一種人參果脫毒組培苗的病毒快速檢測方法

2023-05-31 02:39:56

專利名稱：一種人參果脫毒組培苗的病毒快速檢測方法
技術領域：
本發明涉及植物脫毒組培快繁技術領域，尤其涉及一種人參果脫毒組培苗的病毒快速檢 測方法。
背景技術：
人參果(&tow朋mwn'o^ff^")又名香豔果，為茄科直立多年生草本或亞灌木，原產南 美洲的秘魯、厄瓜多地區。其性喜溫曖、涼爽、千燥氣候，生長適溫18 2(TC。人參果以 漿果供食，低糖、低脂，可炒、燒、炸、做湯、鮮食等。據分析，其果實富含人體所需的維 生素及各種微量元素銅、鉀、鎂、硒等。食用人參果，對各種癌症、高血壓、糖尿病、冠 心病等有較好的防治效果，被譽為抗癌之王、綠色保健珍品。近年來國內引進推廣種植，且 適應性廣、抗逆性強，生產效益高，市場前景好。人參果常規栽培以莖段扦插繁殖為主，但 幼苗和成株極易感染菸草花葉病毒、黃瓜花葉病毒和馬鈴薯M病毒等多種病毒，體內病毒感 染嚴重，並逐代積累，嚴重影響其生長發育，表現為葉片皺縮、變小，死亡率較高，坐果率 低，產量大幅度下降。通過植物莖尖脫毒培養進行種苗脫毒和快速繁殖是生產無病毒種苗的 有效途徑。無毒苗生產需要快速、靈敏、特異的檢測方法。指示植物檢測是一種準確、可靠的檢測 方法，至今人參果病毒病的檢測仍主要依靠於指示植物檢測，按照常規做法，首先必須將試 管苗進行生根培養，移栽成活後才能用指示植物進行檢測，並以指示植物檢測的結果作為判 斷待檢植物是否帶毒的最終依據。但這種方法費時較長，需要l年的時間才能完成，並且病 毒病的症狀表現易受環境因素的影響。因此需要尋找更好的人參果脫毒組培苗的病毒快速檢 測方法。發明內容本發明要解決上述現有技術的缺陷，提供一種人參果脫毒組培苗的病毒快速檢測方法。本發明目的通過以下技術方案來實現這種人參果脫毒組培苗的病毒快速檢測方法，按 如下步驟進行1)、培養基的配製，包括基本培養基和組培各階段培養基的各組分與每升所含重量為-(1) 基本培養基選用MS培養基或1/2MS培養基，蔗糖或白糖20 30g/L，瓊脂7 9 g/L， pH5.6 5.8;(2) 誘導培養基MS+BA0,5 2.0mg/L+IAA0.05 0.5mg/L;(3) 微扦插培養基MS+BA0.1 1.0mg/L+NAA0.05 0.5mg/L;(4) 壯苗培養基MS+BA0.05 0.5mg/L+NAA0.01 0.1mg/L+PP333 0.1 0. 5mg/L;(5) 微嫁接培養基MS+BA0.05 0.5mg/L+IBA0.05 0.5mg/L;(6) 生根培養基l/2MS+NAA0.05 0.5mg/L;(7) 無菌播種培養基1/2MS。2) 、人參果莖尖脫毒培養(1) 外植體的選取與滅菌從盆栽植株或大田植株上剪取頂芽或帶腋芽莖段為外植體， 經滅菌處理，作為脫毒組培用的外植體；(2) 莖尖培養將滅菌處理後的頂芽或帶腋芽莖段在無菌條件下，在40倍的雙筒解剖 鏡下，摘出0.2 0.3111111大小的帶1 2個葉原基的莖尖，接種在誘導培養基上，在培養條件 下培養20 30天後，從莖尖誘導形成幼芽，再培養20 30天，莖不斷抽長，培養成約3 5 節、高5 7cm的幼苗；G)微扦插培養將誘導形成的幼苗切成一節一芽、約3 5節轉接到微扦插培養基上， 在培養條件下培養30 45天每節又培養成約3 5節、高5 7cm的幼苗；根據對幼苗數量 的需求，每隔30 45天按同樣方法進行幼苗再微扦插培養；(4)壯苗培養將微扦插培養成約3 5節、高5 7cm的幼苗切成一節一芽、約3 5 節接種到壯苗培養基上，在培養條件下培養30 45天，幼苗約2 3節、高3 5cm、莖變粗；3) 、指示植物番茄的無菌苗培養(1) 外植體的選取與滅菌取番茄的種子，經滅菌處理，作為無菌播種的外植體；(2) 無菌播種培養將滅菌處理後的種子接種在無菌播種培養基上，在培養條件下培養20 30天後，從種子培育成高約5 7cm的幼苗；(3) 微扦插培養將誘導形成的幼苗切成一節一芽、約3 5節轉接到微扦插培養基上， 在培養條件下培養30 45天每節又培養成約3 5節、高5 7cm的幼苗；根據對幼苗數量 的需求，每隔30 45天按同樣方法進行幼苗再微扦插培養。4) 、微嫁接培養(1) 微嫁接砧木準備將步驟2)人參果莖尖脫毒培養的幼苗在無菌操作條件下切成一 個個帶腋芽的莖段，用解剖刀將腋芽小心的去掉，並在莖段的上部縱切一個長約0.5cm的切 口，作為微嫁接砧木；(2) 微嫁接接穗準備將步驟3)無菌苗培養的指示植物番茄的幼苗切成帶單芽的莖段， 芽上面的部分留0.3 0.5cm，芽下面的部分留0.5 1.0cm，並將其下部削成楔形，削麵約長 0.3cm，作為微嫁接接穗；(3) 微嫁接器準備將步驟2)人參果莖尖脫毒培養的幼苗在無菌操作條件下切成一個個長約1.5cm的不帶腋芽的莖段，用解剖刀在莖段中間縱切一個長約0.5cm的開口；(4) 微嫁接將微嫁接器套入微嫁接砧木的切口下方，然後將微嫁接接穗插入微嫁接砧 木上端的縱切口中，最後將微嫁接砧木的切口下方的微嫁接器往上移至微嫁接砧木的切口處， 將微嫁接砧木的切口和微嫁接接穗固定牢；(5) 微嫁接苗培養將嫁接苗接種到微嫁接培養基中進行培養，在培養條件下經45 60天的培養，指示植物苗生長正常、無病毒病的症狀(葉片相對平展、翠綠、單葉面積較大) 的為脫病毒苗；指示植物表現出病毒病的症狀(葉片稍皺縮、葉緣上巻、暗綠、單葉面積較 小)的為未脫除病毒苗。5)、脫病毒組培苗的增殖培養(1) 微扦插培養將步驟4)檢測出脫病毒的同一編號的組培苗切成一節一芽、約3 5 節轉接到微扦插培養基上，在培養條件下培養30 45天每節又培養成約3 5節、高5 7cm 的幼苗；根據對幼苗數量的需求，每隔30 45天按同樣方法進行幼苗再微扦插培養；(2) 壯苗培養將微扦插培養成約3 5節、高5 7cm的幼苗切成一節一芽、約3 5 節接種到壯苗培養基上，在培養條件下培養30 45天，幼苗約2 3節、高3 5cm、莖變粗；(3) 生根培養將培養的壯苗接種在生根培養基中進行生根培養，在培養條件下培養 20 30天後，幼苗長高成約5 7cm、苗基部長出5 10根細根；(4) 移栽將生根組培苗移栽於基質中，培育1 2個月至成苗。(5) 定植將移栽苗定植在大田中，培育6 10個月至植株。所述的人參果脫毒組培苗的病毒快速檢測方法，其特徵在於所述的培養基，包括基本 培養基和組培各階段培養基的各組分與每升所含重量為(1 )基本培養基選用MS培養基或1/2MS培養基，瓊脂8 g/L， pH5.8;(2) 誘導培養基MS+BAlmg/L+IAA0.1mg/L+蔗糖30g/L;(3) 微扦插培養基MS+BA0.5mg/L+NAA0.1 mg/L+白糖30g/L;(4) 壯苗培養基MS+ BA O.lmg /L+ NAA0.05mg/L +PP333 0.2mg /L+白糖30g/L;(5) 微嫁接培養基MS+BA0.1mg/L+IBA0.1mg/L+蔗糖40g/L;(6) 生根培養基1/2MS+NAA0.1mg/L+白糖20g/L;(7) 無菌播種培養基1/2MS+白糖20g/L。 所述的人參果脫毒組培苗的病毒快速檢測方法，所述的人參果莖尖脫毒培養時外植體的滅菌處理是經75%酒精浸泡0.5 1.0min，再用0.1%升汞溶液滅菌10 15min，最後用無菌水 衝洗3 5次。所述的人參果脫毒組培苗的病毒快速檢測方法，所述的指示植物番茄的無菌苗培養時種子的滅菌處理是經75。/。酒精浸泡0.5 1.0min，再用0.1%升汞溶液滅菌20 30min，最後用無 菌水衝洗3 5次。所述的人參果脫毒組培苗的病毒快速檢測方法，所述的人參果莖尖脫毒培養和脫病毒組 培培養時各組培階段的培養條件是，培養溫度為25士2X:，光照光強為2500 3000Lx，光照 時間為12h/d。所述的人參果脫毒組培苗的病毒快速檢測方法，所述的指示植物番茄的無菌苗培養時各 階段的培養條件是，培養溫度為25士2'C，光照光強為2000 2500Lx，光照時間為10h/d。所述的人參果脫毒組培苗的病毒快速檢測方法，所述的嫁接苗培養時的培養條件是，培 養溫度為25士2。C，光照光強為3000 3500Lx，光照時間為16h/d。所述的人參果脫毒組培苗的病毒快速檢測方法，所述的移栽基質由泥炭珍珠巖蛭石按體積比2: h l配製而成。 本發明的有益效果是(1) 微嫁接材料(脫毒苗)易於在較小的空間和較短的時間內大量繁殖，且不受季節和 外界氣候的影響。(2) 所用的培養基、組培條件和微嫁接器適於人參果脫毒苗的微嫁接培養，利於嫁接口 的癒合，平均嫁接成功率超過90 %，可完全滿足病毒檢測的要求。(3) 與傳統的田間指示植物檢測相比，大大縮短了檢測所需的時間，傳統的方法需要l 年的時間才能完成，本方法只需2個月就可檢測出結果。(4) 該種方法不受時間限制、環境因素的影響，可常年在實驗室條件下進行，非常實用， 可用於人參果脫毒苗的病毒快速檢測和脫毒苗的規模化生產。
具體實施方式
通過以下實施例對本發明作進一步的詳細說明，但本發明的內容並不局限於此。實施例l:1)、培養基的配製，包括基本培養基和組培各階段培養基的各組分與每升所含重量為(1) 基本培養基選用MS培養基或1/2MS培養基，瓊月旨8g/L， pH5.8;(2) 誘導培養基MS+BAlmg/L+IAA0.1mg/L+蔗糖30g/L;(3) 微扦插培養基MS+BA0.5mg/L+NAA0.1 mg/L+白糖30g/L;(4) 壯苗培養基MS+BA0.1mg/L+NAA0.05mg/L+PP333 0.2mg/L+白糖30g/L;(5) 微嫁接培養基MS+BA0.1mg/L+IBA0.1mg/L+蔗糖40g/L;(6) 生根培養基1/2MS+NAA0.1mg/L+白糖20g/L;(7)無菌播種培養基1/2MS+白糖20g/L。2) 、人參果莖尖脫毒培養(1) 外植體的選取與滅菌從盆栽植株或大田植株上剪取頂芽為外植體，經滅菌處理， 作為脫毒組培用的外植體；(2) 莖尖培養將滅菌處理後的頂芽或帶腋芽莖段在無菌條件下，在40倍的雙筒解剖 鏡下，摘出0.2 0.3皿大小的帶1 2個葉原基的莖尖，接種在誘導培養基上，在培養條件 下培養20 30天後，從莖尖誘導形成幼芽，再培養20 30天，莖不斷抽長，培養成約3 5 節、高5 7cm的幼苗；(3) 微扦插培養將誘導形成的幼苗切成一節一芽、約3 5節轉接到微扦插培養基上， 在培養條件下培養30 45天每節又培養成約3 5節、高5 7cm的幼苗；根據對幼苗數量 的需求，每隔30 45天按同樣方法進行幼苗再微扦插培養；(4) 壯苗培養將微扦插培養成約3 5節、高5 7cm的幼苗切成一節一芽、約3 5 節接種到壯苗培養基上，在培養條件下培養30 45天，幼苗約2 3節、高3 5cm、莖變粗；3) 、指示植物番茄的無菌苗培養(1) 外植體的選取與滅菌取番茄的種子，經滅菌處理，作為無菌播種的外植體；(2) 無菌播種培養將滅菌處理後的種子接種在無菌播種培養基上，在培養條件下培養20 30天後，從種子培育成高約5 7cm的幼苗；(3) 微扦插培養將誘導形成的幼苗切成一節一芽、約3 5節轉接到微扦插培養基上， 在培養條件下培養30 45天每節又培養成約3 5節、高5 7cm的幼苗；根據對幼苗數量 的需求，每隔30 45天按同樣方法進行幼苗再微扦插培養。4) 、微嫁接培養(1) 微嫁接砧木準備將步驟2)人參果莖尖脫毒培養的幼苗在無菌操作條件下切成一 個個帶腋芽的莖段，用解剖刀將腋芽小心的去掉，並在莖段的上部縱切一個長約0.5cm的切 口，作為微嫁接砧木；(2) 微嫁接接穗準備將步驟3)無菌苗培養的指示植物番茄的幼苗切成帶單芽的莖段， 芽上面的部分留0.3 0.5cm，芽下面的部分留0.5 1.0cm，並將其下部削成楔形，削麵約長 0.3cm，作為微嫁接接穗；(3) 微嫁接器準備將步驟2)人參果莖尖脫毒培養的幼苗在無菌操作條件下切成一個 個長約1.5cm的不帶腋芽的莖段，用解剖刀在莖段中間縱切一個長約0.5cm的開口；(4) 微嫁接將微嫁接器套入微嫁接砧木的切口下方，然後將微嫁接接穗插入微嫁接砧 木上端的縱切口中，最後將微嫁接砧木的切口下方的微嫁接器往上移至微嫁接砧木的切口處，將微嫁接砧木的切口和微嫁接接穗固定牢；(5)微嫁接苗培養將嫁接苗接種到微嫁接培養基中進行培養，在培養條件下經45 60天的培養，指示植物苗生長正常、無病毒病的症狀(葉片相對平展、翠綠、單葉面積較大) 的為脫病毒苗；指示植物表現出病毒病的症狀(葉片稍皺縮、葉緣上巻、暗綠、單葉面積較 小)的為未脫除病毒苗。5)、脫病毒組培苗的增殖培養(1) 微扦插培養將步驟4)檢測出脫病毒的同一編號的組培苗切成一節一芽、約3 5 節轉接到微扦插培養基上，在培養條件下培養30 45天每節又培養成約3 5節、高5 7cm 的幼苗；根據對幼苗數量的需求，每隔30 45天按同樣方法進行幼苗再增殖；(2) 壯苗培養將微扦插培養成約3 5節、高5 7cm的幼苗切成一節一芽、約3 5 節接種到壯苗培養基上，在培養條件下培養30 45天，幼苗約2 3節、高3 5cm、莖變粗；(3) 生根培養將培養的壯苗接種在生根培養基中進行生根培養，在培養條件下培養 20 30天後，幼苗長高成約5 7cm、苗基部長出5 10根細根；(4) 移栽將生根組培苗移栽於基質中，培育1 2個月至成苗。(5) 定植將移栽苗定植在大田中，培育6 10個月至植株。 所述的人參果脫毒組培苗的病毒快速檢測方法，所述的人參果莖尖脫毒培養時外植體的滅菌處理是經75M酒精浸泡0.5 1.0min，再用0.1%升汞溶液滅菌12min，最後用無菌水衝洗 3 5次。所述的人參果脫毒組培苗的病毒快速檢測方法，所述的指示植物番茄的無菌苗培養時種 子的滅菌處理是經75Q/。酒精浸泡0.5 1.0min，再用0.1%升汞溶液滅菌25min，最後用無菌水 衝洗3 5次。所述的人參果脫毒組培苗的病毒快速檢測方法，所述的人參果莖尖脫毒培養和脫病毒組 培培養時各組培階段的培養條件是，培養溫度為25士2'C，光照光強為2500 3000Lx，光照 時間為12h/d。所述的人參果脫毒組培苗的病毒快速檢測方法，所述的指示植物番茄的無菌苗培養時各 階段的培養條件是，培養溫度為25士2。C，光照光強為2000 2500Lx，光照時間為10h/d。所述的人參果脫毒組培苗的病毒快速檢測方法，所述的嫁接苗培養時的培養條件是，培 養溫度為25土2。C，光照光強為3000 3500Lx，光照時間為16h/d。所述的人參果脫毒組培苗的病毒快速檢測方法，所述的移栽基質由泥炭珍珠巖蛭石按體積比2: 1: l配製而成。 實施例2:本例中，其基本培養基選用MS培養基或1/2MS培養基，瓊脂7g/L， pH5.6;誘導培 養基MS+ BA 0.5mg /L+IAA 0.05mg/L +蔗糖30g/L;微扦插培養基MS+ BA O.lmg /L+ NAA 0.05 mg /L +白糖30g/L;壯苗培養基MS+ BA 0.05mg /L+ NAA 0.01mg/L+PP333 O.lmg /L +白 糖30g/L;微嫁接培養基MS+ BA 0.05mg /L+ IBA 0.05mg/L +蔗糖40g/L;生根培養基1/2MS+ NAA0.05mg/L+白糖20g/L;無菌播種培養基1/2MS+蔗糖20g/L。人參果莖尖脫毒培養時取 頂芽為外植體，經75。/。酒精浸泡0.5 1.0min，再用0.1%升汞溶液滅菌10min，最後用無菌水 衝洗3 5次。指示植物番茄的無菌苗培養時種子的滅菌處理是經75%酒精浸泡0.5 1.0min， 再用0.1%升汞溶液滅菌30min,最後用無菌水衝洗3 5次。其餘步驟，條件均同於實施例1。實施例3:本例中，其基本培養基選用MS培養基或1/2MS培養基，瓊脂9g/L， pH5.7;誘導培 養基MS+ BA 2.0mg /L+ IAA 0.5mg/L +蔗糖；微扦插培養基MS+ BA 1 .Omg /L+ NAA 0.5 mg /L+白糖30g/L;壯苗培養基MS+BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+PP333 0 . 5mg/L +白糖30g/L; 微嫁接培養基MS+BA0.5mg/L+IBA0.5mg/L+蔗糖40g/L;生根培養基1/2MS+NAA 0.5mg/L+白糖20g/L;無菌播種培養基1/2MS+白糖20g/L。人參果莖尖脫毒培養時取帶腋 芽莖段為外植體，經75。/。酒精浸泡0.5 1.0min，再用0.1%升汞溶液滅菌15min，最後用無菌 水衝洗3 5次。指示植物番茄的無菌苗培養時種子的滅菌處理是經75%酒精浸泡0.5 l.Omin，再用0.1。/。升汞溶液滅菌20min，最後用無菌水衝洗3 5次。其餘步驟，條件均同於 實施例1。實施例4:本例中，其基本培養基選用MS培養基或1/2MS培養基，蔗糖或白糖20 40g/L，瓊 月旨7 9g/L， pH5.6 5.8;誘導培養基MS+BA0.5 2.0mg/L+IAA0.05 0.5mg/L; 微扦 插培養基MS+BA0.1 1.0mg/L+NAA0.05 0.5mg/L;壯苗培養基MS+BA0.05 0.5mg /L+NAA0.01 0.1mg/L+PP333 0.1 0. 5mg/L;微嫁接培養基MS+BA0.05 0.5mg/L+IBA 0.05 0.5mg/L;生根培養基1/2MS+NAA0.05 0.5mg/L;無菌播種培養基1/2MS。人參 果莖尖脫毒培養時取頂芽或帶腋芽莖段為外植體，經75n/。酒精浸泡0.5 1.0min，再用0.1% 升汞溶液滅菌10 15min，最後用無菌水衝洗3 5次。指示植物番茄的無菌苗培養時種子的 滅菌處理是經75。/。酒精浸泡0.5 1.0min，再用0.1%升汞溶液滅菌20 30min，最後用無菌水 衝洗3 5次。其餘步驟，條件均同於實施例l。除上述實施例外，本發明還可以有其他實施方式。凡採用等同替換或等效變換形成的技 術方案，均落在本發明要求的保護範圍。
權利要求
1、一種人參果脫毒組培苗的病毒快速檢測方法，其特徵在於該方法按以下步驟進行1)、培養基的配製，包括基本培養基和組培各階段培養基的各組分與每升所含重量為(1)基本培養基選用MS培養基或1/2MS培養基，蔗糖或白糖20～40g/L，瓊脂7～9g/L，pH5.6～5.8；(2)誘導培養基MS+BA 0.5～2.0mg/L+IAA 0.05～0.5mg/L；(3)微扦插培養基MS+BA 0.1～1.0mg/L+NAA 0.05～0.5mg/L；(4)壯苗培養基MS+BA0.05～0.5mg/L+NAA0.01～0.1mg/L+PP3330.1～0.5mg/L；(5)微嫁接培養基MS+BA 0.05～0.5mg/L+IBA 0.05～0.5mg/L；(6)生根培養基1/2MS+NAA 0.05～0.5mg/L；(7)無菌播種培養基1/2MS；2)、人參果莖尖脫毒培養(1)外植體的選取與滅菌剪取頂芽或帶腋芽莖段為外植體，經滅菌處理，作為脫毒組培用的外植體；(2)莖尖培養將滅菌處理後的頂芽或帶腋芽莖段在無菌條件下，在雙筒解剖鏡下，摘出0.2～0.3mm大小的帶1～2個葉原基的莖尖，接種在誘導培養基上，在培養條件下培養20～30天後，從莖尖誘導形成幼芽，再培養20～30天，培養成3～5節、高5～7cm的幼苗；(3)微扦插培養將誘導形成的幼苗切成一節一芽、3～5節轉接到微扦插培養基上，在培養條件下培養30～45天每節又培養成3～5節、高5～7cm的幼苗；根據對幼苗數量的需求，每隔30～45天按同樣方法進行幼苗再微扦插培養；(4)壯苗培養將微扦插培養成3～5節、高5～7cm的幼苗切成一節一芽、3～5節接種到壯苗培養基上，在培養條件下培養30～45天，幼苗2～3節、高3～5cm、莖變粗；3)、指示植物番茄的無菌苗培養(1)外植體的選取與滅菌取番茄的種子，經滅菌處理，作為無菌播種的外植體；(2)無菌播種培養將滅菌處理後的種子接種在無菌播種培養基上，在培養條件下培養20～30天後，從種子培育成高5～7cm的幼苗；(3)微扦插培養將誘導形成的幼苗切成一節一芽、3～5節轉接到微扦插培養基上，在培養條件下培養30～45天每節又培養成3～5節、高5～7cm的幼苗；根據對幼苗數量的需求，每隔30～45天按同樣方法進行幼苗再微扦插培養；4)、微嫁接培養(1)微嫁接砧木準備將步驟2)人參果莖尖脫毒培養的幼苗在無菌操作條件下切成一個個帶腋芽的莖段，將腋芽去掉並在莖段的上部縱切一個長0.5cm的切口，作為微嫁接砧木；(2)微嫁接接穗準備將步驟3)無菌苗培養的指示植物番茄的幼苗切成帶單芽的莖段，芽上面的部分留0.3～0.5cm，芽下面的部分留0.5～1.0cm，並將其下部削成楔形，削麵長0.3cm，作為微嫁接接穗；(3)微嫁接器準備將步驟2)人參果莖尖脫毒培養的幼苗在無菌操作條件下切成一個個長1.5cm的不帶腋芽的莖段，用解剖刀在莖段中間縱切一個長0.5cm的開口；(4)微嫁接將微嫁接器套入微嫁接砧木的切口下方，然後將微嫁接接穗插入微嫁接砧木上端的縱切口中，最後將微嫁接砧木的切口下方的微嫁接器往上移至微嫁接砧木的切口處，將微嫁接砧木的切口和微嫁接接穗固定牢；(5)微嫁接苗培養將嫁接苗接種到微嫁接培養基中進行培養，在培養條件下經45～60天的培養，指示植物苗生長正常、無病毒病的症狀的為脫病毒苗；指示植物表現出病毒病的症狀的為未脫除病毒苗；5)、脫病毒組培苗的增殖培養(1)微扦插培養將步驟4)檢測出脫病毒的同一編號的組培苗切成一節一芽、3～5節轉接到微扦插培養基上，在培養條件下培養30～45天每節又培養成3～5節、高5～7cm的幼苗；根據對幼苗數量的需求，每隔30～45天按同樣方法進行幼苗再微扦插培養；(2)壯苗培養將微扦插培養成約3～5節、高5～7cm的幼苗切成一節一芽、約3～5節接種到壯苗培養基上，在培養條件下培養30～45天，幼苗約2～3節、高3～5cm、莖變粗；(3)生根培養將培養的壯苗接種在生根培養基中進行生根培養，在培養條件下培養20～30天後，幼苗長高成5～7cm、苗基部長出5～10根細根；(4)移栽將生根組培苗移栽於基質中，培育1～2個月至成苗；(5)定植將移栽苗定植在大田中，培育6～10個月至植株。
2、根據權利要求1所述的人參果脫毒組培苗的病毒快速檢測方法，其特徵在於所述的培養基，包括基本培養基和組培各階段培養基的各組分與每升所含重量為-(1) 基本培養基選用MS培養基或1/2MS培養基，瓊脂8 g/L， pH5.8;(2) 誘導培養基MS+ BA l.Omg/L+ IAA0.1mg/L +蔗糖30g/L;(3) 微扦插培養基MS+BA0.5mg/L+NAA0.1 mg/L+白糖30g/L;(4) 壯苗培養基MS+BA0.1mg/L+NAA0.05mg/L+PP333 0.2mg/L+白糖30g/L;(5) 微嫁接培養基MS+BA0.1mg/L+IBA0.1mg/L+蔗糖40g/L;(6) 生根培養基1/2MS+NAA0.1mg/L+白糖20g/L;(7) 無菌播種培養基1/2MS+白糖20g/L。
3、 根據權利要求1所述的人參果脫毒組培苗的病毒快速檢測方法，其特徵在於所述的 人參果莖尖脫毒培養時外植體的滅菌處理是經75%酒精浸泡0.5 1.0min，再用0.1%升汞溶 液滅菌10 15min，最後用無菌水衝洗3 5次。
4、 根據權利要求1所述的人參果脫毒組培苗的病毒快速檢測方法，其特徵在於所述的 指示植物番茄的無菌苗培養時種子的滅菌處理是經75%酒精浸泡0.5 1.0min，再用0.1%升 汞溶液滅菌20 30min，最後用無菌水衝洗3 5次。
5、 根據權利要求1所述的人參果脫毒組培苗的病毒快速檢測方法，其特徵在於，所述的 人參果莖尖脫毒培養和脫病毒組培培養時各組培階段的培養條件是，培養溫度為25i2'C，光 照光強為2500 3000Lx，光照時間為12h/d。
6、 根據權利要求1所述的人參果脫毒組培苗的病毒快速檢測方法，其特徵在於，所述的 指示植物番茄的無菌苗培養時各階段的培養條件是，培養溫度為25士2'C，光照光強為2000 2500 Lx，光照時間為10h/d。
7、 根據權利要求1所述的人參果脫毒組培苗的病毒快速檢測方法，其特徵在於，所述的 嫁接苗培養時的培養條件是，培養溫度為25i2'C，光照光強為3000 3500Lx，光照時間為 16h/d。
8、 根據權利要求1所述的人參果脫毒組培苗的病毒快速檢測方法，其特徵在於所述的 移栽基質由泥炭珍珠巖蛭石按體積比2: 1: 1配製而成。
全文摘要
本發明涉及一種人參果脫毒組培苗的病毒快速檢測方法，屬植物病毒檢測技術領域，包括如下步驟培養基的配製、莖尖脫毒培養、指示植物番茄的無菌苗培養、微嫁接培養和脫病毒組培苗的增殖培養。本發明的優點是所用的培養基、組培條件和微嫁接器適於人參果脫毒苗的微嫁接培養，利於嫁接口的癒合，平均嫁接成功率超過90％，可完全滿足病毒檢測的要求。與傳統的田間指示植物檢測相比，大大縮短了檢測所需的時間。該種方法不受時間限制、環境因素的影響，可常年在實驗室條件下進行，非常實用，可用於人參果脫毒苗的病毒快速檢測和脫毒苗的規模化生產。
文檔編號A01G31/00GK101248761SQ20081006054
公開日2008年8月27日 申請日期2008年3月27日 優先權日2008年3月27日
發明者呂永平, 剛 徐, 汪一婷, 牟豪傑, 陳劍平 申請人:浙江省農業科學院