一種用於藥物載體的多孔微球、製備方法及藥物負載方法
2023-05-30 20:06:56
專利名稱：一種用於藥物載體的多孔微球、製備方法及藥物負載方法
技術領域：
本發明涉及多孔微球的製備領域，具體地，本發明涉及一種用於藥物載體的多孔微球、製備方法及藥物負載方法。
背景技術：
隨著新興生物技術和基因工程發展，蛋白質和多肽類大分子生化醫藥(如生長激素、胰島素、肝素、幹擾素、白細胞介素等)由於在侏儒症、糖尿病、肝硬化以及癌症等難以治癒疾病的治療過程中表現出藥理作用強、副作用少且很少引起過敏反應的特點而倍受重視。由於多肽和蛋白質類藥物穩定性差，在腸胃中易被降解，且存在生物利用度低的問題， 故多採用注射劑。但是由於此類藥物的體內半衰期短，臨床應用時常常需要多次注射給藥。 針對這些問題，研究者們基本遵循兩種解決途徑，第一是尋找一條蛋白質藥物高生物利用率的給藥途徑；第二是通過化學修飾來優化蛋白質的代謝動力學特性，以延長其半衰期，達到長效穩定的目的。其中，利用生物可降型聚合物為骨架材料製備微球給藥系統，可以達到長效緩釋，減少給藥次數和藥物刺激，降低毒副作用，提高療效的目的。通常包埋藥物採用復乳法，在製備過程中蛋白與有機溶劑和油水界面的接觸，都可能影響蛋白質的結構；且攪拌，超聲處理這些外界因素的幹擾，易使其發生聚集、吸附、沉澱、氧化、脫醯胺、水解等一系列物理或化學變化。蛋白質結構一旦遭到破壞，不但藥效下降，而且可能在體內產生免疫原性和其他不良反應。為了增加蛋白藥物在微球化過程中的穩定性，一般需要將其與一些保護劑溶液混合後進行凍幹處理，常用的保護劑主要有兩類聚乙二醇類和糖類，但對殘留的測定和去除帶來困難，不利於大規模的工業化生產。為了克服包埋過程中蛋白質及其他藥物活性易被破壞的問題，可用有多孔結構的微球吸附藥物來達到載藥目的。因為具有多孔結構的微球相比同等粒徑大小的常規微球， 能提供更多的比表面積，在以吸附法製備載藥微球製劑時，能顯著提高藥物的裝載量。粒徑的均一性是微球應用的關鍵問題，因為粒徑不均一勢必造成製備重複性和治療重複性差的問題，難以報批臨床。中國專利(公開號CN101361716A)中使用攪拌法製備的聚乳酸多孔微球粒徑和孔徑分布不均一，難以提高載藥率和準確調控藥物釋放及實驗批次間的重複性。裝載藥物的可完全釋放也是限制載藥聚合物微球進入臨床應用的主要問題，疏水性的聚合物材料與所裝載的蛋白藥物之間易發生非特異性吸附，導致藥物的不完全釋放， 造成藥物的浪費和生物利用度降低。中國專利(授權公告號CN100388970C)中使用的吸附藥物的微球材料是疏水性的聚乳酸(PLA)共聚物，這種疏水性材料在蛋白類藥物的後期釋放中，容易造成藥物的不完全釋放。而且膜材與蛋白之間的非特異性吸附作用易使蛋白發生聚集，降低藥物的活性。針對不同的疾病，所需的釋藥速度不同，例如，用於治療抗癌的藥物需要及時的大量釋放，以達到有效的藥物濃度；而用於治療糖尿病的胰島素等藥物，需要緩慢釋放來保證穩定的藥物濃度，減少注射次數減輕病人的痛苦。因此，製備釋放速度可控的載藥微球十分必要。中國專利(公開號CN193i^81A)中使用乙基纖維素為膜材製備粒徑可控的多孔微球，但沒有對微球的降解速度進行調控和研究，不利於藥物使用的普遍性。總的來說，在製備多孔載藥微球時，需要添加制孔劑，造成後期殘留測定困難，並且降低生物安全性；且現有的技術製備得到的微球粒徑和孔徑不均一，載藥率低，重複性差；釋放過程中蛋白藥物容易與微球骨架發生非特異性吸附，導致藥物不完全釋放並產生聚集體，從而產生免疫原性，導致失去活性；微球降解過程不可控，不利於擴展應用於多種疾病的治療。本發明針對多孔微球粒徑和孔徑分布不均一，載藥率低、不能控制釋放和藥物活性低等問題，提出採用一種兩嵌段的兩親性聚合物為材料，製備多孔微球作為藥物載體解決上述難題。
發明內容
本發明的目的在於提供一種用於藥物載體的多孔微球。本發明的再一目的在於提供一種用於藥物載體的多孔微球的製備方法。本發明的還一目的在於提供一種用於藥物載體的多孔微球的藥物負載方法。根據本發明的用於藥物載體的多孔微球，所述微球的製備方法包括以下步驟1)將可降解兩嵌段兩親性聚合物材料溶於有機溶劑中，形成油相0 ；2)將油相0加入到含有穩定劑的水相中W，形成0/W的預乳；3)將步驟2)所得的0/W預乳通過微孔膜，得到0/W乳液；4)將步驟幻所得到的乳液中的有機溶劑去除、固化，再經離心洗滌和冷凍乾燥， 得到多孔載藥微球；所述步驟1)中有機溶劑至少含有一種在水中溶解度低於2%的溶劑，所述有機溶劑包括二氯甲烷、三氯甲烷、二硫化碳和二甲苯中的一種或多種；所述步驟2)中油相0和水相W的體積比1 5 20。根據本發明的用於藥物載體的多孔微球，所述的預乳液的粒徑大小最好大於膜孔徑，預乳液的製備方法，可通過普通的乳化方式如均質、超聲、機械攪拌等方法製備，所述的乳液中的有機溶劑的去除可採用減壓蒸發、常溫常壓攪拌揮發或溶劑萃取等方法中的一種或者幾種。根據本發明的用於藥物載體的多孔微球，所述的壓力可在l-20001tfa之間調節， 這主要由製備過程中使用的微孔膜孔徑的大小及目標微球大小的製備要求所決定。根據本發明的用於藥物載體的多孔微球，所述的微孔膜包括疏水和親水的膜，優選親水的膜，如採用親水性的SPG膜，該SPG膜為商品化產品，在製備過程中，可通過選擇不同膜孔徑的SPG膜來控制產品的粒徑大小，常用的微孔膜孔徑為0. 5-200μπι，優選的為 1. 4-50 μ m,更優選的為 2. 8-18 μ m。根據本發明的用於藥物載體的多孔微球，所述的聚合物材料的選擇面很廣，不僅可以選擇兩親性材料，如聚乳酸、聚乳酸-聚羥基乙酸共聚物、聚己內酯、聚原酸酯、聚酸酐、聚磷腈分別與聚乙二醇共聚所得的聚合物材料中的任意一種，也可以將其不同種類不同分子量的聚合物復配混合使用。根據本發明的用於藥物載體的多孔微球，所述的有機溶劑可選自水中的溶解度低於2% (不包括2%)的有機溶劑，如二氯甲烷、三氯甲烷、二硫化碳和二甲苯等有機溶劑中的任意一種或多種，具體種類或體積需視所用膜材等製備參數而定。
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根據本發明的用於藥物載體的多孔微球，所述的步驟幻可重複多次，即將步驟3) 所得的乳液作為預乳用壓力再次通過微孔膜，直至得到的乳液的粒徑大小與均一性滿足要求。根據本發明的用於藥物載體的多孔微球，所述的外水相穩定劑可選自聚乙烯醇、 聚甘油脂肪酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐單油酸酯(TweenSO)、聚氧乙烯山梨糖醇酐月桂酸酯 (Tween20)、十二烷基磺酸鈉(SDQ等一種或幾種，穩定劑使用濃度優選為0. IOwt %。本發明還提供了採用所述多孔微球進行藥物負載的方法，該方法包括以下步驟按1 2 100的質量比將藥物與多孔微球混合，振蕩使多孔微球對藥物吸附，離心收集微球，洗去未吸附的藥物，冷凍乾燥，得到吸附有藥物的多孔載藥微球；所述藥物為選自多肽、蛋白類、多糖、核酸、疫苗中的一種，本發明製備得到的載藥微球對於藥物具有很高的釋放率以及保持良好的生物活性，尤其對於多肽、蛋白類物質效果更加明顯，很好的解決了上述難題。由於多糖、核酸和疫苗類藥物在超聲、攪拌等強烈的製備條件下及與有機溶劑接觸時結構和多肽、蛋白類物質一樣，極易破壞而導致失活，因此，在本發明中通過多孔微球對這類藥物進行吸附製備載藥微球，能很好的保持藥物活性， 同樣具有良好的效果。本發明還提供了一種用於藥物載體的多孔微球的製備方法，所述方法包括以下步驟1)將可降解兩嵌段兩親性聚合物材料溶於溶劑中，形成油相0 ；2)將油相0加入到含有穩定劑的水相中W，形成0/W的預乳；3)將步驟2)所得的0/W預乳通過微孔膜，得到0/W乳液；4)將步驟幻所得到的乳液中的有機溶劑去除、固化，再經離心洗滌和冷凍乾燥， 得到多孔載藥微球；所述步驟1)中溶劑至少含有一種在水中溶解度低於2%的有機溶劑，所述有機溶劑包括二氯甲烷、三氯甲烷、二硫化碳和二甲苯中的一種或多種；所述步驟2)中油相0和水相W的體積比1 5 20。本發明提供的尺寸均一的多孔微球，該微球尺寸均一、可控、直徑分布係數(CV)
值在20 %以內，更優選的在15 %以內。藥物裝載率最高可達50 %，釋放過程中蛋白多
肽類藥物活性保持率在90%以上，能瞬間釋放或持續釋放1周至12周。粒徑分布係數
(Coefficient of Variation, CV)採用數球法測定，測定300個粒子的粒徑，按下面的公式
計算粒子的粒徑分布係數(CV)。
— 1CF= T\ /d
N
ν!=1J其中Cli為單個粒子的粒徑，J為粒子的數均粒徑，N為粒子的總數，N > 300個。根據本發明的用於藥物載體的多孔微球，所述微球的平均粒徑範圍在 500nm-100 μ m，所述的聚合物微球在製備過程中至少採用了一種兩嵌段的兩親性聚合物材料並且至少採用了一種在水中的溶解度低於2% (不包括2%)的有機溶劑，更有利於提高藥物的裝載率、保持生物活性和可持續釋放。本發明中採用快速膜乳化方法製備出粒徑和孔徑均一可控，載藥率高，能控制釋
6放，且藥物活性高的多孔微球。其中，膜乳化技術保證了載藥微球粒徑均一可控，製備乳液時首先選用普通的乳化方式如均質、超聲、機械攪拌等方法製備，通過這些常規的方法製得的乳液粒徑大於膜孔徑，然後在壓力的作用下將這些粒徑大於膜孔徑的預復乳通過微孔膜後，便可以得到粒徑和微孔膜一致的復乳液，可以多次重複的操作直至得到的乳液的粒徑大小與均一性滿足要求。其次，採用的兩嵌段共聚物含有親水性鏈段，在固化過程中，由於有機溶劑在微球表面產生快速爆沸而成孔，因為親水性鏈段在微球表面均一分布，因此爆沸速度相同，產生的孔道孔徑均一；同時，通過採用不同親水性鏈段所佔比例的膜材和控制油水比例，能控制微球的孔徑。再次，因為多孔微球的比表面積相對於光滑的微球明顯提高，因而吸附的位點增加，能獲得較高的載藥率。通過控制膜材的分子量和在有機溶劑中的濃度能控制微球的降解速率，膜材分子量、聚合物中親水嵌段所佔比例、油水比以及聚合物在有機溶劑中的濃度都會影響微球的降解速率，從而可以通過調節以上參數來控制藥物的釋放速率。聚合物分子量越低，聚合物在有機溶劑中的濃度越低，微球骨架越疏鬆，利於微球的降解，從而藥物釋放速率較快；反之，提高聚合物分子量和聚合物在有機溶劑中的濃度，微球骨架緊實，微球降解慢，釋藥速率也慢。聚合物中其中親水嵌段所佔的比例越高，微球與周圍水環境接觸的機會越多，親水鏈降解的速率越快，而且微球孔徑也隨著親水嵌段的比例增加而增加，從而提高釋藥速度；反之降低聚合物中其中親水嵌段所佔的比例，釋藥速率隨之降低。外水相體積越大，微球孔徑越大，突釋越大；反之，外水相體積減小，孔徑越小，突釋降低，因此可以根據病情需要，製備不同的多孔載藥微球，從而達到控制藥物釋放速率的目的；同時，親水性鏈段分布在微球表面，避免了疏水性微球與蛋白的非特異性吸附而導致的不完全釋放。 吸附法製備載藥微球避免了超聲、攪拌等製備條件以及有機溶劑和油水界面對藥物活性的影響，很好的保持藥物活性。本發明中利於製備多孔微球的條件是使用在水中溶解度低於2%的有機溶劑， 油相與水相比小於1 5，兩親性聚合材料中親水嵌段所佔比例為4 20%。若使用的有機溶劑在水中溶解度高於2%，油水比大於1 5，兩親性聚合材料中親水嵌段所佔比例低於4%，不利於製備多孔微球。若油水比小於1 20，兩親性聚合材料中親水嵌段所佔比例高於20%，不利於製備規則球形的微球。因為兩嵌段的兩親性聚合物(由疏水性的鏈段和親水性的鏈段交替聚合而成的線性共聚物，該聚合物同時具備親水性和疏水性)，可以很好的解決蛋白類藥物與微球膜材之間的非特異性吸附，保證藥物的完全釋放；另外，以兩親型聚合物為微球材料還可以穩定製備孔徑均一的微球，從而可以獲得較高的載藥率。由於兩親性材料中的親水性部分本身具有類似於制孔劑的性質，在製備過程中不需要額外添加制孔劑，降低了生產成本，解決了殘留測定的困難，利於提高生物安全性。採用快速膜乳化法可實現製備出粒徑均一，大小可控的多孔微球，因為粒徑大小與藥物釋放有緊密聯繫，從而可以通過調節微球粒徑大小達到控制釋放周期的目的。本發明公開的製備方法與現有技術相比，具有以下優點本發明方法製備效率很高，乳液過膜時的流速大小高達lOmls—1，因而製備過程大多瞬間完成。本發明提供了一種多孔載藥微球，其特徵在於，所述微球的直徑分布係數在20%以內，藥物載藥率最高達50 %，釋放過程中蛋白多肽類藥物活性保持率在90 %以上，能瞬間釋放或者持續釋放1周至12周。本發明提供了一種快速製備尺寸均一的多孔載藥微球的方法，並可通過控制製備過程中的微孔膜孔徑大小和操作壓力來控制產品的粒徑大小。本發明克服了現有技術無法製備粒徑均一的多孔載藥微球的問題，保證了實驗的可重複性，利於藥物療效的穩定性和工業化放大生產。本發明不需要在油相額外添加制孔劑，即可達到製備多孔微球的效果，免去了後期測殘留帶來的困難，同時利於降低成本。本發明克服了傳統緩釋多孔微球在後期不能完全釋放的問題，並且在裝載藥物， 釋放和儲存過程中都能有效保持藥物活性。本發明方法操作簡單、條件溫和並且易於工業化放大生產。
圖1為本發明的載藥微球的製備流程示意圖；圖2為實施例1製備的微球的電鏡圖；圖3為實施例1製備的微球的粒徑分布圖；圖4為實施例2製備的微球的電鏡圖；圖5為實施例3製備的微球的電鏡圖；圖6為實施例4製備的微球的電鏡圖；圖7為實施例5製備的微球的電鏡圖。
具體實施例方式下面結合實施例對本發明作進一步的描述，但本發明不僅僅限制於該實施例中。實施例1將孔徑為2. 8 μ m的親水性微孔膜置於水中浸潤，使孔膜充分溼潤。將0. 4g的分子量為1萬的聚乳酸-聚乙二醇共聚物(PELA)(親水嵌段所佔的比例為4% )溶於8ml 二氯甲烷中，作為油相，將該油相加入到80ml的wt的聚乙二醇(PVA)水溶液中，油相和水相的比例為1 10，磁力攪拌300rpm攪拌Imin製備預乳，再將該預乳液在400kPa的操作壓力下壓過微孔膜裝置(如圖1)，得到乳液，乳液過膜時間小於10s，再將乳液在室溫下攪拌Mh以除去有機溶劑二氯甲烷，再經離心洗滌即得到載藥微球。將所得的微球真空乾燥4 得到成品微球。乾燥後的微球重新分散在水中，利用場發射掃描電鏡(JEOL SEM Company, Japan)觀察微球的表面形貌(如圖幻。微球的體積平均粒徑及其分布用雷射粒度儀(Malvern Company,USA)測定(如圖3)，經測定微球的平均粒徑為627nm，粒度分布係數 CV值為12. 53%。將0. 2g微球置於小離心管中，加入5mL胰高血糖素樣肽-I(GLP-I)溶液， 在一定溫度下吸附Mh，然後將未吸附的GLP-I溶液在5000rpm下離心分離，測定未吸附的 GLP-I質量，通過計算定量得到微球對於GPL-I的載藥率為37.8%。準確稱量30mg凍幹微球，加入 IOml ρΗ7· 4 的 PBS 緩衝液(8g NaCl,0. 2g KC1，0. 24g KH2PO4,1. 8IgNa2HPO4 · H2O, 0. 5g NaN3,0. Ig Tween20和1000ml蒸餾水)。樣品管置於37 °C水浴恆溫振蕩器振搖 (120rpm)。定期離心分離，取出1. Oml上清液，同時補入1. Oml新鮮PBS緩衝液。上清液中蛋白含量以BCA試劑和micro-BCA試劑盒則定。經測定，6周內微球持續釋放GLP-I累積達到97.2%,且釋放出的GLP-I活性保持率為96. 5%0實施例2將孔徑為7. 2 μ m的親水性膜置於水中浸潤，使孔膜充分溼潤。將0. 7g的分子量為5萬的聚乳酸-聚羥基乙酸和聚乙二醇共聚物(親水嵌段所佔的比例為10%)溶於IOml 三氯甲烷中，作為油相，將該油相加入到50ml的1. 2% wt的PVA水溶液中，油相和水相的比例為1 5，磁力攪拌300rpm攪拌Imin製備預乳，再將該預乳液在2001tfa的操作壓力下壓過微孔膜裝置，得到乳液，乳液過膜時間小於10s，再將乳液在室溫下攪拌Mh以除去有機溶劑三氯甲烷，再經離心洗滌即得到載藥微球。將所得的微球真空乾燥4 得到成品微球。 乾燥後的微球重新分散在水中，利用場發射掃描電鏡(JEOL SEM Company, Japan)觀察微球的表面形貌(如圖4)。微球的體積平均粒徑及其分布用雷射粒度儀(Malvern Company, USA)測定，經測定，微球的平均粒徑為4. 12 μ m,粒度分布係數CV值為12. 67%。將0. 2g微球置於小離心管中，加入5mL胰島素溶液，在一定溫度下吸附46h，然後將未吸附的胰島素溶液在5000rpm下離心分離，測定未吸附的胰島素質量，通過計算定量得到微球對於胰島素的載藥率為36. 9%。準確稱量30mg凍幹微球，加入IOml pH7. 4的PBS緩衝液(8g NaCl, 0. 2gKCl，0. 24g KH2PO4,1. 81g Na2HPO4 · H20,0. 5g NaN3,0. Ig Tween20 禾口 1000ml 蒸餾水)。 樣品管置於37°C水浴恆溫振蕩器振搖(120rpm)。定期離心分離，取出1. Oml上清液，同時補入1. Oml新鮮PBS緩衝液。上清液中蛋白含量以BCA試劑和micro-BCA試劑盒則定。經測定，5周內微球持續釋放胰島素累積達到95. 8%，且釋放出的胰島素活性保持率為94. 7%0實施例3將孔徑為9 μ m的親水性膜置於水中浸潤，使孔膜充分溼潤。將0. Sg的分子量為 2萬的聚乳酸-聚乙二醇共聚物(親水嵌段所佔的比例為20%)溶於15ml 二硫化碳中，作為油相，將該油相加入到300ml的1. 4% wt的PVA水溶液中，油相和水相的比例為1 20， 磁力攪拌300rpm攪拌Imin製備預乳，再將該預乳液在150kPa的操作壓力下壓過微孔膜裝置，得到乳液，乳液過膜時間小於10s，再將乳液在室溫下攪拌Mh以除去有機溶劑三氯甲烷，再經離心洗滌即得到載藥微球。將所得的微球真空乾燥4 得到成品微球。乾燥後的微球重新分散在水中，利用場發射掃描電鏡(JEOL SEM Company, Japan)觀察微球的表面形貌(如圖5)。微球的體積平均粒徑及其分布用雷射粒度儀(Malvern Company, USA)測定，經測定，微球的平均粒徑為4. 17 μ m,粒度分布係數CV值為13. 74 %。將0. 2g微球置於小離心管中，加入5mL重組生長激素溶液，在一定溫度下吸附36h，然後將未吸附的重組人生長激素溶液在5000rpm下離心分離，測定未吸附的重組人生長激素質量，通過計算定量得到微球對於重組人生長激素的載藥率為22. 8%。準確稱量30mg凍幹微球，加入IOml ρΗ7· 4 的PBS緩衝液(8g NaCl, 0. 2g KCl，0. 24g KH2PO4,1. 81g Na2HPO4 ·Η20，0· 5g NaN3,0. Ig Tween20和1000ml蒸餾水)。樣品管置於37°C水浴恆溫振蕩器振搖(120rpm)。定期離心分離，取出1.0ml上清液，同時補入1.0ml新鮮PBS緩衝液。上清液中蛋白含量以BCA試劑和micro-BCA試劑盒則定。經測定，7周內微球持續釋放生長激素累積達到94. 8%，且釋放出的生長激素活性保持率為95. 4%。實施例4將孔徑為18 μ m的親水性膜置於水中浸潤，使孔膜充分溼潤。將Ig的分子量為3萬的聚己內酯-聚乙二醇共聚物(親水嵌段所佔的比例為15% )溶於20ml 二甲苯中，作為油相，將該油相加入到160ml的1. 5% wt的PVA水溶液中，油相和水相的比例為1 8， 磁力攪拌300rpm攪拌Imin製備預乳，再將該預乳液在IOOkPa的操作壓力下壓過微孔膜裝置，得到乳液，乳液過膜時間小於10s，再將乳液在室溫下攪拌24h以除去有機溶劑三氯甲烷，再經離心洗滌即得到載藥微球。將所得的微球真空乾燥4 得到成品微球。乾燥後的微球重新分散在水中，利用場發射掃描電鏡(JEOL SEM Company，Japan)觀察微球的表面形貌(如圖6)。微球的體積平均粒徑及其分布用雷射粒度儀(Malvern Company,USA)測定， 經測定，微球的平均粒徑為7. 62 μ m，粒度分布係數CV值為14. 65%。將0. 2g微球置於小離心管中，加入5mL亮丙瑞林溶液，在一定溫度下吸附Mh，然後將未吸附的亮丙瑞林溶液在 5000rpm下離心分離，測定未吸附的亮丙瑞林質量，通過計算定量得到微球對於亮丙瑞林的載藥率為47. 8%0準確稱量30mg凍幹微球，加入IOml ρΗ7· 4的PBS緩衝液(8g NaCl, 0. 2g KCl，0. 24gKH2P04,1. 81g Na2HPO4 · H20,0. 5g NaN3,0. Ig Tween20 和 1000ml 蒸餾水)。樣品管置於37°C水浴恆溫振蕩器振搖(120rpm)。定期離心分離，取出1. Oml上清液，同時補入 1.0ml新鮮PBS緩衝液。上清液中亮丙瑞林含量用液相則定。經測定，8周內微球持續釋放亮丙瑞林累積達到98. 2%，且釋放出的亮丙瑞林活性保持率為97. 9%。實施例5將孔徑為50. 2 μ m的親水性膜置於水中浸潤，使孔膜充分溼潤。將1. 2g的分子量為4萬的聚乳酸-聚乙二醇共聚物(親水嵌段所佔的比例為6 % )溶於30ml 二氯甲烷與三氯甲烷復配的溶劑(體積被為1 1)中作為油相，將該油相加入到300ml的2wt%的PVA 水溶液中，油相和水相的比例為1 10，磁力攪拌300rpm攪拌Imin製備預乳，再將該預乳液在70kPa的操作壓力下壓過微孔膜裝置，得到乳液，乳液過膜時間小於10s，再將乳液在室溫下攪拌Mh以除去有機溶劑二氯甲烷，再經離心洗滌即得到載藥微球。將所得的微球真空乾燥4 得到成品微球。乾燥後的微球重新分散在水中，利用場發射掃描電鏡(JE0L SEM Company，Japan)觀察微球的表面形貌(如圖7)。微球的體積平均粒徑及其分布用雷射粒度儀(Malvern Company, USA)測定，經測定，微球的平均粒徑為20. 72 μ m，粒度分布係數 CV值為14. 16%。將0. 2g微球置於小離心管中，加入5mLB肝疫苗溶液，在一定溫度下超聲吸附20h，然後將未吸附的促黃體激素(LHRH)溶液在5000rpm下離心分離，測定未吸附的 LHRH質量，通過計算定量得到微球對於LHRH的載藥率為39. 2%。準確稱量30mg凍幹微球， 加入 IOml ρΗ7· 4 的PBS緩衝液(8g NaCl, 0. 2g KCl，0.24g KH2PO4,1. 81g Na2HPO4 ·Η20,0. 5g NaN3,0. Ig Tween20和1000ml蒸餾水)。樣品管置於37°C水浴恆溫振蕩器振搖(120rpm)。 定期離心分離，取出1.0ml上清液，同時補入1.0ml新鮮PBS緩衝液。上清液中LHRH用BCA 試劑和micro-BCA試劑盒則定。經測定，4周內微球持續釋放LHRH累積達到99. 0%，且釋放出的LHRH活性保持率為96. 3%。
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權利要求
1.一種用於藥物載體的多孔微球，其特徵在於，所述微球的製備方法包括以下步驟1)將可降解兩嵌段兩親性聚合物材料溶於有機溶劑中，形成油相0；2)將油相0加入到含有穩定劑的水相中W，形成0/W的預乳；3)將步驟2、所得的0/W預乳通過微孔膜，得到0/W乳液；4)將步驟幻所得到的乳液中的有機溶劑去除、固化，再經離心洗滌和冷凍乾燥，得到多孔載藥微球；所述步驟1)中有機溶劑至少含有一種在水中溶解度低於2%的溶劑；所述步驟2)中油相0和水相W的體積比1 5 20。
2.根據權利要求1所述的用於藥物載體的多孔微球，其特徵在於，所述步驟1)中，所述有機溶劑包括二氯甲烷、三氯甲烷、二硫化碳和二甲苯中的一種或多種；所述步驟1)兩嵌段兩親性聚合物材料包括聚乳酸、聚乳酸-聚羥基乙酸共聚物、聚己內酯、聚原酸酯、聚酸酐、聚磷腈中的一種或多種與聚乙二醇共聚所得的兩親性聚合材料， 其分子量為1萬 10萬，該兩親性聚合材料中親水嵌段所佔比例為4 20% ；所述步驟2、水相中的穩定劑包括聚乙烯醇、聚甘油脂肪酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐單油酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐月桂酸酯和十二烷基磺酸鈉中的一種或幾種，穩定劑濃度為 0. Iwt % IOwt %。
3.根據權利要求2所述的用於藥物載體的多孔微球，其特徵在於，所述有機溶劑包括二氯甲烷和三氯甲烷中的一種或兩種，所述兩嵌段兩親性聚合物材料包括聚乳酸、聚乳酸-聚羥基乙酸共聚物或聚己內酯與聚乙二醇共聚所得的兩親性聚合材料。
4.根據權利要求1所述的用於藥物載體的多孔微球，其特徵在於，所述步驟3)中微孔膜的孔徑為0. 5 200 μ m，通過微孔膜的壓力為1 2000kPa。
5.根據權利要求1所述的用於藥物載體的多孔微球，其特徵在於，所述藥物為選自多肽、蛋白類、多糖、核酸和疫苗類中的一種。
6.一種用於藥物載體的多孔微球的製備方法，其特徵在於，所述方法包括以下步驟1)將可降解兩嵌段兩親性聚合物材料溶於有機溶劑中，形成油相0；2)將油相0加入到含有穩定劑的水相中W，形成0/W的預乳；3)將步驟2、所得的0/W預乳通過微孔膜，得到0/W乳液；4)將步驟幻所得到的乳液中的有機溶劑去除、固化，再經離心洗滌和冷凍乾燥，得到多孔載藥微球；所述步驟1)中有機溶劑至少含有一種在水中溶解度低於2%的溶劑；所述步驟2)中油相0和水相W的體積比1 5 20。
7.根據權利要求6所述的用於藥物載體的多孔微球的製備方法，其特徵在於，所述步驟1)中，所述有機溶劑包括二氯甲烷、三氯甲烷、二硫化碳和二甲苯中的一種或多種；所述步驟1)兩嵌段兩親性聚合物材料包括聚乳酸、聚乳酸-聚羥基乙酸共聚物、聚己內酯、聚原酸酯、聚酸酐、聚磷腈中的一種或多種與聚乙二醇共聚所得的兩親性聚合材料， 其分子量為1萬 10萬，該兩親性聚合材料中親水嵌段所佔比例為4 20% ；所述步驟幻水相中的穩定劑包括聚乙烯醇、聚甘油脂肪酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐單油酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐月桂酸酯和十二烷基磺酸鈉中的一種或幾種，穩定劑濃度為 0. Iwt % IOwt %。
8.根據權利要求6所述的用於藥物載體的多孔微球的製備方法，其特徵在於，所述有機溶劑包括二氯甲烷和三氯甲烷中的一種或兩種，所述兩嵌段兩親性聚合物材料包括聚乳酸、聚乳酸-聚羥基乙酸共聚物或聚己內酯與聚乙二醇共聚所得的兩親性聚合材料。
9.根據權利要求6所述的用於藥物載體的多孔微球的製備方法，其特徵在於，所述步驟3)中微孔膜的孔徑為0. 5 200 μ m,通過微孔膜的壓力為1 2000kPa。
10.一種利用權利要求1所述用於藥物載體的多孔微球負載藥物的方法，其特徵在於， 按1 2 100的質量比將藥物與多孔微球混合。
全文摘要
本發明涉及多孔微球的製備領域，具體地，本發明涉及一種用於藥物載體的多孔微球、製備方法及藥物負載方法。所述方法包括以下步驟1)將可降解兩嵌段兩親性聚合物材料溶於有機溶劑中，形成油相O；2)將油相O加入到含有穩定劑的水相中W，形成O/W的預乳；3)將步驟2)所得的O/W預乳通過微孔膜，得到O/W乳液；4)將步驟3)所得到的乳液中的有機溶劑去除、固化，再經離心洗滌和冷凍乾燥，得到多孔載藥微球；所述步驟1)中有機溶劑至少含有一種在水中溶解度低於2％的溶劑；所述油相O和水相W的體積比1∶5～20。本發明克服了傳統緩釋多孔微球在後期不能完全釋放的問題，並且在裝載藥物，釋放和儲存過程中都能有效保持藥物活性。
文檔編號A61K47/34GK102258786SQ20111016434
公開日2011年11月30日 申請日期2011年6月17日 優先權日2011年6月17日
發明者周煒清, 王玉霞, 蘇志國, 韋禕, 馬光輝 申請人:中國科學院過程工程研究所