高級脂族伯醇混合物、其由甘蔗蠟製取的方法及其藥學應用的製作方法

2023-05-26 18:20:11 4

專利名稱：高級脂族伯醇混合物、其由甘蔗蠟製取的方法及其藥學應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及高級脂族伯醇的混合物，其中含有22到38個碳原子、尤其是24到34個碳原子的醇，更具體地說，含有24、26、27、28、29、30、32和34個碳原子的直鏈醇。
該混合物各批之間的各個醇的相對組成顯示出很好的重複性。
根據本發明，得到的高級脂族伯醇混合物(下面稱為M.H.P.A.A.)具有特殊的藥理性能，因此可以在藥物製劑中作為活性組分，用於降低膽固醇、抗血小板、抗血栓形成和/或抗局部缺血，以及用於對抗藥物引起的潰瘍和改善男性性功能。
蔗糖蠟及其天然來源，蔗泥，一直是人們關注的對象，這不僅是因為它們的工業用途，而且也由於它們的化學組成。甘蔗中的蠟含量在0.1%至0.3%之間，依品種而異。
在農產工業加工中，僅僅40%的蠟含量被稀釋到甘蔗汁中，其餘的則損失於蔗渣裡。
從這40%中，95%被蔗泥吸收，由蔗泥製得粗蠟。這種蠟由酯、醛、酮、烴類、脂肪酸和游離醇構成，各組分的數量取決於甘蔗作物的品種和來源以及抽取蠟所用的技術。
若干作者已研究過從甘蔗副產物中得到的直鏈脂族醇以了解其成分和主要特點。從各類蠟中製取不同組合的化合物已有報導(J.A.Lamberton等，1959;AustralianJournalofChemistry，13，261-268，以及HornA.andMarticJS，1957;JournalofScienceFoodandAgriculture10，571)，他們提出一種從甘蔗表皮蠟製取脂族醇的方法，其作法是用氫氧化鉀醇溶液均勻皂化，接著將不能皂化的物質酯化，再進行分子蒸餾。
還報導過通過高效高真空蒸餾柱分離醇混合物的另一種方法。這種高真空下的蠟蒸餾用來將羰基化合物化學分離並使用石油醚萃取剩餘的蠟。將溶劑蒸發，剩餘成分醯化，以便通過氧化鋁層析進一步分離。最後，經過加鹼水解得到醇，然後在乙醇中重結晶，熔點範圍為80到82℃。
一種從動物蠟和植物蠟得到高級脂族伯醇的方法是基於將脂族酯皂化，接著採用適當的溶劑，通過壓力為60-300千克/平方釐米、溫度在25-100℃之間的亞臨界態和超臨界態的CO2流體萃取醇混合物，該法表明，在低溫下依賴於溶解度和壓力變化，可以進行選擇性萃取。將這一方法用於甘蔗蠟，可以得到5%的C20到C36的醇的混合物。
另一種設計(Inada S，Furukawa K.，Masui T.，Honda K.，Ogasawara J.and Tsubikamoto G.，1986;回收高級脂族正伯醇的方法，日本專利60-119514號)提出了一種很類似的萃取蠟的方法，該方法以帶有乙烯的亞臨界和超臨界狀態CO2流體為基礎。也有人報導過用處在亞臨界和超臨界狀態的流體從混合物中分離有機化合物。從分析的角度看，所有這些都是有價值的方法，但是由於使用柱色譜和分子蒸餾這些全是不經濟的方法，妨礙了大規模生產。
本發明的目的之一是從粗製蠟和精製蠟這兩種甘蔗蠟中得到、分離和純化有24到34個碳原子的高級脂族伯醇(M.H.P.A.A.)。
本發明的方法是基於用鹼或鹼土金屬氫氧化物，尤其是用低分子量的，特別是鈉、鉀和鈣的氫氧化物濃溶液將預先熔化的甘蔗蠟均相皂化的方法。
氫氧化物溶液的濃度必須使相應的氫氧化物與要處理的蠟的重量比超過5%，尤其是從8%至25%，特別是從15%至25%。皂化過程持續30分鐘以上，尤其是從2至5小時。將這一步得到的固體置於固-液萃取器中，用適當的有機溶劑選擇性萃取M.H.P.A.A.，有機溶劑選自3到8個碳原子的酮，1到5個碳原子的醇，6到9個碳原子的烴，滷仿及芳族化合物，例如苯及其衍生物，包括它們的混合物。用於本發明的一些優選的溶劑是以下幾種丙酮、甲乙酮、戊酮、己酮、庚酮、2-甲基戊酮、乙醇、甲醇、2-丙醇、丁醇、叔丁醇、戊烷、己烷、庚烷、辛烷、氯仿、1，2-二氯乙烷、二氯甲烷、三氯乙烷、1，2，3-三氯丙烷、苯、甲苯、苯酚、對甲基甲苯及其它。
萃取在5到10小時的時間內進行。然後，用上述的溶劑或其混合物將產物連續結晶。產率約為30%，而M.H.P.A.A.的純度達到80%至98%，特別是從90%至98%。這樣得到的M.H.P.A.A.是由22到38個碳原子的醇組成。這是一種灰白色的混合物，熔點在76.5和84.5℃之間。為了用熔凝二氧化矽毛細管柱通過氣相色譜分析M.H.P.A.A.，用N-甲基-N-三甲基矽烷基三氟乙醯胺(MSTFA)衍生化合物。
與先前報導的相比，本發明提出的從甘蔗蠟中獲取M.H.P.A.A.的方法具有某些優點。這些優點之一是加工時間短。本發明的另一個優點是用這種方法可以達到的高產率(接近30%重量)，相比之下，先前介紹的Sho等人的結果報導產率低於5%。所提出的方法的另一個優點與可以達到的M.H.P.A.A.的純度有關(接近98%)，它比目前工藝水平所報導的高出很多。因此，本發明提出的方法比Inada等(日本專利60-119514)和HagiwaraY.(日本專利62-87537)的方法更簡單，而且更適合於大規模生產。
表1列出了根據本發明從甘蔗蠟得到的M.H.P.A.A.混合物的定性和定量組成。
表1在藥物製劑中使用的M.H.P.A.A.組合物的定性及定量組成範圍組分在混合物中的比率1-二十四烷醇0.5-5.0%1-二十六烷醇5.0-15.0%1-二十七烷醇0.5-5.0%1-二十八烷醇50.0-80.0%1-二十九烷醇0.5-3.0%1-三十烷醇6.0-20.0%1-三十二烷醇1.0-10.0%1-三十四烷醇0.0-2.5%表2列出了從甘蔗蠟分離出的一種優選的M.H.P.A.A.組合物，表3列出了最優選的M.H.P.A.A.組合物。
表2在藥物製劑中使用的M.H.P.A.A.的優選的定性與定量範圍組分在混合物中的比率1-二十四烷醇0.5-1.0%1-二十六烷醇6.0-8.0%1-二十七烷醇2.5-3.5%1-二十八烷醇60.0-70.0%1-二十九烷醇0.5-1.0%1-三十烷醇10.0-15.0%1-三十二烷醇4.5-6.0%1-三十四烷醇0.5-2.0%表3在藥物製劑中使用的M.H.P.A.A.組合物的最佳定性與定量範圍組分在混合物中的比率1-二十四烷醇0.8±0.1%1-二十六烷醇6.7±0.3%1-二十七烷醇3.0±0.3%1-二十八烷醇65.6±3.4%1-二十九烷醇0.7±0.1%1-三十烷醇12.5±0.6%1-三十二烷醇5.0±0.4%1-三十四烷醇0.8±0.1%
M.H.P.A.A.及其藥物製劑可以給人類和動物施用。M.H.P.A.A.的日劑量隨所治療的疾病和生命體的實際狀態而有很大變化，但通常是在每天1到100毫克之間，最好是約3-20毫克。M.H.P.A.A.可以口服或非腸道給藥。優選的途徑是口服塗膜的片劑以及粒劑或膠囊。
藥物製劑中含有作為活性組分的0.5%到15%重量的M.H.P.A.A.。這一劑量是通過將M.H.P.A.A.與各種賦形劑(例如凝集劑、崩解劑、潤滑劑、滑動劑)或只與填料混合得到的。這些賦形劑中包括乳糖、玉米澱粉、蔗糖、硬脂酸鎂、微晶纖維素、交聯的羧甲基纖維素鈉、明膠、乙醯鄰苯二甲酸纖維素、二氧化鈦、供片劑用的特種滑石粉和聚乙二醇。
甘蔗蠟的降脂效果已用大鼠得到了證實(Fukuda，甘蔗蠟對大鼠血清和肝脂的影響;化學文摘，106，17，137413p;以及ShoH.等，1984，Okinawan甘蔗蠟和脂肪醇對大鼠血清和肝脂的影響，J.Nutri.Vitaminol.30，6，553-553)。
最初，甘蔗蠟對血清和肝脂的影響用餵飼高含量植物和動物脂肪的雄性Wistar大鼠作了研究。這些作者發現，向規定食物的脂肪中加入0.5%甘蔗蠟大大降低了餵飼植物或動物脂肪的大鼠的血清甘油三脂，但僅在後一情形膽固醇含量才明顯降低，而肝脂的含量不受影響。因此，這些作者斷定，甘蔗蠟具有降血脂作用。
另一方面，ShoH.等人(1984)研究了衝繩甘蔗蠟對於餵食含0.5%這種蠟的食物的大鼠的血清及肝脂的影響，他們發現血清和肝的膽固醇含量均顯著降低。儘管如此，當在動物食物中使用從同一種蠟中得到的脂肪醇時，膽固醇含量無明顯變化。因此，他們排除了蠟的降脂作用是由於這些醇造成的。
但是，幾年之後，ShimuraS.，Hagesawa.T.，TakanoS.和SusukiT.(1987關於二十八烷醇對小鼠運動持久性的影響;NutritionReportsInt.36，1029-1038)用進行體力活動和餵食富含二十八烷醇食物的小鼠研究了二十八烷醇的影響。他們發現，從甘蔗蠟中分離出來的二十八烷醇顯著降低肝中的甘油三酯和膽固醇的含量，而血清中只有甘油三酯含量才明顯降低。他們斷定，從甘蔗蠟中分離出的二十八烷醇具有降脂作用，這與上述的ShoH.等人的先前結果不同。
同樣，曾經提出另一種高級脂族伯醇，二十六烷醇，也具有抗血脂作用，雖然據報導需要很高的劑量才得到這種效果(10-30毫克/千克/天)(HagiwaraY.1987用含二十六烷醇的抗血脂劑治療高血壓、動脈硬化、糖尿病、心臟病和肥胖;日本專利A62099323)。
現在已有認為是安全、有效和耐受性良好的各種商品降脂藥物，但是它們大多產生各種不良的副作用。因為降脂藥物必須長期服用。所以這一點很重要。
例如，二甲苯氧庚酸降低血清甘油三酯，增高高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)含量，並且使血清膽固醇略有減小，但是已報導有幾種不良作用。例如，胃腸作用，如上腹痛、腹瀉、噁心、嘔吐和氣脹等已有報導。另外，在用二甲苯氧庚酸治療的患者中曾發現頭痛、頭昏、視力模糊、陽萎、性慾減退和肝功能反常，例如轉氨酶、乳酸脫氫酶、肌酸磷酸激酶和鹼性磷酸酶增高。同樣，腎衰竭病人不能服用。
丙丁酚是具有抗氧化劑性質的另一種降脂藥物，它使血清膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)適度減少。但是，它的降脂作用的一個缺點是它降低了HDL-C的含量。另外，曾報導它有幾種不良作用，例如約10%的患者的胃腸失調現象，以及心電圖有相當大的變化。
常用的其它降脂藥物是消膽胺和降膽寧。它們是有效的優秀降膽固醇藥物，強烈地降低血清膽固醇和LDL-C，但是會增高甘油三酯含量。這些藥物會引起幾種胃腸症狀，主要是便秘。治療的順應性一般較低，因為有不良的症狀，而且它們是不易服用的藥劑，需要高達12至20克/天的劑量才達到所要求的效果。另外，曾有人報導它們與其它藥物，例如毛地黃毒苷，有不良的化學相互作用。
Lovastatin是「Statins」中的第一種，HMGCOA還原酶的抑制劑，從而有效地降低血清膽固醇和LDL-C的含量，它也適度地增高HDL-C並減少甘油三酯。已有人報導過此種藥物的幾種副作用。例如，主要的副作用是肌病、肌酸磷酸激酶的低度至中度增加和血清轉氨酶永久性增加，這常常在停止治療後變成不可逆的。肌病主要發生於用免疫抑制藥物(如二甲苯氧庚酸或煙酸)進行伴行治療的患者。另外，曾報導過用Lovastatin治療和患者中，敏感的患者有諸如皮疹、瘙癢、頭痛和嚴重的肌肉損傷等副作用，結果導致肌溶解。再者，曾報導過在實驗室動物中發生與藥物有關的睪丸萎縮和肝腫瘤。
類似地，Simvastatin和Pravastatin是另外二種「Statins」，它們按照與Lovastatin同樣的機制起作用，顯示出近似相同的降低膽固醇的效果。對這些患者報導的副作用與用Lovastatin治療的患者相同，但是據稱程度較輕。據報導，用Simvastatin和Pravastatin治療的患者有便秘、氣脹、噁心、頭痛、疲勞、皮下皮疹和影響肌酸磷酸激酶的肌病。
另一方面，曾經提到用某些降脂藥物治療降低了在高血脂病人中常見的血小板過度聚集的傾向，實驗數據已顯示了由這些化合物調節的抗聚集作用。儘管如此，僅僅某些降膽固醇藥物顯示出這種性質。正如已提到的，動脈粥樣硬化是動脈內膜多種多樣變化的綜合結果，這些變化包括脂類、複合的碳水化合物、血和血液產物、纖維組織及鈣沉積物的局部累積，常常還伴有內側變化。因此，這一定義表明動脈粥樣硬化是一個多因素的過程，不僅僅以高血脂作為危險因子。
因此，在對動脈粥樣硬化和發展起作用的各因子之間，血小板聚集佔有很重要的地位。血小板釋放微粒含有活性花生四烯酸，它代謝變化成環形內過氧化物。它們主要被轉化成環形的內過氧化物，最終變成為血栓烷A2(TxA2)，這是一種很強的血管收縮劑和血小板聚集劑。有各種化合物可以誘發血小板聚集，例如膠原、腺苷二磷酸和腎上腺素及其它。因此，各種以「體內」、「體外」或「試管內」方式試驗假定的抗血小板藥物的效力的實驗，通常是檢驗所述藥物對由這些化合物誘發的血小板聚集的影響。
這些試驗也用來試驗健康的志願人員和患有常常誘發聚集過度的病人，例如患有血膽固醇過多和糖尿病的病人的血小板聚集。在這些試驗之中，膠原誘發血小板聚集是最常使用的。例如，靜脈內注射膠原導致「活體內」不可逆的血管內血小板聚集，血小板聚集體進入血管微循環，從而減少循環的血小板計數，同時增加血漿中的丙二醛(MDA)濃度。另外，在某些物種中，注射膠原會誘發血栓形成而造成死亡。在這些模式中，抗血小板藥物一般防止血小板含量減少和丙二醛(MDA)濃度的增加，以及由膠原誘致的死亡。
某些具有防止血小板聚集作用的藥物可用來治療血栓病、心肌梗死和中風，但是它們並非都有這些優點。另一方面，有的抗血栓藥物主要通過溶解過程影響血液凝集，而不是對血小板聚集起作用，例如鏈激酶和尿激酶。
因為局部缺血性心血管病、中風和血管末稍阻塞病症是動脈粥樣硬化的主要後遺症，所以試驗了幾種藥物對這些併發症的作用。例如，理論上如果一種具有降低膽固醇性能的藥物也能通過對這些過程中涉及的其它現象的作用而阻止這些併發症，則必定對治療這些病人有利。同樣，TxA2含量的降低不僅與抗血小板和抗血栓形成作用有關，而且也與抗局部缺血作用有關。抗局部缺血藥物的藥學篩選通常包括評價它們對誘發的腦體局部缺血的作用。例如，曾有人報導過各種藥物對大鼠腦局部缺血的保護作用，包括抑制環氧酶催化的反應的某些非甾族消炎藥物(NSAID)以及血栓合成酶抑制劑和前列腺環素類似物(PgI2)(Borzeix MG和Cahn J.，1988，新的化學上代謝穩定的前列腺環素類似物對鼠類短暫性大腦血量減少的作用;Prostaglandins 35，5，653-664)。
其它的實驗方式，例如用蒙古沙土鼠實驗誘發的腦體局部缺血，也常常採用。
乙醯水楊酸(ASA)是在實驗模型和人體中顯示出抗血小板、抗血栓形成和抗局部缺血性能的一種化合物。它是在治療急性心肌梗塞和中風以及防止血栓栓塞紊亂方面應用最廣的一種藥物。ASA的作用受到眾所周知的它對花生四烯酸代謝時的一種關鍵酶(環氧酶)的抑制作用的支持。因此，ASA使血清中血栓烷A2(TxA2)含量明顯地大大減少，後者是公認的血管內皮病理生理因子，這解釋了ASA的上述作用。
但是，因為ASA的抑制作用是在環氧酶濃度上發揮作用，所以不僅TxA2含量降低，而且前列腺環素(PgI2)的含量也降低，後者是藥理性質與TxB2相反的一種化合物。另一方面，考慮到ASA抑制了前列腺素(系列E)的合成，它會由於阻礙前列腺素的細胞保護作用而造成胃損傷。這是對ASA報導的主要副作用，即，胃炎、胃潰瘍及有關的失調現象。
本發明的目的之一是用一種公眾丟棄物24至34個碳原子的M.H.P.A.A.作為藥物製劑。
本發明的另一目的是使用相當低劑量的24至34個碳原子的M.H.P.A.A.作為降低膽固醇藥物製劑的活性組分。
本發明的又一目的是將M.H.P.A.A.用於抗血小板、抗局部缺血或抗血栓形成的藥物製劑中，以顯示M.H.P.A.A.的抗血小板聚集的作用，這已在「體外」和「體內」模型中以及在人體中的一系列不同實驗中得到證實。
本發明的再一目的是證實M.H.P.A.A.對實驗誘發的局部缺血的保護作用。
本發明的另一目的是證實M.H.P.A.A.和最常用於大腦局部缺血治療的ASA之間有藥理相互作用。結果表明在M.H.P.A.A.和ASA的抗血小板、抗血栓形成和抗局部缺血效能之間有協同作用。
本發明還有一個目的是證實M.H.P.A.A.顯著減少被阿斯匹林、乙醇、消炎痛、化合物C4880(西格馬公司)和其它在所治療人體中產生胃潰瘍的藥物所造成的胃潰瘍。曾經報導，乙醇誘發的胃潰瘍主要與作為生理因素的TxA2的增加有關，而C4800誘發的潰瘍主要與血清素激活的機制有關，雖然不能排除TxA2在雄體單體生殖方面的作用。另一方面，ASA誘發的胃潰瘍與ASA產生的對前列腺素(E系列)合成的抑制有關，因為前列腺素對胃黏膜有細胞保護作用。已經證實，TxA2與PgI2比在胃黏膜中作為一種整體的內源機制起重要的作用。
另一方面，如前所述，某些降低膽固醇的藥物損害男性性功能。例如，曾報導用安妥明和二甲苯氧庚酸治療的患者性慾減退和陽萎。
相反，本發明的另一目的是證實M.H.P.A.A.不僅不損害男性性功能，而且還增強人和動物的性功能。例如，曾提到有許多高膽固醇患者在臨床試驗中進行治療期間性功能增強。這一效果與涉及控制性慾和性行為的主要激素-睪酮在血清中的含量變化無關。
睪酮被認為是哺乳動物中控制性慾的主要性激素。已經有人報導，對於性功能只需要閾值水平的睪酮。過多的睪酮並不導致雄性性功能的進一步增強。但是最近以來已經證實，同樣的睪酮水平包含著不同的激素釋放或給與方式，這可能導致對雄性性功能的不同影響。這表明在這方面仍存在相反的意見。
另一方面，哺乳動物中雄性性功能包括不同的階段性慾、陰莖勃起、性慾高潮和射精，它們是由複雜的神經內分泌機制控制的。例如，這一行為是由作用在末稍效應器上的睪丸激素的釋放，作用在主要位於中央基底視丘下部區域的中樞神經系統上的激發和反饋機制等決定的。多巴胺能途徑和血清素激活途徑都控制性功能。
最後，業已證實，一氧化氮(NO)在海棉體處的釋放是陰莖勃起的關鍵機制。因此，M.H.P.A.A.改進雄性性功能的作用可以用還未完全明了的另外的機制解釋。
最後，在關於M.H.P.A.A.全貌的整個描繪中，與目前已知的藥物相比，它的極好的安全性和耐受性代表了一種重要的優點。例如，用齧齒動物、兔子、獵兔犬和猴子進行的急性、亞慢性和慢性研究中，表明沒有與藥物有關的毒性。另外，它在家兔或小鼠中既無任何的誘變作用，也沒有致畸作用。服用M.H.P.A.A.兩代以上的大鼠未影響胎兒發育，也不影響生殖活動。最後，對小鼠進行24個月的致癌性研究也表明，M.H.P.A.A.沒有毒性和致癌作用。
短期和長期臨床試驗也說明這種治療極其完全和具有極好的耐受性。
本發明的目的將在以下實施例中詳細說明。這些實施例將不限制本發明的範圍。
實施例1取1000克精製甘蔗蠟在100-110℃下熔化，加入溶在150毫升水中的200克氫氧化鉀。在攪拌下保持此過程5小時。在固一液萃取系統中以庚烷作為溶劑由此過程得到的固體中萃取M.H.P.A.A.12小時。將得到的萃取液在室溫下冷卻，M.H.P.A.A.由其中結晶，在甲乙酮中重結晶。得到多達285克的醇混合物;純度為94.70%。混合物的溶點範圍在80.5和82.5℃之間。表4列出了用此方法得到的M.H.P.A.A.的定性和定量組成。
表4所得M.H.P.A.A.的定性和定量組成組分各醇的百分含量1-二十四烷醇0.811-二十六烷醇7.001-二十七烷醇2.811-二十八烷醇65.091-二十九烷醇0.671-三十烷醇12.431-三十二烷醇5.051-三十四烷醇0.84實施例2將2千克粗製甘蔗蠟在85-100℃下熔化，加入溶解在200毫升水中的300克氫氧化鈉，在攪拌下保持此皂化過程4小時。用氯仿作為溶劑在常規的固一液萃取系統中萃取M.H.P.A.A.10小時，將所得的萃取液在室溫下冷卻，所得的固體在甲醇中重結晶，最後在氯仿/甲乙酮混合物中重結晶。得到純度總計92.52%的M.H.P.A.A.405克。M.H.P.A.A.的溶點範圍從79.0至80.5℃。表5列出了用此方法得到的M.H.P.A.A.的定性和定量組成。
表5所得M.H.P.A.A.的定量及定性組成組分各醇的百分含量1-二十四烷醇0.871-二十六烷醇6.841-二十七烷醇3.081-二十八烷醇62.921-二十九烷醇0.801-三十烷醇12.661-三十二烷醇4.651-三十四烷醇0.70實施例3將溶解在7升水中的12升克氫氧化鈣加到50千克預先在100-120℃下溶化的精製甘蔗蠟中。此皂化過程在攪拌下進行7.5小時。在固一液萃取系統中用乙醇作溶劑萃取M.H.P.A.A.12小時。將所得的萃取液在室溫下放置冷卻，而後將固體在氯仿中重結晶。得到純度為93.77%的M.H.P.A.A.13.7千克。該混合物的熔點範圍為80.0-82.0℃。表6列出了用此方法得到的M.H.P.A.A.的定性與定量組成表6所得M.H.P.A.A.的定性與定量組成組分各醇的百分含量1-二十四烷醇0.711-二十六烷醇6.881-二十七烷醇3.061-二十八烷醇64.701-二十九烷醇0.621-三十烷醇12.011-三十二烷醇5.091-三十四烷醇0.70實施例4將8.6千克溶在4.5升水中的氫氧化鈣加到50千克預先在100-120℃熔化的粗製的甘蔗蠟中。皂化過程在連續攪拌下進行3小時。在固一液萃取器中用二氯甲烷作溶劑萃取M.H.P.A.A.12小時。所得的產物冷卻到室溫，得到的固體在己烷和丙酮(1∶1)混合物中重結晶。得到純度為92.91%的醇混合物6.8千克。M.H.P.A.A.的熔點範圍為78.5℃-80.5℃。表7列出了用此方法得到的M.H.P.A.A.的定性和定量組成。
表7所得的M.H.P.A.A.的定性和定量組成組分各醇的百分含量1-二十四烷醇0.751-二十六烷醇7.001-二十七烷醇3.141-二十八烷醇63.601-二十九烷醇0.621-三十烷醇12.031-三十二烷醇4.991-三十四烷醇0.78實施例5向20千克預先在100-110℃的溫度下熔化的精製甘蔗蠟中加入稀釋在3.0升水中的3.7千克氫氧化鉀。皂化過程在連續攪拌下進行5小時。用甲乙酮作為溶劑，在索氏萃取器中萃取M.H.P.A.A.14小時。將萃取出的物質在室溫下冷卻。接著，將它在己烷/氯仿(1∶1)混合物中重結晶，得到純度為92.56%的M.H.P.A.A.3.8千克。M.H.P.A.A.的熔點範圍在78.5和80.5%之間。表8列出了用此方法得到的M.H.P.A.A.的定性與定量組成。
表8所得M.H.P.A.A.的定性與定量組成組分各醇的百分含量1-二十四烷醇0.851-二十六烷醇6.561-二十七烷醇3.101-二十八烷醇63.101-二十九烷醇0.721-三十烷醇12.181-三十二烷醇5.311-三十四烷醇0.74實施例6將250克氫氧化鈣加到預先在100℃熔化的1千克粗製甘蔗蠟中。此皂化過程在連續攪拌下進行2小時。在固一液萃取系統中用2-丙醇作為溶劑萃取M.H.P.A.A.12小時。所得的產物在室溫下冷卻，用庚烷重結晶。得到純度為93.63%的M.H.P.A.A.165克。M.H.P.A.A.的熔點範圍為80.0至81.5℃。表9列出了用此法得到的M.H.P.A.A.的定性和定量組成。
表9所得M.H.P.A.A.的定性和定量組成組分各醇的百分含量1-二十四烷醇0.841-二十六烷醇6.521-二十七烷醇3.181-二十八烷醇64.131-二十九烷醇0.691-三十烷醇12.541-三十二烷醇4.931-三十四烷醇0.80實施例7將400克稀釋在200毫升水中的氫氧化鈉加到預先在110℃熔化的2千克精製甘蔗蠟中。這一過程在連續攪拌下保持3小時。在固體萃取器中用甲苯作為溶劑萃取M.H.P.A.A.6小時，用甲醇作為溶劑第二次重結晶。得到純度為95.10%的M.H.P.A.A.389克。混合物的熔點範圍為81.0至83.0℃。表10列出了用此方法得到的M.H.P.A.A.的定性和定量組成。
表10所得M.H.P.A.A.的定性和定量組成組分各醇的百分含量1-二十四烷醇0.801-二十六烷醇7.001-二十七烷醇2.821-二十八烷醇64.541-二十九烷醇0.721-三十烷醇13.021-三十二烷醇5.311-三十四烷醇0.89實施例85千克精製甘蔗蠟在120℃下熔化後用稀釋在500毫升水中的1千克氫氧化鉀處理。此過程在連續攪拌下保持4小時。在固一液萃取系統中用乙醇作為溶劑萃取M.H.P.A.A.5小時。然後，將萃取液室溫下冷卻，用甲苯作為溶劑將M.H.P.A.A.結晶。得到純度為92.20%的M.H.P.A.A.1490克。M.H.P.A.A.的熔點範圍在79.5和81.0℃之間。表11列出了用此法得到的M.H.P.A.A.的定性與定量組成。
表11所得M.H.P.A.A.的定性和定量組成組分各醇的百分含量1-二十四烷醇0.761-二十六烷醇6.581-二十七烷醇2.841-二十八烷醇62.431-二十九烷醇0.711-三十烷醇13.081-三十二烷醇5.051-三十四烷醇0.75實施例9用M.H.P.A.A.作為活性成分研製了兩種不同的藥物製劑，其成分列在表12中。這些製劑是考慮了活性成分的物理、化學和物理化學特點而研製的。
用溼造粒法將活性組分與藥物賦形劑按控制的比例混合、乾燥、脫粒、潤滑和壓片，製成藥劑。
表12用M.H.P.A.A.作為活性成分的藥物製劑組分製劑1製劑2(%)(%)M.H.P.A.A.5.015.0乳糖56.054.0玉米澱粉15.010.0明膠2.52.0交聯的羧甲基纖維素鈉5.04.0蔗糖5.04.0滑石粉2.02.0硬脂酸鎂1.51.0乙醯鄰苯二甲酸纖維素0.51.0微晶纖維素7.57.0實施例10使雄性紐西蘭兔(2-3千克)適應實驗室條件15天，隨機地分成4個實驗組一個對照組(只服用介質)和三個M.H.P.A.A.處理組。後三組分別用胃管飼法(1毫升/千克)分別服用懸浮在阿拉伯膠/水介質中的5、50和200毫克/千克的M.H.P.A.A.4周。測定基線處的脂含量(開始治療前和治療4周後)。在30天內口服5、50和200毫克/千克的M.H.P.A.A.以一種與劑量有關的方式顯著減少(WilcoxonP＜0.05)總膽固醇和血清中低密度蛋白的含量。另外，對照組和處理組中百分數的變化統計學上是有差異的(MannWhitneyU，P＜0.05)，見

圖1-4。在這一實驗系統中，服用最高劑量的M.H.P.A.A.(200毫克/千克)將血清膽固醇和LDL-C分別降低51%和78%。在所有四組中HDL-C含量均無明顯變化(圖5)。比較處理組與對照組之間的甘油三酯百分含量，變化也很明顯(MannWhitneyU，P＜0.05)，但未觀察到劑量與效果間的關係(見圖6和7)。
實施例11將雄性紐西蘭家兔隨機地分成4組一個對照組(只用胃管飼法服用介質)和分別用5毫升/千克M.H.P.A.A.、二十八烷醇和二十六烷醇處理的3個組。在基線處和處理30天後測定血脂分布。M.H.P.A.A.顯著降低總膽固醇和LDL-C。另外，用M.H.P.A.A.處理的家兔的膽固醇、LDL-C和甘油三脂比對照組的明顯降低。但是，在用二十八烷醇或二十六烷醇處理的二組血脂的變化沒有統計學意義，結果見表13。
表13M.H.P.A.A.、二十八烷醇和二十六烷醇對血膽固醇正常的紐西蘭家兔血脂含量(毫摩爾/升)的影響劑量組別(毫克/千克)基線處理後總膽固醇對照02.52.3M.H.P.A.A. 5 2.8 1.6*+二十八烷醇52.72.2二十六烷醇52.62.4LDL-C
對照01.51.2M.H.P.A.A. 5 1.3 0.6*+二十八烷醇51.40.9二十六烷醇51.51.0甘油三酯對照00.800.82M.H.P.A.A.50.780.55*二十八烷醇50.770.70二十六烷醇50.800.78＊p＜0.05與對照組比較(MannwhitneyU檢驗)+p＜0.05與基線比較(Wilcoxon)實施例12在僅用規定膳食5周之後，45名膽固醇值和LDL-C值用食物不足以控制的門診病人服用含5毫克M.H.P.A.A.的片劑(每天午餐和晚餐時各一次)或無效對照劑共6周。在這段有效治療期間，保持規定的飲食條件。在基線處(只服規定飲食期間結束時)以及治療4和6周後測定血脂含量。M.H.P.A.A.將總血清膽固醇和LDL-C分別顯著地降低16.23%和21.33%。膽固醇與HDL-C的比和LDL-C與HDL-C之比也分別被明顯地減少11.67%和22.28%(p＜0.05，配對數據的Wilcoxon檢驗)。在所有的病人中，總膽固醇含量和LDL-C含量在治療6周後都低於基線值。其它脂類組分含量的變化不明顯，結果列在表14和15中。
表14M.H.P.A.A.(10毫克/天，分2次，每次5毫克)對患Ⅱ型血脂蛋白過多病人血清脂分布(毫摩爾/升)的影響n基線6周(X+SD)(X+SD)總膽固醇M.H.P.A.A. 22 7.43+1.29 6.21+1.38***""無效劑 23 6.97+0.72 6.70+0.75*LDL-CM.H.P.A.A. 22 5.54+1.22 4.35+1.31***"""a無效劑235.07+0.634.97+0.67HDL-CM.H.P.A.A.221.03+0.261.10+0.28無效劑231.13+0.311.02+0.28甘油三酯M.H.P.A.A.222.41+0.941.74+0.88無效劑232.03+0.641.87+0.67VLDL-CM.H.P.A.A.221.09+0.430.79+0.40無效劑230.92+0.290.85+0.31-n患者數目-＊p＜0.01;＊＊＊p＜0.0001，與基線比較(Wilcoxon)
-ap＜0.05與無效劑比較，絕對值，MannWhitneyU檢驗。
-′′′′p＜0.001與無效劑比較(MannWhitneyU檢驗)-′′′′′′p＜0.00001與無效劑比較(MannWhitneyU檢驗)表15M.H.P.A.A.(10毫克/天，分2次，每次5毫克)對患Ⅱ型血脂蛋白過多病人血清脂比率(毫摩爾/升)的影響n基線6周(X+SD)(X+SD)LDL-C/HDL-CM.H.P.A.A. 22 5.71+1.82 4.18+1.59**""a無效劑234.92+1.855.30+1.79膽固醇/HDL-CM.H.P.A.A. 22 7.65+2.18 5.94+1.81*"無效劑236.69+2.217.06+2.05-＊p＜0.05;＊＊p＜0.01，與基線比較(Wilcoxon)-ap＜0.05與無效劑比較，絕對值，MannWhitneyU檢驗。
-′′p＜0.05與無效劑比較(MannWhitneyU檢驗)-′′′′p＜0.01與無效劑比較(MannWhitneyU檢驗)。
實施例13一組患Ⅱ型血脂蛋白過多症的病人在8周僅食用規定飲食後(基線)，服用含15毫克組合物的片劑。在基線處和在治療8周後測定血脂分布。主要結果總結在表16中。含有M.H.P.A.A.的製劑將血清總膽固醇顯著地降低16.44%，LDL-C降低23.51%(見圖8)。HDL-C增加6.40%，而甘油三酯和極低密度脂蛋白膽固醇(VLDL-C)分別減少7.80%和10.83%，但是這些變化在統計學上不顯著。表17中列出了LDC-C與HDL-C之比和膽固醇與HDL-C之比的變化，它們分別顯著地減少了29.07%和23.72%。
表16M.H.P.A.A.對患Ⅱ型血脂蛋白過多的病人血清脂分布和脂蛋白的影響參量n基線n8周(X+SD)(X+SD)膽固醇 25 7.84+1.14 25 6.50+1.21****LDL-C 17 5.86+1.11 18 4.33+1.32**HDL-C191.03+0.44201.21+0.46甘油三酯192.30+1.42202.14+1.06VLDL-C191.05+0.64200.97+0.48＊＊p＜0.01;＊＊＊＊p＜0.0001(Wilcoxon檢驗)
表17M.H.P.A.A.對患Ⅱ型血脂蛋白過高的病人LDL-C/HDL-C和膽固醇/HDL-C比值的影響參數n基線n8周(X+SD)(X+SD)LDL-C/HDL-C 17 6.34+2.79 18 3.82+1.55**膽固醇/HDL-C 19 8.83+3.49 20 6.07+2.17**＊＊p＜0.01(Wilcoxon檢驗)實施例14首先，研究M.H.P.A.A.的作用和它對腺苷二磷酸(ADP)和膠原誘發的大鼠血小板聚集的影響。將一群重250至350克的雄性Sprague-Dawley大鼠隨機地分成兩個實驗組。用胃飼管口服M.H.P.A.A.在阿拉伯膠-水介質的懸浮液4周。2組中一個是只服用介質的對照組，另一組則用M.H.P.A.A.處理(25毫克/千克)。為進行血小板聚集的鑑定，將大鼠在乙醚氣氛中麻醉。打開腹部由腔靜脈抽血5毫升，與3.8%的檸檬酸鈉混合(每9體積血用1體積的檸檬酸鈉)。將血液離心，得到富血小板的血漿(PRP)。將PRP液在330xg下離心15分鐘，得到貧血小板的血漿(PPP)。用腺苷二磷酸和膠原誘發血小板聚集，用一臺Payton集合度計按文獻所述進行測定(McGregorL.，MoranzainR.和RenaudS.;1980;食用亞油酸對大鼠血小板功能的影響;ThrombosisRes.20，499)。用非參數的Mann-WhitneyU檢驗比較治療組與對照組之間的結果。用25毫克/千克的M.H.P.A.A.治療4周的大鼠，在服用亞最高劑量的腺苷二磷酸和膠原時，顯著地抑制了體外血小板的聚集(見圖9和10)。大鼠口服M.H.P.A.A.四周顯著抑制腺苷二磷酸和膠原誘發的血小板聚集這一事實，說明M.H.P.A.A.作為抗血小板藥物起作用。
實施例15為了檢驗M.H.P.A.A.對大鼠體外血小板聚集的影響，進行了它的抗血小板聚集作用時間過程的研究。為此，將重250至350克的兩種性別的Sprague-Dawley大鼠分成四個組一個對照組和三個分別用單劑量為25、50、和200毫克/千克M.H.P.A.A.處置的實驗組。另外，在服用200毫克/千克的劑量2、6和24小時之後，研究對血小板聚集的影響。M.H.P.A.A.用實施例14中所述的方法製備，以一次劑量的形式在實驗前2小時口服給藥。對照的動物服用相同體積的介質，所有的動物均禁食，但是在實驗前20小時自由飲水。用乙醚將所有的動物麻醉，從腔靜脈抽血，與3.8%的檸檬酸鈉混合(每9體積血加1體積抗凝劑)。將血在250g離心10分鐘以得到富血小板的血漿(PRP)。一旦分離出PRP，將剩餘的部分在1300g離心15分鐘，得到貧血小板的血漿(PPP)。用濁度法定量測定血小板聚集度(BornG.，1962;腺苷二磷酸引起的血小板聚集及其解聚;Nature(London)194，927-929)。將儀器較正為對RPP透光率為0%、對PPP為100%，然後測定血小板聚集度。記錄聚集曲線5分鐘。結果用最大聚集百分數(%)表示。各組之間用Mann-WhitneyU檢驗(P＜＜0.05)比較。在採血樣前2小時服用M.H.P.A.A.(50和200毫克/千克)抑制了腺苷二磷酸誘發的血小板聚集，而較低的劑量(25毫克/千克)沒有明顯改變對腺苷二磷酸的響應(見圖11)。選擇最高劑量的M.H.P.A.A.(200毫克/千克)研究抗血小板作用的時間過程。雖然在2小時後血小板的聚集被明顯地抑制，但是6小時後這種抑制作用就變成不很明顯(P＝0.06)，而在24小時後已得不到統計學上有意義的結果(見圖12)。結果表明，在採血2小時前讓大鼠口服多二十烷醇，在用50和200毫克/千克的M.H.P.A.A.處置的大鼠的PRP中以與劑量依賴的關係抑制了腺苷二磷酸誘發的血小板聚集。M.H.P.A.A.對腺苷二磷酸誘發的聚集的抑制作用是可逆的，因為在用它以200毫克/千克的劑量處理6小時後，對血小板聚集的抑制作用已不很明顯，而在處理24小時後，觀察到效果喪失，說明M.H.P.A.A.不會造成永久性的細胞變性。
實施例16研究了M.H.P.A.A.對大鼠體內靜脈血小板聚集的影響和對小鼠膠原誘發的死亡率的影響。將重250至300克的Sprague Dawley雄大鼠和重20至25克的57BL6雌性小鼠隨機地分成幾個實驗組。M.H.P.A.A.按實施例14所述製備，乙醯水楊酸(ASA)則溶解在5%的NaHCO3中。在鑑定前2小時用管飼法口服藥物。在口服藥物16小時前動物禁食。雄大鼠按1毫升/100克體重、小雌鼠按0.5毫升/20克體重服藥，對照動物則服用相當體積的介質。在大鼠的靜脈內血小板聚集研究中使用四個實驗組1)對照組、2)、3)和4)組分別服用5、10和20毫克/千克的M.H.P.A.A.。將動物用戊巴比妥鈉腹膜內麻醉(30-40毫克/千克)。在將30毫克/千克的膠原注射到陰莖靜脈中之前和90秒之後，將一根套管插到頸總動脈中採取血樣。在含有0.7毫克/毫升消炎痛和19毫克/毫升EDTA的100微升混合物的塑料管中收集900微升血。取一部分通過光學顯微鏡計數測定各樣品中的血小板濃度。然後將血液離心，血漿丙二醛(MDA)濃度通過硫巴比妥酸法定量測定(SatohM.，1978;測定腦血管障礙中血脂過氧化物的新比色法;ClinChim.Acta90，34-43)。注射膠原之後血小板計數和血漿MDA濃度的變化用基線值的百分數表示。對照組和處理組之間的差異性用Mann-WhitneyU檢驗法確定。
為了研究膠原誘發的大鼠死亡率，將實驗分組如下1)對照組動物只服用介質，但是用靜脈內注射膠原法誘發死亡;
2)在注射膠原2小時前，用360毫克/千克體重的M.H.P.A.A.預先處理動物;
3)在誘發死亡前1、4、8和24小時，用360毫克/千克體重的M.H.P.A.A.預先處理動物;
4)在檢測前2小時，用180毫克/千克體重和M.H.P.A.A.和50毫克/千克體重的ASA對動物預處理。
按文獻所述製備Ⅲ型酸溶的小牛皮膠原(KimuraY.，KaubeT.和WatanabeK.，1985;Celostagel對血小板聚集和實驗血栓形成的影響;ArzneimForschDrugRes.35，114-1148)，以最終濃度為2.5毫克/毫升使用。通過眼眶後血管叢注射，劑量為0.1毫升/20克體重。這一劑量造成對照動物60%至100%的死亡率。對照動物和處理過的動物之間死亡百分率的比較用Fischer正合概率檢驗法進行。
M.H.P.A.A.明顯地抑制了由膠原誘發的循環血小板計數的減少和血漿中MDA濃度的同時增加(見圖13)。360毫克/千克體重的M.H.P.A.A.使膠原誘發的死亡率大大降低(見圖14)。對膠原致死的這種保護效果是在檢測前1和4小時服用這一劑量時觀察到的，但是在檢測前8小時服用則不顯著(見圖15)。
M.H.P.A.A.(180毫克/千克體重)和ASA(50毫克/千克體重)的結合應用也造成膠原致死率在統計學意義上的顯著降低，而當二者單獨服用時均無效果(見圖16)。單獨服時無效的M.H.P.A.A.劑量和ASA劑量，在一起用時有明顯的保護作用，從而表明M.H.P.A.A.和ASA的抗血栓形成效果有協同作用。
實施例17為了分析M.H.P.A.A.對大鼠大腦梗塞的影響，將體重290至330克的SpragueDawley雄鼠分成以下實驗組1)陰性對照組未結紮的大鼠只用胃管飼法服用介質;
2)陽性對照組結紮的大鼠也用胃管飼法服用介質;
3)和4)結紮的大鼠用同樣的途徑分別服用M.H.P.A.A.(5和25毫克/千克體重)。
不同的治療組逐日服用4周。最後一組如這種模型中通常採用的那樣，在結紮前12小時和結紮後8和24小時服藥。
為了誘發大腦局部缺血，將動物輕微地麻醉，通過將頸總動脈雙側結紮造成血量減少。緊接著皮下注射硝普酸鈉(0.8毫克/250克體重)以造成動脈低血壓。60分鐘後取下頸動脈夾，觀察動物72小時，然後殺死。迅速取出大腦，在80℃的烘箱中放置24小時。測定溼重和乾重以確定水含量(水腫)，採用以下公式水腫＝ (溼重-乾重)/(溼重) ×100採用非參量的Mann-WhitneyU檢驗對結果進行統計分析。逐日服用25毫克/千克體重的M.H.P.A.A.周能顯著減輕大腦水腫(P＜＜0.05)。這一劑量也減少了死亡率和患水腫動物的百分數，雖然另外這兩項降低沒有達到顯著的水平。這些發現表明，服用25毫克/千克體重的M.H.P.A.A.對實驗誘發的鼠腦局部缺血有明顯的保護作用，因為大腦水腫大大減輕。所治療的動物中顯示出大腦水腫面積的百分數也有減小，但是這一減小未達到顯著的水平(見表18)。
表18M.H.P.A.A.對大鼠誘發性大腦缺血的影響劑量百分數實驗組(毫克/千克)水腫死亡動物(-)對照079.3+/-0.39------(+)對照080.1+/-0.823554.5M.H.P.A.A.580.0+/-0.914033.3M.H.P.A.A.2579.5+/-0.49*287.6(-)對照陰性對照;(+)對照陽性對照;＊與陽性對照相比差異明顯;p＜＜0.05(Mann-WhitneyU檢驗)。
實施例18為研究M.H.P.A.A.和阿斯匹林對於誘發的大鼠大腦缺血症的協同效應，將重250至300克的雄性SpragueDawley鼠分成5組1)陰性對照(未結紮的鼠);
2)陽性對照(只服用介質的結紮的動物);
3)管飼法口服25毫克/千克體重的M.H.P.A.A.的動物;
4)口服溶在5%碳酸氫鈉溶液中的30毫克/千克體重的ASA的動物;
5)口服ASA(30毫克/千克體重)+M.H.P.A.A.(25毫克/千克體重)的大鼠。
在實驗前2小時服藥。為了誘發局部缺血，將動物用乙醚輕微麻醉，分離出頸總動脈並結紮之。然後皮下注射硝普酸鈉(0.8毫克/250克體重)造成低血壓。60分鐘後取下動脈夾，觀察動物24小時。將它們殺死，立即取出大腦，在80℃的烘箱中放置24小時以確定含水量。用非參量的Mann-WhitneyU檢驗分析結果。上述劑量的M.H.P.A.A.和阿斯匹林在分別給動物服用時都不能明顯減輕大腦缺血。但是，當它們一起服用時，得到明顯的保護作用(p＜＜0.01)(見圖17)。這些結果證實在M.H.P.A.A.和ASA的抗局部缺血效能之間有協同作用。
實施例19採用兩種性別的蒙古沙土鼠(體重60-80克)，事先使其適應實驗室條件一周。用胃管飼法服用懸浮在Tween-20水溶液介質中的M.H.P.A.A.。將這些動物隨機地分成以下幾組
(1)陽性對照(結紮的動物，只服用介質);
(2)M.H.P.A.A.(50毫克/千克體重);
(3)M.H.P.A.A.(300毫克/千克體重)。
所有治療藥物都在誘發大腦缺血前2小時服用。將左頸總頸動脈暴露，在乙醚麻醉下用外科手術線雙重結紮。觀察各動物的行為24小時，記錄大腦缺血的臨床症狀，例如轉圈、周而復始的痙孿以及癲癇等。同時記錄死亡率。用Fischer正合概率檢驗法統計比較各組死亡率和臨床症狀的頻度。結果表明，這種治療減輕了臨床症狀並且大大降低了死亡率(見圖18)。
眾所周知，在結紮頸總動脈之後約60%的蒙古沙土鼠產生了神經病態缺陷，例如轉圈行為和周期性痙孿。這些症狀與約2/3這些動物的顱底點和頸動脈系統之間的連結動脈不完善或不存在有關。另外，幾乎80%的顯示出臨床症狀的動物在結紮後72小時內死亡。
因為難以鑑定全部腦區大腦梗塞形成的嚴重程度，而死亡率則容易定量判定，所以通常用此參量評價被認為是抗局部缺血的藥物。我們的結果表明，M.H.P.A.A.(200毫克/千克體重)對蒙古沙土鼠因一側結紮頸總動脈造成的腦體缺血有明顯的保護作用。因此，說明M.H.P.A.A.可用於防止腦體缺血的產生。
實施例20研究了M.H.P.A.A.對各種藥物誘發的胃潰瘍的影響。使用體重200至220克的兩種性別的SpragueDawley大鼠。使動物適應實驗室條件一周，水和食物任意。在24小時禁食之後，將鼠隨機地分成兩個實驗組。第一組在腹膜內注射懸浮在Tween20/水介質中的M.H.P.A.A.(25毫克/千克體重)，第二組(對照組)只接受相同體積的介質。在每種情形裡，都對對照組和治療組進行誘發不同類型的藥物誘致胃潰瘍的實驗步驟(每類潰瘍使用兩組)A)用C4880(Sigma)實驗誘發的胃潰瘍。實驗步驟與AwoutersF.，NemegeensCJE和JanskenPAJ所述的相似(1985大鼠肥大細胞5-HT胃損傷試驗的藥理分析和氟哌喹酮的影響;Drug.Div.Res.5，303-312)。為此，皮下注射10毫克/千克體重的聯苯羥基胺，30分鐘後靜脈內注射C4880。在施用C48804小時後將動物殺死，迅速取出胃，沿長度方向切開胃大彎，用蒸餾水洗。然後，暴露出胃黏膜，用放大鏡測量損傷面積。將結果用顯示損傷的面積百分數表示。在這種方式裡，在注射聯苯羥基胺30分鐘之前服用預療藥物(M.H.P.A.A.或介質)。
B)乙醇誘發的潰瘍。試驗步驟按ZengilH、OnikE、EreanTS和TarkerRK所述進行(1987ilopnost和UK38485對於各種刺激物造成的胃黏膜損傷的保護作用;ProstaglandinsLeukotrienesandMedicine，30，61-67)。為此，在施用M.H.P.A.A.或介質1小時之後，用胃管飼法使大鼠口服40%的乙醇(1毫升/每隻鼠)。2小時後將鼠殺死，如上所述定量測量胃潰瘍。
C)ASA誘發的胃潰瘍根據前一節中引用的同一作者的方法進行試驗。在用M.H.P.A.A.或介質處理1小時後，令大鼠口服ASA(100毫克/千克體重)。2小時後將鼠殺死，如上所述測定胃潰瘍。用非參量的Mann-WhitneyU檢驗法比較對照組和用M.H.P.A.A.處理組。腹膜內施用M.H.P.A.A.(25毫克/千克體重)顯著抑制了由C4880、乙醇和ASA誘發的胃潰瘍(見圖19)。
另外，正如可以從表19看到的，口服M.H.P.A.A.不僅減少了TxB2，而且也使PgI2增加，從而大大地降低了TxB2與PgI2之比。
表19M.H.P.A.A.和ASA對小鼠血清中TxB2含量和6酮PgFla的影響TxB26酮PgF1a TxB2/(納克/毫升)(納克/毫升)6酮PgF1a指數對照286+16.71.65+0.26173ASA(50毫克/千克) 36.3+13.3**(a) 1.12+0.41 46.5M.H.P.A.A.
(180毫克/千克) 182+31.9**(b) 3.91+0.4*32.4M.H.P.A.A.
+ASA 9.25+5.4**(c) 1.57+0.16 5.8＊p＜0.05;＊＊p＜0.01;a＝b＝c(Mann Whitney U檢驗)由M.H.P.A.A.引起的對TxB2含量的抑制和PgI2的增加可以解釋該混合物對胃潰瘍的保護作用。因此，當同時用M.H.P.A.A.和ASA時，觀察到TxB2對PgI2之比大大減小。另外，這一機制也可以解釋醇混合物對其它藥物誘發的胃潰瘍的作用。
實施例21對於年齡從25至70歲的兩種性別患Ⅱ型高血脂蛋白的45名門診病人，在雙盲條件下一天一次服用M.H.P.A.A.或無效對照片劑6周(治療的病人每天服用5毫克M.H.P.A.A.)。在治療前和治療後研究以下參量出血時間、血小板計數、凝血酶原時間、抗凝血酶Ⅲ活性、溶血時間、血漿優球蛋白、腺苷二磷酸誘發的血小板聚集度和丙二醛(MDA)濃度。
表20總結了數據。這些數據表明，與凝固過程有關的參量沒有一個受到影響，而在由腺苷二磷酸誘發血小板聚集的各組之間有顯著差別。另外，也觀察到丙二醛的不很明顯的減少(P＝0.058)。
表20M.H.P.A.A.治療對患Ⅱ型血脂蛋白過多的病人血液凝固和血小板聚集的影響分析時間無效對照劑M.H.P.A.A.
(5毫克/天)出血時間02'47"+/-1'26"2'31"+/-1'24"6周2'10"+/-1'34"2'08"+/-1'06"血小板計數0201.23+/-29.98198.13+/-39.486周188.55+/-35.99175.33+/-40.87凝血酶原時間013.67+/-1.8014.43+/-4.186周13.40+/-1.1013.69+/-2.25纖維蛋白原02.64+/-0.462.84+/-0.546周2.81+/-0.522.92+/-0.44抗凝血酶III活性079.95+/-7.5082.86+/-11.976周91.78+/-9.6993.67+/-14.62溶血時間0247.27+/-30.10230.43+/-48.196周248.64+/-55.72228.48+/-45.39血漿優球蛋白035.79+/-18.1836.93+/-20.936周47.59+/-21.2930.98+/-24.19腺苷二磷酸048.98+/-16.2852.27+/-24.266周56.97+/-24.7727.45+/-24.81++丙二醛02.99+/-1.752.45+/-2.31a6周2.79+/-1.281.76+/-1.67
aP＝0.058+P＜0.05++P＜0.01(MannWhitneyU試驗)實施例22口服或腹膜內施用M.H.P.A.A.顯著增強雄鼠的性功能。例如，將雄性大鼠隨機地分成3個實驗組，適應實驗室條件一周。在處理前測定與接受雌激素的雌鼠的交配活性，以保證處理的隨機化分配。一旦證實之後，用管飼法使大鼠口服M.H.P.A.A.或介質10周，處理後再記錄交配活性(見表21)。
表21M.H.P.A.A.對雄鼠性功能的影響組別大鼠數目(對SD)顯示以下行為的大鼠百分數(%)爬上交配勃起爬上交配勃起對照8+148+135066M.H.P.A.A.
0.5 21+21*22+21*75 75M.H.P.A.A.
5.0 24+19*37+44***83*92*M.H.P.A.A.
50 23+11*23+10***100*100*＊p＜0.05;＊＊＊p＜0.001(在組間比較)此表列出了爬上交配和陰莖勃起的平均值+標準偏差以及顯示出兩種行為的動物百分數。用MannWhitneyU檢驗法對各組的平均值作了比較，並且用Fischer的正合概率檢驗比較了每種行為發生的頻度。
在處理停止6周後記錄性功能。未發現各組間還有顯著差別，因此說明在有效處理期間觀察到的雄性性功能增強與藥物有關。但是，未觀察到回縮效應。這些結果表明，M.H.P.A.A.造成的性功能的增強在清除期之後是可逆的。
實施例23研究M.H.P.A.A.對雄猴(獮猴屬，熊總科)性行為的影響。將動物隨機地分成下列幾組一個對照組和分別用2.5和25毫克/千克體重M.H.P.A.A.口服處置的2個組。表22中列出了數據。
表22M.H.P.A.A.對獮猴交配外性行為和血清中睪酮含量的影響(X+SD)組別睪酮含量(毫克/千克)勃起者數目手淫者數目(毫摩爾/升)對照2+12+119.25+6.98M.H.P.A.A. 2.512+1010+922.00+2.44M.H.P.A.A. 2511+77+516.58+4.44＊P＜0.05，與對照組比較(MannWhitneyU檢驗)。
結果表明，M.H.P.A.A.顯著增強被控制雄猴的交配外性活動，因為陰莖勃起和手淫者的數目比對照組顯著增加。但是，處置組和對照組之間的血清睪酮含量之間沒有重大差別。此實施例說明，服用這些製劑增強所處置的動物的性功能，而這一效果與在猴子中發現的雄性激素含量無關。猴子的一般行為的其它部分未受影響。這表明M.H.P.A.A.的這種刺激作用主要不是作用在中樞神經系統上，而是作用在末梢效應器上。考慮到M.H.P.A.A.對TxA2與PgI2之比的影響，不能排除一氧化氮(NO)的釋放刺激陰莖海綿體是造成這一作用的機制。
實施例24如上所述，M.H.P.A.A.刺激雄性大鼠的性行為。因為二十八烷醇是M.H.P.A.A.的主要組分，比較了二十八烷醇和M.H.P.A.A.各自單獨地對雄性大鼠性行為的影響。使Wistar雄鼠和雌鼠適應實驗室條件一周。在使用前至少2周將雌鼠卵巢切除。為進行實驗，在交配實驗之前50-80小時皮下注射0.5毫克/千克體重的苯甲酸雌二醇酯，5-8小時前注射磺體酮。將M.H.P.A.A.懸浮在Tween20/水介質中，腹膜內注射3周。二十八烷醇以類似的方式製備和施用。對照動物只施用介質。
將動物隨機地分成三組1)對照組，2)M.H.P.A.A.組(1.54毫克/千克體重)和3)二十八烷醇組(1毫克/千克體重)。考慮到二十八烷醇在混合物中的相對濃度，上述的劑量保證了二十八烷醇在所處置的兩組中劑量相同。在基線處(保證各組的性功能充分隨機化)和處置3周後觀察交配活性。記錄下由受體雌鼠激發的陰莖勃起和爬上交配行為共90分鐘。採用MannWhitneyU檢驗法對各組進行比較。在基線處，所有各組的性功能相近，但在處置3周以後，所處置的兩組中勃起和爬上交配的數目明顯高於對照組。另一方面，在M.H.P.A.A.組中爬上交配和勃起的數目比二十八烷醇組中的高得多(見表23)。
這些結果與先前的顯示醇混合物激發雄鼠性行為的結果相一致，但是它還顯示了二十八烷醇誘發的刺激作用。但是，用醇混合物處置組比二十八烷醇組的性行為明顯要高。它表明，醇混合物的刺激作用與二十八烷醇的存在有關，但是混合物中其它醇的存在肯定以某種方式調節對性功能的刺激作用。
表23M.H.P.A.A.和二十八烷醇對雄性大鼠性行為的影響組別X+SD爬上交配勃起對照44+2340+19M.H.P.A.A. 175+87**" 174+87**"二十八烷醇 81+40*76+3權利要求
1.一種高級脂族伯醇的混合物，其中含有從22到38個碳原子、尤其是從24到34個碳原子的醇。
2.根據權利要求1的混合物，其中含有24、26、27、28、29、30、32和34個碳原子的醇，尤其是直鏈醇。
3.根據權利要求1或2的混合物，其中含有1-二十四烷醇，特別是從0.5-5.05%;1-二十六烷醇，特別是從5.0-15.0%;1-二十七烷醇，特別是從0.5-5.0%;1-二十八烷醇，特別是從50.0-80.0%;1-二十九烷醇，特別是從0.5-3.0%;1-三十烷醇，特別是從6.0-20.0%;1-三十二烷醇，特別是從1.0-10.0%;以及1-三十四烷醇，特別是從0.0-2.5%。
4.根據權利要求3的一種混合物，其中含有從0.5-1.0%、尤其是0.8±0.1%的1-二十四烷醇;5.5-8.5%、尤其是6.7±0.3%的1-二十六烷醇;2.0-3.5%、尤其是3.0±0.3%的1-二十七烷醇;60.0-70.0%、尤其是65.6±3.4%的1-二十八烷醇;0.4-1.2%、尤其是0.7±0.1%的1-二十九烷醇;10.0-15.0%、尤其是12.5±0.6%的1-三十烷醇;4.0-6.0%、尤其是5.0±0.4%的1-三十二烷醇;和0.4-2.0%、尤其是0.8±0.1%的1-三十四烷醇。
5.獲取權利要求1-4中任一權項的高級脂族伯醇混合物的方法，其特徵在於將甘蔗蠟熔化，最好是在均相中用鹼金屬或鹼土金屬氫氧化物的溶液皂化;在固液萃取系統中用有機溶劑萃取高級脂族伯醇，這些溶劑包括6到9個碳原子的烴類、3到8個碳原子的酮類、1到5個碳原子的醇類、滷仿或芳族化合物以及它們的混合物;任選地將粗產物在上述有機溶劑和/或其混合物中重結晶。
6.根據權利要求5的方法，其特徵在於甘蔗蠟的熔化溫度在90至150℃之間;氫氧化物的濃度為5至30%;皂化步驟的時間在30分鐘以上;萃取步驟的時間為1到20小時。
7.根據權利要求5或6的方法，其特徵在於使用氫氧化鈉、鈣和/或鉀作為氫氧化物溶液。
8.根據權利要求5-7中任一權項的方法，其特徵在於使用戊烷、己烷、庚烷和/或辛烷作為萃取步驟中的烴。
9.根據權利要求5-7中任一權項的方法，其特徵在於使用丙酮、戊酮、甲乙酮、甲基丁基酮和/或3-庚酮作為萃取步驟中的酮。
10.根據權利要求5-7中任一權項的方法，其特徵在於使用甲醇、乙醇、正丙醇、2-丙醇、正丁醇、2-丁醇、正戊醇和/或叔丁醇作為萃取步驟中的醇。
11.根據權利要求5-7中任一權項的方法，其特徵在於使用二氯甲烷、1，2-二氯乙烷、氯仿、三氯乙烷、1，2-二氯丙烷和/或1，2，3-三氯丙烷作為萃取步驟中的滷仿。
12.根據權利要求5-7中任一權項的方法，其特徵在於使用苯、甲苯、乙苯、苯酚和/或對甲基甲苯作為萃取步驟中的芳族溶劑。
13.作為片劑、膠囊、粒劑或其它形式的藥物製劑，其特徵在於，其中含有0.5%至15.0%重量的權利要求1-4中任一權項的混合物和作為藥物賦形劑的適當的填料、凝集劑、崩解劑、潤滑劑以及其它任選的可接受的藥物賦形劑。
14.根據權利要求13的藥物製劑，其中含有乳糖和/或玉米澱粉作為填料，蔗糖滑石粉和/或微晶纖維素作為凝集劑，明膠和/或交聯的羧甲基纖維素鈉作為崩解劑，滑石粉和/或硬脂酸鎂作為潤滑劑。
15.根據權利要求13或14的藥物製劑，其中含有0.5-15.0%重量的權利要求1-4中任一權項的混合物;和作為藥物賦形劑的50.0-65.0%重量的乳糖，10.0%-20.0%重量的玉米澱粉，3.0-6.0%重量的蔗糖，6.0-10.0%重量的微晶纖維素，1.5-4.0%重量的明膠，3.0-7.0%重量的交聯的羧甲基纖維素鈉，1.0-3.0%重量的滑石粉和0.5-2.5%重量的硬脂酸鎂，以及任選地含有其它藥用賦形劑，例如0.5-1.5%重量的乙醯鄰苯二甲酸纖維素。
16.製備根據權利要求13-15中任一權項的藥物製劑的方法，其特徵在於，利用溼法造粒方法將權利要求1-4中任一權項的混合物和藥物賦形劑混合，然後乾燥，脫粒，潤滑和壓片。
17.使用權利要求1-4中任一權項的混合物或權利要求13-15中任一權項的藥物製劑治療血膽固醇過多症。
18.使用權利要求1-4中任一權項的混合物或權利要求13-15中任一權項的藥物製劑作為抗血小板劑。
19.使用權利要求1-4中任一權項的混合物或權利要求13-15中任一權項的藥物製劑作為抗血栓形成劑。
20.使用權利要求1-4中任一權項的混合物或權利要求13-15中任一權項的藥物製劑作為抗局部缺血藥劑。
21.使用權利要求1-4中任一權項的混合物與乙醯水楊酸一起作為抗血小板劑、抗局部缺血劑或抗血栓形成劑。
22.根據權利要求21的用途，其特徵在於，權利要求1-4中任一權項的混合物與乙醯水楊酸的比例為20∶1至1∶20，特別是從10∶1至1∶10。
23.根據權利要求21或22的用途，其特徵在於，使用權利要求1-4中任一權項的混合物作為防止胃潰瘍的保護劑和/或治療劑。
24.根據權利要求23的用途，其特徵在於，所述胃潰瘍是由乙醯水楊酸、乙醇、消炎痛、化合物C4880和有關化合物誘發的。
25.使用權利要求1-4中任一權項的混合物或權利要求13-15中任一權項的藥物製劑改善人和動物的性功能。
26.按照日劑量為1到100毫克、特別是5到20毫克的量，口服或非腸道施用權利要求1-4中任一權項的混合物或權利要求13-15中任一權項的藥物製劑。
全文摘要
通過皂化和用有機溶劑萃取等步驟，可以從甘蔗蠟得到碳原子數為22到38個的高級脂族伯醇的混合物，該混合物含有二十四烷醇、二十六烷醇、二十七烷醇、二十八烷醇、二十九烷醇、三十烷醇、三十二烷醇和三十四烷醇，可以用來治療血膽固醇過多症和諸如血小板過度聚集、局部缺血和血栓形成等動脈粥樣硬化併發症，並且防止藥物誘發的胃潰瘍和改進雄性性功能。
文檔編號C07C29/88GK1084844SQ9310316
公開日1994年4月6日 申請日期1993年3月19日 優先權日1992年9月29日
發明者A·拉古那格蘭雅, J·馬格蘭納赫南迪斯, D·卡巴哈昆坦納, L·阿魯沙沙巴拉瓦曼尼亞, R·馬斯費雷羅, M·加西亞美沙 申請人:達爾馬實驗室有限公司