小鼠創傷失血性休克模型的建立方法

2023-06-17 09:18:21

專利名稱：小鼠創傷失血性休克模型的建立方法
技術領域：
本發明涉及動物實驗模型技術領域，主要是一種小鼠創傷失血性休克模型的建立方法。
背景技術：
無論和平或戰爭年代，創傷失血性休克都是一種常見的臨床重症。在臨床實踐中， 創傷死亡中1/3由創傷性休克引起。創傷失血性休克後，機體免疫功能紊亂引起的膿毒血症及多臟器功能衰竭越來越成為其導致死亡的最主要的原因。為了開展創傷失血性休克引起的一系列病理生理改變的相關研究，比如炎症反應、免疫調節、微循環灌注、器官損傷等問題，建立一個穩定的創傷失血性休克模型顯得至關重要。目前，創傷失血性休克模型大致可以分為大動物模型和小動物模型。然而，大動物模型(豬、狗、牛、羊等)具有很多缺點，比如個體差異大、資金花費高、難於飼養繁殖等。相反，小動物模型(大鼠、小鼠等)具有明顯的優點，比如品種多、個體差異小、花費低、易於飼養繁殖等。因此，越來越多的關於創傷失血性休克的科研建立在大鼠或小鼠的模型上。在過去的幾年中，我們的科研團隊已經建立了大鼠的創傷失血性休克模型，並在此基礎上進行了一定的研究，相關的論文已經發表在Critical Care Medicine,Shock.The Journal of Trauma等雜誌上。相對於大鼠模型，小鼠模型又有其獨特的優勢，比如小鼠的試劑較多、基因敲出小鼠和轉基因小鼠的應用等等。因此，建立小鼠的創傷失血性休克模型對創傷研究來說具有必要性。雖然，前人嘗試了一些方法去建立小鼠的創傷失血性休克模型，但是因為這些方法各有缺點，所以至今尚未建立一個標準的小鼠創傷失血性休克模型。 由於以上原因，促使我們去建立一個既能模擬臨床實際、又能便以操作的小鼠創傷失血性休克模型。

發明內容
本發明的目的正是要克服上述技術的不足，而提供一種小鼠創傷失血性休克模型的建立方法，監測小鼠的各項病理生理指標，為科研和臨床提供應用的平臺。本發明解決其技術問題採用的技術方案這種小鼠創傷失血性休克模型的建立方法，步驟如下(1)鼠尾無創測壓選取8-12周的體重20 25g左右的雄性C57BL/6小鼠，水合氯醛作為麻醉劑，以300mg/kg向腹膜內注射；麻醉後仰臥位綁定小鼠四肢，並用無創鼠尾測壓儀將小鼠尾巴固定，以此來檢測小鼠的平均動脈壓(MAP)、心率等生理指標；(2)股骨離斷創傷固定小鼠後，沿小鼠左側髕骨處做一長約0. 5cm縱行切口，暴露肌腱，剪斷肌腱與股骨，無菌棉花填塞骨髓腔，縫合肌腱和切口 ；(3)頸動脈置管，放血、補液沿小鼠頸正中線做一長約Icm的縱行切口，分離後充分暴露頸內結構，於遠心端結紮右側頸動脈，經右側頸動脈插管並固定，在無創鼠尾測壓儀的監測下逐漸放血至休克(平均動脈壓為35士5mmHg)，記錄放血量，並且維持休克狀態90min ；然後經右頸動脈的導管補乳酸林格氏液，補液量為失血量2倍，用微量注射泵15分鐘左右完成補液。補液完畢後拔出導管並結紮右頸動脈，縫合頸部切口 ；(4)雷射都卜勒監測微循環灌注在整個創傷失血性休克及復甦過程中，對小鼠的平均動脈壓(MAP)、心率等生理指標進行檢測，並用雷射都卜勒監測在小腸、肝臟、腎臟等重要器官上的微循環灌注情況。本發明有益的效果是1、該模型能夠模擬臨床實踐。2、該創傷休克打擊能夠引起微循環改變，器官組織及功能的損傷。3、該模型具有可操作性，且能夠加載多種幹預。4、相對於大鼠，雖然小鼠的操作難度增加，但是能夠增加應用面，比如免疫學研究以及轉基因小鼠的應用。


圖1是本發明在失血結束時，與對照組(Sham)相比的示意圖；圖2是本發明在補液後M小時，與對照組(Sham)相比的示意圖。
具體實施例方式為了使本發明的目的、技術方案及優點更加清楚明白，下面結合舉例，對本發明進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的舉例僅僅用以解釋本發明，並不用於限定本發明。如圖所示，這種小鼠創傷失血性休克模型的建立方法，步驟如下(1)鼠尾無創測壓選取8-12周的體重20 25g左右的雄性C57BL/6小鼠，水合氯醛作為麻醉劑，以300mg/kg向腹膜內注射；麻醉後仰臥位綁定小鼠四肢，並用無創鼠尾測壓儀將小鼠尾巴固定，以此來檢測小鼠的平均動脈壓(MAP)、心率等生理指標；(2)股骨離斷創傷固定小鼠後，沿小鼠左側髕骨處做一長約0. 5cm縱行切口，暴露肌腱，剪斷肌腱與股骨，無菌棉花填塞骨髓腔，縫合肌腱和切口 ；(3)頸動脈置管，放血、補液沿小鼠頸正中線做一長約Icm的縱行切口，分離後充分暴露頸內結構，於遠心端結紮右側頸動脈，經右側頸動脈插管並固定，在無創鼠尾測壓儀的監測下逐漸放血至休克(平均動脈壓為35士5mmHg)，記錄放血量，並且維持休克狀態 90min ；然後經右頸動脈的導管補乳酸林格氏液，補液量為失血量2倍，用微量注射泵15分鐘左右完成補液。補液完畢後拔出導管並結紮右頸動脈，縫合頸部切口 ；(4)雷射都卜勒監測微循環灌注在整個創傷失血性休克及復甦過程中，對小鼠的平均動脈壓(MAP)、心率等生理指標進行檢測，並用雷射都卜勒監測在小腸、肝臟、腎臟等重要器官上的微循環灌注情況。結果如圖6所示，與對照組(Sham)相比，在失血結束時，創傷失血性休克組(TH/ S)的平均動脈壓明顯降低，在小腸(Intestine)、肝臟(Liver)、腎臟(Kidney)等重要器官上的微循環灌注(Perfusion)明顯降低；但是在補液結束時，對照組(Sham)與創傷失血性休克組(TH/S)無明顯差異。*p < 0. 05，#p < 0. 01。如圖7所示，在補液後M小時，與對照組(Sham)相比，創傷失血性休克組(TH/S)在小腸(Intestine)、肝臟(Liver)、腎臟
4(Kidney)等重要器官上的組織損傷明顯增加(箭頭所示)，在小腸、肝臟、腎臟等重要器官上的組織損傷評分(histological injury scores)明顯增加。*p < 0. 05，#p < 0· 01。本技術經過大量動物實驗證明，嚴重的創傷失血性休克能夠引起明顯的病理生理改變。雖然通過液體復甦能夠迅速恢復血流動力學的穩定，但是在小腸、肝臟、腎臟等重要器官上的組織損傷仍然明顯增加。總之，小鼠的創傷失血性休克模型作為一個動物實驗模型，可以為科研和臨床提供一個應用平臺，以便在此基礎上進行更加深入的研究。同時，小鼠的創傷失血性休克模型可以為創傷免疫的研究提供理論基礎，為臨床救治並發嚴重感染的創傷性休克患者提供新的思路。可以理解的是，對本領域技術人員來說，對本發明的技術方案及發明構思加以等同替換或改變都應屬於本發明所附的權利要求的保護範圍。
權利要求
1. 一種小鼠創傷失血性休克模型的建立方法，其特徵在於步驟如下(1)鼠尾無創測壓選取8-12周的體重20 25g的雄性C57BL/6小鼠，水合氯醛作為麻醉劑，以300mg/kg向腹膜內注射；麻醉後仰臥位綁定小鼠四肢，並用無創鼠尾測壓儀將小鼠尾巴固定，來檢測小鼠的平均動脈壓、心率生理指標；(2)股骨離斷創傷固定小鼠後，沿小鼠左側髕骨處做一長0.5cm縱行切口，暴露肌腱， 剪斷肌腱與股骨，無菌棉花填塞骨髓腔，縫合肌腱和切口 ；(3)頸動脈置管，放血、補液沿小鼠頸正中線做一長Icm的縱行切口，分離後充分暴露頸內結構，於遠心端結紮右側頸動脈，經右側頸動脈插管並固定，在無創鼠尾測壓儀的監測下逐漸放血至休克，平均動脈壓為35士5mmHg，記錄放血量，並且維持休克狀態90min ；然後經右頸動脈的導管補乳酸林格氏液，補液量為失血量2倍，用微量注射泵15分鐘完成補液， 補液完畢後拔出導管並結紮右頸動脈，縫合頸部切口 ；(4)雷射都卜勒監測微循環灌注在整個創傷失血性休克及復甦過程中，對小鼠的平均動脈壓、心率生理指標進行檢測，並用雷射都卜勒監測在小腸、肝臟、腎臟重要器官上的微循環灌注情況。
全文摘要
本發明涉及一種小鼠創傷失血性休克模型的建立方法，步驟如下(1)鼠尾無創測壓(2)股骨離斷創傷固定小鼠後，沿小鼠左側髕骨處做一長0.5cm縱行切口；(3)頸動脈置管，放血、補液沿小鼠頸正中線做一長1cm的縱行切口，於遠心端結紮右側頸動脈，經右側頸動脈插管並固定，在無創鼠尾測壓儀的監測下逐漸放血至休克，並且維持休克狀態90min；補液完畢後縫合頸部切口；(4)雷射都卜勒監測微循環灌注。本發明有益的效果是1、該模型能夠模擬臨床實踐。2、該創傷休克打擊能夠引起微循環改變，器官組織及功能的損傷。3、該模型具有可操作性，且能夠加載多種幹預。
文檔編號A61D1/00GK102379754SQ20111031874
公開日2012年3月21日 申請日期2011年10月19日 優先權日2011年10月19日
發明者唐寅, 張勻, 梁廷波, 白雪莉, 陳偉, 陳靈曉 申請人:梁廷波