加熱的色譜分離方法與流程

2023-06-15 21:16:26

分案聲明

本申請是申請日為2012年07月06日，申請號為201280033631.2，發明名稱為「加熱的色譜分離方法」的發明專利申請的分案申請。

本發明涉及純化多元不飽和脂肪酸(pufa)及其衍生物的改進的色譜分離方法。特別是，本發明涉及允許待使用的洗脫液的量減少的改進的色譜分離方法。

背景技術：

脂肪酸(特別是pufa)及其衍生物是生物學上重要分子的前體，它們在調節諸如血小板聚集、炎症和免疫反應等生物學功能中起著重要作用。因此，pufa及其衍生物可在治療上可用於治療廣泛的病理病症，這病理病症包括cns病症、包括糖尿病性神經病變的神經病變、心血管疾病、包括炎性皮膚疾病的全身免疫系統和炎症病症。

在諸如蔬菜油和海洋油等天然進料中發現pufa。然而，這些pufa經常以飽和脂肪酸和許多其他雜質的摻和劑存在於這些油中。因此，在用於營養或用於藥物之前，應該對pufa進行合意的純化。

不幸的是，pufa極易被破壞。因此，當在氧存在下加熱時，它們易於發生異構化反應、過氧化反應和低聚反應。因此，難以通過pufa產物的分餾和純化來製備純脂肪酸。即使在真空條件下蒸餾也可能導致不可接受的產物降解。

色譜分離技術為本領域技術人員所眾所周知。涉及固定床系統和模擬或真實移動床系統的色譜分離技術均為本領域技術人員所熟悉。

在常規的固定床色譜系統中，其組分待分離的混合物滲透通過容器。該容器一般是圓柱形的，並且通常被稱為柱。該柱含有對流體表現出高滲透率的多孔材料的填料(一般稱為固定相)。混合物中各組分的滲透速度取決於該組分的物理性質，從而使得組分接連地且優選地從柱中出來。因此，一些組分趨向於牢固地固定到固定相，並且因此將緩慢地滲出，然而其他組分趨向於薄弱地固定並更快速地從柱中出來。已經提出許多不同的固定床色譜系統並且這些固定床色譜系統均被用於分析目的和工業生產目的。

模擬和真實移動床色譜是本領域技術人員所熟悉的已知技術。操作原理涉及液體洗脫液相和固體吸附劑相的逆流移動。該操作允許溶劑的最小用量，從而使得該方法經濟可行。已經發現這種分離技術在不同領域中的若干應用，這些領域包括碳氫化合物、工業化學品、油、糖和api。

因此，模擬移動床系統由含有串聯連接在一起的吸附劑的若干獨立的柱組成。在第一方向上洗脫液通過該柱。在系統中原料和洗脫液的注入點和已分離組分的收集點依靠一系列閥門而周期性地移動。整體效應將模擬含有固體吸附劑的移動床的單一柱的操作，固體吸附劑在洗脫液的流動的逆流方向上移動。因此，如常規的固定床系統中的，模擬移動床系統由含有洗脫液通過的固體吸附劑的固定床的柱組成；但在模擬移動床系統中，該操作達到模擬連續逆流移動床的程度。

參照圖1，示出了典型的模擬移動床色譜設備。通過考慮含有被分成多段(section)(更精確地說，從柱的底部到頂部被分成四個重疊的子區域i、ii、iii和iv)的固定相s的豎直的色譜柱來解釋模擬或真實移動床色譜分離方法的概念。藉助於泵p在底部的ie處引入該洗脫液。在子區域ii和子區域iii之間的ia+b處引入待分離的組分a和b的混合物。在子區域i和子區域ii之間的sb處收集主要含有b的提取物，並且在子區域iii和子區域iv之間的sa處收集主要含有a的提餘物。

在模擬移動床系統的情況下，通過引入點和收集點相對於固體相的移動來引起固定相s的模擬向下移動。在真實移動床系統的情況下，通過多個色譜柱相對於引入點和收集點的移動來引起固定相s的模擬向下移動。在圖1中，洗脫液向上流動，並且混合物a+b注入到子區域ii和子區域iii之間。組分將根據它們與固定相的色譜相互作用(例如在多孔介質上的吸附)而移動。對固定相表現出較強的親和力的組分b(運動較慢的組分)將會較慢地被洗脫液夾帶並且將會由延遲地跟隨著洗脫液。對固定相表現出較弱的親和力的組分a(運動較快的組分)將會容易地被洗脫液夾帶。如果恰當地估計和控制參數的合適設置(特別是在每個子區域中的流速)，那麼將在子區域iii和子區域iv之間收集展示對固定相的較弱親合性的組分a作為提餘物，並且在子區域i和子區域ii之間收集展示對固定相的較強親合性的組分b作為提取物。

因此，應當理解的是，示意性示出在圖1中的常規的移動床系統僅限於二元分餾。

在下列若干專利中描述了用於模擬移動床色譜的方法和裝置，這些專利包括：us2985589、us3696107、us3706812、us3761533、fr-a-2103302、fr-a-2651148和fr-a-2651149，通過引用將這些專利的全文併入本文中。該主題還在ganetsos和barker編輯的「preparativeandproductionscalechromatography」，marceldekkerinc,newyork,1993中得以充分論述，通過引用將其全文併入本文中。

真實移動床系統在操作上類似於模擬移動床系統。然而，不是藉助於閥門系統來變換進料混合物和洗脫液的注入點與被分離開的組分的收集點，而是使一系列吸附部件(即，柱)相對於進料點和排出點進行物理移動。再者，操作達到模擬連續的逆流的移動床的程度。

在以下若干專利中描述了真實移動床色譜的方法和裝置，這些專利包括：us6979402、us5069883和us4764276，通過引用將這些專利併入本文中。

pufa產物的純化特別有挑戰性。因此，用於製備pufa產物的許多合適的原料是極其複雜的混合物，該極其複雜的混合物含有大量在色譜設備中具有非常相似的保留時間的不同組分的。因此，非常難以將治療上有用的pufa與這些原料分離。然而，特別是對於藥物應用和營養食品應用來講，需要高純度的pufa產物。因此歷史上，當需要高純度pufa產物時，已經使用了蒸餾。然而，如上所討論，使用蒸餾作為用於難以處理的pufa的分離技術具有顯著的缺點。

一般而言，分離pufa的所有色譜分離技術利用大體積的有機溶劑作為洗脫液。在完成色譜分離方法後，必須從洗脫液中的溶液中回收pufa。典型地，巨大支出的時間和精力涉及到從洗脫液中的溶液中回收pufa。而且，用作色譜分離方法中的洗脫液的有機溶劑經常有害於環境或處理它們的技工。因此，需要待使用的有機溶劑的量減少的色譜分離方法。

如上所述，含有pufa的合適的商業原料，例如魚油，典型地含有在色譜設備中具有非常相似的保留時間的大量的不同組分。因此，也需要提高在具有相似的保留時間的進料混合物的組分之間的解析度的色譜分離方法。

技術實現要素：

已經有利地發現，在室溫以上的溫度下所進行的色譜分離方法需要較少的有機溶劑洗脫液。因此，在高溫(elevatedtemperature)下，基本上減少了商業上關注的很多pufa的保留時間，反過來，意味著較少的有機溶劑洗脫液必須用於分離含有各種不同的pufa的混合物，例如魚油原料，或魚油衍生的原料。

已經有利地發現，使用含水有機溶劑來提高色譜分離方法中使用的水的量提高了存在於具有相似的保留時間的進料混合物中的組分的解析度。這意味著具有較高的水含量的洗脫液允許pufa產物與進料混合物較乾淨地分離。

因此，本發明提供了從進料混合物中回收多元不飽和脂肪酸(pufa)產物的色譜分離方法，該方法包括進料混合物通過含有作為洗脫液的含水有機溶劑的一個或多個色譜柱，

其中，進料混合物通過色譜柱中的至少一個的溫度大於室溫。

附圖說明

圖1示出用於分離二元混合物的模擬或真實移動床方法的基本原理。

圖2示出適合於將epa與運動較快和較慢的組分(即，極性較大和極性較小的雜質)分離的本發明的一個具體實施方式。

圖3示出適合於將dha與運動較快和較慢的組分(即，極性較大和極性較小的雜質)分離的本發明的一個具體實施方式。

圖4更詳細地示出適合於將epa與運動較快和較慢的組分(即，極性較大和極性較小的雜質)分離的本發明的一個具體實施方式。

圖5更詳細地示出適合於將dha與運動較快和較慢的組分(即，極性較大和極性較小的雜質)分離的本發明的一個具體實施方式。

圖6更詳細地示出適合於將epa與運動較快和較慢的組分(即，極性較大和極性較小的雜質)分離的本發明的第一優選的實施方式的替代方法。

圖7更詳細地示出適合於將dha與運動較快和較慢的組分(即，極性較大和極性較小的雜質)分離的本發明的第二優選的實施方式的替代方法。

圖8示出用於純化與運動較快和較慢的組分(即，極性較大和極性較小的雜質)分離的epa的本發明的一個具體實施方式。

圖9示出用於純化與運動較快和較慢的組分(即，極性較大和極性較小的雜質)分離的epa的本發明的一個具體實施方式的替代方法。

圖10示出可以進行本發明的色譜分離方法的一個具體實施方式的三種方式。

圖11顯示用於純化與運動較快和較慢的組分(即，極性較大和極性較小的雜質)分離的epa的進一步的實施方式。

圖12顯示按照本發明所生產的epapufa的gcfames跡線(traces)。

圖13顯示按照本發明所生產的epapufa的gcfames跡線。

具體實施方式

如本文所用的，術語「pufa產物」是指包含一種或多種的典型地具有營養或藥物重要性的多元不飽和脂肪酸(pufa)和/或其衍生物的產物。典型地，pufa產物是單一的pufa或其衍生物。或者，pufa產物是兩種或更多種pufa或其衍生物，例如兩種pufa或其衍生物的混合物。

術語「多元不飽和脂肪酸」(pufa)是指含有多於一個雙鍵的脂肪酸。這種pufa為本領域技術人員所周知。如本文所用的，pufa衍生物是甘油單酯、甘油二酯或甘油三酯、酯、磷脂、醯胺、內酯或鹽形式的pufa。甘油三酯和酯是優選的。酯是更優選的。酯典型地為烷基酯，優選c1～c6的烷基酯，更優選c1～c4的烷基酯。酯的實例包括甲酯和乙酯。乙酯是最優選的。

典型地，pufa產物含有至少一種ω-3或ω-6pufa，優選至少一種ω-3pufa。ω-3pufa的實例包括α-亞麻酸(ala)、十八碳四烯酸(sda)、二十碳三烯酸(ete)、二十碳四烯酸(eta)、二十碳五烯酸(epa)、二十二碳五烯酸(dpa)和二十二碳六烯酸(dha)。優選sda、epa、dpa和dha。更優選epa和dha。ω-6pufa的實例包括亞油酸(la)、γ-亞麻酸(gla)、二十碳二烯酸、二高-γ-亞麻酸(dgla)、花生四烯酸(ara)、二十二碳二烯酸、腎上腺酸以及二十二碳五(ω-6)烯酸。優選la、ara、gla和dgla。

在一個實施方式中，pufa產物是epa和/或epa乙酯(ee)。

在另一個實施方式中，pufa產物是dha和/或dha乙酯(ee)。

在又一個實施方式中，pufa產物是epa和dha和/或epaee和dhaee的混合物。

在最優選的實施方式中，pufa產物是epa或epa乙酯，所生產的epa或epa乙酯的純度為大於90％的純度，優選為大於95％的純度，並且更優選為大於97％的純度。

典型地，除了所述pufa產物，在本發明的色譜分離方法中收集另外的次要pufa產物。優選地，pufa產物是epa，並且另外的次要pufa產物是dha。

在本發明的進一步的實施方式中，該設備配置為收集pufa產物，該pufa產物是epa和dha的濃縮混合物。因此，使用含有epa、dha、比epa和dha極性更大的組分以及比epa和dha極性更小的組分的進料混合物。在第一分離步驟中，典型地移出比epa和dha極性更小的材料。在第二分離步驟中，典型地移出比epa和dha極性更大的材料，並且收集epa和dha的濃縮混合物作為pufa產物。

適用於通過本發明的方法分餾的進料混合物可以從包括植物和動物油和脂肪的天然來源中和從包括基因修飾的植物、動物和包括酵母的微生物的合成來源中獲得。實例包括魚油、藻油和微藻油以及植物油，例如琉璃苣油，藍薊油和月見草油。在一個實施方式中，進料混合物是魚油。在另一個實施方式，進料混合物是藻油。當期望的pufa產物是epa和/或dha時，藻油特別合適。當期望的pufa產物是gla時，基因修飾的紅花油特別合適。當期望的pufa產物是epa時，基因修飾的酵母特別合適。

在特別優選的實施方式中，進料混合物是魚油或魚油衍生的原料。已經有利地發現，當使用魚油或魚油衍生的原料時，通過本發明的方法可以大於90％的純度，優選為大於95％的純度，並且更優選為大於97％的純度生產epa或epa乙酯pufa產物。

在通過本發明的方法分餾之前，進料混合物可以經歷化學處理。例如，它可以經歷甘油酯交換或甘油酯水解，在某些情況下，接著經歷選擇性方法，諸如結晶、分子蒸餾、尿素分餾、硝酸銀或其他金屬鹽溶液的萃取、碘內酯化反應或超臨界流體分餾。或者，進料混合物可以直接使用而沒有初始處理步驟。

進料混合物典型地含有pufa產物以及至少一種極性較大的組分和至少一種極性較小的組分。極性較小的組分相比pufa產物對本發明的方法中使用的吸附劑具有更強的吸附力。在操作期間，這種極性較小的組分典型地優先於液體洗脫液相而隨著固體吸附劑相移動。極性較大的組分相比pufa產物對本發明的方法中使用的吸附劑具有更弱的吸附力。在操作期間，這種極性較大的組分典型地優先於固體吸附劑相而隨著液體洗脫液相移動。一般而言，極性較大的組分將分離進入提餘物流，而極性較大的組分將分離進入提取物流。

極性較大和極性較小的組分的實例包括(1)存在於天然油(例如，海洋油或植物油)中的其他組分，(2)貯藏、精煉和在先前濃縮步驟期間形成的副產物以及(3)來自先前濃縮或純化步驟期間利用的溶劑或試劑的汙染物。

(1)的實例包括其他不需要的pufa；飽和脂肪酸；固醇，例如膽固醇；維生素；以及環境致汙物，諸如多氯聯苯(pcb)、聚芳烴(pah)殺蟲劑、有機氯殺蟲劑、二噁英和重金屬。pcb、pah、二噁英和有機氯殺蟲劑都是高度非極性的組分。

(2)的實例包括來自pufa產物的同分異構體以及氧化或分解產物，例如，脂肪酸及其衍生物的自氧化聚合產物。

(3)的實例包括可以加入以從進料混合物中移出飽和或單一不飽和脂肪酸的尿素。

優選地，進料混合物是含pufa的海洋油(例如，魚油)，更優選的是包含epa和/或dha的海洋油(例如，魚油)。

通過本發明的方法製備濃縮的epa(ee)的典型的進料混合物包含50～75％的epa(ee)、0～10％的dha(ee)以及包括其他必要的ω-3和ω-6脂肪酸的其他組分。

通過本發明的方法製備濃縮epa(ee)的優選的進料混合物包括：55％的epa(ee)、5％的dha(ee)以及包括其他必要的ω-3和ω-6脂肪酸的其他組分。dha(ee)比epa(ee)極性更小。

通過本發明的方法製備濃縮dha(ee)的典型的進料混合物包括：55～75％的dha(ee)、0～10％的epa(ee)以及包括其他必要的ω-3和ω-6脂肪酸的其他組分。

通過本發明的方法製備濃縮dha(ee)的優選的進料混合物包括：75％的dha(ee)、7％的epa(ee)以及包括其他必要的ω-3和ω-6脂肪酸的其他組分。epa(ee)比dha(ee)極性更大。

通過本發明的方法製備epa(ee)和dha(ee)的濃縮混合物的典型的進料混合物包括：大於33％的epa(ee)和大於22％的dha(ee)。

典型地，本發明的方法中使用的所有色譜柱的溫度大於室溫。

如將理解的是，在大於室溫的溫度下至少一個色譜柱中，柱的內部對分離方法來說是重要的。因此，典型地，色譜柱裡面的含水有機溶劑洗脫液和吸附劑的溫度大於室溫。當然，可以通過內部機構(例如通過加熱洗脫液和/或進料混合物)和/或外部機構(例如通過用任何已知傳統機構加熱色譜柱的外面)在至少一個色譜柱裡面獲取所需的溫度。

典型地，通過加熱含水有機溶劑洗脫液和/或進料混合物來獲取加熱後的色譜柱的所需高溫。這具有內部加熱柱的效果。

因此，進料混合物通過色譜柱中的至少一個的溫度也可以測量為含水有機溶劑洗脫液的溫度。

因此，本發明也提供了從進料混合物中回收多元不飽和脂肪酸(pufa)產物的色譜分離方法，該方法包括使進料混合物通過含有作為洗脫液的含水有機溶劑的一個或多個色譜柱，

其中，如本文所定義的，洗脫液的溫度高於室溫。

或者，通過加熱柱來獲取色譜柱中的至少一個的所需溫度。使用例如電加熱罩、熱水套或盤管(coil)或者通過熱輻射燈來進行加熱。典型地加熱一個或多個色譜柱的內部和/或外部。

可以通過加熱柱和/或含水有機溶劑洗脫液和/或進料混合物來獲取色譜柱中的至少一個的所需溫度。

典型地，色譜柱中的至少一個的溫度大於30℃，優選大於35℃，更優選大於40℃，甚至更優選大於45℃，甚至更優選大於50℃，甚至更優選大於55℃，並且甚至更優選大於57℃。在某些實施方式中，56℃的溫度是有利的。

典型地，色譜柱中的至少一個的溫度為至多100℃，優選至多95℃，更優選至多90℃，甚至更優選至多85℃，甚至更優選至多80℃，甚至更優選至多75℃，並且甚至更優選至多70℃。

典型地，色譜柱中的至少一個的典型的溫度範圍為30～100℃、35～95℃、40～90℃、45～85℃、50～80℃、55～75℃或者57～70℃。

色譜柱中的至少一個的優選的溫度範圍為40～70℃，優選為50～67℃，更優選56～65℃，並且甚至更優選57～63℃。

本發明的方法涉及使進料混合物通過一個或多個色譜柱。任何已知的色譜柱可以用於所要求保護的方法。

一個或多個色譜柱典型地含有吸附劑。色譜分離技術領域中已知的常規吸附劑可以用於本發明的方法。當使用多於一個色譜柱時，每個色譜柱可以含有相同的或不同的吸附劑。典型地，當使用多於一個色譜柱時，每個柱含有相同的吸附劑。這種通常使用的材料實例是聚合物珠粒，優選用dvb(二乙烯基苯)成網的聚苯乙烯；和矽膠，優選具有c8或c18烷烴的反相鍵合的矽膠，特別是c18烷烴的反相鍵合的矽膠。優選的是c18鍵合的反相矽膠。本發明的方法中使用的吸附劑優選是非極性的。

吸附劑固定相材料的形狀可以是例如球形或非球形的珠粒，優選為基本上球形的珠粒。這種珠粒的直徑典型地為5～500微米，優選為10～500微米，更優選為15～500微米，更優選為40～500微米，更優選為100～500微米，更優選為250～500微米，更加優選為250～400微米，最優選為250～350微米。在一些實施方式中，可以使用的珠粒的直徑為5～35微米，典型地為10～30微米，優選為15～25微米。一些優選的粒徑多少比過去的模擬和真實移動床方法中使用的珠粒的粒徑更大。使用較大顆粒能夠使較低壓力的洗脫液用於該系統。依次地，這在設備的成本節約、效率和壽命方面上具有優勢。已驚奇地發現，大粒徑的吸附劑珠粒可以用於本發明的方法(具有它們的相關優勢)，而在解析度上沒有任何損失。

使用的柱的維度沒有特別受限制，並將在一定程度上取決於待純化的進料混合物的體積。技術人員將能夠易於確定適當大小的柱以應用。每個柱的直徑典型地為10～1000mm，優選為10～500mm，更優選為25～250mm，甚至更優選50～100mm，並最優選為70～80mm。每個柱的長度典型地為10～300cm，優選為10～200cm，更優選為25～150cm，甚至更優選為70～110cm，並更優選為80～100cm。

本發明的方法中使用的洗脫液是含水有機溶劑。

含水有機溶劑典型地包括水以及一種或多種醇、醚、酯、酮或腈或者其混合物。

醇溶劑為本領域技術人員所眾所周知。醇典型地為短鏈醇。醇的化學式典型地為roh，其中，r是直鏈或支鏈c1～c6烷基。c1～c6烷基優選為未取代的。醇的實例包括甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇、仲丁醇和叔丁醇。優選甲醇和乙醇。更優選甲醇。

醚溶劑為本領域技術人員所眾所周知。醚典型地為短鏈醚。醚典型地具有化學式r-o-r'，其中r和r'相同或不同，並且代表直鏈或支鏈的c1～c6烷基。c1～c6烷基優選為未取代的。優選的醚包括二乙醚、二異丙醚和甲基叔丁基醚(mtbe)。

酯溶劑為本領域技術人員所眾所周知。酯典型地為短鏈酯。酯典型地具有化學式r-(c＝o)-o-r'，其中r和r'相同或不同，並且代表直鏈或支鏈的c1～c6烷基。優選的酯包括乙酸甲酯和乙酸乙酯。

酮溶劑為本領域技術人員所眾所周知。酮典型地為短鏈酮。酮典型地具有化學式r-(c＝o)-r'，其中r和r'相同或不同，並且代表直鏈或支鏈的c1～c6烷基。c1～c6烷基優選為未取代的。優選的酮包括丙酮、甲乙酮和甲基異丁基酮(mibk)。

腈溶劑為本領域技術人員所眾所周知。腈典型地為短鏈腈。腈典型地具有化學式r-cn，其中，r代表直鏈或支鏈的c1～c6烷基。c1～c6烷基優選為未取代的。優選的腈包括乙腈。

典型地，含水有機溶劑是含水醇或含水乙腈。

含水有機溶劑優選為含水甲醇或含水乙腈。更優選含水甲醇。

典型地，洗脫液不是超臨界狀態。典型地，洗脫液是液體。

典型地，整個設備中的洗脫液的平均水與有機溶劑的比例，例如水:甲醇比例，為0.1:99.9～12:88體積份，優選為0.25:99.75～10:90體積份，並更優選為0.5:99.5～9:91體積份。在一些實施方式中，整個設備中的洗脫液的平均水與有機溶劑的比例，例如水:甲醇比例，優選為0.1:99.9～9:91體積份，更優選為0.25:99.75～7:93體積份，甚至更優選為0.5:99.5～6:94體積份。在其他實施方式中，整個設備中的洗脫液的平均水與有機溶劑的比例，例如水:甲醇比例，優選為4:96～12:88體積份，優選為6:94～10:90體積份，優選為7:93～9:91體積份，甚至優選為7.5:92.5～8.5:91.5體積份。

當含水有機溶劑是含水乙腈時，洗脫液典型地含有至多30wt％的水，餘量為乙腈。優選地，洗脫液含有5～25wt％的水，餘量為乙腈。更優選地，洗脫液含有10～20wt％的水，餘量為乙腈。甚至更優選地，洗脫液含有15～25wt％的水，餘量為乙腈。

典型地，基於水和有機溶劑的總重量，洗脫液含有5wt％的水或更多。優選地，洗脫液含有6wt％的水或更多，更優選7wt％的水或更多，甚至更優選約8wt％的水。因此，洗脫液典型地含有5～15wt％的水，優選6～13wt％的水，更優選7～11wt％的水，甚至更優選7.5～9.5wt％的水，甚至更優選7.5～8.5wt％的水。有利地，此增加的水含量提高了存在於進料混合物中的密切相關組分的解析度。增加的水含量的洗脫液可以在某些環境下需要較大體積的正使用的洗脫液。在實踐中，這通過將進料混合物通過的色譜柱中的至少一個加熱至大於室溫的溫度，優選通過將洗脫液加熱至大於室溫的溫度而進行彌補(offset)。以此方式加熱柱和/或洗脫液減少需要使用的溶劑量。

任何已知的色譜設備均可以用於本發明的方法目的，只要它涉及使進料混合物通過一個或多個含有作為洗脫液的含水有機溶劑的色譜柱，其中，進料混合物通過的色譜柱中的至少一個的溫度大於室溫。

在模擬或移動床色譜設備進行本發明的方法的每個分離步驟。

本發明的方法中使用的色譜柱數不特別受限制。在某些實施方式中，可以使用單一色譜柱。因此，這種實施方式典型地涉及單一固定柱。

在其他的實施方式中，使用多於一個色譜柱。這可以涉及使進料混合物通過兩個或更多個串聯或並聯布置的可相同或不同的色譜柱。在此實施方式中使用的柱數不特別受限制，但是典型地不超過三十個柱。

使用多個色譜柱的一個具體實施方式是模擬或真實移動床色譜。

因此，本發明的方法典型地包括引入進料混合物到具有含有作為洗脫液的含水有機溶劑的多個連接的色譜柱的一個或多個模擬或真實移動床色譜設備中，其中，多個連接的色譜柱中的至少一個的溫度大於室溫。

典型地，基本上所有連接的色譜柱的溫度大於室溫。優選地，所有連接的色譜柱的溫度大於室溫。

任何已知的模擬或真實移動床色譜設備均可以用於本發明的方法的目的，只要設備按照本發明的方法使用。如果依照本發明的方法進行配置，us2985589、us3696107、us3706812、us3761533、fr-a-2103302、fr-a-2651148、fr-a-2651149、us6979402、us5069883和us4764276中描述的這些設備都可以使用。

在一個實施方式中，該方法包括步驟：

(i)在具有含有作為洗脫液的含水有機溶劑的多個連接的色譜柱的模擬或真實移動床色譜設備中的第一分離步驟中，純化進料混合物以獲得中間產物；以及(ii)在使用具有含有作為洗脫液的含水有機溶劑的多個連接的色譜柱的模擬或真實移動床色譜設備的第二分離步驟中，純化(i)中獲得的中間產物以獲得pufa產物；

其中，第一分離步驟中的多個連接的色譜柱中的一個或多個的溫度和/或第二分離步驟中的多個連接的色譜柱中的一個或多個的溫度大於室溫；並且其中，

(a)在同一色譜設備上依次進行第一和第二分離步驟，在第一和第二分離步驟之間回收中間產物並且在第一和第二分離步驟之間調節在色譜設備中的方法條件，使得在每個分離步驟中將pufa產物與進料混合物的不同組分分離；或者

(b)在單獨的第一和第二色譜設備上分別進行第一和第二分離步驟，從第一分離步驟中所獲得的中間產物引入到第二色譜柱中，並且在每個分離步驟中將pufa產物與進料混合物的不同組分分離。

在此實施方式中，術語「模擬或真實移動床色譜設備」典型地是指多個連接的色譜柱，該多個連接的色譜柱含有作為洗脫液的含水有機溶劑，並且具有進料混合物流的一個或多個注入點、水和/或有機溶劑的一個或多個注入點、從所述多個連接的色譜柱中能夠收集液體的提餘物取出流、來自所述多個連接的色譜柱的提取物流和提餘物流，由所述提取物流和提餘物流能夠收集液體。

在此實施方式中使用的色譜設備具有含有作為洗脫液的含水有機溶劑的單一列的串聯連接的色譜柱。典型地，每個色譜柱連接到設備中與該柱相鄰的兩個柱。因此，來自該列中的給定柱的輸出連接到該列中的相鄰的柱的輸入，相對於該列中的洗脫液的流動是下遊。因此，洗脫液可以繞著連接的色譜柱的列流動。典型地，沒有色譜柱連接到該設備中的不相鄰的柱。

如本文所使用的，術語「不相鄰」是指在例如相同設備中，由一個或多個柱，優選3個或更多個柱，更優選5個或更多個柱，最優選約5個柱分開的柱。

典型地，在此實施方式中，每個設備僅具有進料混合物的一個注入點。在一個實施方式中，每個設備僅具有含水有機溶劑洗脫液的一個注入點。在另一個實施方式中，每個設備具有水和/或有機溶劑的兩個或更多個注入點。

術語「提餘物」為本領域技術人員所眾所周知。在真實和模擬移動床色譜的上下文中，它是指與固體吸附劑相相比隨液體洗脫液相移動更迅速的組分的流。因此，與進料流相比，提餘物流典型地富含極性較大的組分並缺乏極性較小的組分。

術語「提取物」為本領域技術人員所眾所周知。在真實和模擬移動床色譜的上下文中，它是指與液體洗脫液相相比隨固體吸附劑相移動更迅速的組分的流。因此，與進料流相比，提取物流典型地富含極性較小的組分並缺乏極性較大的組分。

在此實施方式中，每個設備中使用的柱數不特別受限制。技術人員將能夠易於確定適當的柱數以使用。柱數典型地為4個或更多個，優選為6個或更多個，更優選為8個或更多個，例如4、5、6、7、8、9或10個柱。在優選的實施方式中，使用5個或6個柱，更優選6個柱。在另一個優選的實施方式中，使用7個或8個柱，更優選8個柱。典型地，有不多於25個柱，優選不多於20個柱，更優選不多於15個柱。

在此實施方式中，第一和第二分離步驟中使用的色譜設備典型地含有相同的柱數。對於某些應用，它們可以具有不同的柱數。

在此實施方式中，第一和第二分離步驟中使用的色譜設備中的柱典型地具有相同的維度，但對於某些應用，可以具有不同的維度。

柱的流速受限於一系列柱中的最大壓力並且取決於柱的維度和固體相的粒徑。本領域技術人員將能夠易於建立每個柱維度的所需流速以確保充分解吸。直徑較大的柱一般將需要較高的流動以保持穿過柱的線性流動。

在此實施方式中，對於上面所概述的典型的柱大小，典型地，進入第一分離步驟中使用的色譜設備的洗脫液的流速為1～4.5l/min，優選為1.5～2.5l/min。典型地，來自第一分離步驟中使用的色譜設備的提取物的流速為0.1～2.5l/min，優選為0.5～2.25l/min。在來自第一分離步驟的提取物的一部分循環回到第一分離步驟的中使用的設備的實施方式中，循環的流速典型地為0.7～1.4l/min，優選為約1l/min。典型地，來自第一分離步驟中使用的色譜設備的提餘物的流速為0.2～2.5l/min，優選為0.3～2.0l/min。在來自第一分離步驟的提餘物的一部分循環回到第一分離步驟中使用的設備的實施方式中，循環的流速典型地為0.3～1.0l/min，優選為約0.5l/min。典型地，進料混合物引入到第一分離步驟中使用的色譜設備中的流速為5～150ml/min，優選為10～100ml/min，更優選為20～60ml/min。

在此實施方式中，對於上面所概述的典型的柱大小，典型地，進入第二分離步驟中使用的色譜設備的洗脫液的流速為1～4l/min，優選為1.5～3.5l/min。典型地，來自第二分離步驟中使用的色譜設備的提取物的流速為0.5～2l/min，優選為0.7～1.9l/min。在來自第二分離步驟的提取物的一部分循環回到第二分離步驟中使用的設備的實施方式中，循環的流速典型地為0.6～1.4l/min，優選為0.7～1.1l/min，更優選為約0.9l/min。典型地，來自第二分離步驟中使用的色譜設備的提餘物的流速為0.5～2.5l/min，優選為0.7～1.8l/min，更優選為約1.4l/min。在來自第二分離步驟的提餘物的一部分循環回到第二分離步驟中使用的設備的實施方式中，循環的流速典型地為0.3～1.0l/min，優選為約0.5l/min。

如技術人員將理解的，經由各種提取物流和提餘物流所收集或移出的液體的速率的參數是指一段時間中移出的液體體積，典型地為l/min。相似地，液體循環回到設備，典型地回到設備中的相鄰的柱的速度的參考是指一段時間中循環的液體體積，典型地為l/min。

在此實施方式中，優選真實移動床色譜。

步進時間(steptime)，即切換進料混合物和洗脫液的注入點與所收集的餾分的各種取出點之間的時間，不特別受限制，並且將取決於所使用的柱數和維度以及通過設備的流速。技術人員將能夠易於確定合適的步進時間以用於本發明的方法。步進時間典型地為100～1000秒，優選為200～800秒，更優選為250～750秒。在一些實施方式中，合適的步驟時間為100～400秒，優選為200～300秒，更有優選為約250秒。在其他實施方式中，合適的步進時間為600～900秒，優選為700～800秒，更優選為約750秒。

在此實施方式中，本發明的方法包括第一或第二分離方法。

這兩個步驟可以易於在單一色譜設備上進行。因此，在一個實施方式中，(a)第一和第二分離步驟依次在同一色譜設備上進行，在第一和第二步驟之間回收中間產物並且在第一和第二分離步驟之間調節色譜設備中的方法條件，使得在每個分離步驟中將pufa產物與進料混合物的不同組分分離。此分離方法的優選實施方式如圖10a所示。因此，第一分離步驟(左手側)在具有8個柱的smb設備上進行。在第一和第二分離步驟之間，中間產物回收到例如容器中，調節色譜設備中的方法條件，使得在每個分離步驟中將pufa產物與進料混合物的不同組分分離。然後，第二分離步驟(右手側)在具有8個柱的smb設備上進行。

在實施方式(a)中，調節方法步驟通常是指整體上調節設備中的方法條件，即物理調節設備使得條件不同。它不是指簡單地再次引入中間產物回到方法條件可能碰巧不同的相同設備的不同部分中。

或者，第一和第二分離色譜設備可以用於第一和第二分離步驟。因此，在另一個實施方式中，(b)第一和第二分離步驟分別在單獨的第一和第二色譜設備上進行，來自第一分離設備的中間產物引入到第二色譜設備中，並且在每個分離步驟中將pufa產物與進料混合物的不同組分分離。

在實施方式(b)中，兩個分離步驟可以依次進行或同時進行。

因此，在兩個分離步驟依次進行的情況下的實施方式(b)中，第一和第二分離步驟依次分別在單獨的第一和第二色譜設備上進行，在第一和第二分離步驟之間回收中間產物並且調節第一和第二色譜設備中的方法條件，使得在每個分離步驟中將pufa產物與進料混合物的不同組分分離。此分離方法的優選實施方式如圖10b所示。因此，第一分離步驟(左手側)在具有8個柱，一至八，的smb設備上進行。在第一和第二分離步驟之間，中間產物回收到例如容器中，然後引入到第二分離smb設備中。第二分離步驟(右手側)在具有8個柱，九至十六，的第二分離smb設備上進行。調節兩個色譜設備中的方法條件，使得在每個分離步驟中將pufa產物與進料混合物的不同組分分離。

在兩個分離步驟同時進行的情況下的實施方式(b)中，第一和第二分離步驟同時在單獨的第一和第二色譜設備上進行，在第一和第二分離步驟之間將中間產物引入到第二分離步驟中使用的色譜設備中，並且調節第一和第二色譜設備中的方法條件，使得在每個分離步驟中將pufa產物與進料混合物的不同組分分離。此分離方法的優選實施方式如圖10c所示。因此，第一分離步驟(左手側)在具有8個柱，一至八，的smb設備上進行。然後，第一分離步驟中獲得的中間產物引入到第二分離步驟中使用的第二分離色譜設備中。中間產物可以直接地或例如經由容器而間接地從第一分離步驟送到第二分離步驟。第二分離步驟(右手側)在具有8個柱，九至十六，的第二分離smb設備上進行。調節兩個色譜設備中的方法條件，使得在每個分離步驟中將pufa產物與進料混合物的不同組分分離。

在兩個分離步驟同時進行的情況下的實施方式(b)中，洗脫液單獨地在兩個單獨的色譜設備中循環。因此，除了在第二分離步驟中純化並引入到第二分離步驟中使用的色譜設備中的中間產物中可作為溶劑存在的洗脫液，在兩個單獨的色譜設備之間不共用洗脫液。在第一和第二分離步驟中使用的兩個單獨的色譜設備之間不共用色譜柱。

在此實施方式中，在第一分離步驟中獲得中間產物之後，在第二分離步驟中純化中間產物之前，可以部分地或全部地移出含水有機溶劑洗脫液。或者，可以在第二分離步驟中純化中間產物，而不移出任何存在的溶劑。

如上所提及的，在此實施方式中，在每個分離步驟中將pufa產物與進料混合物的不同組分分離。在實施方式(a)中，在第一和第二分離步驟之間調節兩個分離步驟中使用的單一smb設備的方法條件，使得在每個分離步驟中將pufa產物與進料混合物的不同組分分離。在實施方式(b)中，設置第一和第二分離步驟中使用的兩個單獨的色譜設備中的方法條件，使得在每個分離步驟中將pufa產物與進料混合物的不同組分分離。

因此，在此實施方式中，改變第一和第二分離步驟中的方法條件。改變的方法條件可以包括：例如，使用的柱的大小、使用的柱數、柱中使用的填料、smb設備的步進時間、設備的溫度、分離步驟中使用的洗脫液或設備中使用的流速，特別是經由提取物流或提餘物流所收集的液體的循環速率。

優選地，在此實施方式中，可以改變的方法條件是分離步驟中使用的洗脫液的水與有機溶劑的比例和/或經由分離步驟中的提取物流或提餘物流所收集的液體的循環速率。這兩個選項在下面進行更詳細的討論。

在此實施方式中，與進料混合物相比，第一分離步驟中獲得的中間產物典型地富含pufa產物。

在此實施方式中，第一分離步驟中獲得的中間產物然後引入到第二分離步驟中使用的色譜設備。

在此實施方式中，典型地收集中間產物作為來自第一分離步驟中使用的色譜設備的提餘物流或提取物流。

典型地，在此實施方式中，收集中間產物作為第一分離步驟中的提餘物流，並且收集pufa產物作為第二分離步驟中的提取物流。因此，第一分離步驟中收集的提餘物流用作第二分離步驟中的進料混合物。第一分離步驟中收集的提餘物流典型地含有pufa產物和極性較大的組分。

或者，在此實施方式中，收集中間產物作為第一分離步驟中的提取物流，並且收集pufa產物作為第二分離步驟中的提餘物流。因此，第一分離步驟中收集的提取物流用作第二分離步驟中的進料混合物。第一分離步驟中收集的提取物流典型地含有pufa產物和極性較小的組分。

在此實施方式中，在每個分離步驟中將pufa產物與進料混合物的不同組分分離。典型地，本發明的方法的每個分離步驟中分離的組分具有不同的極性。

優選地，在此實施方式中，在第一分離步驟中將pufa產物與進料混合物的極性較小的組分分離，並且在第二分離步驟中將pufa產物與進料混合物的極性較大的組分分離。

典型地，在此實施方式中，(a)來自第一分離步驟中使用的設備的提取物流的一部分循環回到第一分離步驟中使用的設備中；和/或

(b)來自第一分離步驟中使用的設備的提餘物流的一部分循環回到第一分離步驟中使用的設備中；和/或

(c)來自第二分離步驟中使用的設備的提取物流的一部分循環回到第二分離步驟中使用的設備中；和/或

(d)來自第二分離步驟中使用的設備的提餘物流的一部分循環回到第二分離步驟中使用的設備中。

優選地，在此實施方式中，(a)來自第一分離步驟中使用的設備的提取物流的一部分循環回到第一分離步驟中使用的設備中；和

(b)來自第一分離步驟中使用的設備的提餘物流的一部分循環回到第一分離步驟中使用的設備中；和

(c)來自第二分離步驟中使用的設備的提取物流的一部分循環回到第二分離步驟中使用的設備中；和

(d)來自第二分離步驟中使用的設備的提餘物流的一部分循環回到第二分離步驟中使用的設備中。

在此實施方式中的循環涉及將第一或第二分離步驟中使用的色譜設備外的提取物流或提餘物流的一部分進料回到該步驟中使用的設備中，典型地到相鄰的柱中。此相鄰的柱是在系統中相對於洗脫液的流動為下遊的相鄰的柱。

在此實施方式中，經由第一或第二分離步驟中的提取物流或提餘物流循環回到該步驟中使用的色譜設備所收集的液體的速率是經由將該流進料回到該步驟中使用的設備中，典型地回到相鄰的柱，即在系統中相對於洗脫液流動的下遊柱中所收集的液體的速率。

這可以參照圖9中的優選實施方式看出。第一分離步驟中的提取物流的循環速率是從第一分離步驟中使用的色譜設備的柱2的底部所收集的提取物進料到第一分離步驟中使用的色譜設備的柱3的頂部的速率，即進料到第一分離步驟中的色譜設備的柱3的頂部的液體的流速。

在此實施方式中，第二分離步驟中的提取物的循環速率是在第二分離步驟中使用的色譜設備的柱2的底部所收集的提取物進料到第二分離步驟中使用的色譜設備的柱3的頂部的速率，即進料到第二分離步驟中的色譜設備的柱3的頂部的液體的流速。

在此實施方式中，典型地通過將該分離步驟中的該流所收集的液體進料到容器中並且然後用泵將來自容器中的該液體抽回到該分離步驟中使用的設備中，典型地到相鄰的柱中來影響第一和/或第二分離步驟中的提取物流和/或提餘物流的循環。在這種情況下，在第一和/或第二分離步驟中經由具體的提取物或提餘物所收集的液體循環速率，典型地回到相鄰的柱的速率是用泵將液體從容器抽回到色譜設備中的速率，典型地到相鄰的柱中的速率。

正如技術人員將理解的是，在此實施方式中，經由洗脫液流和原料流引入到色譜設備的液體的量與從該設備中移出並循環回到設備中的液體的量平衡。

因此，在此參照圖9的實施方式中，對於提取物流，進入在第一和第二分離步驟中使用的色譜設備中洗脫液(解吸劑)的流速(d)等於在該分離步驟中經由提取物流所收集的液體積聚到容器中的速率(e1和e2)加上將提取物循環回到該具體分離步驟中使用的色譜設備中的速率(d-e1和d-e2)。

在此實施方式中，對於來分離步驟的提餘物流，將提取物循環回到該具體分離步驟中使用的色譜設備的速率(d-e1和d-e2)加上原料引入到該具體分離步驟中使用的色譜設備中的速率(f和r1)等於經由該具體分離步驟中的提餘物流所收集的液體積聚到容器中的速率(r1和r2)加上提餘物循環回到該具體分離步驟中使用的色譜設備中的速率(d+f-e1-r1和d+r1-e2-r2)。

在此實施方式中，來自色譜設備的具體提取物流或提餘物流所收集的液體積聚到容器中的速率也可以被認為是移出來自該色譜設備的該提取物流或提餘物流的淨速率。

典型地，在此實施方式中，調節經由第一分離步驟中的提取物流和提餘物流所收集的液體循環回到該分離步驟中使用的設備中的速率，使得在每個分離步驟中pufa產物可以與進料混合物的不同組分分離。

典型地，在此實施方式中，調節經由第二分離步驟中的提取物流和提餘物流所收集的液體循環回到該分離步驟中使用的設備中的速率，使得在每個分離步驟中pufa產物可以與進料混合物的不同組分分離。

優選地，在此實施方式中，調節經由每個分離步驟中的提取物流和提餘物流所收集的液體循環回到該分離步驟中使用的設備中的速率，使得在每個分離步驟中pufa產物可以與進料混合物的不同組分分離。

典型地，在此實施方式中，經由第一分離步驟中的提取物流所收集的液體循環回到第一分離步驟中使用的色譜設備中的速率不同於經由第二分離步驟中的提取物流所收集的液體循環回到第二分離步驟中使用的色譜設備中的速率，和/或經由第一分離步驟中的提餘物流所收集的液體循環回到第一分離步驟中使用的色譜設備中的速率不同於經由第二分離步驟中的提餘物流所收集的液體循環回到第二分離步驟中使用的色譜設備中的速率。

改變經由第一或第二分離步驟中的提取物流和/或提取物流所收集的液體循環回到該具體分離步驟中使用的設備中的速率具有改變存在於提取物流和提餘物流中的極性較大和極性較小的組分的量的作用。因此，例如，較低的提取物循環速率導致該分離步驟中的較少的極性較小的組分被提餘物流攜帶。較高的提取物循環速率導致較多的極性較小的組分被提餘物流攜帶(carrythrough)。

這個可以從例如，圖6中所示的本發明的具體實施方式看出。經由第一分離步驟中的提取物流所收集的液體循環回到該分離步驟中使用的設備的速率(d-e1)將影響在第一分離步驟中的提餘物流攜帶任何組分a的程度(r1)。

典型地，在此實施方式中，經由第一分離步驟中的提取物所收集的液體循環回到第一分離步驟中使用的色譜設備的速率比經由第二分離步驟中的提取物所收集的液體循環回到第二分離步驟中使用的色譜設備的速率更快。優選地，從第一分離步驟中收集含有pufa和極性較大的組分的提餘物流並在第二分離步驟中純化，並且經由第一分離步驟中的提取物流所收集的液體循環回到第一分離步驟中使用的色譜裝置中的速率比經由第二分離步驟中的提取物流所收集的液體循環回到第二分離步驟中使用的色譜裝置中的速率更快。

或者，在此實施方式中，經由第一分離步驟中的提取物流所收集的液體循環回到第一分離步驟中使用的色譜裝置中的速率比經由第二分離步驟中的提取物流所收集的液體循環回到第二分離步驟中使用的色譜裝置中的速率更慢。

典型地，在此實施方式中，經由第一分離步驟中的提餘物所收集的液體循環回到第一分離步驟中使用的色譜設備的速率比經由第二分離步驟中的提餘物所收集的液體循環回到第二分離步驟中使用的色譜設備的速率更快。優選地，從第一分離步驟中收集含有pufa和極性較大的組分的提取物流並在第二分離步驟中純化，並且經由第一分離步驟中的提餘物流所收集的液體循環回到第一分離步驟中使用的色譜裝置中的速率比經由第二分離步驟中的提餘物流所收集的液體循環回到第二分離步驟中使用的色譜裝置中的速率更快。

或者，在此實施方式中，經由第一分離步驟中的提餘物流所收集的液體循環回到第一分離步驟中使用的色譜裝置中的速率比經由第二分離步驟中的提取物流所收集的液體循環回到第二分離步驟中使用的色譜裝置中的速率更慢。

在此實施方式中，當調節循環速率使得在每個分離步驟中pufa產物可以與進料混合物的不同組分分離時，每個分離步驟中使用的洗脫液的水與有機溶劑的比例可以相同或不同。典型地，每個分離步驟中使用的洗脫液的水與有機溶劑的比例為0.5:99.5～5.5:94.5體積份。

典型地，在此實施方式中，每個分離步驟中使用的洗脫液的水與有機溶劑的比例具有不同的水與有機溶劑的比例。優選地調節每個分離步驟中使用的洗脫液的水與有機溶劑的比例，使得在每個分離步驟中pufa產物可以與進料混合物的不同組分分離。

在此實施方式中，每個分離步驟中使用的洗脫液的洗脫能力典型地不同。優選地，第一分離步驟中使用的洗脫液的洗脫能力大於第二分離步驟中使用的洗脫液的洗脫能力。在實踐中，這個通過改變每個分離步驟中使用的水和有機溶劑的相對量來獲取。

取決於有機溶劑的選擇，它們可以是比水的更強的解吸劑。或者，它們可以是比水更弱的解吸劑。例如，乙腈和醇是比水更強的解吸劑。因此，當含水有機溶劑是含水醇或乙腈時，第一分離步驟中使用的洗脫液中的醇或乙腈的量大於第二分離步驟中使用的洗脫液中的醇或乙腈的量。

典型地，在此實施方式中，第一分離步驟中的洗脫液的水與有機溶劑的比例比第二分離步驟中的洗脫液的水與有機溶劑的比例更低。因此，第一分離步驟中的洗脫液比第二分離步驟中的洗脫液典型地含有更多的有機溶劑，優選醇，更優選甲醇。

在此實施方式中，當每個分離步驟中使用的含水有機溶劑具有不同的水與有機溶劑的比例時，第一分離步驟中的洗脫液的水與有機溶劑的比例典型地為0:100～5:95體積份，優選為0.1:99.9～2.5:97.5體積份，更優選為0.25:99.75～2:98體積份，且最優選為0.5:99.5～1.5:98.5體積份。在這些實施方式中，第二分離步驟中的洗脫液的水與有機溶劑的比例典型地為2:98～8:92體積份，優選為3:97～7:93體積份，更優選為4:96～6:94體積份，並且甚至更優選為4.5:95.5～5.5:94.5體積份。

在此實施方式中，當每個分離步驟中使用的含水有機溶劑具有不同的水有機溶劑含量時，第一分離步驟中的洗脫液的水與有機溶劑的比例優選為0.5:99.5～1.5:98.5體積份，並且第二分離步驟中的洗脫液的水與有機溶劑的比例優選為4.5:95:5～5.5:94.5體積份。

將理解的是，上面所指的每個分離步驟中的水和有機溶劑的比例是全部的色譜設備中的平均比例。

典型地，在此實施方式中，通過引入水和/或有機溶劑到分離步驟中使用的色譜設備中的一個或多個柱中來控制在每個分離步驟中的洗脫液的水與有機溶劑的比例。因此，例如，為了獲取比第二分離步驟中的水與有機溶劑的比例更低的第一分離步驟中的水與有機溶劑的比例，典型地，與第二分離步驟中使用的色譜設備相比，水更緩慢地引入到第一分離步驟中使用的色譜設備中。

典型地，在此實施方式中，在每個分離步驟中使用的色譜設備中的不同的點處引入基本上純的有機溶劑和基本上純的水。這兩個流的相對流速將確定色譜設備中的整體溶劑曲線(profile)。或者，在此實施方式中，在每個分離步驟中使用的每個色譜設備中的不同的點處引入不同的有機溶劑/水混合物。那個將涉及兩種或更多種不同的有機溶劑/水混合物引入到具體分離步驟中使用的色譜設備中，每種有機溶劑/水混合物具有不同的有機溶劑/水比例。此實施方式中的有機溶劑/水比例的相對流速和相對濃度將確定該分離步驟中使用的色譜設備中的整體溶劑曲線。

優選地，在此實施方式中，要麼(1)收集含有pufa產物與極性較大的組分的中間產物作為第一分離步驟中的提餘物流，並且收集pufa產物作為第二分離步驟中的提取物流；要麼

(2)收集含有pufa產物和極性較小的組分的中間產物作為第一分離步驟中的提取物流，並且收集pufa產物作為第二分離步驟中的提餘物流。

選項(1)適合於從進料混合物中純化epa。

選項(1)示於圖2。在第一分離步驟中純化包含pufa產物(b)和極性較大的組分(c)和極性較小的組分(a)的進料混合物f。在第一分離步驟中，移出極性較小的組分(a)作為提取物流e1。收集pufa產物(b)和極性較大的組分(c)作為提餘物流r1。提餘物流r1是隨後在第二分離步驟中純化的中間產物。在第二分離步驟中，移出極性較大的組分(c)作為提餘物流r2。收集pufa產物(b)作為提取物流e2。

選項(1)更詳細地示於圖4。除了示出有機溶劑解吸劑(d)和水(w)引入到每個色譜設備的點，圖4和圖2相同。有機溶劑解吸劑(d)和水(w)一起組成洗脫液。(d)相典型地是基本上純的有機溶劑；但在某些實施方式中，它可以是主要包含有機溶劑的有機溶劑/水混合物。(w)相典型地是基本上純的水；但在某些實施方式中，它可以是主要包含水的有機溶劑/水混合物，例如98％的水/2％的乙腈的混合物。

選項(1)的進一步圖解示於圖6。這裡沒有分離的水注入點，而代替地，在(d)處注入含水有機溶劑解吸劑。

在此實施方式中，通過改變每個色譜設備中的洗脫液的解吸能力可以輔助提餘物流和提取物流的分離。這個可以通過在每個色譜設備中的不同的點處引入洗脫液的有機溶劑(或有機溶劑豐富)組分和水(或水豐富)組分來獲取。因此，典型地，在系統中相對於洗脫液的流動，在提取物輸出點上遊處引入有機溶劑，並且在提取物輸出點和引入原料到該區域的點之間引入水。這個示於圖4。

典型地，在此實施方式中，第一分離步驟中使用的含水有機溶劑洗脫液比第二分離步驟中使用的洗脫液含有更多的有機溶劑，即第一步驟中的水與有機溶劑的比例比第二步驟中的水與有機溶劑的比例更低。

在此實施方式中，可以通過改變經由第一和第二分離步驟中的提取物流和提餘物流所收集的液體循環回到該分離步驟中使用的色譜設備中的速率來輔助分離。

典型地，在此實施方式中，經由第一分離步驟中的提取物流所收集的液體循環回到第一分離步驟中使用的色譜設備中的速率比經由第二分離步驟中的提取物流所收集的液體循環回到第二分離步驟中使用的色譜設備中的速率更快。

在此實施方式中，相對於洗脫液的流動，典型地在引入進料混合物到第一分離步驟中使用的色譜設備中的點的下遊處移出第一分離步驟中的第一提餘物流。

在此實施方式中，相對於洗脫液的流動，典型地在引入進料混合物到第一分離步驟中使用的色譜設備中的點的上遊處移出第一分離步驟中的第一提取物流。

在此實施方式中，相對於洗脫液的流動，典型地在中間產物引入到第二分離步驟中使用的色譜設備中的點的下遊處移出第二分離步驟中的第二提餘物流。

在此實施方式中，相對於洗脫液的流動，典型地在中間產物引入到第二分離步驟中使用的色譜設備中的點的上遊處移出第二分離步驟中的第二提取物流。

典型地，在此實施方式中，相對於洗脫液的流動，在移出第一提取物流的點的上遊處有機溶劑或含水有機溶劑引入到第一分離步驟中使用的色譜設備中。

典型地，在此實施方式中，當水引入到第一分離步驟中使用的色譜設備中時，相對於洗脫液的流動，在引入進料混合物的點的上遊處但在移出第一提取物流的點的下遊處有機溶劑或含水有機溶劑引入到第一分離步驟中使用的色譜設備中。

典型地，在此實施方式中，相對於洗脫液的流動，在移出第二提取物流的點的上遊處有機溶劑或含水有機溶劑引入到第二分離步驟中使用的色譜設備中。

典型地，在此實施方式中，當水引入到第二分離步驟中使用的色譜設備中時，相對於洗脫液的流動，在引入中間產物的點的上遊處但在移出第二提取物流的點的下遊處有機溶劑或含水有機溶劑引入到第二分離步驟中使用的色譜設備中。

選項(2)適合於從進料混合物中純化的dha。

選項(2)示於圖3。在第一分離步驟中純化包含pufa產物(b)和極性較大的組分(c)和極性較小的組分(a)的進料混合物f。在第一分離步驟中，移出極性較大的組分(c)作為提餘物流r1。收集pufa產物(b)和極性較小的組分(a)作為提取物流e1。提取物流e1是隨後在第二分離步驟中純化的中間產物。在第二分離步驟中，移出極性較小的組分(a)作為提取物流e2。收集pufa產物(b)作為提餘物流r2。

選項(2)更詳細地示於圖5。除了示出引入有機溶劑解吸劑(d)和水(w)到每個色譜設備中的點，圖5和圖3相同。如上，(d)相是典型地是基本上純的有機溶劑，但在某些實施方式中，可以是主要包含有機溶劑的有機溶劑/水混合物。(w)相典型地是基本上純的水，但在某些實施方式中，可以是主要包含水的有機溶劑/水混合物，例如98％的水/2％的甲醇混合物。

選項(2)的進一步的圖解示於圖7。這裡沒有分離的水注入點，而代替地，在(d)處注入有機溶劑解吸劑。

典型地，在此實施方式中，經由第一分離步驟中的提餘物流所收集的液體再次引入到第一分離步驟中使用的色譜設備中的速率比經由第二分離步驟中的提餘物流所收集的液體再次引入到第二分離步驟中使用的色譜設備中的速率更快。

典型地，在此實施方式中，第一分離步驟中使用的含水有機溶劑洗脫液比第二分離步驟中使用的洗脫液含有更少的有機溶劑，即第一分離步驟中的水與有機溶劑的比例高於第二分離步驟中的更高。

在此實施方式中，相對於洗脫液的流動，典型地在引入進料混合物到第一分離步驟中使用的色譜設備中的點的下遊處，移出第一分離步驟中的第一提餘物流。

在此實施方式中，相對於洗脫液的流動，典型地在引入進料混合物到第一分離步驟中使用的色譜設備中的點的上遊處，移出第一分離步驟中的第一提取物流。

在此實施方式中，相對於洗脫液的流動，典型地在引入進料混合物到第二分離步驟中使用的色譜設備中的點的下遊處，移出第二分離步驟中的第二提餘物流。

在此實施方式中，相對於洗脫液的流動，典型地在引入進料混合物到第二分離步驟中使用的色譜設備中的點的上遊處，移出第二分離步驟中的第二提取物流。

典型地，在此實施方式中，相對於洗脫液的流動，典型地在移出第一提取物流的點的上遊處，有機溶劑或含水有機溶劑引入到第一分離步驟中使用的色譜設備。

典型地，在此實施方式中，當水引入到第一分離步驟中使用的色譜設備中時，相對於洗脫液的流動，在引入進料混合物的點的上遊處但在移出第一提取物流的點的下遊處，水引入到第一分離步驟中使用的色譜設備中。

典型地，在此實施方式中，相對於洗脫液的流動，在移出第二提取物流的點的上遊處，將有機溶劑或含水有機溶劑引入到第二分離步驟中使用的色譜設備中。

典型地，在此實施方式中，當水引入到第二分離步驟中使用的色譜設備中時，相對於洗脫液的流動，在引入中間產物的點的上遊處但在移出第二提取物流的點的下遊處，水引入到第二分離步驟中使用的色譜設備中。

在此實施方式中，第一和第二分離設備中使用的每個模擬或真實移動床色譜設備優選由八個色譜柱組成。這些是指柱1～8。在每個設備中，八個柱串聯排列使得柱1的底部連接到柱2的頂部，柱2的底部連接到柱3的頂部…等等…並且柱8的底部連接到柱1頂部。這些連接可以可選地經由保持容器(holdingcontainer)，隨著循環流進入下一個柱中。洗脫液的流動從柱1到柱2到柱3等等通過系統。吸附劑的有效流動從柱8到柱7到柱6等等通過系統。

這個示於圖8。包含pufa產物(b)和極性較大(c)和極性較小(a)的組分的進料混合物f引入到第一分離步驟中使用的色譜設備中的柱5的頂部。有機溶劑解吸劑引入到第一分離步驟中使用的色譜設備的柱1的頂部。水引入到第一分離步驟中使用的色譜設備的柱4的頂部。在第一分離步驟中，從柱2的底部移出極性較小的組分(a)作為提取物流e1。從柱7的底部移出pufa產物(b)和極性較大的組分(c)作為提餘物流r1。提餘物流r1是隨後在第二分離步驟中通過在柱5的頂部處引入到第二分離步驟中使用的色譜設備中進行純化的中間產物。有機溶劑解吸劑引入到第二分離步驟中使用的色譜設備中的柱1的頂部。水引入到第二分離步驟中使用的色譜設備中的柱4的頂部。在第二分離步驟中，在柱7的底部處，移出極性較大的組分(c)作為提餘物流r2。在柱2的底部處，收集pufa產物(b)作為提取物流e2。

在此實施方式中，典型地將有機溶劑引入到第一分離步驟中使用的色譜設備的柱1的頂部。

在此實施方式中，典型地將水引入到第一分離步驟中使用的色譜設備的柱4的頂部。

在此實施方式中，典型地將有機溶劑引入到第二分離步驟中使用的色譜設備的柱1的頂部。

在此實施方式中，典型地將有機溶劑引入到第二分離步驟中使用的色譜設備的柱4的頂部。

在此實施方式中，典型地將進料流引入到第一分離步驟中使用的色譜設備的柱5的頂部。

在此實施方式中，從第一分離步驟中使用的色譜設備的柱7的底部收集第一提餘物流作為中間產物。然後在第二分離步驟中純化此中間產物並且典型地引入到第二分離步驟中使用的色譜設備的柱5的頂部。在第二分離步驟中純化之前，第一提餘物流可以可選地收集到容器中。

在此實施方式中，典型地從第一分離步驟中使用的色譜設備的柱2的底部移出第一提餘物流。第一提取物流可以可選地收集到容器中並且再次引入到第一分離步驟中使用的色譜設備的柱3的頂部。

在此實施方式中，典型地從第二分離步驟中使用的色譜設備的柱7的底部移出第二提餘物流。

在此實施方式中，典型地從第二分離步驟中使用的色譜設備的柱2的底部收集第二提取物流。此第二提取物流典型地含有已純化的pufa產物。第二提取物流可以可選地收集到容器中並且再次引入到第二分離步驟中使用的色譜設備的柱3的頂部。

在此實施方式中，所使用的洗脫液典型地為含水醇，優選為含水甲醇。水與醇的比例典型地為0.5:99.5～6:94體積份。

典型地，在此實施方式中，第一分離步驟中使用的色譜設備中的水與有機溶劑的比例比第二分離步驟中使用的色譜設備中的水與有機溶劑的比例更低。因此，第一分離步驟中的洗脫液典型地比第二分離步驟中使用的洗脫液含有更多的有機溶劑。

在此實施方式中，第一分離步驟中的水與有機溶劑的比例典型地為0.5:99.5～1.5:98.5體積份。第二分離步驟中的水與有機溶劑的比例典型地為2:98～6:94體積份。

在此實施方式中，雖然圖8的實施方式如圖10a所示配置，但是圖10b和10c所示的配置也可以用於此實施方式中。

此實施方式也示於圖9。包含pufa產物(b)的極性較大的組分(c)和極性較小的組分(a)引入到第一分離步驟中使用的色譜設備中的柱5的頂部。含水有機溶劑解吸劑引入到第一分離步驟中使用的色譜設備中的柱1的頂部。在第一分離步驟中，從柱2的底部移出極性較小組分(a)作為提取物流e1。從柱7的底部移出pufa產物(b)和極性較大的組分(c)作為提餘物流r1。提餘物流r1是在第二分離步驟中通過引入到第二分離步驟中使用的色譜設備的柱4的頂部進行純化的中間產物。含水有機溶劑解吸劑引入到第二分離步驟中使用的色譜設備中的柱1的頂部。在第二分離步驟中，在柱7的底部處，移出極性較大組分(c)作為提餘物流r2。在柱2的底部處，收集pufa產物(b)作為提取物流e2。

在此實施方式中，典型地將含水有機溶劑引入到第一分離步驟中使用的色譜設備中的柱1的頂部。

在此實施方式中，典型地將含水有機溶劑引入到第二分離步驟中使用的色譜設備中的柱9的頂部。

在此實施方式中，典型地將進料流引入到第一分離步驟中使用的色譜設備中的柱5的頂部。

在此實施方式中，典型地從第一分離步驟中使用的色譜設備的柱7的底部收集第一提餘物流作為中間產物。然後，中間產物在第二分離步驟中純化並典型地引入到第二分離步驟中使用的色譜設備的柱5的頂部。在第二分離步驟中純化之前，第一提餘物流可以可選地收集到容器中。

在此實施方式中，典型地從第一分離步驟中使用的色譜設備的柱2的底部移出第一提取物流。第一提取物流可以可選地收集到容器中並且部分再次引入到第一分離步驟中使用的色譜設備的柱3的頂部。經由第一分離步驟中的提取物流所收集的液體循環回到第一分離步驟中使用的色譜設備中的速率是用泵將液體從此容器抽到柱3的頂部的速率。

在此實施方式中，典型地從第一分離步驟中使用的色譜設備的柱7的底部移出第二提餘物流。

在此實施方式中，典型地從第一分離步驟中使用的色譜設備的柱2的底部收集第二提取物流。此第二提取物流典型地含有已純化的pufa產物。第二提取物流可以可選地收集到容器中並且部分再次引入到第一分離步驟中使用的色譜設備的柱3的頂部。經由來自第二分離步驟的提取物流所收集的液體循環回到第二分離步驟中使用的色譜設備中的速率是用泵將液體從此容器抽到柱3的頂部中的速率。

在此實施方式中，所使用的洗脫液典型地為含水醇，優選為含水甲醇。水與醇的比例典型地為0.5:99.5～6:94體積份。

典型地，在此實施方式中，第一分離步驟中使用的色譜設備中的水與有機溶劑的比例比第二分離步驟中使用的色譜設備中的水與有機溶劑的比例更低。因此，第一分離步驟中使用的洗脫液典型地比第二分離步驟中使用的洗脫液含有更多有機溶劑。

在此實施方式中，第一分離步驟中的水與有機溶劑典型地為0.5:99.5～1.5:98.5體積份。第二分離步驟中的水與有機溶劑典型地為2:98～6:94體積份。

在此實施方式中，典型地經由來自第一分離步驟的提取物流所收集的液體循環回到第一分離步驟中使用的色譜設備的速率比經由來自第二分離步驟的提取物流所收集的液體循環回到第二分離步驟中使用的色譜設備的速率更快。在這種情況下，在每個分離步驟中，含水有機溶劑洗脫液典型地基本上相同。

在此實施方式中，雖然圖9的實施方式如圖10a所示配置，但是示於圖10b和10c的配置也用於此實施方式。

在進一步的實施方式中，本發明的方法包括引入進料混合物到具有含有作為洗脫液的含水醇的多個連接的色譜柱的模擬或真實移動床色譜設備，其中，該設備具有包含第一區域和第二區域的多個區域，每個區域具有來自所述多個連接的色譜柱的提取物流和提餘物流，由提取物流和提餘物流更夠收集液體，並且其中，(a)從第一區域中的柱中收集含有pufa產物和極性較大的組分的提餘物流並且引入到第二區域中的不相鄰的柱中，和/或(b)從第二區域中的柱中收集含有pufa產物和極性較小的組分的提餘物流並且引入到第一區域中的不相鄰的柱中，在每個區域中所述pufa產物與進料混合物的不同組分分離，其中，多個連接的色譜柱中的至少一個的溫度大於55℃。

在此進一步的實施方式中，術語「區域」是指多個連接的色譜柱，多個連接的色譜柱含有作為洗脫液的含水醇，並且具有一個或多個進料混合物流的注入點、一個或多個水和/或醇的注入點、來自所述多個連接的色譜柱的提取物流和提餘物流，由所述提取物流和提餘物流能夠收集液體。典型地，每個區域僅具有進料混合物的一個注入點。在一個實施方式中，每個區域僅具有含水醇洗脫液的一個注入點。在另一個實施方式中，每個區域具有兩個或更多個水和/或醇的注入點。

在此進一步的實施方式中，基本上全部的多個連接的色譜柱的溫度典型地大於55℃。在此進一步的實施方式中，全部的多個連接的色譜柱的溫度典型地大於55℃。

在此進一步的實施方式中，多個連接的色譜柱中的至少一個的溫度典型地為56℃或大於56℃，優選為57℃或大於57℃。

典型地，在此進一步的實施方式中，多個連接的色譜柱中的至少一個的溫度至多100℃，優選至多95℃，更優選為至多90℃，甚至更優選為85℃，甚至更優選為80℃，甚至更優選為75℃，並且甚至更優選為70℃。

典型地，在此進一步的實施方式中，多個連接的色譜柱中的至少一個的溫度為56～70℃，優選為56～67℃，更優選為56～65℃，甚至更優選為57～63℃。

此進一步的實施方式是指如pct/gb10/002339所描述的，通過引用將這些專利的全文併入本文中。pct/gb10/002339中列舉的優選的方法條件是此進一步的實施方式的優選的方法條件，並且可以將pct/gb10/002339併入。

此進一步的實施方式示於圖11。包含pufa產物(b)的進行較大的組分(c)和極性較小的組分(a)的進料混合物f引入到第一區域中的柱5的頂部。含水醇吸附劑引入到第一區域中的柱1的頂部。在第一區域中，從柱2的底部移出極性較小的組分(a)作為提取物流e1。從柱7的底部移出pufa產物(b)和極性較大的組分(c)作為提餘物流。然後，在柱12的頂部處，提餘物流r1引入到第二區域中。含水醇吸附劑引入到第二區域中的柱9的頂部。在第二區域中，在柱14的底部處，移出極性較大的組分(c)作為提餘物流r2。在柱10的底部處，收集pufa產物(b)作為提取物流e2。

在此進一步的實施方式中，典型地將含水醇引入到第一區域中的柱1的頂部。

在此進一步的實施方式中，典型地將含水醇引入到第一區域中的柱9的頂部。

在此進一步的實施方式中，典型地將進料流引入到第一區域中的柱5的頂部。

在此進一步的實施方式中，典型地從第一區域中的柱7的底部收集第一提餘物流並且引入到第二區域中的柱12的頂部。在引入到柱12之前，第一提餘物流可以可選地收集到容器中。

在此進一步的實施方式中，典型地從第一區域中的柱2的底部移出第一提取物流。第一提取物流可以可選地收集到容器中並且部分再次引入到第一區域中的柱3的頂部。經由來自第一區域的提取物流所收集的液體循環回到第一區域中的速率是用泵將液體從此容器抽到柱3的頂部的速率。

在此進一步的實施方式中，典型地從第二區域中的柱14的底部移出第二提餘物流。

在此進一步的實施方式中，典型地從第二區域中的柱10的底部收集第二提餘物流。此第二提取物流典型地含有已純化的pufa產物。第二提取物流可以可選地收集到容器中並且部分再次引入到第二區域中的柱11的頂部。經由來自第二區域的提取物流所收集的液體循環回到第二區域中的速率是用泵將液體從此容器抽到柱11的頂部的速率。

在此進一步的實施方式中，典型地經由來自第一區域的提取物流所收集的液體循環回到第一區域中的速率經由來自第二區域的提取物流所收集的液體循環回到第二區域中的速率更快。

在此進一步的實施方式中，在每個區域中含水醇洗脫液典型地基本上相同。

在另外進一步的實施方式中，本發明的方法不同於從進料混合物中回收多元不飽和脂肪酸(pufa)產物的色譜分離方法，該方法包括引入進料混合物到具有含有作為洗脫液的含水醇的多個連接的色譜柱的模擬或真實移動床色譜設備，其中，設備具有至少包含第一區域和第二區域的多個區域，每個區域具有來自所述多個連接的色譜柱的提取物流和提餘物流，由所述提取物流和提餘物流能夠收集液體，並且其中，(a)從第一區域中的柱中收集含有pufa產物和極性較大的組分的提餘物流並且引入到第二區域中的不相鄰的柱中，和/或(b)從第二區域中的柱中收集含有pufa產物和極性較小的組分的提取物流並且引入到第一區域中的不相鄰的柱中，在每個區域中所述pufa產物與進料混合物的不同組分分離，其中，所有多個連接的色譜柱的溫度為40℃或55℃。

在此另外進一步的實施方式中，術語「區域」如上所定義。

典型地，在此另外進一步的實施方式中，多個連接的色譜柱中的至少一個的溫度為40℃或55℃。優選地，在此另外進一步的實施方式中，在15～55℃下，優選在20～40℃下，甚至更優選在約30℃下，即在室溫下進行該方法。

典型地，在此另外進一步的實施方式中，本發明的方法不同於從進料混合物中回收多元不飽和脂肪酸(pufa)產物的色譜分離方法，該方法包括引入進料混合物到具有含有作為洗脫液的含水醇的多個連接的色譜柱的模擬或真實移動床色譜設備，其中，設備具有至少包含第一區域和第二區域的多個區域，每個區域具有來自所述多個連接的色譜柱的提取物流和提餘物流，由所述提取物流和提餘物流能夠收集液體，並且其中，(a)從第一區域中的柱中收集含有pufa產物和極性較大的組分的提餘物流並且引入到第二區域中的不相鄰的柱中，和/或(b)從第二區域中的柱中收集含有pufa產物和極性較小的組分的提取物流並且引入到第一區域中的不相鄰的柱中，在每個區域中所述pufa產物與進料混合物的不同組分分離。

因此，優選地，在此另外進一步的實施方式中，本發明的方法不同於如pct/gb10/002339所描述的。

在又進一步的實施方式中，進料混合物通過的色譜柱中的至少一個的溫度不同於40℃或55℃。

在此又進一步的實施方式中，進料混合物通過的所有色譜柱的溫度典型地不同於40℃或55℃，優選不同於40℃或55℃，更優選不同於39.5～40.5℃或54.5～55.5℃。

在實踐中，本發明的方法一般地將通過計算機來控制。因此，本發明也提供控制如本文所定義的色譜設備的電腦程式，該電腦程式含有代碼模塊，當電腦程式執行時，代碼模塊命令設備執行本發明的方法。

本發明也提供在從進料混合物中回收多元不飽和脂肪酸(pufa)產物的色譜分離方法中一個或多個加熱的色譜柱和/或加熱的洗脫液和/或加熱的進料混合物的應用，該方法包括純化含有作為洗脫液的含水有機溶劑一個或多個色譜柱中的進料混合物，以(a)減少分離方法中使用的洗脫液的量和/或(b)提高存在於進料混合物中的各種組分的分離方法中的解析度。

典型地，加熱的色譜柱和/或加熱的洗脫液和/或加熱的進料混合物中的至少一個加熱到如本文所定義的溫度。

典型地，本發明也提供加熱的洗脫液在從進料混合物中回收多元不飽和脂肪酸(pufa)產物的色譜分離方法中的應用，該方法包括純化含有作為洗脫液的含水有機溶劑的一個或多個色譜柱中的進料混合物，以(a)減少分離方法中使用的洗脫液的量和/或(b)提高存在於進料混合物中的各種組分的分離方法中的解析度。

本發明也提供從進料混合物中回收多元不飽和脂肪酸(pufa)產物的色譜分離方法，該方法包括使進料混合物通過含有作為洗脫液的含水有機溶劑的一個或多個加熱的色譜柱，

其中，進料混合物通過的色譜柱中的至少一個的溫度大於室溫，和/或其中，洗脫液和/或進料混合物的溫度大於室溫，並且

其中，一個或多個加熱的色譜柱能使(a)分離方法中使用的洗脫液的量減少和/或(b)存在於進料混合物中的各種組分的分離方法中的解析度提高。

典型地，色譜柱中的至少一個加熱到如本文所定義的溫度。

優選地，洗脫液加熱到如本文所定義的溫度。

典型地，此方法是如本文所定義的方法。

典型地，在本發明的方法中，在大於室溫的溫度下，至少一個色譜柱能使(a)分離方法中使用的洗脫液的量減少和/或(b)存在於進料混合物中的各種組分的分離方法中的解析度提高。

本發明也提供包含通過本發明的方法可獲得的pufa產物的組合物。

下面的實施例對本發明進行說明。

實施例

實施例1

根據圖11示意性所示的系統，使用真實移動床色譜系統分餾魚油衍生的原料(55重量％的epaee，5重量％的dhaee)，該真實移動床色譜系統使用鍵合c18矽膠(粒徑300μm)作為固定相併使用含水甲醇(90:10w/w甲醇:水)作為洗脫液。如圖11所示，15個柱(直徑：22mm，長度：300mm)串聯連接。解吸劑預加熱到60℃的溫度，產生約60℃的柱溫度。

操作參數和流速如下。對於下面的條件，epaee以高水平的純度(由gcfames測定的99％)生產。epa產物的gcfames跡線如圖12所示。

步進時間：600秒

原料(f)進料速率：0.5ml/min

第一區域中的解吸劑進料速率(d1)：33ml/min

第一區域中的提取物速率(e1)：7ml/min

第一區域中的提取物循環速率(d1-e1)：26ml/min

第一區域中的提餘物速率(r1)：8ml/min

第二區域中的解吸劑進料速率(d2)：34ml/min

第二區域中的提取物速率(e2)：10ml/min

第二區域中的提取物循環速率(d2-e2)：24ml/min

第二區域中的提餘物速率(r2)：8ml/min

實施例2

根據圖10示意性所示的系統，使用真實移動床色譜系統分餾魚油衍生的原料(55重量％的epaee，5重量％的dhaee)，該真實移動床色譜系統使用鍵合c18矽膠(粒徑300μm)作為固定相併使用含水甲醇(98:2w/w甲醇:水)作為洗脫液。分離1由如圖10所示的串聯連接的8個柱(直徑：76.29mm，長度：914.40mm)組成。隔離並分離來自分離1的中間提餘物，並且使用如上述柱的相同順序進行分離2。解吸劑預加熱到40℃的溫度，產生約40℃的柱溫度。

操作參數和流速如下。對於下面的條件，epaee以高水平的純度(由gcfames測定的98％)生產。epa產物的gcfames跡線如圖13所示。

步進時間：1200秒

原料(f)進料速率：35ml/min

第一步驟中的解吸劑進料速率(d1)：2270ml/min

第一步驟中的提取物速率(e1)：1320ml/min

第一步驟中的提取物循環速率(d1-e1)：950ml/min

第一步驟中的提餘物速率(r1)：950ml/min

第二步驟中的解吸劑進料速率(d2)：1510ml/min

第二步驟中的提取物速率(e2)：850ml/min

第二步驟中的提取物循環速率(d2-e2)：660ml/min

第二步驟中的提餘物速率(r2)：670ml/min

實施例3

在使用含水甲醇洗脫液和c18二氧化矽吸附劑的固定床色譜設備中測量若干普通脂肪酸的保留時間。因此，測定十八碳四烯酸(sda)、二十碳五烯酸(epa)、二十二碳六烯酸(dha)和油酸(oa)的保留時間，並且改變甲醇的溫度和濃度。下面的表顯示了絕對保留時間和各種脂肪酸(相對於epa)的相對保留時間。

從表1、3和5中的絕對保留時間可以看出，在升高的溫度下，整體的運行時間非常短，即在較高溫度下具有較低的溶劑消耗和較高的產量。

從表2、4和6的相對保留時間可以看出，升高的溫度相比更密切相關的組分(dha)對極性較小的雜質(oa)的相對保留時間具有更大的影響。因此，在5％的水下，oa(相對於epa)的相對保留時間從18℃下的1.91減少到70℃下的1.63，然而dha(相對於epa)的相對保留時間從18℃下的1.19減少到70℃下的1.15。當分別使用2％和10％的水進行試驗時，看到相似的效果。

這意味著，使用提高的水含量可以提高密切相關的組分(例如，來自dha的epa)的解析度，但是在較高的溫度下進行時具有較低的溶劑消耗和較高的產量。

表1：各種溫度下主要脂肪酸峰的保留時間(分鐘)

使用作為移動相的含有2％水的甲醇和c18二氧化矽

表2：在各種溫度下主要脂肪酸峰相對epa的相對保留時間(rrt)

使用作為移動相的含有2％水的甲醇和c18二氧化矽

表3：各種溫度下主要脂肪酸峰的保留時間(分鐘)

使用作為移動相的含有5％水的甲醇和c18二氧化矽

表4：在各種溫度下主要脂肪酸峰相對epa的相對保留時間(rrt)

使用作為移動相的含有5％水的甲醇和c18二氧化矽

表5：各種溫度下主要脂肪酸峰的保留時間(分鐘)

使用作為移動相的含有10％水的甲醇和c18二氧化矽

表6：在各種溫度下主要脂肪酸峰相對epa的相對保留時間(rrt)

使用作為移動相的含有10％水的甲醇和c18二氧化矽