一種治療皮膚創傷的藥物組合物及其藥物製劑的製作方法

2023-06-17 09:29:01 1

本發明屬於藥物化學技術領域，尤其涉及一種治療皮膚創傷的藥物組合物及其藥物製劑。

背景技術：

隨著經濟高速發展和工業化進展的加速，人類健康面臨的非傳染性疾病威脅正日益增重，其中，糖尿病和隨之而來的併發症更是危害健康的無情殺手。目前，糖尿病以危及人類健康「三大殺手」之一高居諸病前鋒，在全世界構成龐大的患者群。據報導，在中國，其年發病率在3.2％以上，且呈不斷上升趨勢，發展形勢日趨嚴峻。糖尿病患者的皮膚易受損傷，糖尿病病人的皮膚損傷簡稱為糖尿病創傷。糖尿病創傷在損傷後往往反覆發作，遷延不愈，形成難愈性潰瘍，可能導致壞疽及截肢，是糖尿病併發症的嚴重後果之一。

儘管目前報導了多種針對糖尿病創傷的治療方法，例如手術治療、物理治療和中醫治療，但是總體上來說，糖尿病創傷的日常治療至今仍無便捷而有效的方法，很多患者往往因延誤治療而致殘，嚴重則危及生命。在糖尿病創傷的治療中，藥物治療因其方法簡便易行，深受廣大患者青睞，但是目前尚沒有能夠有效治療糖尿病創傷的藥物。糖尿病創傷成為了頑疾，嚴重影響了糖尿病病人的生活。目前，全世界都在尋求治療糖尿病創傷的高效藥物及其藥物製劑，廣大患者更是渴望日常創傷能夠及時自我處理的普及性藥物製劑。

技術實現要素：

有鑑於此，本發明的發明目的在於提供一種治療皮膚創傷的藥物組合物及其藥物製劑。本發明提供的藥物組合物中各個組分之間產生了協同增效作用，顯著提高了藥效，該藥物組合物可應用於治療皮膚創傷，且可製備成多種藥物製劑，更有利於其推廣和使用。

本發明是通過如下技術方案實現的:

本發明提供了一種治療皮膚創傷的藥物組合物，其包括表皮細胞生長因子、胰島素和多糖；所述多糖為低聚多糖和/或低聚多糖衍生物；

其中，各個組分的含量之比為：(8～12mg)所述表皮細胞生長因子：(10～25U)所述胰島素：(1～5g)所述多糖。

在本發明中，表皮細胞生長因子是指具有表皮細胞生長因子活性的蛋白質，其能夠刺激細胞增殖、分化和遷移。本發明中的表皮細胞生長因子可以為天然活性肽，也可以為重組表皮細胞生長因子；且不受物種限制，優選為哺乳動物表皮細胞生長因子。在本發明的一些實施例中，所用表皮細胞生長因子選自豬表皮細胞生長因子、牛表皮細胞生長因子或人表皮細胞生長因子。

發明人在利用異體胰島細胞移植治療糖尿病的研究中發現哺乳動物腺體細胞經體外培養仍可釋放出多種天然活性肽物質，其主要成分之一為表皮細胞生長因子(EGF)，該物質可刺激皮膚細胞的生長與修復。據文獻報導，表皮細胞生長因子(EGF)是機體內天然存在的一種生長因子，其主要功能是促進皮膚細胞的分裂增殖。研究發現，EGF能促進上皮細胞、成纖維細胞的增殖；增強表皮細胞的活力；延緩表皮細胞的老化，使肌膚各組成成份保持最佳生理狀態。此外，它還能刺激細胞外一些大分子(如透明質酸和膠原白等)的合成與分泌、滋潤皮膚，是決定肌膚活力和健康的源泉。

在本發明中，胰島素是指具有胰島素活性的蛋白質，其由胰臟內的胰島β細胞分泌，能夠促進細胞對葡萄糖的攝取和利用，降低血糖；促進糖原、脂肪、蛋白質的合成。本發明中的胰島素可以為天然活性肽，也可以為重組胰島素；且不受物種限制，優選為哺乳動物胰島素。在本發明的一些實施例中，所用胰島素選自豬胰島素、牛胰島素或人胰島素。

在本發明的一些實施例中，本發明提供的藥物組合物中的表皮細胞生長因子由表皮細胞生長因子提取液提供。

在本發明的一些實施例中，本發明提供的藥物組合物中，當由表皮細胞生長因子提取液提供表皮細胞生長因子時，所述表皮細胞生長因子提取液的製備方法包括：

獲得下頜腺組織，切碎後，採用組織塊培養法培養細胞，培養6～9天，收集上清液，即得。

在本發明中，表皮細胞生長因子提取液的製備方法中的下頜腺組織來自於哺乳動物；優選豬、牛或人。在本發明的一些實施例中，所用的下頜腺組織來自於豬。

在本發明中，表皮細胞生長因子提取液的製備方法中，以體積百分比計，組織塊培養法所用的培養基為含20％FCS的1640培養液。

在本發明的另外一些實施例中，本發明提供的藥物組合物中，當由表皮細胞生長因子提取液提供表皮細胞生長因子時，所述表皮細胞生長因子提取液的製備方法具體為：

摘取哺乳動物下頜腺活體組織，剪為碎塊，經Hanks液自然沉澱洗滌後，置於含有20％FCS的1640培養液的培養瓶中，培養6～9天；細胞培育過程中，培養液保持清澈，分次收集全部上清液，即得。

在本發明的另外一些實施例中，本發明提供的藥物組合物中的胰島素由胰腺提取液提供。

在本發明的一些實施例中，本發明提供的藥物組合物中，當由胰腺提取液提供胰島素時，所述胰島素提取液的製備方法包括：

摘取哺乳動物胰腺活體組織，剪為碎塊，經Hanks液自然沉澱洗滌後，置於含有20％FCS的1640培養液的培養瓶中，培養6～9天；細胞培育過程中，培養液保持清澈，分次收集全部上清液，即得。

在本發明提供的藥物組合物中，表皮細胞生長因子、胰島素和多糖都有各自的作用機制，但是針對糖尿病病人的皮膚創傷的治療，在單獨使用時，效果不明顯。本發明大膽將表皮細胞生長因子、胰島素和多糖進行組合，通過大量的創造性勞動，獲得本發明提供的藥物組合物。實驗結果證實，本發明提供的藥物組合物能夠刺激細胞生長、促進創傷癒合，且不同的組分之間產生了協同增效作用。發明人還意外發現，當由所述表皮細胞生長因子提取液提供表皮細胞生長因子、採用所述胰島素提取液提供胰島素時，在各個組分含量相同的情況下，所得的藥物組合物的活性要優於表皮細胞生長因子、胰島素和多糖藥物組合物，差異顯著(P＜0.05)。

優選地，本發明提供的藥物組合物中的低聚多糖選自：動物性食物纖維。

優選地，本發明提供的藥物組合物中的低聚多糖衍生物選自：殼聚糖、殼寡糖、D-氨基葡萄糖鹽酸鹽或羧甲基殼聚糖。

更為優選地，本發明提供的藥物組合物中的低聚多糖衍生物為殼聚糖。本發明中的殼聚糖包括高密度殼聚糖、水溶性殼聚糖，但不僅限於這兩類殼聚糖。進一步優選地，本發明中所用的殼聚糖的性質優選為水溶性殼聚糖。

在本發明的一些實施例中，本發明提供的藥物組合物中的低聚多糖衍生物為殼聚糖。海洋生物殼體組織的提取物甲殼素及其改性衍生物殼聚糖具有一系列優良的理化性能和藥物功效，它具有很強的生物兼容性：其分子中的氨基和羥基與生物大分子蛋白質、胺基酸、核酸、酶類具有良好親合性。研究報導，殼聚糖對創傷具有促愈作用，還具有抑癌效應和免疫活性、且無熱源反應、無皮膚刺激反應、無皮膚致敏反應、無全身過敏反應，對眼結膜及角膜無刺激性，與生物材料亦無溶血反應。殼聚糖良好的藥理功能和安全性在研究和實踐等廣泛領域獲得公認。

在本發明的一些實施例中，本發明提供的藥物組合物中，所述組分還包括珍珠粉和/或三七粉。

珍珠粉和/或三七粉的作用：珍珠粉是優質中藥材，它對皮膚具有潤滑、滋養、美白、斂瘡等多種功效。三七粉具有化瘀、止血，活血定痛的功效。

優選地，本發明提供的藥物組合物所針對的皮膚創傷選自糖尿病相關的創傷、潰瘍、燒傷、曬傷、老化皮膚創傷、角膜潰爛創傷、炎性胃腸道疾病創傷、腸炎性疾病創傷、克羅恩氏病創傷、潰瘍性結腸炎、褥瘡、大皰性表面松解症創傷、皮膚起皰創傷、牛皮癬創傷、視網膜病創傷、口腔創傷、裂傷、手術切口創傷或手術後粘連創傷。在本發明的一些實施例中，本發明提供的藥物組合物所針對的皮膚創傷具體為糖尿病相關的創傷。

本發明還提供了一種治療皮膚創傷的藥物，其由本發明提供的藥物組合物和藥學上可接受的輔料組成；

該藥物組合物包括表皮細胞生長因子、胰島素和多糖；所述多糖為低聚多糖和/或低聚多糖衍生物；

其中，各個組分的含量之比為：(8～12mg)所述表皮細胞生長因子：(10～25U)所述胰島素：(1～5g)所述多糖。

優選地，本發明提供的藥物的劑型為軟膏劑、乳劑、噴劑或塗膜劑。

本發明還提供了一種治療皮膚創傷的噴劑，100mL藥物製劑中包括如下含量的各個組分：

其中，所述多糖為低聚多糖和/或低聚多糖衍生物。

優選地，本發明提供的治療皮膚創傷的噴劑中的助溶劑選自聚乙二醇、乙醯胺、硼砂、碘化鉀或苯甲酸鈉。更為優選地，本發明提供的治療皮膚創傷的噴劑中的助溶劑為聚乙二醇，所述聚乙二醇的分子量為370-630。進一步優選地，聚乙二醇的分子量為370～460。在本發明的一些實施例中，所用助溶劑具體為聚乙二醇400。

本發明還提供了一種治療皮膚創傷的噴劑，100ml藥物製劑中包括如下含量的各個組分：

其中，所述多糖為低聚多糖和/或低聚多糖衍生物。

優選地，本發明提供的治療皮膚創傷的噴劑中的助溶劑選自聚乙二醇、乙醯胺、硼砂、碘化鉀或苯甲酸鈉。更為優選地，本發明提供的治療皮膚創傷的噴劑中的助溶劑為聚乙二醇，所述聚乙二醇的分子量為370-630。進一步優選地，聚乙二醇的分子量為370～460。在本發明的一些實施例中，所用助溶劑具體為聚乙二醇400。

本發明提供了一種治療皮膚創傷的藥物組合物及其藥物製劑，該藥物組合物包括表皮細胞生長因子、胰島素和多糖；所述多糖為低聚多糖和/或低聚多糖衍生物；其中，各個組分的含量之比為：(8～12mg)表皮細胞生長因子：(10～25U)胰島素：(1～5g)所述多糖。本發明提供的藥物組合物中各個組分之間產生了協同增效作用，顯著提高了藥效，實驗結果證實，該藥物組合物可用於頑固 的糖尿病創傷，治療效果顯著，為糖尿病病人日常生活創傷的防範和治療提供了新方法，且該藥物組合物可製成多種藥物製劑，更有利於其推廣和使用。

具體實施方式

本發明公開了一種治療皮膚創傷的藥物組合物及其藥物製劑。本領域技術人員可以參考本文內容，使用該方法，製備獲得該藥物組合物，實現其應用，特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領域技術人員而言是顯而易見的，它們都被視為包括在本發明內。本發明的藥物組合物、其藥物製劑及其製備方法和應用已經通過較佳的實施例進行了描述，相關人員明顯能在不脫離本發明的內容、精神和範圍內對本文的藥物組合物、其藥物製劑、製備方法和應用進行適當變更與組合，來實現和應用本發明技術。

本發明提供的一種治療皮膚創傷的藥物組合物及其藥物製劑中所用到的試劑盒原料均可由市場購得。

下面結合實施例對本發明作進一步說明，但本發明並不局限於此，實施例中的製備方法均為常規製備方法，此處不再詳述。

實施例1藥物組合物的製備

(1)表皮細胞生長因子提取液的製備：

在無菌控制條件下摘取豬幼仔(約出生8-12小時)下頜腺活體組織，快速稱重為350mg，之後剪為碎塊，經Hanks液自然沉澱洗滌3次後，置於含有20％FBS的1640培養基16ml的培養瓶(50ml)中，置於37℃、5％CO2培養箱中培養6-9天，細胞培養過程中，培養液應保持清澈，分次收集全部上清液，置於-20℃，備用。

採用酶聯免疫吸附實驗(ELISA)方法檢測其中的表皮細胞生長因子，從第1天到第9天，獲取的表皮細胞生長因子含量逐天遞減，高值至低值為30～5mg/ml。

(2)胰島素提取液的製備：

在無菌控制條件下摘取豬幼仔(約出生8-12小時)胰腺活體組織，快速稱重為450mg，之後剪為碎塊，經Hanks液自然沉澱洗滌3次後，置於含有20％FBS的1640培養基16ml的培養瓶(50ml)中，置於37℃、5％CO2培養箱中培養 6-9天，細胞培養過程中，培養液應保持清澈，分次收集全部上清液，置於-20℃，備用。

採用胰島素放射免疫藥盒(雙抗--PEG法)檢測其中的胰島素，從第1天到第9天，獲取的胰島素含量逐天遞減，高值至低值為23-2.6U/ml。

(3)藥物組合物的製備：

將準確稱量的表皮細胞生長因子、胰島素、水溶性殼聚糖、珍珠粉(或三七粉)、聚乙二醇400混合，加入約50ml的水，充分溶解後，加水至100ml，滅菌，分裝，即得。

實施例2藥物製劑的製備

按照如下配方準確稱量各個組分，備用：

按照如下方法製備獲得含藥物組合物的噴劑：

將準確稱量的表皮細胞生長因子提取液(按照實施例1提供的表皮細胞生長因子提取液的製備方法製備獲得)、胰島素提取液(按照實施例1提供的胰島素提取液的製備方法製備獲得)、水溶性殼聚糖、聚乙二醇400混合，加入約50ml的水，充分溶解後，加水至100ml，滅菌，分裝，即得。

實施例3藥物製劑的製備

按照如下配方準確稱量各個組分，備用：

按照如下方法製備獲得含藥物組合物的噴劑：

將準確稱量的表皮細胞生長因子提取液(按照實施例1提供的表皮細胞生長因子提取液的製備方法製備獲得)、胰島素提取液(按照實施例1提供的胰島素提取液的製備方法製備獲得)、水溶性殼聚糖、聚乙二醇400混合，加入約50ml的水，充分溶解後，加水至100ml，滅菌，分裝，即得。

實施例4藥物製劑的製備

按照如下配方準確稱量各個組分，備用：

按照如下方法製備獲得含藥物組合物的噴劑：

將準確稱量的表皮細胞生長因子提取液(按照實施例1提供的表皮細胞生長因子提取液的製備方法製備獲得)、胰島素提取液(按照實施例1提供的胰島素提取液的製備方法製備獲得)、水溶性殼聚糖、聚乙二醇400混合，加入約50ml的水，充分溶解後，加水至100ml，滅菌，分裝，即得。

實施例5藥物製劑的製備

按照如下配方準確稱量各個組分，備用：

按照如下方法製備獲得含藥物組合物的噴劑：

將準確稱量的表皮細胞生長因子提取液(按照實施例1提供的表皮細胞生長因子提取液的製備方法製備獲得)、胰島素提取液(按照實施例1提供的胰島素提取液的製備方法製備獲得)、水溶性殼聚糖、珍珠粉、聚乙二醇400混合，加入約50ml的水，充分溶解後，加水至100ml，滅菌，分裝，即得。

實施例6藥物製劑的製備

按照如下配方準確稱量各個組分，備用：

按照如下方法製備獲得含藥物組合物的噴劑：

將準確稱量的表皮細胞生長因子提取液(按照實施例1提供的表皮細胞生長因子提取液的製備方法製備獲得)、胰島素提取液(按照實施例1提供的胰島素提取液的製備方法製備獲得)、水溶性殼聚糖、三七粉、聚乙二醇400混合，加入約50ml的水，充分溶解後，加水至100ml，滅菌，分裝，即得。

實施例7藥物製劑的製備

按照如下配方準確稱量各個組分，備用：

按照如下方法製備獲得含藥物組合物的噴劑：

將準確稱量的表皮細胞生長因子提取液(按照實施例1提供的表皮細胞生長因子提取液的製備方法製備獲得)、胰島素提取液(按照實施例1提供的胰島素提取液的製備方法製備獲得)、水溶性殼聚糖、珍珠粉、聚乙二醇400混合，加入約50ml的水，充分溶解後，加水至100ml，滅菌，分裝，即得。

實施例8藥效實驗

試驗材料：Wistar大白鼠30隻，體重150-180克(g)，雌雄各半，購自濟南磐升生物技術有限責任公司。實施例2製備獲得的藥物製劑為試驗組，「百多邦」莫匹羅星軟膏為對照組、生理鹽水為空白對照組。

試驗方法：

1、動物模型：深Ⅱ度燙傷模型的製備。將大鼠背部皮膚去毛後，浸入85℃恆溫水浴中，持續15秒，造成深Ⅱ度燙傷，面積4*6cm，體表面積的10％。

2、動物分組：採用雌雄分別隨機均衡分組法，共分三組：(1)空白對照組10隻，塗抹生理鹽水。(2)對照組10隻，塗抹「百多邦」莫匹羅星軟膏(主要成份：莫匹羅星)。(3)試驗組10隻，塗抹「實施例2製備獲得的藥物製劑」。上述三組每天換藥一次，每次每cm2塗藥2ml，觀察15天，記錄三組大白鼠的創面癒合時間(天)和癒合率(％)，實驗結果見表1。

表1觀察記錄表

試驗結果討論：

試驗組10隻受試物創面7天左右癒合，癒合率達到100％。塗抹生理鹽水的空白對照組15天後，受試物創面癒合率為0％。對照組12±2天，受試物創面癒合率為20％。試驗表明，與空白對照組和對照組相比較，實施例2製備獲得 的藥物製劑可以促進創面癒合，具有顯著的皮膚修復作用(P≤0.01)。

分別採用實施例3至實施例7製備獲得的藥物製劑，按照相同的試驗方法檢測各個藥物製劑的活性，得到了相似的實驗結果，說明本發明提供的藥物組合物、藥物製劑能夠有效促進創面癒合，具有皮膚修復作用，可作為治療皮膚創傷的藥物。

實施例9臨床觀察實驗

材料：實施例2製備獲得的藥物製劑。

治療方法：糖尿病患者的瘡面經生理鹽水或硫酸慶大黴素注射液洗瘡後，將消毒藥棉浸漬適量藥液鋪於瘡面上，或將藥液直接塗於患處再覆蓋輔料，每天或隔日換藥一次療程7-15天。

附病例1：

王XX，女，68歲，患Ⅱ型糖尿病15餘年，於2013年6月患帶狀皰疹，左胸、背部簇集性血疹，水皰，皮疹，皮膚潮紅，呈帶狀分布。用實施例2製備獲得的藥物製劑治療後，10天左右上述皮疹自行吸收，皮膚光滑同正常皮膚，無瘢痕。

附病例2：

田XX，男，60歲，患Ⅱ型糖尿病5年。2013年10月，左小腿因外傷引起紅斑、丘疹，滲出液瘙癢，3周後發展為全身泛性溼疹，住院16天經控制糖尿病和抗過敏治療雖全身丘疹治癒，但左小腿的創傷仍未愈，自動出院。左小腿患處潰爛，其面積為20×20cm2。用多種中、西藥膏均過敏，用實施例2製備獲得的藥物製劑治療後，2周左右皮膚痊癒，痊癒後皮膚光滑同正常皮膚，無瘢痕。

附病例3：

張XX，女，65歲，患Ⅱ型糖尿病10餘年，2013年6月因摔傷，大腿三處骨折，進行外科手術，術後刀口有3處，刀口分別長10cm/8cm/5cm。術後拆線，用實施例2製備獲得的藥物製劑治療7天後，刀口痊癒，無明顯疤痕。

附病例4：

鄧XX，男，60歲，患Ⅱ型糖尿病6年，2012年7月開水燙傷右上肢前端呈水皰，但未感染，其面積為4×9cm2。用實施例2製備獲得的藥物製劑治療5天後痊癒，痊癒後皮膚光滑同正常皮膚，無瘢痕。