個實施方案中，水溶性藥物-聚合物軛合物具有式V結構 其中R1為烷基或單一非重複的式(B)藥物-聚合物軛合物 R2為O、NH或S；R3為烷基、環烷基或芳基；R4為H、＝O、-O-COC4H9或OR7；R7為H、COR9或烷基；R8為烷基或H；R9為烷基、H、芳基或-CH2Ar；且n為1-1000。
本發明的另一個實施方案包括一種用於製備式(V)化合物的方法，該方法包括向式(I、II、III和IV)化合物中加胺，得到式(V)化合物或相應的開環結構。在一個優選的實施方案中，胺為二乙胺。
本發明也提供一種用於製備上述軛合物的方法，該方法包括將下式化合物 或下式化合物 其中R3為烷基、環烷基或芳基；R4為H、＝O、-O-COC4H9或OR7；R6為＝O或OR7；R7為H、COR9或烷基；R8為烷基或H；R9為烷基、H、芳基或-CH2Ar；且n為1-1000，
且X為滷素，如Br、Cl或I，與下式化合物HR2-(CH2CH2O)n-R1或下式化合物HR2-(CH2CH2O)n-R2H其中R2為O、NH或S；n為1-1000且R1為烷基或式(A)藥物-聚合物軛合物 或式(B)藥物-聚合物軛合物 和R2、R3、R4、R6、R8和n定義同上，反應得到需要的軛合物。
本發明還提供一種用於製備式P-X-D化合物或聚合物的方法其中P為水溶性聚合物；
D為渥曼青黴素衍生物；且X為水溶性聚合物和渥曼青黴素衍生物之間的共價鍵。
該方法包括使式P-XH聚合物(其中P和X定義同上)與式DX化合物(其中X為滷素，如Br、Cl或I)反應得到需要的產物。
本發明的軛合物優選水溶性軛合物，更優選水溶性藥物-聚合物軛合物。
附圖簡述

圖1表示聚乙二醇化-17-羥基-渥曼青黴素相對於未聚乙二醇化-17-羥基-渥曼青黴素的抗腫瘤活性。將腦瘤的腫瘤細胞系PTEN(-/-)U87MG神經膠質瘤植入小鼠中。小鼠於第0-4天靜脈注射給藥。該圖表示在溶媒；15mg/kg、5mg/kg、1.5mg/kg、0.5mg/kg聚乙二醇化-17-羥基-渥曼青黴素；1mg/kg和0.5mg/kg未聚乙二醇化-17-羥基-渥曼青黴素劑量(x-軸)時，相關的腫瘤生長情況(y-軸)(1、1.5、2、2.5、3、3.5和4mm)。
圖2表示渥曼青黴素衍生物在體內抗PTEN(-/-)U87MG神經膠質瘤的抗腫瘤活性。在該實驗中，於第0天開始觀察在裸小鼠中皮下異種移植的U87MG神經膠質瘤生長，並於第0-4天以0.15、0.5、1.5、5和15mg/kg/劑量給予本發明的渥曼青黴素衍生物。如圖2所示，最小有效劑量(MED)為0.5mg/kg/劑量(MED)，該劑量在第7天達到50％抑制腫瘤生長。顯然進一步增加抗癌活性為劑量依賴性。該實驗中的最大耐受劑量(MTD)為15mg/kg/劑量。
圖3表示在U87MG神經膠質瘤模型中渥曼青黴素衍生物與紫杉醇抗腫瘤活性的聯合。在圖3所示的U87MG神經膠質瘤研究中，於第0-4天靜脈注射給予本發明渥曼青黴素衍生物。於第0天和第7天腹膜內給予紫杉醇。按照每周一次的給藥方案，紫杉醇的MTD為60mg/kg/劑量。將小鼠用1mg/kg/劑量的本發明渥曼青黴素衍生物、30和60mg/kg/劑量的紫杉醇治療，或用1mg/kg/劑量的本發明渥曼青黴素衍生物與30mg/kg/劑量的紫杉醇聯合治療。單獨的本發明渥曼青黴素衍生物活性與30mg/kg/劑量的紫杉醇活性相同。兩種藥物聯合使用比單用任一種更有效。聯合藥物組的腫瘤抑制效果與用60mg/kg/劑量的紫杉醇所達到的腫瘤抑制效果相似。
圖4表示使用NSCLC A549模型的兩個實驗的合併數據。於第0-4天、14-18天靜脈注射給予渥曼青黴素衍生物。於第0、7和14天腹膜內給予紫杉醇。將小鼠用5mg/kg/劑量的渥曼青黴素衍生物、30mg/kg/劑量的紫杉醇治療，或用兩種藥物聯合治療。單用5mg/kg/劑量的渥曼青黴素衍生物的活性與30mg/kg/劑量的紫杉醇相似。顯然，聯合治療產生了最令人關注的抗腫瘤活性，獲得了腫瘤生長的完全停止。
圖5表示在U87MG神經膠質瘤模型中與有效TOR抑制劑聚乙二醇化-雷帕黴素(Peg-rapa)聯合使用時抗腫瘤活性的評價。於第0-4天，單獨或聯合靜脈注射給予1mg/kg/劑量的渥曼青黴素衍生物和0.1mg/kg/劑量的Peg-rapa。圖5中數據顯示，聯合治療明顯比單獨任一種藥物產生了更好的抗腫瘤活性。
發明詳述下面的實驗旨在幫助理解本發明，無意且不應以任何方式視為限定權利要求書描述的本發明。
本發明涉及利用水溶性聚合物的渥曼青黴素衍生物的發現。
本發明涉及水溶性藥物聚合物。具有聚乙二醇(PEG)結構的水溶性聚合物為具有多種分子量的線性或支化中性聚合物，溶於水和大多數有機溶劑。分子量小於1000的PEGs為粘性無色液體，更高分子量的PEGs為蠟狀白色膠體。該固體的熔點與分子量成比例，在67℃達到坪值。分子量從幾百到大約80,000。可以用於提高藥物釋放能力的水溶性聚合物實例包括如聚乙二醇(PEG)、PEG甲醚、PEG-嵌段-PEG-嵌段-PEG、聚乙烯醇、聚羥乙基(polyhydroxyethyl)、聚甲基丙烯酸酯、聚丙烯醯胺、聚丙烯酸、聚乙基噁唑啉、聚乙烯吡咯烷酮和多糖。在本發明的一個優選實施方案中，含1-1000個單體的水溶性聚合物連接到渥曼青黴素衍生物，更優選的單體數量為250-400，最優選的數量為50-150。連接的水溶性聚合物分子量範圍可為約400至約80,000。在一個優選的實施方案中，分子量為約1000至約8000的範圍，在最優選的實施方案中，分子量為約4000至約6000的範圍。
水溶性聚合物通過共價鍵連接至渥曼青黴素衍生物。這種共價鍵可為酯、二酯、尿烷、醯胺、腫胺或叔胺、醚或任何能使水不溶性或水溶性差的藥物以可溶形式釋放進入哺乳動物體內的共價鍵。
本發明的渥曼青黴素衍生物包括具有如下結構的水溶性藥物-聚合物軛合物 其中
R1為烷基或式(A)的藥物-聚合物軛合物 R2為O、NH或S；R3為烷基、環烷基或芳基；R6為＝O或OR7；R7為H、COR9或烷基；R8為烷基或H；R9為烷基、H、芳基或-CH2Ar；且n為1-1000。
其中
R1為烷基或式(B)的藥物-聚合物軛合物 R2為O、NH或S；R3為烷基、環烷基或芳基；R4為H、＝O、-O-COC4H9或OR7；R6為＝O或OR7；R7為H、COR9或烷基；R8為烷基或H；R9為烷基、H、芳基或-CH2Ar；且n為1-1000。
其中
R1為烷基或式(B)的藥物-聚合物軛合物 R2為O、NH或S；R3為烷基、環烷基或芳基；R4為H、＝O、-O-COC4H9或OR7；R7為H、COR9或烷基；R8為烷基或H；R9為烷基、H、芳基或-CH2Ar；且n為1-1000。
n為1-1000。
其中n＝1-1000。
本發明中，術語「烷基」包括直鏈和支鏈烷基部分且可以是被取代的或未被取代的，優選1-8個碳原子。術語「環烷基」指具有3-12個碳原子的脂環烴基並包括但不限於環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基或降冰片基(norbornyl)。
本發明中，術語「芳基」或「Ar」指芳烴部分且可以是被取代的或未被取代的。芳基可以選自但不限於苯基。
本發明中，「醯基」指式-(C＝O)-烷基或-(C＝O)-全氟烷基的基團，其中烷基或全氟烷基含1-7個碳原子；優選的實例包括但不限於乙醯基、丙醯基、丁醯基、三氟乙醯基。
本發明中，「溶劑」為可溶解PEGSH的極性化合物，包括如二噁烷、乙腈、四氫呋喃(THF)或二甲基甲醯胺(DMF)。
本發明中，「叔胺」包括如N，N-二異丙基乙胺、三乙胺、三丁基胺。
本發明中，不是叔胺的胺可包括但不限於烷基胺、雜芳基胺、芳胺、哌啶、哌嗪、二-氨基丙烷、胺基酸或任何伯胺或仲胺。
R1優選甲基。R2優選S。R3優選-CH2-或-CH2-CH2-。R4優選-OR7。R6優選＝O。R7優選CO9.R R8優選甲基。R9優選甲基。本發明的一個實施方案包含化合物其中R1為甲基；R2為S；R3為-CH2-或-CH2-CH2-；R4為-OR7；R7為-COR9；R8為甲基且R9為甲基。本發明的再一個實施方案包含化合物其中R1為甲基；R2為S；R3為-CH2-或-CH2-CH2-；R6為O且R8為甲基。n為1-1000，優選50-400，包括50-150和250-400。
在本發明的一個實施方案中，取代芳基可任選被選自但不限於以下的取代基單、二、三或四取代烷基、醯基、烷氧羰基、烷氧基、烷氧烷基、烷氧基烷氧基、氰基、滷素、羥基、硝基、三氟甲基、三氟甲氧基、三氟丙基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、二烷基氨基烷基、羥烷基、烷氧基烷基、烷硫基、-SO3H、-SO2NH2、-SO2NH烷基、-SO2N(烷基)2、-CO2H、CO2NH2、CO2NH烷基和-CO2N(烷基)2。
在另一個實施方案中，本發明提供一種用於在哺乳動物中治療或預防介導的病症或疾病的方法。相應地，本發明為哺乳動物提供一種藥用組合物，該組合物包含聯合或組合應用的本發明水溶性藥物-聚合物軛合物與藥學上可接受的載體。本發明水溶性藥物-聚合物軛合物可以單獨給藥或與其它治療有效化合物或療法聯合給藥，其它治療有效化合物或療法用於治療或預防哺乳動物中介導的病症或疾病。
當水溶性藥物-聚合物軛合物在哺乳動物中治療或抑制介導的病症或疾病時，優選以口服或皮下途徑提供。水溶性藥物-聚合物軛合物可以下列途徑提供損害內、腹膜內、肌內或靜脈內注射；輸注；脂質體調節釋藥；局部、鼻內、肛門、陰道、舌下、尿道(uretheral)、透皮、鞘內、經眼或經耳釋藥。為了在提供本發明水溶性藥物-聚合物軛合物時獲得一致，優選本發明水溶性藥物-聚合物軛合物為單位劑量形式。合適的單位劑量形式包括片劑、膠囊劑和小袋裝或小瓶裝粉劑。這些單位劑量形式可含0.1-100mg軛合至本發明水溶性藥物-聚合物的渥曼青黴素衍生物，優選2-50mg。更優選的單位劑型含5-25mg結合至本發明水溶性藥物-聚合物的渥曼青黴素衍生物。本發明水溶性藥物-聚合物軛合物可以約10-1000mg/kg的劑量範圍經口給藥，或優選0.5-10mg/kg的劑量範圍。這類水溶性藥物-聚合物軛合物可以按每天1-6次給藥，每天1-4次更常用。本領域技術人員已知其有效量；它也取決於水溶性藥物-聚合物軛合物的形式。本領域技術人員通常可進行經驗活性測試以測定水溶性藥物-聚合物軛合物在生物測定中的生物活性，從而確定給藥劑量。
本發明水溶性藥物-聚合物軛合物可以與常規賦形劑一起配製，如填充劑、崩解劑、粘合劑、滑潤劑、調味劑、著色劑或載體。載體可以是例如稀釋劑、氣霧劑、局部用載體、水溶液、非水溶液或固體載體。載體可以為聚合物或牙膏。本發明中的載體包括藥學上可接受的任何標準載體，如磷酸鹽緩衝鹽水溶液、醋酸鹽緩衝鹽水溶液、水、乳狀液如油/水乳狀液或甘油三酸酯乳狀液、各種潤溼劑、片劑、包衣片劑和膠囊劑。
當經口或局部提供時，這種水溶性藥物-聚合物軛合物將在不同載體中釋放來提供給患者。典型地，這類載體包含賦形劑如澱粉、乳、糖、某類粘土、明膠、硬脂酸、滑石粉、植物脂肪或油、膠或二醇。具體所需載體根據理想的釋藥方法選擇，例如，磷酸鹽緩衝鹽水溶液(PBS)可用於靜脈內或全身釋藥，植物脂肪、乳膏、油膏、軟膏或凝膠可用於局部釋藥。
本發明水溶性藥物-聚合物軛合物可與合適的稀釋劑、防腐劑、增溶劑、乳化劑、助劑和/或載體一起釋藥，用於治療或預防哺乳動物中介導的病症或疾病。這些組合物為液體或者凍幹製劑或其它乾燥製劑，包括各種緩衝物(如Tris-HCl、醋酸鹽、磷酸鹽)、pH和離子強度的稀釋劑、防止表面吸收的添加劑如白蛋白或明膠、清潔劑(如TWEEN 20、TWEEN 80、PLURONIC F68、膽汁酸鹽)、增溶劑(如甘油、聚乙烯甘油)、抗氧化劑(如BHA和BHT、抗壞血酸、偏硫酸氫鈉)、防腐劑(如硫汞撒、苯甲醇、對羥基苯甲酸酯)、增量劑或張力調節劑(如乳糖、甘露醇)、聚合物的共價連接物如聚乙二醇、金屬離子絡合物，或水溶性藥物-聚合物軛合物結合到水凝膠或脂質體、微乳、膠束、單層囊或多層囊、紅細胞影或原生質球的粒狀製劑中或上。這些組合物影響水溶性藥物-聚合物軛合物或組合物的物理狀態、溶解性、穩定性、體內釋放速度和體內清除速率。組合物的選擇將取決於能治療或抑制哺乳動物中介導的病症或疾病的水溶性藥物-聚合物軛合物的物理和化學性質。
本發明水溶性藥物-聚合物軛合物可以通過膠囊劑局部釋藥，使水溶性藥物-聚合物軛合物於一段時間內緩釋。控釋或緩釋的組合物包括親脂性貯庫(如脂肪酸、蠟、油)製劑。
本發明中，哺乳動物中介導的病症或疾病包括表達PI 3激酶和/或TOR激酶的任何病症，其表達水平比健康哺乳動物中發現的表達水平更高。本發明水溶性藥物-聚合物軛合物用作PI3激酶和TOR激酶的抑制劑。PI3激酶和TOR激酶抑制劑有效治療或抑制哺乳動物中介導的病症或疾病有缺血性心臟病、再狹窄、炎症、血小板凝集、硬化症、呼吸性疾病、HIV、骨吸收疾病、非小細胞肺癌和腦癌。
本發明化合物可以單一化合物提供或與其它化合物聯合提供。
預期抑制PI3K可提高其它藥物的治療活性，這些藥物調節生長因子信號、細胞因子應答和細胞周期控制。渥曼青黴素衍生物與α-幹擾素在導致腫瘤縮小及提高mTOR激酶的特異性抑制劑聚乙二醇化雷帕黴素抗癌活性方面具協同作用。
PI3K或AKT的細胞抑制導致存活率降低，這個重要過程是許多標準癌症療法抗癌活性的基礎。然而，在許多情況中，腫瘤細胞迅速產生化學抗性。化學抗性的一個細胞機制涉及PI3K/AKT途徑的結構性提高。因此，細胞毒藥物與PI3K抑制劑的聯合治療可以在最初治療中進一步增加功效，也可以在復發治療中幫助恢復化學敏感性。渥曼青黴素衍生物在肺癌和神經膠質瘤中顯示出可加強紫杉醇的抗癌功效(見圖3和圖4)。
17-二氫-17-(1-碘乙醯基)-渥曼青黴素的製備1，3-二環己基碳二亞胺(DCC)、4-二甲基氨基吡啶和渥曼青黴素購自Aldrich Chemical Co.(Milwaukee，WI)。平均分子量為5000的甲氧基-PEG-SH(mPEG-SH 5000)購自Shearwater Polymers，Inc.(Huntsville，AI)。所有溶劑均為HPLC級，所有其它化學製品為分析級試劑或等同試劑。製備高效液相色譜儀(HPLC)由來自RaininInstrument Inc.(Woburn，MA)的兩個Dynamax溶劑輸送系統(SD-1型)和一個Dynamax吸收度檢測器(UV-1型)組成。另外的設備包括來自Savant Instruments，Inc.(Holbrook，NY)的自動真空離心蒸發濃縮器(Savant，Model AS 160)和來自Buchi(Flawil，Switzerland)的BUCHI旋轉蒸發系統(RE 260和R 124)。1H-NMR圖譜用CDCl3作溶劑在400MHz NMR分光光度計上記錄。
HPLC方法-製備HPLC在Prep Nova-pak HR C18柱(300×19mm，來自Waters)上用梯度方法運行，梯度為最初5分鐘80％A和20％B，在30分鐘內80％A和20％B至30％A和70％B。緩衝液A為90％水和10％乙腈。緩衝液B為10％水和90％乙腈。流速為20mL/分鐘，UV波長為254nm。收集第27分鐘的組分(水溶性藥物-聚合物軛合物III)或第15分鐘的組分(水溶性藥物-聚合物軛合物IV)，用二氯甲烷萃取並進行後處理。從HPLC收集的組分用二氯甲烷萃取。將有機層用無水硫酸鈉乾燥並按如下方法進行後處理。將從HPLC收集的組分用二氯甲烷萃取。將有機層用無水硫酸鈉乾燥。用旋轉蒸發系統除去有機溶劑。將殘留物轉移至小瓶，在真空離心蒸發濃縮器中乾燥過夜。
在氮氣下，將60mg渥曼青黴素(0.14mmol，來自Aldrich)的12mL四氫呋喃(THF)溶液於0℃冰浴中冷卻。加入1M硼烷的THF溶液(134μl，0.14mmol，來自Aldrich)，於0℃攪拌該反應混合物3.5小時。用1mL水將反應猝滅。升溫至室溫後，將反應混合物用水稀釋並用乙酸乙酯萃取。後處理後得到約60mg固體(90％純的17-羥基-渥曼青黴素，由HPLC檢測)。將該固體(約0.126mmol 17-羥基-渥曼青黴素)溶解入15mL二氯甲烷中，與碘乙酸(24mg，0.13mmol)、二環己基碳二亞胺(DCC)(27mg，0.13mmol)和4-N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(0.1mg，作為催化劑)反應。將該反應混合物於室溫保持1小時。後處理後，得到約75mg粗品(黃色固體)。經製備HPLC分離得到純的17-二氫-17-(1-碘乙醯基)-渥曼青黴素。共得到54mg白色固體。[M+H]在m/z 599，[M+NH4]在m/z 616，[M+H]離子的精確質量599.0758Da，C25H28O9I的計算質量599.0772Da。
1H-NMR(CDCl3)δ0.94(s，3H)，1.54(dd，J＝12.16，10.06，1H)，1.69(m，1H)，1.69(m，3H)，1.78(m，1H)，2.15(s，3H)，2.31(m，1H)，2.56(dd，J＝12.16，7.36，1H)，2.63(ddd，J＝2.7，1H)，2.85(ddd，J＝20.12，9.91，2.7，1H)，2.99(dd，J＝11.11，7.21，1H)，3.19(s，3H)，3.46(dd，J＝11.11，1.8，1H)，3.69(d，J＝10.6，1H)，3.72(d，J＝10.6，1H)，4.76(dd，J＝7.21，1.8，1H)，4.87(dd，J＝7.51，9.46，1H)，6.10(ddd，J＝10.06，7.36，3.0，1H)，8.23(s，1H).13C-NMRδ-5.62，12.79，21.14，24.65，26.58，27.04，40.11，40.72，44.07，44.99，59.44，72.90，88.88，114.25，141.11，142.72，144.93，148.68，149.84，157.66，168.94，169.54，172.77.
M-PEG-SH 5000與17-二氫-17-(1-碘乙醯基)-渥曼青黴素的軛合物(III)的製備在氮氣下，將40mg(0.067mmol)17-二氫-17-(1-碘乙醯基)-渥曼青黴素溶解入15mL乙腈和10mL 0.1M碳酸氫鈉中。於1小時內加入共345mg的M-PEG-SH-5000(0.069mmol)(分4批)。於室溫再攪拌1小時後，將反應混合物用二氯甲烷萃取並進行後處理。得到約320mg粗品。從260mg粗品經製備HPLC後得到共209mg純水溶性藥物-聚合物軛合物III。
1H-NMR(CDCl3)δ0.92(s，3H)，1.53(dd，1H)，1.68(m，1H)，1.75(s，3H)，1.77(m，1H)，2.14(s，3H)，2.32(m，1H)，2.53(dd，1H)，2.63(s，1H)，2.85(overlap，1H)，2.85(t，J＝6.56，2H)，2.99(dd，J＝11.03，7.3，1H)，3.2(s，3H)，3.31(s，2H)，3.38(s，3H)，3.47(dd，J＝11.03，1.79，1H)，3.55(s，2H)，3.64(m)，3.7(s，2H)，4.76(dd，J＝7.3，1.79，1H)，4.86(dd，1H)，6.15(s，1H)，8.24(s，1H).13C-NMR δ12.85，21.11，24.68，26.48，27.39，34.01，40.19，40.68，44.05，44.81，59.03，59.42，70.3，70.35，70.57，70.88，71.93，72.88，80.69，88.86，114.21，141.19，142.68，144.92，148.63，149.88，157.63，169.58，170.52，172.75.
11-去乙醯基-11-(1-碘乙醯基)-渥曼青黴素的製備將42mg(0.11mmol)11-O-去乙醯基渥曼青黴素(由渥曼青黴素製備，J.Med Chem，1996，39，5021)溶解入8mL二氯甲烷中，與碘乙酸(24mg，0.13mmol)、DCC(27mg，0.13mmol)和DMAP(0.1mg，作為催化劑)反應。將該反應混合物於室溫保持2小時。後處理後，得到約80mg粗品(黃色固體)。經製備HPLC分離得到純的11-去乙醯基-11-(1-碘乙醯基)-渥曼青黴素。共得到41mg微黃色固體。[M+H]在m/z 555，[M+NH4]在572，[M+NH4]離子的精確質量572.0783Da，C23H27O8NI的計算質量572.0775Da。
1H-NMR(CDCl3)δ0.97(s，3H)，1.66(dd，J＝12.84，8.80Hz，1H)，1.75(s，3H)，2.06(ddd，J＝22.25，12.72，8.93Hz，1H)，2.27(dt，J＝19.68，8.93Hz，1H)，2.65(dd，J＝12.84，7.58Hz，1H)，2.61-3.18(m，2H)，2.92(ddd，J＝12.72，5.99，2.57Hz，1H)，3.01 proR(ddd，J＝11.25，6.72Hz，1H)，3.23(s，3H)，3.46 proS(dd，J＝11.25，1.59Hz，1H)，3.65(d，J＝9.9Hz，1H)，3.89(d，J＝9.9Hz，1H)，4.83(dd，J＝6.72，1.59Hz，1H)，6.15(ddd，J＝8.8，7.58，2.57Hz，1H)，8.26(s，1H).13C-NMR δ-6.68，14.65，22.93，26.48，35.05，35.74，40.87，44.11，49.04，59.69，71.84，73.31，88.54，114.28，140.92，142.74，144.81，148.77，150.09，157.52，167.8，172.48，215.89.
M-PEG-SH 5000與11-去乙醯基-11-(1-碘乙醯基)-渥曼青黴素的軛合物(IV)的製備在氮氣下，將30mg(0.054mmol)11-去乙醯基-11-(1-碘乙醯基)-渥曼青黴素溶解入15mL乙腈和10mL 0.1M碳酸氫鈉中。於1小時內加入共300mg M-PEG-SH-5000(0.060mmol)(分3批)。於室溫再攪拌1小時後，將反應混合物用二氯甲烷萃取並進行後處理。得到約274mg粗品。經製備HPLC後得到總量172mg的純水溶性藥物-聚合物軛合物IV。
1H-NMR(CDCl3)δ0.98(s，3H)，1.64(dd，J＝12.88，8.87，1H)，1.74(s，3H)，2.06(ddd，J＝22.25，12.72，9.03，1H)，2.27(dd，J＝19.58，9.37，1H)，2.6(dd，J＝19.58，8.53，1H)，2.63(dd，J＝12.88，7.53，1H)，2.84(t，J＝6.36，2H)，2.91(ddd，J＝12.72，5.86，2.68，1H)，3.01proR(dd，J＝11.38，6.36，1H)，3.16(s，3H)，3.19(m，1H)，3.38(s，3H)，3.46 proS(dd，J＝11.38，6.36，1H)，3.55(s，2H)，3.65(m)，3.7(s，2H)，3，34(d，J＝9.87，2H)，4.91(dd，J＝6.36，1.84，1H)，6.15(ddd，J＝8.87，7.53，2.68，1H)，8.27(s，1H).13C-NMR δ14.6，22.93，26.51，31.99，33.64，35.72，35.76，40.82，44.08，49.1，59.02，59.47，70.36，70.55，70.87，71.18，71.92，73.05，88.35，114.35，140.52，142.97，144.74，149.08，150.07，157.68，169.02，172.52，215.97.
PEG 11-羥基渥曼青黴素的合成 白色或淺黃色粉末84％淺黃色粉末乙醚己烷THF MeCNiPrOH iPrOH用於結晶純化純化時使用X為Br、Cl或I且R10為(CH2)n或 其中n＝0-5。
PEG 17-羥基渥曼青黴素的合成(適用於10-100g) 白色或淺黃色粉末84％ 淺黃色粉末乙醚 己烷THF MeCNiPrOH iPrOH用於結晶純化 純化時使用X為Br、Cl或I且R10為(CH2)n或 其中n＝0-5。
製備mPEGSH 5000和17-二氫-17-(1-碘乙醯基)-渥曼青黴素的軛合物(III)(聚乙二醇化渥曼青黴素衍生物)的另一種方法 向17-二氫-17-(1-碘乙醯基)-渥曼青黴素(215mg，0.36mmol)的乙腈(20mL)溶液中加入N，N-二異丙基乙胺(150mg，1.16mmol)，然後加入PEG-(巰基)25000(PEGSH，780mg)。然後將混合物攪拌30分鐘，加入乙醚(400mL)，用Buchner漏鬥收集固體，用乙醚洗滌，得到PEG-二-渥曼青黴素軛合物產物，為類白色固體。
軛合物V的製備向軛合物III(n＝100-110)(3g)的二氯甲烷(12mL)溶液中加入二乙胺(200μL)。18h後將易揮發物在真空中除去。將所得黃色固體溶解入少量的二氯甲烷。加入乙醚，經過濾收集所得黃色粉末。得到題述化合物，為黃色粉末(2.8g)。n＝109時，質譜m/z計算值為5526，實測值＝5526。
體內異種移植研究在用於實驗前，將Balb/c nu/nu(無胸腺)小鼠按照Association forAccreditation of Laboratory Animal Care(實驗動物管理與使用認證協會)(AALAACC)標準飼養至少一周。將動物於微型隔離籠中飼養並且只在層流罩超淨臺中操作。所有食物和水經高壓滅菌。用25-26號消毒針和注射器將200μl細胞懸浮液接種至小鼠左脅。將細胞重懸浮在完全生長培養基中，並按每隻小鼠1000萬個細胞給予。當所致腫瘤達到開始實驗的合適大小時，將小鼠按相等大小重新編組(n＝10)。一旦試驗開始，將小鼠靜脈注射給予0.2cc重懸浮在無菌蒸餾水中的水溶性藥物-聚合物軛合物II和水溶性藥物-聚合物軛合物IV。將渥曼青黴素和其它非聚乙二醇化水溶性藥物-聚合物軛合物在小鼠注射前配製成10mg/ml的二甲亞楓(DMSO)溶液，並用磷酸緩衝鹽溶液(PBS)稀釋。按每2周重複、每天5次的劑量方案給予處理，直到腫瘤達到動物體重的10％。實驗期間按每周兩次監測實體瘤的生長情況。腫瘤大小用滑動遊標卡尺測定，其質量按mm用式L×W除以2計算。單位密度將立方mm轉換成mg。腫瘤生長不能超過小鼠體重的15％，達到該程度時將小鼠處死。
在異種移植U87MG成膠質細胞瘤模型中的抗癌活性腫瘤體積(mm3)
用於渥曼青黴素衍生物的細胞培養和增殖試驗A549(人非小細胞肺癌)和H-157細胞系購自American TypeCulture Collection(ATCC)(Rockville，MD)。在37℃含5％CO2的培養器中，將細胞置於含10％胎牛血清(FBS)的RPMI培養基1640中培養。所有細胞培養試劑均購自Gibco-BRL(Grand Island，NY)。按每孔約3000個細胞將細胞接種於96-孔培養板中。接種1天後，將水溶性藥物-聚合物軛合物或溶媒對照物加入細胞中。在處理開始後三天進行增殖實驗。至於非放射性細胞增殖試驗，通過測量染料MTStatrazolium染料的代謝轉化(通過活細胞)而測定活細胞密度，MTS試驗為本領域技術人員所熟知的細胞增殖試驗，為先前確定的細胞增殖試驗。該試驗用購自Promega Corp.(Madison，WI)的試驗試劑盒進行。將試驗板溫育1-2小時，在96-孔式板閱讀器中通過測量在490nm的吸收度讀出結果。至於胸苷結合實驗，將細胞用[甲基-3H]-胸苷(PerkinElmer Life Sciences，Boston，MA)標記5小時。然後在玻璃纖維濾膜上收穫細胞，並用Wallac 1205β板液體閃爍計數器計數。各藥物的治療效果以對照細胞生長的百分比計算，該對照細胞生長得自於相同板中溶媒處理後的細胞生長。
對人腫瘤細胞體外增殖的影響
權利要求
1.一種具有通式P-X-D的水溶性藥物-聚合物軛合物其中，P為水溶性聚合物；D為渥曼青黴素衍生物；和X為水溶性聚合物與所述渥曼青黴素衍生物之間的共價鍵。
2.一種藥用組合物，所述組合物包含權利要求1的水溶性藥物-聚合物軛合物和藥學上可接受的載體。
3.一種在哺乳動物中治療或抑制介導的病症或疾病的方法，所述方法包括提供所述哺乳動物有效量的權利要求1的水溶性藥物-聚合物軛合物。
4.權利要求3的方法，其中所述有效量的水溶性藥物-聚合物為10-1000mg/kg。
5.權利要求3的方法，其中所述有效量的水溶性藥物-聚合物為0.5-10mg/kg。
6.權利要求3-5中任一項的方法，其中治療或抑制包括PI3激酶或TOR激酶的抑制。
7.權利要求3-6中任一項的方法，其中所述病症為非小細胞肺癌、腦癌、缺血性心臟病、再狹窄、炎症、血小板凝集、硬化症、呼吸性疾病、HIV和骨吸收疾病。
8.權利要求3-7中任一項的方法，其中單獨提供或與其它調節生長因子信號、細胞因子應答和細胞周期控制的藥物聯合提供有效量。
9.權利要求8的方法，其中所述藥物為α-幹擾素或聚乙二醇化雷帕黴素。
10.權利要求8的方法，其中所述藥物為細胞毒藥物。
11.一種式I軛合物 其中R1為烷基或式(A)藥物-聚合物軛合物 R2為O、NH或S；R3為烷基、環烷基或芳基；R6為＝O或OR7；R7為H、COR9或烷基；R8為烷基或H；R9為烷基、H、芳基或-CH2Ar；且n為1-1000。
12.一種式I軛合物 其中R1為烷基或式(B)藥物-聚合物軛合物 R2為O、NH或S；R3為烷基、環烷基或芳基；R4為H、＝O、-O-COC4H9或OR7；R7為H、COR9或烷基；R8為烷基或H；R9為烷基、H、芳基或-CH2Ar；且n為1-1000。
13.一種式II軛合物 其中R1為烷基或式(B)藥物-聚合物軛合物 R2為O、NH或S；R3為烷基、環烷基或芳基；R4為H、＝O、-O-COC4H9或OR7；R7為H、COR9或烷基；R8為烷基或H；R9為烷基、H、芳基或-CH2Ar；且n為1-1000。
14.一種式III軛合物 n為1-1000。
15.一種式IV軛合物 其中n＝1-1000。
16.權利要求11-15中任一項的水溶性藥物-聚合物軛合物，其中n為250-400。
17.權利要求11-15中任一項的水溶性藥物-聚合物軛合物，其中n為50-150。
18.權利要求11-15中任一項的水溶性藥物-聚合物軛合物，其中所述聚合物的分子量為約400至約80,000。
19.權利要求11-15中任一項的水溶性藥物-聚合物軛合物，其中所述聚合物的分子量為約1000至約8000。
20.權利要求11-15中任一項的水溶性藥物-聚合物軛合物，其中所述聚合物的分子量為約4000至約6000。
21.一種藥用組合物，所述組合物包含權利要求11-20中任一項的軛合物和藥學上可接受的載體。
22.一種在哺乳動物中治療或抑制介導的病症或疾病的方法，所述方法包括提供所述哺乳動物有效量的權利要求11-20中任一項的軛合物。
23.權利要求22的方法，其中所述有效量的軛合物為10-1000mg/kg。
24.權利要求22的方法，其中所述有效量的軛合物為0.5-10mg/kg。
25.權利要求22-24中任一項的方法，其中治療或抑制包括PI3激酶或TOR激酶的抑制。
26.權利要求22-25中任一項的方法，其中所述病症為非小細胞肺癌、腦癌、缺血性心臟病、再狹窄、炎症、血小板凝集、硬化症、呼吸性疾病、HIV和骨吸收疾病。
27.權利要求22-26中任一項的方法，其中單獨提供或與其它調節生長因子信號、細胞因子應答和細胞周期控制的藥物聯合提供有效量。
28.權利要求27的方法，其中所述藥物為α-幹擾素或聚乙二醇化雷帕黴素。
29.權利要求27的方法，其中所述藥物為細胞毒藥物。
30.一種製備權利要求14的軛合物的方法，所述方法包括a.將溶劑加至17-二氫-17-(1-碘乙醯基)-渥曼青黴素以得到溶液；b.向該溶液中加入叔胺或碳酸氫鈉；c.向步驟(b)的溶液中加入mPEG-巰基5000；d.攪拌步驟(c)的溶液30分鐘；e.向所攪拌的溶液中加入醚；f.收集固體；和g.用醚洗滌所收集的固體得到所述聚乙二醇化渥曼青黴素衍生物。
31.一種式Va軛合物 其中R1為烷基或單獨不重複的式(B)藥物-聚合物軛合物 R2為O、NH或S；R3為烷基、環烷基或芳基；R4為H、＝O、-O-COC4H9或OR7；R7為H、COR9或烷基；R8為烷基或H；R9為烷基、H、芳基或-CH2Ar；且n為1-1000。
32.一種式Vb軛合物 其中R1為烷基或式(A)藥物-聚合物軛合物 或式(B)藥物-聚合物軛合物 R2為O、NH或S；R3為烷基、環烷基或芳基；R4為H、＝O、-O-COC4H9或OR7；R6為＝O或OR7；R7為H、COR9或烷基；R8為烷基或H；R9為烷基、H、芳基或-CH2Ar；且n為1-1000。
33.一種製備權利要求31的軛合物的方法，所述方法包括向權利要求13的軛合物中加入胺以得到需要的產物。
34.一種製備權利要求32的軛合物的方法，所述方法包括向權利要求11或權利要求12的軛合物中加入胺以得到需要的產物。
35.權利要求33或權利要求34的方法，其中所述胺包含二乙胺。
36.一種製備權利要求1-10中任一項的軛合物的方法，所述方法包括使其中P和X如權利要求1中定義的式P-XH聚合物與其中X為滷素的式DX化合物反應，以提供需要的產物。
37.一種製備權利要求11-14中任一項的軛合物的方法，所述方法包括使下式化合物 或下式化合物 其中R3為烷基、環烷基或芳基；R4為H、＝O、-O-COC4H9或OR7；R6為＝O或OR7；R7為H、COR9或烷基；R8為烷基或H；R9為烷基、H、芳基或-CH2Ar；且n為1-1000，和X為滷素，與下式化合物HR2-(CH2CH2O)n-R1或下式化合物HR2-(CH2CH2O)n-R2H其中R2為O、NH或S；n為1-1000且R1為烷基或式(A)藥物-聚合物軛合物 或式(B)藥物-聚合物軛合物 且R2、R3、R4、R6、R8和n定義同上，反應得到需要的產物。
38.一種製備權利要求15的軛合物的方法，所述方法包括a)向11-去乙醯基-11-(1-碘乙醯基)-渥曼青黴素中加入溶劑以得到溶液；b)向該溶液中加入叔胺；c)向步驟(b)的溶液中加入mPEG-巰基5000；d)攪拌步驟(c)的溶液30分鐘；e)向所攪拌的溶液中加入醚；f)收集固體；和g)用醚洗滌所收集的固體得到所述聚乙二醇化渥曼青黴素衍生物。
全文摘要
本發明涉及利用水溶性聚合物為載體的用於藥物的可溶性渥曼青黴素衍生物，並包括具有說明書中所述結構的化合物。
文檔編號A61K31/765GK1809385SQ200480017040
公開日2006年7月26日 申請日期2004年4月20日 優先權日2003年4月23日
發明者T·朱, K·於, J·盧卡斯, J·古, A·扎斯克 申請人:惠氏控股公司