一種用於結直腸癌藥敏檢測的試劑盒的製作方法

2023-05-30 12:38:11 1

專利名稱：一種用於結直腸癌藥敏檢測的試劑盒的製作方法
技術領域：
本實用新型涉及一種抗腫瘤藥敏測試的裝置，具體地說，涉及一種用於結直腸癌藥敏檢測的試劑盒。
背景技術：
結直腸癌是常見的消化道惡性腫瘤，發生率僅次於胃癌和食道癌。在我國常見惡性腫瘤死亡中，結直腸癌患者佔第五位。近二十年來結直腸癌的發病率在逐漸增加，同時，其發病年齡趨向老齡化。在西方發達國家，結直腸癌是僅次於肺癌的第二位惡性腫瘤。不同國家的發病率相差60倍。好發部位為直腸及直腸與乙狀結腸交界處，佔60%。發病多在60 70歲，50歲以下不到20%。年輕人結直腸癌應排除先前存在的潰瘍性結腸炎癌變或家族性結直腸癌。男女之比為2: I。NCCN結腸/直腸/肛管癌臨床指南專家組相信治療結直腸癌必須使用綜合治療的方法。專家組一致認可將患者納入的臨床試驗比按照標準治療或公認治療更有好處。專家組推薦 的III期結腸癌的輔助化療方案有FOLFOXd類，首選)、FL0X(1類)、CapeOx (2A)、5-FU/LV(2A)或卡培他濱(2A);輔助化療也是高危II期患者的一種治療方法，專家組推薦5-FU/LV土奧沙利鉬，或卡培他濱(三個方案的共識級別均為2A)。伴有肝或肺轉移的患者，如果適合手術且能達到RO (完全)切除或完全消融，就應該考慮手術切除。術前化療可以作為同時性或異時性可切除轉移瘤的初始治療，或者經過化療可以將不可切除轉移瘤轉化為可切除時，初始治療也應該考慮術前化療(即轉化性化療)。肝/肺轉移瘤切除術後應給予輔助化療。專家組推薦的晚期或轉移性腫瘤的初始化療方案取決於患者是否適合高強度治療。高強度的化療方案包括F0LF0X、FOLFIR1、CapeOX，和F0LF0XIRI(2B類)；基於目前研究數據，生物製劑(如，貝伐珠單抗、西妥昔單抗和帕尼單抗)與上述藥物的聯合應用部分已獲治療推薦，部分被列為一種治療選擇。腫瘤進展患者的化療方案的選擇取決於初始治療。儘管化療在惡性腫瘤的治療中佔有非常重要的地位，但是在臨床實踐中，結果往往不盡如人意。其中，腫瘤細胞對化療藥物產生耐藥是導致腫瘤化療失敗的常見因素，也是困擾腫瘤治療的關鍵性難題。耐藥問題是極為普遍的臨床問題，據美國癌症協會估計，90%以上因腫瘤死亡的患者在不同程度上受到耐藥影響。腫瘤細胞耐藥分為原發性和獲得性耐藥兩大類。目前臨床上通常的做法是，根據國際腫瘤臨床試驗的循證研究結果，得知不同的化療藥物對不同腫瘤的治療敏感性不同，即每一種腫瘤有相應有效的化療藥物敏感譜，從而選擇療效最高的化療單藥或多種藥物組成的聯合方案進行治療。但在臨床上經常碰到這樣的情況，經循證研究公認為對某種腫瘤有效的治療方案，而對有的患者卻毫無效果。如阿黴素對浸潤性乳腺癌是一種具有裡程碑意義的治療藥物，但仍有50%的浸潤性乳腺癌病人對這種藥不敏感。又如健擇，對結直腸癌公認的療效明顯，但也有60%以上的病人療效並不明顯。[0008]腫瘤對各種化療藥物存在著明顯的個體差異。即不同的腫瘤類型或同一類型的不同病人，甚至同一病人在不同的發病階段，對化療的敏感性並不完全相同，治療效果差別也很大。至今還沒有一種化療藥物或幾種化療藥物的聯合應用，能對某一種腫瘤100%有效。臨床上，用同一種化療藥物或同一種化療方案治療不同的腫瘤患者，顯然帶有一定的盲目性。因此，在化療前針對不同的患者進行腫瘤藥敏試驗來選擇有效化療藥物進行化療顯得十分必要。為此,建立一種像細菌敏感試驗一樣,通過相對可靠的敏感試驗方法,對不同的病人準確篩選敏感的化療藥物，並確定其劑量，真正實現臨床的個體化用藥。目前腫瘤藥敏試驗操作所需的藥物以臨用現配為主，腫瘤藥敏試驗需要測試多種抗腫瘤藥物，藥液配製稀釋繁瑣，且腫瘤藥敏試驗所需抗腫瘤藥物劑量小，取樣不便。部分藥物溶液狀態下保存時間短，剩餘部分只能報廢，造成藥物的浪費，尤其是價格昂貴的藥物。CN93111551.5公開了腫瘤化療藥物敏感預測試劑配製方法及試劑盒，該專利將8種常用抗腫瘤藥物按設定劑量預裝於標本瓶內。但該方法不便於聯合化療方案的測試，且不便於方案的劑量調整。CN03102260.X採用預製藥敏檢測板的方法，將抗腫瘤藥物按計算劑量加入檢測板內，凍幹、包裝，用於腫瘤藥敏試驗。該方法同樣不便於聯合化療方案的測試，且不便於方案的劑量調整。臨床目前有少量採用抗腫瘤藥物臨時配製的方法進行抗腫瘤藥物藥敏測試，但是，該方法存在許多問題:配製藥物的準確濃度未知，所配製藥液的準確性存疑；臨床口服抗腫瘤藥物的抗腫瘤藥物藥敏測試無法進行；個體操作誤差大。為了便於腫瘤藥敏試驗的操作以及節約成本，我們將各種常用的結直腸癌抗腫瘤藥物製備成劑量準確、穩定性好、能夠在腫瘤細胞培養液中快速溶解的無菌藥膜。並將藥膜按使用劑量進行準確的切片，分裝
實用新型內容
本實用新型涉及一種抗腫瘤藥敏測試的裝置，具體地說，涉及一種用於結直腸癌藥敏測試的試劑盒。本實用新型技術方案如下:一種結直腸癌藥敏檢測的試劑盒，由盒體、藥膜檢測組件、標示卡和說明書組成，藥敏檢測組件、標示卡和說明書置於盒內，其特徵在於所述的藥膜檢測組件包括結直腸癌藥物藥膜、空白藥膜和細胞培養板。上述所述的試劑盒，其特徵在於所述的藥膜檢測組件還包括藥物活化酶包裝。上述所述的試劑盒，其特徵在於所述的藥膜檢測組件中，結直腸癌藥物藥膜和空白藥膜與細胞培養板按設定化療方案預裝形成預裝培養板。上述所述的試劑盒，其特徵在於所述的藥膜檢測組件中，結直腸癌藥物藥膜和空白藥膜分別以獨立包裝和細胞培養板組成了可調式的套裝培養板。上述所述的試劑盒，其特徵在於所述的結直腸癌藥物藥膜選自氟尿嘧啶膜、卡培他濱膜、奧沙利鉬膜、伊立替康膜中一種或者兩種以上。上述所述的試劑盒，其特徵在於所述的細胞培養板為24孔細胞培養板。[0022]作為優選，上述所述的試劑盒，其特徵在於所述的預裝培養板是結直腸癌藥敏檢測板，其為預裝24孔培養板，孔預裝藥膜如下:2個孔中預裝空白藥膜2個孔中預裝氟尿嘧啶膜2個孔中預裝卡培他濱膜2個孔中預裝奧沙利鉬膜2個孔中預裝伊立替康膜2個孔中預裝奧沙利鉬膜和氟尿嘧啶膜2個孔中預裝伊立替康膜和氟尿嘧啶膜2個孔中預裝奧沙利鉬膜和卡培他濱膜2個孔中預裝伊立替康膜和卡培他濱膜2個孔中預裝奧沙利鉬膜和伊立替康膜4個孔中無藥膜。本實用新型是一種用於結直腸癌抗腫瘤藥敏測試的試劑盒，試劑盒中藥膜檢測組件包裝形式為將結直腸癌藥物藥膜與24孔細胞培養板按設定化療方案預裝的預裝培養板和獨立的藥膜包裝與空白 24孔細胞培養板組合的可調式套裝兩種。每個可調式套裝中含有一個結直腸癌常用的抗腫瘤藥物藥膜包裝盒、一個細胞培養板。藥膜包裝上有每一種藥膜的代號，每個細胞培養板附帶一張標示卡，用於標記各孔內的藥物成分。各種抗腫瘤藥膜和空白藥膜均分別置於獨立的無菌有蓋小塑料盒內，再將小塑料盒按順序裝入大塑料盒內。各種藥物活化酶均分別置於獨立的無菌有蓋小塑料盒內，再將小塑料盒按順序裝入大塑料盒內。細胞培養板為24孔細胞培養板，標示卡為24格，用於標記各孔內的藥物成分。使用時，將空白對照、空白藥膜對照和各種化療方案分別標記於標示卡上，按標示卡內容向細胞培養板內添加藥膜，加入腫瘤細胞懸液，振蕩使藥膜溶解混勻。預裝培養板所設定的化療方案參考最新的診療指南的標準化療方案制訂。按設定方案將藥膜裝入培養板各孔中。本實用新型中所述的藥物藥膜，通常地，藥物藥膜按重量百分比含0.0001% 30%抗腫瘤藥物、50% 98%成膜材料和1% 20%增塑劑。其中，所述的成膜材料包括但不限於聚乙烯醇、羥丙甲纖維素、羥丙基纖維素、羧甲基纖維素鈉、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯胺類、聚乙烯氨基縮醛衍生物、聚乙烯吡啶衍生物、明膠、阿拉伯膠、蟲膠、瓊脂、海藻酸及其鹽、玉米朊、澱粉、糊精、白芨膠等。優選使用聚乙烯醇04-88和聚乙烯醇05-88。所述的增塑劑選自甘油、聚乙二醇、乙二醇、丙二醇、山梨醇、檸檬酸三乙酯等。本實用新型中所述的藥物藥膜，可以用本領域中常規方法製備，例如可以按如下方法製得結直腸癌藥物藥膜:(I)將成膜材料加入水中，攪拌溶解或加熱溶解；(2)加入增塑劑和抗腫瘤藥物，攪拌溶解均勻，採用加熱、靜置或超聲等方式脫氣;(3)將上述溶液塗布於制膜設備，採用熱風或冷風等方式乾燥；[0045](4)脫膜，測定含量，並按照測定結果進行分劑量分割；(5)將分割後的藥膜採用放射線照射滅菌或環氧乙烷滅菌，優選放射線照射滅菌。各種腫瘤化療藥物藥膜參考藥物在人體內的血漿峰值濃度製備，根據藥膜含量測定結果，將每片藥膜切割為含Iml血漿峰值濃度的化療藥物，空白藥膜切割面積1cm2。為了便於腫瘤藥敏測試的操作，藥膜需要能快速溶解於腫瘤細胞培養液中。因此成膜材料要易於溶解，膜的厚度和面積要控制在合適的範圍，保證溶解速度和機械強度。厚度優選0.04mm 0.15mm。形狀可為圓形、正方形或長方形,面積優選為0.5cm2 16cm2,以適應相應規格的細胞培養板。本發明Icm2大小的膜劑可在Iml培養液中於100秒內溶解。所述的空白藥膜，是指不含結直腸癌藥物的藥膜，可以按照上述結直腸癌藥物藥膜方法進行製備，但不加入結直腸癌藥物。本實用新型在進行結直腸癌藥敏測試中，不僅提高腫瘤藥敏測試的操作效率，使操作簡便，而且大大提高了藥敏測試的準確性，大大減少測試藥物用量，節約用藥成本，提高藥敏測試的經濟性，特別是，也適用於聯合化療的藥敏測試。

圖1:實施例1實用新型中結直腸癌藥敏檢測預裝24孔培養板俯視圖；圖2:實施例1實用新型中結直腸癌藥敏檢測預裝24孔培養板平視圖；圖3:實施例1實用新型中標示卡。其中:圖1、2中 ,A-D為培養板的孔行號，1-6為培養板的孔列號,孔對應的行號和列號的組合即為孔的編號，例如:A6孔表不培養板的第A行第6列的孔。圖3中,標不卡中每格編號,對應於培養板的孔編號。培養板各孔中，預裝藥膜如下:A1-A2空白(無藥膜,空白對照)A3-A4空白藥膜(藥膜不含藥物，空白藥膜對照)A5-A6氟尿嘧啶膜B1-B2卡培他濱膜B3-B4奧沙利鉬膜B5-B6伊立替康膜C1-C2奧沙利鉬膜+氟尿嘧啶膜C3-C4伊立替康膜+氟尿嘧啶膜C5-C6奧沙利鉬膜+卡培他濱膜D1-D2伊立替康膜+卡培他濱膜D3-D4奧沙利鉬膜+伊立替康膜D5-D6空白無藥膜。
具體實施方式
實施例1:用於結直腸癌藥物藥敏檢測試劑盒本實用新型試劑盒，由盒體、結直腸癌藥敏檢測預裝24孔培養板(圖1、2)、標示卡(圖3)和說明書組成。結直腸癌藥敏測試預裝24孔培養板、標示卡和說明書置於盒中。說明書是解釋和介紹試劑盒，便於使用者正確使用本試劑盒。於化療前取I例患者的結直腸癌新鮮組織塊(0.5 Icm3)，置於無菌生理鹽水中(含20萬單位/ml青黴素、25萬單位/ml鏈黴素)，在超淨工作檯上，剪除脂肪、纖維等正常組織，以及壞死和血汙組織，用帶抗生素的生理鹽水衝洗乾淨組織，加入組織消化酶(胰酶、膠原酶)消2 3h，使組織塊成為單個細胞漏過銅網，離心棄上清，加RPMI1640培養液吹打成細胞懸液，計數並調細胞濃度至I X 106/ml。細胞懸液種於預裝24孔培養板(圖1或2)中(lml/孔)，振蕩使藥膜溶解混勻，並在標示卡(圖3)中記錄。37°C、5%二氧化碳飽和溼度培養24小時。離心收集懸浮細胞，微量離心機轉速2000RPM，離心時間5min，棄培養基。用冷PBS洗滌細胞兩次(2000RPM，離心時間5min收集細胞)。用400 μ I IX Binding Buffer懸浮細胞，濃度大約為I X IO6/ml ο在細胞懸浮液中加入5 μ lAnnexinV-FITC，輕輕混勻後於2_8°C避光條件下孵育15分鐘。加入10 μ I PI後輕輕混勻於2-8°C避光條件下孵育5分鐘。在I小時內用流式細胞儀檢測對照組及藥物組細胞凋亡及壞 死的數量，計算藥物的抑制率，評估藥物的敏感度。結果見表I。表I供篩選化療方案的抑制率
權利要求1.一種用於結直腸癌藥敏檢測的試劑盒，由盒體、藥敏檢測組件、標示卡和說明書組成，藥敏檢測組件、標示卡和說明書置於盒內，其特徵在於所述的藥膜檢測組件包括結直腸癌藥物藥膜、空白藥膜和細胞培養板。
2.根據權利要求1所述的試劑盒，如果需要，所述的藥膜檢測組件還可包括藥物活化酶包裝。
3.根據權利要求1所述的試劑盒，其特徵在於所述的藥膜檢測組件中，結直腸癌藥物藥膜和空白藥膜與細胞培養板按設定化療方案預裝形成預裝培養板。
4.根據權利要求1所述的試劑盒，其特徵在於所述的藥膜檢測組件中，結直腸癌藥物藥膜和空白藥膜分別以獨立包裝和細胞培養板組成了可調式的套裝培養板。
5.根據權利要求1-4任一項所述的試劑盒，其特徵在於所述的結直腸癌藥物藥膜選自氟尿嘧啶膜、卡培他濱膜、奧沙利鉬膜、伊立替康膜中一種或者兩種以上。
6.根據權利要求1-4任一項所述的試劑盒，其特徵在於所述的細胞培養板為24孔細胞培養板。
7.根據權利要求3所述的試劑盒，其特徵在於所述的預裝培養板是結直腸癌藥敏檢測板，其為預裝24孔培養板，孔預裝藥膜如下: 2個孔中預裝空白藥膜 2個孔中預裝氟尿嘧啶膜 2個孔中預裝卡培他濱膜 2個孔中預裝奧沙利鉬膜 2個孔中預裝伊立替康膜 2個孔中預裝奧沙利鉬膜和氟尿嘧啶膜 2個孔中預裝伊立替康膜 和氟尿嘧啶膜 2個孔中預裝奧沙利鉬膜和卡培他濱膜 2個孔中預裝伊立替康膜和卡培他濱膜 2個孔中預裝奧沙利鉬膜和伊立替康膜 4個孔中無藥膜。
專利摘要本實用新型提供一種結直腸癌藥敏測試的試劑盒，由盒體、藥敏測試組件、標示卡和說明書組成，藥敏檢測組件、標示卡和說明書置於盒內，其特徵在於所述的藥敏測試組件包括結直腸癌藥物藥膜、空白藥膜和細胞培養板，其中，結直腸癌藥物藥膜和空白藥膜與細胞培養板按設定化療方案預裝形成預裝培養板，或者結直腸癌藥物藥膜和空白藥膜分別以獨立包裝和細胞培養板組成了可調式的套裝培養板。本實用新型在進行結直腸癌抗腫瘤藥敏檢測中，不僅提高腫瘤藥敏測試的操作效率，使操作簡便，而且大大提高了藥敏測試的準確性，大大減少測試藥物用量，節約用藥成本，提高藥敏測試的經濟性，特別是，也適用於聯合化療的藥敏檢測。
文檔編號C12Q1/02GK203144399SQ20132015960
公開日2013年8月21日 申請日期2013年3月26日 優先權日2013年3月26日
發明者邱瑞寶, 張發明, 戚文榮, 朱美霞, 吳明輝, 鄧鋼, 陶徵宇 申請人:蘇州麥克威爾生物醫藥科技有限公司