脂質衍生的中性納米顆粒的製作方法
2023-05-30 21:03:41
脂質衍生的中性納米顆粒的製作方法
【專利摘要】本發明公開了新型脂質、使用該化合物製備的脂質體組合物以及中和或以其他方式改性此類脂質體組合物的相關方法。本文所述的脂質可用作例如脂質體媒介物來促進囊封的多核苷酸向靶細胞的傳遞，以及隨後此類靶細胞的轉染。在某些實施方案中，包括脂質體傳遞媒介物的一種或多種化合物可以被中和或進一步改性，使得脂質體傳遞媒介物的性質被改性。
【專利說明】脂質衍生的中性納米顆粒
[0001] 相關申請
[0002] 本申請要求2012年3月29日提交的美國臨時申請No. 61/617,478的權益，該申 請的公開內容以引用方式併入本文。
【背景技術】
[0003] 使用脂質體傳遞媒介物來促進治療劑的位點特異性傳遞代表了快速發展的藥品 傳遞領域；然而治療劑高效傳遞至靶細胞和組織、以及隨後轉染這些靶細胞和組織仍具有 技術上的挑戰。儘管多種脂質和脂質體基傳遞系統在促進治療劑向靶細胞和組織的傳遞中 具有可利用性，但是在體內和體外應用中仍有許多挑戰。例如脂質體基傳遞系統的突出缺 點涉及脂質體的構建，其中所述的脂質體具有足夠的穩定性，以及此類脂質體能夠高效地 將它們囊封的內容物釋放至靶細胞和組織的能力。
[0004] 就用於傳遞核酸的脂質體傳遞媒介物的研發而言，引入陽離子脂質作為脂質體媒 介物的成分代表了重要的進步。陽離子脂質體的性質（包括例如它們的穩定性、尺寸和表 面電荷）使得它們成為用於將負電荷核酸囊封並傳遞至靶細胞和組織的理想載體。包括此 類陽離子脂質體媒介物的陽離子成分（例如陽離子脂質和/或陽離子聚合物）會促進脂質 體的脂質雙層與負電荷核酸之間的相互作用，並由此增加此類陽離子脂質體媒介物的囊封 效率。所製備的包括陽離子脂質（例如1，2_二油醯基-3-三甲基銨-丙烷（DOTAP))的脂 質體部分由於它們的正的表面電荷，已經證明了高效地裝載負電荷核酸的能力，並且使用 陽離子脂質體媒介物可以促進濃度適當超過使用中性脂質體媒介物所取得的濃度的核酸 被囊封。例如在某些情況下，陽離子脂質納米顆粒系統可以表徵為當裝載負電荷核酸時，囊 封效率接近 100% (例如參見Li,etal.PharmRes.，2007, 24:438-449)。
[0005] 但是，用於構建此類脂質體媒介物的許多陽離子脂質通常是有毒的，因此特別在 傳遞治療有效量的囊封內容物（例如核酸）所需的量方面，可以限定使用。進一步限定電 荷脂質體系統的使用，則在將它們給予受試對象後，此類電荷系統可以快速地由系統性的 循環中清除，由此限制了它們在靶細胞和組織中的分布和累積。為了克服與陽離子脂質體 媒介物的使用相關的技術挑戰，已經使用了多成分脂質體傳遞系統。具體而言，使用可電離 的脂質來製備脂質體媒介物已經用作響應於脂質體所暴露的環境PH(例如生理pH)的變化 來調控脂質體電荷的手段。因此，此類可電離的脂質容許它們表面電荷中的變化，這種變化 可以被操縱，從而例如增加脂質體的囊封效率。
[0006] 儘管之前所述的限制，以及脂質體基的媒介物促進囊封物質向靶細胞的傳遞的能 力，脂質體基的媒介物是用於治療劑的有吸引力的載體，並將該主題保持為不斷研發的努 力。儘管就囊封和穩定性而言，包括陽離子成分的脂質體基媒介物已經顯示出有前途的結 果，但是仍非常需要改善的脂質體基傳遞系統。
[0007] 與電荷脂質體基媒介物相反，中性脂質體媒介物通常表徵為具有相對改善的藥代 動力學性質。而且，部分由於使用中性脂質體觀察到囊封的效率低，所以實施有限的研究來 調查中性脂質體將治療劑傳遞至靶細胞的用途。仍需要新型的脂質，該脂質引入了用於傳 遞囊封的核酸和多核苷酸的多功能方法。特別需要保持了中性和電荷脂質體傳遞系統的一 些有利特徵的脂質納米顆粒。
[0008] 發明概述
[0009] 本發明描述了新型脂質及包括此類脂質的脂質體組合物。此外，本發明公開了使 用此類脂質（例如可切割的陽離子脂質）作為脂質體組合物的成分、從而有助於將一種或 多種治療劑（例如治療多核苷酸）囊封於此類脂質體組合物中的方法。此外，本發明還公 開了製備中性脂質體組合物的方法，其中所述的中性脂質體組合物可表徵為具有高的囊封 效率（例如相對傳統的中性脂質體組合物而言）。本發明所述的新方法、脂質和組合物使用 了多功能策略來促進將一種或多種治療劑囊封於中性脂質體組合物中，以及隨後使用此類 脂質體組合物轉染一種或多種靶細胞。
[0010] 本發明公開了新型脂質及使用此類脂質來調控例如脂質體媒介物（例如脂質納 米顆粒）（其中引入了此類新型脂質）的性質（例如表明電荷）的相關方法。例如在某些 實施方案中，本發明涉及操縱脂質體媒介物（例如脂質納米顆粒）的方法，其中所述的脂質 體媒介物包括至少一種具有可釋放的極性頭部基團的脂質，所述的方法包括脂質體媒介物 與一種或多種試劑接觸從而使極性頭部基團由所述的至少一種脂質上釋放的步驟。在一些 實施方案中，在此類極性頭部基團由脂質上釋放時，剩餘脂質體媒介物的表面電荷被改變。 例如在極性頭部基團由脂質上釋放後，脂質體媒介物可以具有總體為中性的表面電荷（例 如大約-2. 5至大約+2. 5mV的淨表面電荷或zeta電位）。備選地，在極性頭部基團由脂質 上釋放後，脂質體媒介物可以具有總體為負的表面電荷（例如低於大約_25mV的淨表面電 荷或zeta電位）。
[0011] 在某些實施方案中，本發明公開的脂質通常包括極性頭部基團（例如以R1基團表 示），其通過連接基團與親脂性尾部基團（例如以R2基團表示）結合。在一些實施方案中， 連接基團（或者包括功能基團，該功能基團）在暴露於一種或多種試劑或環境（例如在暴 露於酸性環境或還原條件時）時容易進行化學或酶切割（例如通過還原或水解）。在一個 實施方案中，本發明涉及中和或以其他方法改變脂質體組合物的方法。通常，此類脂質體組 合物包括至少一種脂質，該脂質具有可釋放的頭部基團、尾部基團以及具有式I結構的可 切割的連接基團：
[0012]
【權利要求】
1. 一種中和脂質納米顆粒的方法，其中所述的脂質納米顆粒包括至少一種具有可釋放 的極性頭部基團的脂質，所述的方法包括使所述的脂質納米顆粒與一種或多種試劑接觸的 步驟，從而使所述的極性頭部基團由所述的脂質上釋放並使所述的脂質納米顆粒由此被中 和。
2. 權利要求1所述的方法，其中所述的脂質具有以下結構：
其中&為所述的可釋放的極性頭部基團，並且選自咪唑、胍鹽、亞胺、烯胺、氨基、可任 選地取代的烷基氨基和可任選地取代的吡啶基；其中R2選自可任選地取代的、可變的飽和 或不飽和的烷基，可任選地取代的、可變的飽和或不飽和的醯基，可任選地取代的吡啶基，
其中馬和1?4均獨立地選自可任選地取代的、可變的飽和或不飽和的C6-C2(l烷基，和可 任選地取代的、可變的飽和或不飽和的C6-C2(l醯基；並且 其中n為0或任何正整數。
3. 權利要求2所述的方法，其中所述的一種或多種試劑能夠以還原方式切割所述的脂 質的-硫鍵。
4. 權利要求3所述的方法，其中在以還原方式切割所述的脂質的二硫鍵時，由所述的 脂質上釋放： 並且所述的脂質由此被中和。
5. 權利要求3所述的方法，其中在以還原方式切割所述的脂質的二硫鍵時，剩餘的中 性脂質具有以下結構：
6. 權利要求5所述的方法，其進一步包括改性所述的剩餘的中性脂質的步驟，從而形 成改性的脂質； 其中所述的改性的脂質具有以下結構：
其中R5選自聚合物，肽，靶向配體，可任選地取代的、可變的飽和或不飽和的烷基，及加 帽結構；以及 其中n為0或任何正整數。
7. 權利要求6所述的方法，其中所述的改性中性脂質的步驟包括在氧化條件下使所述 的中性脂質與具有以下結構的第二化合物接觸，從而形成二硫鍵並由此使所述的中性脂質 被改性：
8. 權利要求6所述的方法，其中所述的改性中性脂質的步驟包括使所述的中性脂質與 具有以下結構的第二化合物接觸：
其中R5選自聚合物，肽，靶向配體，可任選地取代的、可變的飽和或不飽和的烷基，及加 帽結構；以及 其中n為0或任何正整數。
9. 權利要求6所述的方法，其中所述的改性中性脂質的步驟包括使所述的中性脂質與 具有以下結構的第二化合物接觸：
其中R5選自聚合物，肽，靶向配體，可任選地取代的、可變的飽和或不飽和的烷基，及加 帽結構；以及 其中n為0或任何正整數。
10. 權利要求6所述的方法，其中R5為靶向配體，其選自肽、適體、維生素和寡核苷酸。
11. 權利要求6所述的方法，其中R5為靶向配體，其選自阿樸脂蛋白-B、阿樸脂蛋白-E、 葡萄糖、半乳糖和甘露糖。
12. 權利要求6所述的方法，其中R5為聚乙二醇。
13. 權利要求6所述的方法，其中R5為可任選地取代的、可變的飽和或不飽和的Ci-C% 燒基。
14. 權利要求1所述的方法，其中所述的一種或多種試劑為還原劑。
15. 權利要求14所述的方法，其中所述的還原劑選自三（2-羧基乙基）膦（TCEP)、 巰基乙醇（P-ME)、二硫蘇糖醇（DTT)、穀胱甘肽、二硫赤蘚醇和它們的組合。
16. 權利要求15所述的方法，其中所述的還原劑為溶液形式。
17. 權利要求15所述的方法，其中所述的脂質納米顆粒與所述的還原劑接觸至少大約 5分鐘。
18. 權利要求15所述的方法，其中所述的脂質納米顆粒與所述的還原劑接觸至少大約 1小時。
19. 權利要求15所述的方法，其中所述的脂質納米顆粒與所述的還原劑接觸至少大約 3小時。
20. 權利要求15所述的方法，其中所述的脂質納米顆粒與所述的還原劑接觸至少大約 24小時。
21. 權利要求15所述的方法，其中所述的脂質納米顆粒的zeta電位在該脂質納米顆粒 與所述的還原劑接觸之前為至少大約25mV，而在該脂質納米顆粒與所述的還原劑接觸之後 為低於大約5mV。
22. 權利要求15所述的方法，其中所述的脂質納米顆粒的zeta電位在該脂質納米顆粒 與所述的還原劑接觸之後為大約-25.OmV至大約5.OmV。
23. 權利要求21所述的方法，其中所述的脂質納米顆粒的zeta電位在該脂質納米顆粒 與所述的還原劑接觸之後為大約-5.OmV至大約5.OmV。
24. 權利要求1所述的方法，其中所述的脂質納米顆粒進一步包括選自PEG改性的脂 質、非陽離子脂質和輔助脂質中的一種或多種化合物。
25. 權利要求1所述的方法，其中所述的脂質納米顆粒囊封了一種或多種治療劑。
26. 權利要求1所述的方法，其中所述的脂質納米顆粒在中和該脂質納米顆粒之前裝 載一種或多種治療劑。
27. 權利要求25所述的方法，其中所述的治療劑包括一種或多種多核苷酸。
28. 權利要求27所述的方法，其中所述的一種或多種多核苷酸包括mRNA。
29. 權利要求28所述的方法，其中所述的mRNA包括選自鎖核酸（LNA)、2' -0-烷基-RNA 單元、2' -OMe-RNA單元、2' -氨基-DNA單元和2' -氟代-DNA單元中的一種或多種核苷酸改 性。
30. 權利要求27所述的方法，其中所述的中和的脂質納米顆粒包括至少0. 1iig囊封的 多核苷酸。
31. 權利要求27所述的方法，其中所述的中和的脂質納米顆粒包括至少0. 5yg囊封的 多核苷酸。
32. 權利要求27所述的方法，其中所述的一種或多種多核苷酸選自反義寡核苷酸、 siRNA、miRNA、snRNA、snoRNA和它們的組合。
33. 權利要求27所述的方法，其中所述的一種或多種多核苷酸包括一種或多種LNA。
34. 權利要求27所述的方法，其中所述的一種或多種多核苷酸包括DNA。
35. 權利要求27所述的方法，其中所述的一種或多種多核苷酸包括RNA。
36. 權利要求35所述的方法，其中所述的RNA選自mRNA、siRNA、snoRNA、microRNA和 它們的組合。
37. 權利要求35所述的方法，其中所述的RNA編碼了蛋白質或酶。
38. 權利要求37所述的方法，其中所述的蛋白質或酶選自人類生長激素、紅細胞生 成素、a1-抗胰蛋白酶、酸性a葡萄糖苷酶、芳基硫酸酯酶、羧基肽酶N、a半乳糖苷酶 A、a-L-艾杜糖苷酸酶、艾杜糖酸酯-2-硫酸酯酶、艾杜糖酸酯硫酸酯酶、N-乙醯葡糖 胺-1-磷酸轉移酶、N-乙醯氨基葡糖苷酶、a-氨基葡糖苷乙醯基轉移酶、N-乙醯葡糖胺 6_硫酸酯酶、N-乙醯半乳糖胺-4-硫酸酯酶、0 -葡萄糖苷酶、半乳糖-6-硫酸硫酸酯酶、 3 -半乳糖苷酶、3 -葡萄糖醛酸酶、葡萄糖腦苷脂酶、硫酸乙醯肝素硫酸脂酶、肝素-N-硫 酸酯酶、溶酶體酸脂酶、透明質酸酶、半乳糖腦苷脂酶、編碼鳥氨酸轉氨甲醯酶（0TC)、氨甲 醯磷酸合成酶1(CPS1)、精氨酸琥珀酸合成酶（ASS1)、精氨酸代琥珀酸裂解酶（ASL)、精氨 酸酶1 (ARG1)、囊性纖維化跨膜轉運調節因子（CFTR)、存活運動神經元（SMN)、因子IX、因子VIII和低密度脂蛋白受體。
39. -種根據權利要求1所述的方法製備的中性脂質納米顆粒。
40. 權利要求39所述的中性脂質納米顆粒，其進一步包括一種或多種治療劑。
41. 一種根據權利要求9所述的方法製備的改性的脂質納米顆粒。
42. 權利要求41所述的改性的脂質納米顆粒，其進一步包括一種或多種治療劑。
43. -種治療方法，其包括將權利要求40或42所述的脂質納米顆粒給予受試對象。
44. 一種將一種或多種治療劑囊封於中性脂質納米顆粒中的方法，該方法包括以下步 驟：(a)使用所述的一種或多種治療劑裝載包括至少一種可還原的陽離子脂質的脂質納米 顆粒；以及（b)使所述的脂質納米顆粒與一種或多種還原劑接觸，使得所述的脂質納米顆 粒被中和。
45. 權利要求44所述的方法，其中所述的中性脂質納米顆粒的囊封效率為至少50%。
46. 權利要求44所述的方法，其中所述的中性脂質納米顆粒的囊封效率為至少75%。
47. 權利要求44所述的方法，其中所述的中性脂質納米顆粒的囊封效率為至少90%。
48. 權利要求44所述的方法，其中所述的可還原的陽離子脂質具有以下結構：
49. 權利要求44所述的方法，其中所述的可還原的陽離子脂質具有以下結構：
50. 權利要求44所述的方法，其中所述的可還原的陽離子脂質具有以下結構：
51. 權利要求44所述的方法，其中所述的一種或多種還原劑選自三（2-羧基乙基）膦 (TCEP)、0-巰基乙醇（0-ME)、二硫蘇糖醇（DTT)、穀胱甘肽、硫赤蘚醇和它們的組合。
52. 權利要求44所述的方法，其中所述的脂質納米顆粒與所述的還原劑接觸至少大約 5分鐘。
53. 權利要求44所述的方法，其中所述的脂質納米顆粒與所述的還原劑接觸至少大約 1小時。
54. 權利要求44所述的方法，其中所述的脂質納米顆粒與所述的還原劑接觸至少大約 3小時。
55. 權利要求44所述的方法，其中所述的脂質納米顆粒與所述的還原劑接觸至少大約 24小時。
56. 權利要求44所述的方法，其中所述的脂質納米顆粒的zeta電位在該脂質納米顆粒 與所述的一種或多種還原劑接觸之前為至少大約25mV，而在該脂質納米顆粒與所述的一種 或多種還原劑接觸之後為低於大約5mV。
57. 權利要求56所述的方法，其中所述的脂質納米顆粒的zeta電位在該脂質納米顆粒 與所述的一種或多種還原劑接觸之後為大約-25.OmV至大約5.OmV。
58. 權利要求56所述的方法，其中所述的脂質納米顆粒的zeta電位在該脂質納米顆粒 與所述的一種或多種還原劑接觸之後為大約-10.OmV至大約5.OmV。
59. 權利要求44所述的方法，其中所述的脂質納米顆粒進一步包括選自PEG改性的脂 質、非陽離子脂質和輔助脂質中的一種或多種化合物。
60. 權利要求44所述的方法，其中所述的治療劑包括一種或多種多核苷酸。
61. 權利要求60所述的方法，其中所述的一種或多種多核苷酸選自反義寡核苷酸、 siRNA、miRNA、snRNA、snoRNA和它們的組合。
62. 權利要求60所述的方法，其中所述的一種或多種多核苷酸包括一種或多種LNA。
63. 權利要求60所述的方法，其中所述的一種或多種多核苷酸包括DNA。
64. 權利要求60所述的方法，其中所述的一種或多種多核苷酸包括RNA。
65. 權利要求64所述的方法，其中所述的RNA為mRNA並且其中所述的mRNA包括選自 鎖核酸（LNA)、2' -0-烷基-RNA單元、2' -OMe-RNA單元、2' -氨基-DNA單元和2' -氟代-DNA 單元中的一種或多種核苷酸改性。
66. 權利要求64所述的方法，其中所述的RNA選自mRNA、siRNA、snoRNA、microRNA和 它們的組合。
67. 權利要求64所述的方法，其中所述的RNA編碼了蛋白質和酶。
68. -種根據權利要求44所述的方法製備的中性脂質納米顆粒。
69. -種治療方法，其包括將權利要求68所述的中性脂質納米顆粒給予受試對象。
70. -種中和脂質納米顆粒的方法，其中所述的脂質納米顆粒包括至少一種具有可釋 放的極性頭部基團的脂質，所述的方法包括使所述的脂質納米顆粒與一種或多種試劑接觸 的步驟，從而使所述的極性頭部基團由所述的脂質上釋放並使所述的脂質納米顆粒由此被 中和；其中所述的脂質具有以下結構：
其中&為所述的可釋放的極性頭部基團，並且選自咪唑、胍鹽、亞胺、烯胺、氨基、可任 選地取代的烷基氨基和可任選地取代的吡啶基；其中R2選自可任選地取代的、可變的飽和 或不飽和的烷基，可任選地取代的、可變的飽和或不飽和的醯基，可任選地取代的吡啶基，
其中馬和1?4均獨立地選自可任選地取代的、可變的飽和或不飽和的C6-C2(l烷基，和可 任選地取代的、可變的飽和或不飽和的C6-C2(l醯基； 其中x為可切割的連接基團，其選自二硫化物、酯、腙、亞胺、縮醛、縮酮、cis-烏頭 醯基、原酸酯、酐、硫代丙酸酯、乙烯醚、氨基磷酸酯、GLFG、Val-Cit、GG、AA、GGGF和PVGLIG;以及 其中n為0或任何正整數。
71. 權利要求70所述的方法，其中所述的可切割的連接基團為二硫化物。
72. 權利要求71所述的方法，其中所述的一種或多種試劑為還原劑。
73. 權利要求72所述的方法，其中所述的還原劑選自三（2-羧基乙基）膦（TCEP)、 巰基乙醇（P-ME)、二硫蘇糖醇（DTT)、穀胱甘肽、二硫赤蘚醇和它們的組合。
74. 權利要求72所述的方法，其中所述的脂質納米顆粒與所述的還原劑接觸至少大約 5分鐘。
75. 權利要求72所述的方法，其中所述的脂質納米顆粒與所述的還原劑接觸至少大約 1小時。
76. 權利要求72所述的方法，其中所述的脂質納米顆粒與所述的還原劑接觸至少大約 3小時。
77. 權利要求72所述的方法，其中所述的脂質納米顆粒與所述的還原劑接觸至少大約 24小時。
78. 權利要求72所述的方法，其中所述的脂質納米顆粒的zeta電位在該脂質納米顆粒 與所述的一種或多種還原劑接觸之前為至少大約25mV，而在該脂質納米顆粒與所述的一種 或多種還原劑接觸之後為低於大約5mV。
79. 權利要求78所述的方法，其中所述的脂質納米顆粒的zeta電位在該脂質納米顆粒 與所述的還原劑接觸之後為大約-25.OmV至大約5.OmV。
80. 權利要求78所述的方法，其中所述的脂質納米顆粒的zeta電位在該脂質納米顆粒 與所述的還原劑接觸之後為大約-5.OmV至大約5.OmV。
81. 權利要求71所述的方法，其中所述的一種或多種試劑為酶。
82. 權利要求81所述的方法，其中所述的酶選自鹼性磷酸酶、羧基肽酶G2、胞嘧啶脫氨 酶、硝基還原酶、葡萄糖苷酸酶、a-半乳糖苷酶、硫氧還蛋白和Y幹擾素誘導的溶酶體 巰基還原酶（GILT)。
83. 權利要求71所述的方法，其中所述的脂質具有以下結構：
84. 權利要求71所述的方法，其中所述的脂質具有以下結構：
85. 權利要求71所述的方法，其中所述的脂質具有以下結構：
86. 權利要求70所述的方法，其中所述的可切割的連接基團為酯。
87. 權利要求86所述的方法，其中所述的一種或多種試劑在接觸所述的脂質納米顆粒 時水解所述的酯。
88. -種根據權利要求70所述的方法製備的脂質納米顆粒。
89. 權利要求88所述的脂質納米顆粒，其中所述的脂質納米顆粒的囊封效率為至少 50%。
90. 權利要求88所述的脂質納米顆粒，其中所述的脂質納米顆粒的囊封效率為至少 75%。
91. 權利要求88所述的脂質納米顆粒，其中所述的脂質納米顆粒的囊封效率為至少 90%。
92. 權利要求88所述的脂質納米顆粒，其進一步包括一種或多種治療劑。
93. 權利要求92所述的脂質納米顆粒，其中所述的治療劑為mRNA。
94. 權利要求92所述的脂質納米顆粒，其中所述的脂質納米顆粒包括至少0. 1yg囊封 的治療劑。
95. 權利要求92所述的脂質納米顆粒，其中所述的脂質納米顆粒包括至少0. 5yg囊封 的治療劑。
96. 權利要求93所述的脂質納米顆粒，其中所述的mRNA包括選自鎖核酸（LNA)、 2' -0-烷基-RNA單元、2' -OMe-RNA單元、2' -氨基-DNA單元和2' -氟代-DNA單元中的一種 或多種核苷酸改性。
97. 權利要求93所述的脂質納米顆粒，其中所述的mRNA包括一種或多種硫代磷酸酯核 苷酸間連鍵基團。
98. 權利要求93所述的脂質納米顆粒，其中所述的mRNA包括所有硫代磷酸酯核苷酸間 連鍵基團。
99. 權利要求93所述的脂質納米顆粒，其中所述的mRNA包括獨立地選自5-甲基胞核 嘧啶、異胞核嘧啶、假異胞核嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-丙炔基尿嘧啶、6-氨基嘌呤、2-氨基嘌 呤、肌苷、假尿苷、2-硫脲嘧啶、二氨基嘌呤和2-氯-6-氨基嘌呤胞核嘧啶中的至少一種改 性的核苷酸。
100. -種調控脂質體媒介物的表面電荷的方法，其中所述的脂質體媒介物包括至少一 種含有可釋放的極性頭部基團的脂質；所述的方法包括使所述的脂質體媒介物與至少一種 試劑接觸的步驟；其中在所述的脂質體媒介物與所述的至少一種試劑接觸時，所述的極性 頭部基團由所述的脂質上釋放，並且所述的脂質體媒介物的表面電荷由此被調控。
101. 權利要求100所述的方法，其中所述的脂質體媒介物進一步包括選自PEG改性的 脂質、非陽離子脂質和輔助脂質中的一種或多種化合物。
102. 權利要求101所述的方法，其中所述的脂質體媒介物的淨表面電荷在該脂質體媒 介物與所述的至少一種試劑接觸之前為至少大約+25mV，而在該脂質納米顆粒與所述的至 少一種試劑接觸之後為低於大約-5.OmV。
103. 權利要求101所述的方法，其中所述的脂質體媒介物為脂質納米顆粒。
104. 權利要求100所述的方法，其中所述的經調控的脂質體媒介物的淨表面電荷為低 於大約-25mV。
105. 權利要求100所述的方法，其中所述的經調控的脂質體媒介物的淨表面電荷為低 於大約_50mV至大約_10mV。
106. 權利要求100所述的方法，其中所述的經調控的脂質體媒介物的淨表面電荷為低 於大約_5.OmV至大約+5.OmV。
107. 權利要求100所述的方法，其中所述的試劑為選自三（2-羧基乙基）膦（TCEP)、 巰基乙醇（P-ME)、二硫蘇糖醇（DTT)、穀胱甘肽、二硫赤蘚醇和它們的組合中的還原 劑。
108. 權利要求100所述的方法，其中所述的脂質具有以下結構：
109. 權利要求100所述的方法，其中所述的脂質具有以下結構：
110. 權利要求100所述的方法，其中所述的脂質具有以下結構：
【文檔編號】A61K9/127GK104487055SQ201380026368
【公開日】2015年4月1日 申請日期:2013年3月29日 優先權日:2012年3月29日
【發明者】F·德羅莎, B·C·吉爾德, M·哈特萊因 申請人:夏爾人類遺傳性治療公司