產過氧化氫細菌用於牙齒增白的用途的製作方法

2023-05-30 13:14:56 3

專利名稱：：產過氧化氫細菌用於牙齒增白的用途的製作方法產過氧化氫細菌用於牙齒增白的用途優先權本申請要求2008年6月13日提交的美國序號61/061，264的優先權，該文件通過引用以全文形式結合至本文。
背景技術：
：牙齒表面為能吸收的且可通過使用菸草產品、食用或飲用某些食物和飲料(例如咖啡、茶和紅酒)、牙菌斑的積累、衰老的過程、疾病、創傷、藥物治療、先天條件和其他環境作用而被著色或變色。牙齒由內牙質層、外釉質層和獲得膜組成。該獲得膜為牙齒釉質表面上形成的來源於唾液的蛋白質性質的層。可發生牙齒的外在和內在著色。外在著色為獲得膜的著色，該著色可在食用、飲用或吸菸期間當化合物(例如鞣質和多酚化合物)與牙齒接觸時發生。然後這些化合物開始陷入並緊密結合至牙齒表面上的蛋白質性質的層。外在著色可通過清潔牙齒的機械方法(例如刷子刷或牙線清潔)和化學清潔方法去除。即使經常用刷子刷和牙線清潔，快或慢的積累可發展成明顯的內在牙齒變色。內在著色可由滲透釉質層和牙質層的著色化合物引起，或可起源於牙齒內的源。內在著色難於去除且通常不能通過清潔牙齒的機械方法去除，但高的化學濃度和/或長時期的化學清潔方法可用於去除一些或全部此類著色。白的、未著色牙齒被認為是美容上需要的。牙齒可通過，例如機械清潔方法、置於牙齒上的罩冠(veneer)和化學漂白來增白。雖然牙齒增白產品為本領域已知的，但這些產品傳統上由追求白牙齒的美容益處的那些人使用。然而，有不同的消費者群需要白牙齒和/或更多口部益處，這些口部益處包括較清潔的牙齒、較健康的牙齦和減少的口臭。因此，需要提供除牙齒增白外還可產生口部護理益處的口部衛生產品。此外，口部衛生時間通常是有限的且因此需要快速並方便地產生這些口部護理益處作為日常口部衛生方案的一部分。發明概述本發明的一個實施方案提供了一種增白受試者牙齒的方法，所述方法包括向受試者的口腔給予包含一種或多種分離的、非致病的、產過氧化氫的菌種或菌株的組合物。所述一種或多種分離的、非致病的、產過氧化氫的菌種或菌株可為乳桿菌屬(Lactobacillus)、雙歧桿菌屬(Bifidobacteria)或綠色鏈球菌屬(Str印tococcus)、明串珠菌屬(Leuconostoc)、乳球菌屬(Lactococcus)、片球菌屬(Pediococcus)或其組合。所述一種或多種分離的、非致病的、產過氧化氫的菌種或菌株可為(a)—種或多種分離的口腔鏈球菌(Str印tococcusoralis)株或(b)—種或多種分離的乳房鏈球菌(Str印tococcusuberis)株或(c)其組合。所述一種或多種分離的、非致病的、產過氧化氫的菌種或菌株可被單獨地給予至受試者口腔中牙齒表面和直接包圍該牙齒表面的軟組織。該受試者可為哺乳動物。所述組合物可以約每天一次或兩次、約每周一次或約每月一次給予受試者。所述組合物還可包含一種或多種缺乏乳酸脫氫酶的變異鏈球菌(mutansStreptococcus)種或菌株例如鼠鏈球菌(Str印tococcusrattus)。所述組合物還可包含一種或多種可代謝的碳源。本發明的另一實施方案提供了一種治療著色的牙齒、齲齒、牙周炎、口部細菌感染、口部創傷、念珠菌(Candida)或真菌過度生長、口臭、口乾燥引起的齲齒和相關的牙周疾病的方法。該方法包括向受試者的口腔給予包含一種或多種分離的、非致病的、產過氧化氫的菌種或菌株和一種或多種缺乏乳酸脫氫酶的變異鏈球菌種或菌株的組合物。所述一種或多種分離的、非致病的、產過氧化氫的菌種或菌株和一種或多種缺乏乳酸脫氫酶的變異鏈球菌種或菌株可被單獨地給予至受試者口腔中牙齒表面和直接包圍該牙齒表面的軟組織。所述組合物還可包含一種或多種可代謝的碳源。本發明的還另一個實施方案提供了用於增白受試者牙齒的牙齒處理設備。所述設備包含牙齒增白組合物和(b)鄰近該牙齒增白組合物的隔離層，其中所述組合物包含一種或多種分離的、非致病的、產過氧化氫的菌種或菌株。所述隔離層可包含包括限定U形或L形槽的至少一個側壁和底壁的牙齒處理託盤。所述隔離層可包含柔性條。所述牙齒增白組合物還可包含一種或多種可代謝的碳源。附圖簡述圖1顯示了著色的牙科陶瓷盤隨時間的亮度值。組A(實驗的)、組B(加過氧化氫酶)、組C(減右旋糖)、D(減KJ3sm)。圖2顯示了處理4周後著色的陶瓷盤的外觀。組A(實驗的)、組B(加過氧化氫酶)、組C(減右旋糖)、D(減KJ3sm)。發明詳述本文使用的單數形式「a」、「an」和「the」包括複數對象，除非文中另外明確指出。本發明提供了用於保持口部健康(包括，例如牙齒增白)的方法和組合物。本發明的組合物包含一種或多種分離的、非致病的、產過氧化氫的菌種或菌株和任選的缺乏LDH的變異鏈球菌。某些細菌可以以能增白牙齒的水平產生過氧化氫，這被本文第一次證明。本發明的組合物可影響或實現所需的牙齒表面的外觀和/或結構的改變。外觀和結構改變的實例包括，但不必限於，增白、漂白著色、去除著色、去除菌斑和去除牙垢。此外，本發明的組合物可向受試者提供額外的口部護理益處例如治療和/或預防齲齒、牙周炎、口部細菌感染和疾病、口部創傷、念珠菌或真菌過度生長、口臭或口乾燥引起的齲齒和相關的牙周疾病、促進創傷癒合或其組合。本發明的組合物本發明提供了使用組合物增白牙齒表面的方法，所述組合物包含一種或多種非致病的、產過氧化氫的綠色鏈球菌種或菌株和/或一種或多種非致病的、產過氧化氫的乳桿菌種或菌株和/或一種或多種非致病的、產過氧化氫的雙歧桿菌種或菌株和/或一種或多種非致病的、產過氧化氫的乳球菌種或菌株和/或一種或多種非致病的、產過氧化氫的片球菌種或菌株和/或一種或多種非致病的、產過氧化氫的明串珠菌種或菌株。本發明的一個實施方案中所述菌株通常可被認為是安全的(GRAS)，且能通過靜電作用、範德華作用或細菌表面上的蛋白或多糖粘附素(該粘附素識別牙齒表面存在的分子並與其相互作用)短暫地附著或粘著於牙齒表面。綠色鏈球菌種的實例包括，但不限於，血鏈球菌(S.sanguis)、副血鏈球菌(S.parasanguis)、格氏鏈球菌(S.gordonii)、口腔鏈球菌(S.oralis)、乳房鏈球菌(S.uberis)、緩症鏈球菌(S.mitis)、鼠鏈球菌(S.rattus)、唾液鏈球菌(S.salivariaus)、前庭鏈球菌(S.vestibularis)、咽峽鏈球菌(S.·angionosus)、星群鏈球菌(S.constellatus)、中間鏈球菌(S.intermedius)、變異鏈球菌(S.mutans)、表兄鏈球菌(S.sobrinus)、米氏鏈球菌(S.milleri)、大鼠鏈球菌(S.cricetus)和溫和鏈球菌(S.mitior)。乳桿菌種的實例包括，但不限於，嗜酸乳桿菌(L.acidophilus)、詹氏乳桿菌(L.jensenii)、鏈狀乳桿菌(L.catenaforme)、德氏乳桿菌乳亞種(L.Ieichmanni)、植物乳桿菌(L.plantarum)、約氏乳桿菌(L.johnsonii)、加氏乳桿菌(L.gasseri)、德氏乳桿菌(L.delbrueckii)、乾酪乳桿菌(L.casei)、短乳桿菌(L.brevis)、唾液乳桿菌(L.salivarius)、加氏乳桿菌(L.gasseri)、豬腸道乳桿菌(L.sobrius)、鼠李糖乳桿菌(L.rhamnosus)、路氏乳桿菌(L.reuteri)、發酵乳桿菌(L.fermentum)、類乾酪乳桿菌(L.paracasei)葡聚糖乳桿菌(L.dextranicum)和瑞士乳桿菌(L.helveticus)。雙歧桿菌種的實例包括，但不限於，角雙歧桿菌(B.angulatum)、動物雙歧桿菌(B.animalis)、星狀雙歧桿菌(B.asteroides)、雙歧雙歧桿菌(B.bifidum)、牛雙歧桿菌(B.boum)、短雙歧桿菌(B.breve)、鏈狀雙歧桿菌(B.catenulatum)、豚雙歧桿菌(B.choerinum)、棒狀雙歧桿菌(B.coryneforme)、兔雙歧桿菌(B.cuniculi)、齒雙歧桿菌(B.dentium)、高盧雙歧桿菌(B.galIicum)、雞胚雙歧桿菌(B.gal1inarum)、蜜蜂雙歧桿菌(Bindicum)、長雙歧桿菌(B.longum)、大雙歧桿菌(B.magnum)、瘤胃雙歧桿菌(B.merycicum)、最小雙歧桿菌(B.minimum)、假小鏈雙歧桿菌(B.pseudocatenulatum)、假長雙歧桿菌假長亞種(B.pseudolongum)>B.psychraerophilum、小雞雙歧桿菌(B.pullorum)、反芻雙歧桿菌(B.ruminantium)、波倫亞雙歧桿菌(B.saeculare)、B.scardovii、B.simiae、纖細雙歧桿菌(B.subtile)、B.thermacidophilum、口譽熱雙歧桿菌(B.thermophilum)禾口B.urinali。可產生過氧化氫的其他非致病細菌的實例包括，不限於，片球菌種，例如乳酸片球菌(P.acidilactici)、明串珠菌種例如腸膜明串珠菌(L.mesenteroides)、乳球菌種例如乳酸乳球菌(L.Iactis)。細菌產生的過氧化氫的量可被實驗測定。參見例如Hillman和Olivers，Arch.Oral.Biol.，33:395-401(1988)。在氧存在時生長的細胞的培養液用40μg/ml辣根過氧化物酶和0.4ymol/ml鄰聯茴香胺孵育。2分鐘後，加入0.02ml5NHCl終止反應。在410nm測量樣品光密度，並且根據標準曲線計算樣品的過氧化氫濃度，該標準曲線使用可靠的過氧化氫和在230nm時SBf1cnT1的消光係數製備。本發明的一個實施方案中，所述細菌可產生至少約0.5、l、2、5mM或更多的H2A或約0.1和約5mM之間的任何範圍或值。本發明的一個實施方案中，本發明的組合物包含一種或多種分離的口腔鏈球菌株和/或一種或多種乳房鏈球菌株。本發明的組合物可任選包含一種或多種分離的缺乏LDH的變異鏈球菌株或菌種。非致病的、產過氧化氫的細菌和/或變異鏈球菌的組合提供了明顯的實用優勢，該組合物可用於預防和治療，例如，齲齒、牙周炎、口部細菌感染和疾病、口部創傷、念珠菌或真菌過度生長、口臭或口乾燥引起的齲齒或牙周疾病，還增白牙齒。口腔鏈球菌(以前被稱為血鏈球菌(S.sanguis)II型)和乳房鏈球菌為維持包含牙周菌群的微生物的正常、健康的平衡的重要組分。參見Socransky等，OralMicrobiol.Immunol.3:1-7(1988)；Hillman禾口Shivers，Arch.Oral.Biol.，33:395-401(1988)；Hillman等，Arch.Oral.Biol.,30:791-795(1985)。口腔鏈球菌也可發現於牙菌斑中且已被證實與牙周健康相關聯，特別是通過幹擾牙周病原體(例如Aggregetobacteractinomycetemcomitans、牙銀口卜啉單胞菌(Porphyromonasgingivalis)、微小消化鏈球菌(Peptostreptococcusmicros)禾口直腸彎曲桿菌(Campylobacterrectus))群集而與牙周健康相關聯。本發明的組合物可包含一種或多種分離的口腔鏈球菌株，例如，ATCC35037、ATCC55229、ATCC700233、ATCC700234和ATCC9811。其他口腔鏈球菌株包括KJ3和KJ3sm。KJ3sm為抗lmg/ml鏈黴素的KJ3的天然發生的遺傳性變體。該鏈黴素抗性為有利的，因為這提供了容易分離該細菌的標記。此外，鏈黴素抗性菌株為輕微衰減的且在口腔中不如野生型菌株存活得長久。當目標為將該細菌非持久性地群集於動物口腔時，此性質是有用的。乳房鏈球菌還可發現於牙菌斑中並被證實與牙周健康關聯，特別是通過幹擾牙周病原體(例如福賽斯坦納菌(Tarmerellaforsythensis)、微小消化鏈球菌、直腸彎曲桿菌和產黑素普雷沃氏菌(Prevotellamelaninogenica))群集而與牙周健康關聯。本發明的組合物可包含一種或多種分離的乳房鏈球菌株，例如，ATCC13386、ATCC13387、ATCC19435、ATCC27958、ATCC35648、ATCC700407、ATCC9927、菌株KJ2或菌株KJ2sm。KJ2sm為抗lmg/ml鏈黴素並提供與口腔鏈球菌的鏈黴素抗性菌株相同的優勢的KJ2的天然發生的遺傳性變體。一種或多種分離的口腔鏈球菌株或一種或多種分離的乳房鏈球菌株或兩者都可用於本發明的組合物和方法。本發明的組合物可包含缺乏乳酸產生的一種或多種分離的變異鏈球菌種。這些菌種包括，例如，鼠鏈球菌、大鼠鏈球菌、變異鏈球菌、表兄鏈球菌、汗毛鏈球菌(S.downeii)、獼猴鏈球菌(S.macacae)和野生鏈球菌(S.ferus)。本發明的變異鏈球菌基本不產生L(+)乳酸脫氫酶(LDH)。此菌株被命名為缺乏LDH的菌株。變異鏈球菌的缺乏LDH的菌株比野生型變異鏈球菌株少產生75%、80%、90%、95%、98%、99%或100%的乳酸。缺乏LDH的變異鏈球菌株可為天然發生的變異鏈球菌株或基因改造的變異鏈球菌株。缺乏LDH的變異鏈球菌可在口腔中與病原菌競爭和/或替換病原菌，所述病原菌例如變異鏈球菌，其為齲齒的主要致病因素。缺乏LDH的變異鏈球菌株將與變異鏈球菌競爭相同的營養、群集位點等。因此，缺乏LDH的變異鏈球菌株可用於，例如，預防和/或治療齲齒。缺乏LDH的變異鏈球菌株為非致病的，改變口腔的微環境以防止病原生物的群集或過度生長和/或從病原為宿主的土著菌群的一部分的口腔替換病原生物。缺乏LDH的變異鏈球菌株的實例包括，例如，鼠鏈球菌JH145(ATCC31377)(自發的、天然發生的缺乏LDH的突變型)和JH140(ATCC31341)(化學改造的缺乏LDH的突變型)°參見，例如Stanshenko&Hillman,MicrofloraofplaqueinratsfollowinginfectionwithanLDH-deficientmutantofStreptococcusrattus(用鼠鏈球菌的LDH缺乏的突變型感染後的大鼠牙菌斑微生物群)，CariesRes.23:375-377(1989)；Hillman,LactatedehydrogenasemutantsofStreptococcusmutans:Isolationandpreliminarycharacterization(變異鏈球菌的乳酸脫氫酶突變型分離和初步表Ε).Infect.Immun.21:206-212(1978)；還參見Abhyankar等，SerotypecStreptococcusmutansmutatabletolactatedehydrogenasedeficiency(nT^^j^lLSH^SBIiE^SW血清型c變異鏈球菌)·J.Dent.Res.64:1267-71(1985)。變異鏈球菌的缺乏LDH的菌株可使用，例如，化學或物理誘變技術得自於變異鏈球菌。使用這些技術進行誘變的菌株被認為是遺傳學上改造的菌株。例如，可使變異鏈球菌株經受誘變因素如亞硝酸、甲酸、硫酸氫鈉、紫外線、鹼基類似物誘變劑包括例如5-溴-脫氧尿苷(5BU)、烷化劑(alkylator)例如甲磺酸乙酯(EMS)、甲磺酸甲酯(MMS)、硫酸二乙酯(DES)和亞硝基胍(NTG、NG、MNNG)。參見，例如hVitroMutagenesisProtocols(體外誘^Tj^)，Braman,Ed.，HumanaPress,2002。天然發生的、自發的缺乏LDH的變異鏈球菌株可使用，例如，Hillman,LactatedehydrogenasemutantsofStreptococcusmutansisolationandpreliminarycharacterization(變異鏈球菌的乳酸脫氫酶突變型分離和初步表徵).Infect.Immun.21:206-212(1978)中公開的方法製備。自發的缺乏LDH的突變型以約10_5頻率的速率出現ο參見Johnson等，CariogenicpotentialinvitroinmanandinvivointheratoflactatedehydrogenasemutantsofStreptococcusmutans(變異鏈球菌乳酸脫氫酶突變型在人體外和大鼠體內的生齲齒潛能).Arch.OralBiol.25:707-713(1980)。天然發生的、自發的缺乏LDH的變異鏈球菌株可通過將細菌於葡萄糖四氮唑鐺培養基上平板培養而從產LDH的變異鏈球菌株區分。缺乏LDH的變異鏈球菌菌落將為鮮紅色且在尺寸上比親株菌落相對較大，該親株在葡萄糖四氮唑鐺培養基上為白色並且在尺寸上相對較小。天然發生的、自發的缺乏LDH的變異鏈球菌株可用於本發明的組合物。鼠鏈球菌的缺乏LDH的菌株已被分離。簡要地講，鼠鏈球菌BHT-2的培養物在ToddHewitt肉湯中過夜生長至飽和，然後將稀釋的樣品分散於葡萄糖四氮唑鐺培養基上以產生約300個菌落每板。野生型、產酸菌落在此培養基上為白色。缺乏LDH的突變型為鮮紅色。鼠鏈球菌JH145為在篩選的大約100，000個白色菌落中的一個紅色菌落。因此鼠鏈球菌JH145為天然發生的，缺乏LDH的突變型。變異鏈球菌的缺乏LDH的菌株(例如鼠鏈球菌BHT-2的缺乏LDH的突變型)在存在葡萄糖和其他糖或多元醇情況下培養時產生較少的總的可滴定酸、在休眠和生長培養的情況在葡萄糖存在下培養時產生明顯較少的乳酸、更好地粘附於羥磷灰石(hydroxyapitite)並在存在蔗糖情況下生長時累積更多的菌斑。LDH活性可如Brown&Wittenberger(J.Bacteriol.110:604，1972)描述的進行分析。終端pH可通過在含葡萄糖的ToddHewitt肉湯中傳代培養菌株(1100)來測定。37°C在燭罐中培養48小時後，可測定培養物580nm的吸光度和其pH。培養物的乳酸&it^TiSil^(ifeififiiJt。&Muirhead，Quantitativemethodforthegaschromatographicanalysisofshort-chainmonocarboxylicanddicarboxylicacidsinfermentationmedia(發酵介質中短鏈一元羧酸和二元羧酸氣相色譜分析的定量方法).Appl.Microbiol.29:374-381(1975)；Hillman等，Acetoinproductionbywild-typestrainsandalactatedehydrogenase-deficientmutantofStreptococcusmutans(變異鏈球菌野生型菌株和乳酸脫氫酶缺乏的突變體的乙偶姻的生成hhfect.Immun.55:1399-1402(1987)。此外，任何本領域技術人員已知的基因改造技術可用於從產LDH的變異鏈球菌親株製造缺乏LDH的變異鏈球菌株。例如，LDH基因或LDH基因的部分可被刪除或誘變處理，包括，例如，插入誘變技術。其他誘變技術包括，例如，同源重組、循環序列重組、寡核苷酸定向誘變、位點定向誘變、易錯PCR、硫代磷酸酯(phosphothioate)修飾的DNA誘變、含尿嘧啶的模板誘變、缺口雙鏈體誘變、點錯配修復誘變、修復缺失宿主株誘變、放射產生的誘變、缺失誘變、限制選擇誘變、限制純化誘變、位點飽和誘變、總體誘變、循環總體誘變和嵌合核酸產生。因此，任何使LDH基因失效的基因改造技術均可用於生產缺乏LDH的變異鏈球菌株。本發明的一個實施方案中，缺乏LDH的菌株，不論是天然發生的還是基因改造的突變型，具有小於10_7的回覆頻率並產生小於約10%親代水平的乳酸脫氫酶活性。使用兩種或多種不同的菌種可提供相對於使用單一菌種的優勢。這是因為不同的菌種群集於牙齒的不同表面或部分。所以，使用超過一種細菌可用於「覆蓋」牙齒的所有或大多數的表面，反之，僅使用一種細菌可導致牙齒的某些表面或部分未被群集。所以，牙齒的所有表面都暴露於增白作用下。本發明的組合物還可包含可被所述一種或多種分離的、非致病的、產過氧化氫的菌種或菌株或所述一種或多種缺乏乳酸脫氫酶的變異鏈球菌種或菌株或該兩種類型的菌種或菌株代謝的一種或多種碳源。碳源包括，但不限於，例如，葡萄糖、山梨醇、甘露醇、果糖、半乳糖、麥芽糖、蔗糖、木糖、乳糖、甘油或其組合。本發明的組合物可包含藥學可接受的或營養學可接受的載體。該載體與被給藥的受試者的口腔生理學相容。載體可由基於固體的、乾材料組成以形成片劑、膠囊、錠劑或粉末形式。載體還可由液體或基於膠的材料組成以形成液體、凝膠和口香糖形式。合適的液體或基於凝膠的載體包括但不限於水、生理鹽水、尿素、醇及其衍生物和二醇(例如乙二醇或丙二醇)。該載體的組成可進行變化，只要它不會明顯妨礙本發明菌株的治療活性。組合物可被配置以便適合以多種方式口部給藥，例如以固體、半固體、液體(包括，例如黏性液體、膏、凝膠或溶液)、乾物質、牙粉、漱口液、口部衝洗劑、液體懸液、局部劑、粉末食物補充物、膏、凝膠、固體食物、口部清洗劑、包裝食物、晶片、錠劑、口香糖等形式給予。其他配方對於本領域任何技術人員將是顯而易見的。本發明的組合物可包含營養補充組分且可包含多種營養劑的任一種，如所公知的，包括維生素、礦物質、必需和非必需胺基酸、糖類、脂質、食品、食品補充劑等。本發明的組合物還可包含天然的或合成的增香劑和食品質量著色劑，其全部與維持本發明的菌種或菌株生存力相容。本發明的組合物可包含一種或多種膠凝劑，該膠凝劑可作為粘合劑以使該組合物附著於牙齒上。該膠凝劑的濃度可為大於該組合物重量的約2、4、6、8、10、15、20、30、40、50、60,70,80百分比或小於該組合物重量的約80、70、60、50、40、30或20百分比。用於本發明的合適的膠凝劑和粘合劑包括，例如，矽氧烷、聚環氧乙烷、聚乙烯醇、聚烷基乙烯醚-馬來酸共聚物(PVM/MA共聚物)例如，GantrezAN119、AN139和S-97、聚乙烯醇、聚丙烯酸、泊洛沙姆(PoloXamer)407(聚氧丙烯(Pluronic))、聚乙烯吡咯烷酮-乙酸乙烯酯共聚物(PVP/VA共聚物)，例如LuviskolVA和PlasdoneSPVP/VA、聚乙烯吡咯燒酮(PVP，例如K-15至K-120)、聚季銨鹽-11(Polyquaterium-Il)(Gafquat755N)、聚季銨鹽-39(Polyquaterium_39)(Merquat加3330)、卡波姆(carbomer)或羧基聚亞甲基(卡巴普(Carbopol))、羥基丙基甲基纖維素、羥基乙基纖維素、羥基丙基纖維素、玉米澱粉、羧甲基纖維素、明膠和藻酸鹽例如藻酸鈉、天然膠例如刺梧桐樹膠、黃原膠、瓜爾膠、阿拉伯樹膠、黃芪膠及其混合物。本發明的組合物中可存在溼潤劑或增塑劑。溼潤劑或增塑劑包括，例如，甘油(glycerin)、甘油(glycerol)、山梨醇、聚乙二醇、丙二醇及其他可食用的多元醇。該溼潤劑或增塑劑可以以組合物重量的約至約99%之間、約10%至約95%之間或約50%和約80%之間(或在和99%之間的任何範圍)存在。本發明的細菌可以在，例如，發酵罐中製備。該細菌可從發酵罐中收穫且可被，例如，濃縮。本發明的細菌可通過，例如，脫水或噴霧乾燥製備以供使用。噴霧乾燥通常包括在容器中及在熱空氣蒸汽條件噴灑細菌懸液。細菌還可通過微囊化(參見例如，美國專利第6，251，478號)、冷凍乾燥或通過塗以保護物質(例如脂質物質，如三醯甘油、蠟、有機酯、大豆油、棉籽油、棕櫚仁油和長鏈脂肪酸和醇的酯)製備來使用。增白牙齒的方法本發明提供了傳送向口腔表面提供一種或多種口部護理益處(包括牙齒增白)的組合物的方法，所述方法包括向受試者的牙齒和/或鄰近的軟組織施用本發明的組合物。所述菌種或菌株可以以治療有效量存在於本發明的組合物中。治療有效指有效地減輕、減少、預防和/或改善一種或多種齲齒、牙周炎、細菌感染或疾病、口部創傷、念珠菌或真菌過度生長、口臭或口乾燥引起的齲齒或牙周疾病的症狀或永久地或臨時地減輕、減少、預防或改善在牙齒上的著色或變色。治療有效也指有效地促進口腔中創傷癒合。治療有效量為本發明的組合物以足夠高的水平明顯地改善要被預防和/或治療的狀況，但以足夠低的水平避免嚴重的副作用(以合理的收益/風險比)的量，其在內科/牙科合理的判斷範圍內。本發明的組合物的治療有效量可隨待治療的特定狀況、待治療的患者的年齡和身體狀況、該狀況的嚴重程度、治療的持續時間、共同治療的性質、使用的源的具體形式和施用該組合物的特定載體而變化。本發明的組合物可以以治療有效量施用於口腔的黏膜組織、口腔的齒齦組織、牙齒表面和/或其任何組合以治療和/或預防著色和/或變色的牙齒。本發明的組合物可被吞咽或可在口腔周圍漱洗並被吐出。治療是指引起牙齒上變色或著色的量或強度的減少。預防是指，例如，在治療期間，臨時地(治療後一段時間)或長期地在牙齒上基本沒有額外的著色或變色形成。本發明的一個實施方案中，組合物被單獨施用於牙齒表面(並任選施用於直接包圍該牙齒的軟組織)，排除口腔中其他組織。這可通過，例如，直接將本發明的組合物直接抹至牙齒表面或通過用，例如，隔離層使本發明的組合物保持在牙齒上的適當位置來實現。VITA3DMasterShadeGuide提供了一系列牙齒色調(shade)，從非常亮至非常暗變化。總共有四種牙齒色調構成了在亮度範圍內這兩個端點之間的整個色彩範圍。本發明的一個實施方案中，本發明的方法提供了約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或更多的(或在1和四之間的任何值或範圍)VITA3DMaster亮度色調的變化。本發明的菌株可形成至少部分的口腔暫住菌群或土著菌群並表現出其他有益的在口腔中的預防和/或治療效果。本發明的組合物的其他口部護理益處包括，例如，治療和/或預防受試者中的齲齒、牙周炎(包括，例如早髮型牙周炎、局部的和全面的青少年牙周炎和快速進行性的和成人牙周炎)、口部細菌感染和疾病、口部創傷、念珠菌或真菌過度生長、口臭或口乾燥引起的齲齒、促進創傷癒合或其組合。治療是指這些疾病/狀況的一種或多種症狀被長期地或臨時地減輕、減少或改善。本發明的一個實施方案中，本發明的組合物可結合隔離層被施用於受試者的牙齒，以使該組合物保持與牙齒和周圍的口部組織接觸。隔離層可為固體或為可變形的且能保持本發明的組合物與牙齒的舌面、臉部面、咬合面和/或切面接觸。隔離層可包含定製的或非定製的牙齒處理託盤，該託盤包括限定U形或L形槽的至少一個或兩個側壁和底壁。本發明的組合物存在於該隔離的槽區域且該隔離可以挨著牙齒放置以使本發明的組合物與牙齒接觸。或者，該隔離層可包含柔性的材料條。該材料條可包含任何材料，包括，例如一種或多種聚合物、聚合的膜、蠟、泡沫、天然的和合成的織造材料、非織造材料、箔、紙、橡膠及其組合。該材料條可為單一層的材料或包含多於一層的層壓材料。例如，該材料條可包含兩個或多個聚合膜的層壓材料或可包含蠟和非織造材料。該材料條可具有覆蓋多顆牙齒的臉部面、咬合面、切面、咬合面和/或舌面和/或鄰近該多顆牙齒的臉部面、切面、咬合面和/或舌面的一些軟組織的任何形狀和尺寸。該材料條可被通過由本發明的組合物或施用於、塗覆於該材料條或與該材料條混合的任何其他組合物提供的粘合劑附著保持在口部表面上的適當位置。或者，該材料條可被通過來自使該材料條在牙齒的臉部面、切面、咬合面和/或舌面周圍變形的機械壓力而保持在適當位置。該材料條可為可溶的或易蝕的。該材料條溶解或腐蝕之後，本發明的組合物可被留在牙齒的臉部面、咬合面、切面和/或舌面和/或軟組織表面以繼續作用於那些表面。組合物可被給予至受試者(例如動物，包括哺乳動物例如人、非人靈長類動物、狗、貓、大鼠、小鼠、馬、山羊或兔)的口腔。本發明的組合物可以在例如，食物、水、牙粉、凝膠、膏、乳液、氣溶膠噴塗物、口香糖、錠劑、片劑、膠囊或液體懸液中經口給予。所述細菌可以事先配製入食物、水、凝膠或其他載體中或可為組合物，該組合物由使用者在使用之前添加至載體中。本發明的一個實施方案提供了使治療有效的細菌非持久地群集於受試者口腔的方法，所述方法包括將本發明的組合物給予受試者的口腔。本發明的一個實施方案中，給予的菌株不會長期地群集於口腔，而是在給予該細菌之後該菌株存在於口腔中約1天、約1周、約2周、約3周、約1個月、約3個月或約12個月。本發明的組合物可以以約IxlO3,IxlO5,IxlO7,IxlO9或IxIO11CFU(或在約IxlO3和約IxlO11之間的任何範圍或值)的活細菌劑量給予。本發明的組合物的劑量可以以每天三次、每天兩次、每天一次、隔天一次、每周兩次、每周一次、兩周一次或每月一次給予。可每天給予一、二或多劑量的本發明的組合物，持續約1周、約2周、約1個月、約2個月、約3個月、約一年或更長時間。本發明的組合物可每天使用，作為口部護理方案一部分。將本發明的組合物用作日常口部護理方案一部分，使得使用者能實現並維持多種需要的口部護理益處，包括但不限於白的、無牙垢的牙齒。可將本發明的組合物施用於牙齒和/或軟組織約1分鐘至約8小時。某些實施方案中，該組合物可施用超過約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、30、40、50、60、90、120、150、180、210、240、270、300、330、360、390、420、450、480分鐘(或在約1和約480分鐘之間的任何範圍或值)和/或少於480、450、420、390、360、330、300、270、240、210、180、150、120、90、60、50、40、30、20、15、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1分鐘(或在約480和約1分鐘之間的任何範圍或值)及其任何組合，其中所述菌種或菌株具有該組合物重量的約0.01%和約50%之間或約0.至約25%或約1.0%至約10%或在0.01%和50%之間的任何範圍或值的濃度。此方案可有利地每天使用一次，使用超過約一個月、兩個月、四個月、六個月、十二個月、十八個月、兩年、五年、八年、十年和/或少於約十五年、十年、八年、五年、兩年、18個月、12個月、六個月、四個月、兩個月、一個月及其任何組合。另一實施方案中此方案可有利地每天使用一次或兩次，使用超過約一個月且少於約5年。本發明的試劑盒可包含一個月、兩個月、三個月、四個月、五個月、六個月或12個月的本發明組合物的供應量。本發明的組合物可被包裝且進而多數包裝的組合物可在儲存容器或外部包裝或紙盒中供應。本文任何地方引用的所有專利、專利申請和其他科學或技術作品均通過引用以全文形式結合至本文。合適的情況下，本文說明性描述的發明可在缺乏本文沒有具體公開的任何要素、限制時被實踐。因此，例如，本文的每個例子中術語「包含」、「基本上由...組成」和「由...組成」的任一個可被其他兩個術語的任一個替換。已使用的術語和表達用作描述而非限制的術語，且沒有意圖在使用該術語和表達時排除所顯示和描述的特徵的任何等同物或其中的部分，而是已認識到在本發明要求保護的範圍內的各種修正是可能的。因此，應理解雖然本發明已經通過實施方案被具體公開，但本文公開的概念的任選特徵、修改和變體可被本領域技術人員採用，且此種修改和變體被認為是在本發明的範圍內，如說明書和附加的權利要求所限定的。此外，本發明的特徵和方面按照馬庫什組或其他可選的組合的方式描述時，本領域技術人員將認識到本發明還藉此按照馬庫什組或其他組的任何個體成員或成員的子群描述。實施例天然的綠色鏈球菌株口腔鏈球菌(KJ3sm)和乳房鏈球菌(KJkm)可通過產生抑制牙周病原體生長的過氧化氫促進牙周健康。當在糖，例如葡萄糖或蔗糖的存在下培養這些微生物，且在大氣中有氧存在時，過氧化氫的產生為糖酵解的正常終端產物。將著色的牙科陶瓷材料(著色的牙釉質的代表)用口腔鏈球菌的懸液處理以測定是否口腔鏈球菌能促進牙齒增白。因此，口腔鏈球菌的懸液在葡萄糖和氧存在下體外培養，以確定它是否可產生足夠的過氧化氫來實現對於著色的類似於牙齒的陶瓷盤的可測量的增白效果。十個牙科陶瓷盤(Dr.KennethJ.Anusavice的惠贈，UniversityofFlorida,Gainesville,FL)用茶(Lipton)禾口氯己定(0.12%,HiTechPhamacalCo.,Amityville,NY)著色八周時間。將每個盤置於50ml錐形(Falcon)塑料試驗管中。加入3ml調製的Lipton茶(將家庭型Lipton茶包加入200ml沸水中5min以製備)以覆蓋這些盤。在室溫孵育M小時後，通過潷析將茶去除，將該盤用5ml自來水漂洗，然後將茶溶液用:3ml0.12%氯己定替換，持續M小時。重複步驟2和3，進行4周，周一至周五，且該盤保持在周五的溶液中經過周末。使用AChromaMeterCR-400色度計(Minolta，Ramsey，NJ)定量測量該盤的亮度。該盤的亮度值通過將該設備的測量頭置於盤上直接產生。使用標準顯色板校準色度計。處理階段在得到最終色度計讀數一天後開始。九份從起子板(starterplate)接種的口腔鏈球菌株KJ3sm的單獨培養物，在30ml補充0.碳酸氫鈉/0.5%葡萄糖/lmg/ml硫酸鏈黴素的iToddHewitt肉湯(Difco;BactoCatalogNo.249240)中，在環境搖床OOOrpm)中於37°C生長。過夜培養後，在室溫離心收集細胞，用IOmlAmies培養基洗一次，然後重懸於30ml含有或不含右旋糖(葡萄糖；FisherScientific,CatalogNo.D16)和過氧化氫酶(SigmaAldrichCatalogNo.C93225G)的Amies培養基中，如表1所示。對照(組D)包含30ml有右旋糖和鈍化的過氧化氫酶的Amies培養基。在指明時，過氧化氫酶通過在沸水浴中加熱5分鐘鈍化。將步驟2和圖1描述的整個30ml部分加入至每管包含1個著色的牙科陶瓷盤的50mli^lcon管中。這些處理步驟每天重複，持續4周，周一至周五，且該盤保持於周五的溶液中經過周末。表1處理條件組盤序號KJ3sm(~IO9cfu/ml)右旋糖(0.5%)過氧化氫酶(3000U/ml)A11,2,3++鈍化的B24,5,6++有活性的C37,8,9+_鈍化的D410-+4屯化的1實驗的2過氧化氫酶對照3右旋糖對照4Amies對照在處理階段每周測量每個盤的亮度值，執行該測量四周時間。使用組平均值(士S.D.；圖1)將L值(亮度)作為時間的函數繪圖。組A數據的趨勢線具有2.37的斜率，該值明顯大於組B(-0.M)、組C(0.52)和組D(-0.84)的趨勢線斜率，這表明組A中的盤以比其他組的盤快得多的速率隨時間變得更加光亮或更白。在4周實驗期結束時，組A的陶瓷盤的變光亮或增白對於肉眼是顯而易見的(圖2)。對組間和組內的L值進行比較以分析統計學顯著性差異。進行4(處理A、B、C、D)X5(時間:0、1、2、3、4周)混合模型重複測量的AN0VA，進行Greenhouse-Geisser校正，測定在不同時間各種處理對於L值的微分影響。後續分析測定每個時間點的處理效果。此後使用Bonferroni校正的t檢驗以測定這些處理之間的顯著差異。所有的分析使用ρ=.05的族(family-wise)。結果表明處理(F(3，6)=6.0，p<.05)和時間(F(l.3，24)=12.7,ρ=.005)的顯著效果，該效果被處理X時間相互作用(W4，24)=58.7，p<.001)取代。此相互作用的分解在基線(時間0)和第1周(F(3，6).05)產生非顯著的結果。在2-4周，處理組A產生比處理B和D明顯更大的效果(t(3)>8.1，ρ彡.01)，且僅在第4周期間產生比處理C明顯更大的效果(W2)=4.l，p=.015)。在處理B、C和D之間未觀察到顯著差異(P>.05)。有葡萄糖和空氣存在時培養的口腔鏈球菌在將茶和氯己定著色的陶瓷盤暴露於口腔鏈球菌四周後對該陶瓷盤產生了統計學顯著的增白效果。在培養基中包含過氧化氫酶顯著減少了任何增白效果，這表明增白的機理涉及由細胞產生過氧化氫。過氧化物的產生和由此的增白效果，依賴於可代謝的碳源的存在，例如葡萄糖。組C中觀察到的少量增白效果可能是由於殘留的來自儲存的糖類(例如細胞內多糖的形式)代謝的過氧化物的產生。圖1中組A的L值作為時間函數的曲線沒有達到穩定水平，這表明最大增白效果尚未在本研究的時限內出現，且使用KJ3sm的更長時間的處理將可能實現更強的增白效果。權利要求1.一種增白受試者牙齒的方法，所述方法包括向受試者口腔給予包含一種或多種分離的、非致病的、產過氧化氫的菌種或菌株的組合物。2.權利要求1的方法，其中所述一種或多種分離的、非致病的、產過氧化氫的菌種或菌株為乳桿菌屬、雙歧桿菌屬、綠色鏈球菌屬、明串珠菌屬、片球菌屬、乳球菌屬或其組合。3.權利要求1的方法，其中所述一種或多種分離的、非致病的、產過氧化氫的菌種或菌株為(a)—種或多種分離的口腔鏈球菌株或(b)—種或多種分離的乳房鏈球菌株或(c)其組合。4.權利要求1的方法，其中所述一種或多種分離的、非致病的、產過氧化氫的菌種或菌株被單獨地給予至受試者口腔中牙齒表面和直接包圍該牙齒表面的軟組織。5.權利要求1的方法，其中所述受試者為哺乳動物。6.權利要求1的方法，其中將所述組合物給予受試者約每天一次或兩次、約每周一次或約每月一次。7.權利要求1的方法，其中所述組合物還包含一種或多種缺乏乳酸脫氫酶的變異鏈球菌種或菌株。8.權利要求7的方法，其中所述一種或一種或多種缺乏乳酸脫氫酶的變異鏈球菌種包含鼠鏈球菌。9.權利要求1的方法，其中所述組合物還包含一種或多種碳源，所述碳源可被所述一種或多種分離的、非致病的、產過氧化氫的菌種或菌株代謝。10.一種治療著色的牙齒、齲齒、牙周炎、口部細菌感染、口部創傷、念珠菌或真菌過度生長、口臭和口乾燥引起的齲齒的方法，所述方法包括向受試者的口腔給予包含一種或多種分離的、非致病的、產過氧化氫的菌種或菌株和一種或多種缺乏乳酸脫氫酶的變異鏈球菌種或菌株的組合物。11.權利要求10的方法，其中所述一種或多種分離的、非致病的、產過氧化氫的菌種或菌株為乳桿菌屬、雙歧桿菌屬或綠色鏈球菌屬、明串珠菌屬、片球菌屬、乳球菌屬或其組合。12.權利要求10的方法，其中所述一種或多種分離的、非致病的、產過氧化氫的菌種或菌株和一種或多種缺乏乳酸脫氫酶的變異鏈球菌種或菌株被單獨地給予至受試者口腔的牙齒表面和直接包圍該牙齒表面的軟組織。13.權利要求10的方法，其中所述受試者為哺乳動物。14.權利要求10的方法，其中將所述組合物給予受試者約每天一次或兩次、約每周一次或約每月一次。15.權利要求10的方法，其中所述一種或一種或多種缺乏乳酸脫氫酶的變異鏈球菌種包含鼠鏈球菌。16.權利要求10的方法，其中所述組合物還包含一種或多種碳源，所述碳源可被所述一種或多種分離的、非致病的、產過氧化氫的菌種或菌株或所述一種或多種缺乏乳酸脫氫酶的變異鏈球菌種或菌株或兩者代謝。17.用於增白受試者牙齒的牙齒處理設備，所述設備包含(a)牙齒增白組合物，所述組合物包含一種或多種分離的、非致病的、產過氧化氫的菌種或菌株；和(b)鄰近所述牙齒增白組合物的隔離層。18.權利要求17的牙齒處理設備，其中所述隔離層包含牙齒處理託盤，所述託盤包括限定U形或L形槽的至少一個側壁和底壁。19.權利要求17中限定的牙齒處理設備，其中所述隔離層包含柔性條。20.權利要求17的牙齒處理設備，其中所述一種或多種分離的、非致病的、產過氧化氫的菌種或菌株為乳桿菌屬、雙歧桿菌屬、綠色鏈球菌屬、明串珠菌屬、片球菌屬、乳球菌屬或其組合。全文摘要本發明提供了用於增白受試者牙齒的組合物和方法，所述方法包括向受試者口腔給予一種或多種分離的、非致病的、產過氧化氫的菌株。文檔編號A61K35/74GK102123693SQ200980131840公開日2011年7月13日申請日期2009年6月11日優先權日2008年6月13日發明者J·D·希爾曼申請人:奧潔克公司