中藥注射劑安全性提高方法

2023-05-26 18:47:06

專利名稱：中藥注射劑安全性提高方法
技術領域：
本發明涉及中藥注射劑生產方法領域，應用於不以大分子為有效成分的中藥注射 劑生產，以提高其安全性。
背景技術：
中藥注射劑最早產生於上世紀四十年代，由錢信忠等學者開創，現已廣泛應用於 臨床。2010年版《中華人民共和國藥典》(簡稱《中國藥典》)一部就收錄有燈盞細辛、清開 靈、止喘靈等單方和複方注射劑。中藥注射劑能提升藥效、使某些中藥的療效得到更好地發 揮，在推進中藥劑型發展，拓展中藥的應用範圍，服務廣大人民健康等方面的確功不可沒。 從技術上來講，業界大體上已經解決了中藥注射劑的有效性問題(儘管作用機制尚不完全 清除)，安全性依然是業界難題。隨著中藥注射劑的廣泛應用，不良反應不斷發現，甚至致死性不良反應也屢有報 道。近年來發生的「清開靈注射液事件」、「雙黃連注射液事件」、「魚腥草注射液事件」等說 明中藥注射劑的安全性不容忽視，受到業界甚至公眾的廣泛關注。中藥的療效最早來自口服和外用，沒有注射給藥方式。大多中藥注射劑的研發也 源自口服劑的療效，如清開靈注射液、雙黃連注射液、丹參注射液和燈盞細辛注射液。口服 能夠吸收的中藥成分基本上都屬於小分子物質，因為大分子物質不易吸收。中藥注射劑具有生物提取物的特徵，目前的製備流程沒有大分子物質去除工藝。 因此，中藥注射劑包含有小分子物質和小量或微量的大分子物質。大分子和小分子尚無統 一的分子量界限，但學術界對於「分子量越大口服越難吸收」的觀點深入人心。以2010年 版《中國藥典》二部收載的2271個藥物(品種)為例，在治療全身性疾病的口服化學藥物 中，分子量大於500的較少見，超過1000的則罕見(只有環孢素、維生素B12、腺苷鈷胺、依 託紅黴素4個，但吸收不太理想)，超過3000的則沒有。分子量與吸收的關係實際上已經在 藥物設計方面得到了廣泛應用。一般認為中藥注射劑中可能含有的蛋白質、鞣質(縮合鞣 質)、多糖、核酸和樹脂均視為大分子物質，2000年版《中國藥典》也對其中的蛋白質、鞣質 和樹脂開始進行檢查。因此，我們推測，中藥注射劑的療效來自所含的小分子物質，與分子 量大於3000的物質幾乎無關。由於中藥注射劑具有生物提取物的特徵，因此在提取的過程中不可避免地帶來一 些生物大分子，比如植物蛋白質、核酸等，還有可能帶入鞣質、樹脂、多糖等大分子。這些大 分子口服是不能直接吸收的，必須經過消化道的降解才可能以小分子吸收。蛋白質是抗原 性最強的常見物質，而且分子量越大抗原性越強，越容易引起過敏反應或類過敏。據此推 測，中藥注射劑含有的微量蛋白質是導致過敏或類過敏等特有不良反應的主要原因，其他 大分子如多糖、核酸、鞣質、樹脂等也可能參與了這些不良反應。因此中藥注射劑的安全性 很大程度上取決於所含的大分子成分。來自中藥的大分子化學成分對人體影響較大的主要 可分為四類，對中藥注射劑安全性的主要影響分子如下蛋白質多為植物蛋白，部分為動物蛋白或微生物蛋白。蛋白質類物質是抗原性較強的化學物質，能引起各種過敏反應(包括I、II、III、IV型)。由於與人的種屬差異較大， 中藥注射劑含有的蛋白質類大分子的抗原性均較強。鞣質鞣質是引起中藥注射劑注射後疼痛的主要物質之一。鞣質後蛋白質結合為 更大的分子複合物後，可增強蛋白質的過敏性。多糖蛋白多糖或糖蛋白本身就具有很強的抗原性，一般高於原有的蛋白質。單純 的多糖能夠通過「免疫佐劑」效應增強免疫的作用，即也能增強過敏反應。核酸具有免疫調節作用，多通過「免疫佐劑」效應增強過敏反應。現有中藥注射劑的生產工藝中，一般都採用「醇水法」或「水醇法」製備中藥注射 劑的原料。「醇水法」主要是採用乙醇提取中藥材，回收溶劑後再加水去除沉澱後製得；而 「水醇法」則主要是採用水提取藥材，適當濃縮後然後用80%左右的乙醇沉澱，將上清液制 備成原料。除此之外還有「酸提鹼沉法」等。然而，這些方法製得的原料均不同程度地含有 大分子雜質，如含有蛋白質、多糖、核酸、鞣質等。為了去除鞣質，傳統工藝利用蛋白質沉澱 鞣質的性質採用「皮粉法」去除。在中藥注射劑製備的後期工藝中，為了保障活性成分不被 破壞，幾乎都採用膜過濾的方法除菌。然而，通過對上市中藥注射劑的研究發現，通過較靈敏的方法仍能檢測到大分子 蛋白質和鞣質的存在，有些注射劑的蛋白質含量甚至高達10yg/ml (此值不能被《中國藥 典》一部規定的法定方法檢測出)，超過足以引起過敏反應的理論值。在實驗條件下，我們 發現皮粉等蛋白質對鞣質的沉澱能力有限，不能完全去除鞣質，在一定條件下，蛋白質和鞣 質可以共存。在實驗條件下，我們還發現80%的乙醇至少可以溶解20μ g/ml的蛋白質(以 牛血清白蛋白計)。而中藥注射劑的最後一道工藝是超濾除菌，顯然不能去除大分子物質。因此，為了提高中藥注射劑的安全性，去除大分子物質是必然的選擇。

發明內容
作為用於全身治療的傳統中藥，大分子物質很難吸收產生全身作用；相反，如果直 接進入機體反而可能導致安全性問題。本發明利用此原理，在傳統中藥注射劑的生產工藝 中引入一道大分子截留工藝，去除一定分子量以上的大分子物質，這樣在保障原有中藥注 射劑活性成分改變不大的情況下，去除中藥注射劑中的大分子物質，以提高中藥注射劑的 安全性。本發明中採用的膜是截留分子量3k 30k的膜，材質不限；截留的方式可以採用 正壓，也可以採用負壓。


圖1為中藥注射液A經10、30k截留膜處理後獲得的去大分子注射液指紋圖譜A 為中藥注射液原液指紋圖譜，B為經IOk截留膜處理後去大分子中藥注射液指紋圖譜；C為 經30k截留膜處理後去大分子中藥注射液指紋圖譜。圖2為中藥注射液B經IOk截留膜處理後獲得的去大分子注射液指紋圖譜:A為 中藥注射液原液指紋圖譜，B為經IOk截留膜處理後去大分子中藥注射液指紋圖譜。圖3為中藥注射液C經30k截留膜處理後獲得的去大分子注射液指紋圖譜:A為 中藥注射液原液指紋圖譜，B為經30k截留膜處理後去大分子中藥注射液指紋圖譜。
具體實施例方式實施示例1用截留分子量為IOk和30k的截留膜提高某上市中藥注射劑A的安全性中藥注射液A為一複方製劑(批號100327. 2)，採用離心方式分別經截留分子量 為IOk和30k的膜處理後得到5份樣品，分別為「Q0」、「Q2」、「Q3」、「Q2上」和「Q3上」。「Q0」 為正常的中藥注射液A ；「Q2」為經IOk截留膜去大分子後的注射液；「Q3」為經30k截留膜 去大分子後的注射液；「Q2上」為IOk截留膜截留獲得的富含大分子注射液，來自10倍體積 的原注射液；「Q3上」為30k截留膜截留獲得的富含大分子注射液，來自10倍體積的原注射 液。將「Q0」、「Q2」、「Q3」三個樣品進行HPLC指紋圖譜分析，發現三個樣品的指紋圖譜 相似度較高(圖1)。進一步定量考察發現，「Q2」和「Q3」指紋圖譜中的主要指紋峰與「Q0」 相比，改變度< 5% (表1)，表明經IOk和30k截留膜去除大分子後，物質基礎未發生明顯 變化，提示療效無明顯變化。附指紋圖譜色譜條件色譜柱NUDE0SIL-C18，4.6mmX 250mm，5 μ m ；流動相:(A)甲醇-(B)O. 5%醋酸，梯度洗脫=Omin 10 %甲醇，50min :100%甲醇， 65min :100% 甲醇；檢測波長255nm；流速為 1. OmL/min ；柱溫40°C；進樣量20μ L。表1注射液A主要峰相似度
保留時間 QO面積 Q2面積 Q2/Q0 Q3面積 Q3/Q0
3.073843983983220110.9982373950.985.205363049035846300.9935873380.99
13.813534052552390440.9851755280.97
24.65884731662811695030.96801655810.95參照2010年版《中國藥典》一部附錄91進行異常毒性檢查。按照附錄91要求配 制以上5種來自中藥注射劑A的樣品，取符合要求的35隻小鼠隨機分為5組，每隻小鼠腹 腔注射0. 5ml，觀察20分鐘，結果發現注射「Q0」、「Q2」、「Q3」樣品的小鼠未見明顯變化，而 注射了 「Q2上」和「Q3上」樣品的小鼠分別有5、4隻發生扭體反應。表明富含大分子組分 中藥注射劑的安全性較低，從而間接表明去除大分子物質後的注射劑安全性得到提高。實施示例2用截留分子量為IOk的截留膜提高某上市中藥注射劑B的安全性中藥注射液B為一複方製劑(批號201003 )，採用正壓方式經截留分子量為IOk的截留膜處理後得到3份樣品，分別為「S0」、「S2」和「S2上」。SO為正常的中藥注射液 A ;「S2」為經IOk截留膜去大分子後的注射液；「S2上」為IOk截留膜截留獲得的富含大分 子注射液，來自10倍體積的原注射液。 將「S0」、「S2」兩個樣品進行HPLC指紋圖譜分析，發現兩個樣品的指紋圖譜相似度 較高(圖2)。進一步定量考察發現，「S2」指紋圖譜中的主要指紋峰與「SO」相比，改變度 < 5% (表幻，表明經IOk截留膜去除大分子後，物質基礎未發生明顯變化，提示療效無明
顯變化。附色譜條件用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；YMC-Pack ODS (4. 6mmX 150mm)； 流動相=A相為0. 25%冰醋酸(V/V)，B相為甲醇； 檢測波長:350nm 柱溫:30°C ；
流速為lml/min ；洗脫程序見表3。 表2中藥注射液B指紋圖譜洗脫程序表
權利要求
1.一種提高中藥注射劑安全性的方法，其特徵是在中藥注射劑獲得成品前採用特定大 分子截留膜去除分子量大於一定值的大分子物質。
2.根據權利要求1所描述的大分子截留膜，其截留分子量為3k 30k。
3.根據權利要求1所描述的大分子截留方法，可以採用正壓方式截留大分子，也可以 採用負壓截留大分子物質。
全文摘要
一種能夠提高中藥注射劑安全性的方法，其特徵是在獲得中藥注射劑成品前增加一道大分子截留工藝，去除注射劑成品中的大分子物質，從而提高中藥注射劑的安全性。採用本發明能在不明顯改變原中藥注射劑療效的前提下增加中藥注射劑的安全性，適用於基於有效成分為非大分子類物質的所有中藥注射劑。
文檔編號A61K36/00GK102133240SQ201110055780
公開日2011年7月27日 申請日期2011年3月9日 優先權日2011年3月9日
發明者呂小滿, 張陸勇, 李奇峰, 柯瑾, 段為鋼, 江振洲 申請人:雲南中醫學院