氧肟酸類組蛋白去乙醯化酶抑制劑及其製備方法和用途的製作方法

2023-06-05 07:55:56

專利名稱：：氧肟酸類組蛋白去乙醯化酶抑制劑及其製備方法和用途的製作方法
技術領域：
：本發明涉及藥物化學領域，具體涉及一類氧肟酸類組蛋白去乙醯化酶抑制劑、其製備方法、含其的藥物製劑及其醫藥用途。
背景技術：
：真核基因的表達受遺傳調控(geneticregulation)和表觀遺傳調控(epigeneticregulation)雙重調控。遺傳調控包括基因轉錄、轉錄後加工、翻譯以及翻譯後修飾等環節；表觀遺傳調控是指轉錄前基因在染色質水平上的結構調K1，它是真核基因組一種獨特的調控機制。表觀遺傳調控主要包括DNA甲基化、RNA幹涉、組蛋白修飾三方面，可以在不改變DNA編碼序列的前提下使基因發生可遺傳的沉渠犬(Egger,Liang,AparicioandJones，Epigeneticsinhumandiseaseandprospectsforepigenetictherapy.Jow"a/2004，429:p.457-63.)。由組蛋白修飾所引起的染色體局部構象的改變(染色質重塑，chromatinremodeling),在真核生物基因表達調控中發揮著重要的作用。組蛋白的翻譯後修飾，包括對組蛋白尾部的賴氨酸和精氨酸殘基的乙醯化，甲基化，磷酸化，以及泛素化等，這些修飾構成了組蛋白密碼(histonecode)。組蛋白密碼作為一種DNA序列之外的基因信息的儲存和補充機制，大大擴展了基因編碼的信息量。其中，組蛋白的乙醯化修飾較為普遍，也是近年來研究最為深入的組蛋白密碼。組蛋白的乙醯化修飾發生在N-端進化保守的賴氨酸殘基的s-氨基上，在H3和H4上的修飾較H2A和H2B更為普遍，比較重要的乙醯化位點是H3上的Lys^卩Lys14，以及H4上的Lys5，Lys8，Lys12，Lys16。一般認為，基因的轉錄活性與染色體的局部構象密切相關。組蛋白的乙醯化/去乙醯化可以改變染色體的局部構象，影響DNA與轉錄調節的非核小體複合物之間的相互作用，進而調控特定基因的表達。在細胞核中，未經乙醯化的賴氨酸殘基帶正電荷，可以與鹼性的DNA磷酸骨架緊密結合，轉錄因子，轉錄調節複合物以及RNA聚合酶不能與DNA結合，染色體處於異染色質(heterochromatin)狀態，轉錄沉默；乙醯化後，組蛋白的賴氨酸殘基處於中性，染色體的構象更為鬆散，染色體處於常染色質(euchromatin)狀態，轉錄因子及相關的調節因子可以與DNA的啟動子結合(Acharya，Sparreboom,VenitzandFigg,Rationaldevelopmentofhistonedeacetylaseinhibitorsasanticanceragents:areview.Jo簡a/2005,68:p.917-32.)。一般說來，在基因轉錄活躍區，組蛋白的乙醯化程度偏高，而在基因轉錄非活躍區，組蛋白的乙醯化程度偏低。組蛋白的乙醯化狀態取決於組蛋白乙醯轉移酶(histoneacetyltransferases,HATs)和組蛋白去乙醯化酶(histonedeacetylases，HDACs)之間的活性競爭。HATs能催化乙醯輔酶A上的乙醯基轉移到組蛋白的N-端賴氨酸殘基，中和正電荷，使DNA與組蛋白之間的相互作用減弱，染色體呈轉錄活性的鬆散結構，有利於轉錄因子與DNA結合，轉錄激活。反之，HDACs通過催化組蛋白N-端的去乙醯化，使組蛋白帶正電荷，與帶負電荷的DNA緊密結合，染色體結構聚集，轉錄因子不能接近目標DNA，轉錄抑制。HATs和HDACs活性失衡與腫瘤的發生密切相關，腫瘤細胞中通常發生由於染色體重塑而導致的基因轉錄調節異常(MahlknechtandHoelzer,Histoneacetylationmodifiersinthepathogenesisofmalignantdisease.Jbw"a/2000,6:p.623-44.)。染色體的重塑與腫瘤發生的關係有多種猜測，比較有代表性的有以下三種(Acharya，Sparreboom,VenitzandFigg,Rationaldevelopmentofhistonedeacetylaseinhibitorsasanticanceragents:areview.Jowmtf/2005,68:p.917-32.):1)組蛋白乙醯化水平異常偏高可能會激活某些通常情況下受抑制的啟動子，導致蛋白質的異常表達；2)啟動子區域乙醯化水平偏低可能會導致某一顯型關鍵的基因轉錄沉默；3)HATs/HDACs的異常定位或募集可能會誘發腫瘤或其它疾病。儘管腫瘤細胞中編碼HDACs的基因並未發生缺失或異常，但HDACs與多種原癌基因和腫瘤抑制基因密切相關，HDACs活性異常可能會導致腫瘤的發生(Kristeleit，Stimson，WorkmanandAheme,Histonemodificationenzymes:noveltargetsforcancerdrugs.Jowr朋/2004，9:p.135-54.)。通過抑制HDACs，某些重要基因得以轉錄，可以退出細胞周期，促進細胞分化，以及誘導細胞凋亡。HDACs抑制劑可以抑制白血病或實體腫瘤細胞增殖，並誘導腫瘤細胞分化(Kramer，GottlicherandHeinzel,Histonedeacetylaseasatherapeutictarget.Jiowraa/2001，12:p.294-300。。HDACs抑制劑一般可使腫瘤細胞停滯於Gl期，但有時也會觀察到G2期細胞增多(Qiu，Burgess,Fairiie，Leonard,ParsonsandGabrielli,HistonedeacetylaseinhibitorstriggeraG2checkpointinnormalcellsthatisdefectiveintumorcells.Jowr"a/2000,11:p.2069-83.)。幾乎所有HDACs抑制劑都會激活周期蛋白依賴激酶抑制因子p21api/WAF1(由CDKN1A基因編碼)的轉錄，p21OTi/WAFi可以與cydinE《DK2及cyciinA-CDK2複合物結合，使其失活；另外，很多HDACs抑制劑還能下調細胞內cyclinA和cycUriD的水平，阻止腫瘤抑制蛋白視網膜母細胞瘤蛋白Rb磷酸化，細胞不能進入S期，細胞周期無法進行(LipinskiandJacks,Theretinoblastomagenefamilyindifferentiationanddevelopment.Jowr朋,1999，18:p.7873-82.)。CDKNlA對於HDACs抑制劑介導的G1期抑制起關鍵作用，如果細胞缺失CDKN1A基因，則細胞進入S期，DNA複製，可以檢測到細胞內的DNA為4n，細胞易於發生凋亡。HDACs抑制劑對p2ldPiWAH的激活作用是不依賴於p53的，這點尤為重要，因為腫瘤細胞普遍存在由於p53功能異常而導致的增殖失控(Xiao,HasegawaandIsobe,BothSplandSp3areresponsibleforp21waflpromoteractivityinducedbyhistonedeacetylaseinhibitorinNIH3T3cells.JowmaZ1999,73:p.291-302.)。HDACs抑制劑還能使人正常纖維原細胞以及某些腫瘤細胞產生一個G2期控制點，因此，正常細胞可以以一種安全的方式退出細胞周期，這也可能是HDACs抑制劑對正常細胞或組織幾乎無毒副作用的原因之一。另外，很多研究都觀察到HDACs誘導的凋亡是與蛋白質的合成相關的(HendersonandBrancolini,Apoptoticpathwaysactivatedbyhistonedeacetylaseinhibitors:implicationsforthedrug-resistantphenotype./owm"/2003,6:p.247-56.,Marks,Rifkind，Richon，Breslow，MillerandKelly,Histonedeacetylasesandcancer:causesandtherapies.Jowtw^2001,1:p.194-202.)。如果抑制蛋白質的合成，會拮抗HDACs誘導的凋亡。HDACs抑制劑促使細胞退出細胞周期，或者發生分化或者發生凋亡等不同的藥理作用是與多種因素相關的。一般說來，細胞退出細胞周期是發生分化的前提，當用量較高時，HDACs抑制劑通常具有細胞毒作用，能夠誘導細胞凋亡，而在低劑量時，則會將細胞阻滯於Gl期，使其退出細胞周期。另外，還與細胞的種類有關，同一劑量可能會促進某一種細胞分化，而誘導另一種細胞凋亡。這可能是由於藥物在具體細胞內的吸收和代謝速度不同引起的；也可能是由於某些腫瘤細胞內會缺失調節細胞周期或發生凋亡所需的基因，例如，過量表達Bcl2的細胞不再會發生由HDACs抑制劑誘導的凋亡，但是卻不會影響HDACs抑制劑對細胞周期的〈乍用(Johnstone,Histone-deacetylaseinhibitors:noveldrugsforthetreatmentofcancer.2002,1:p.287-99.)。通常情況下，HDACs抑制劑激活p21apiWAF1,使細胞停滯於G1期，如果細胞缺失CDKN1A基因，或者G1控制點喪失功能，細胞能夠通過G1期控制點，DNA進一歩複製為4n，則這些細胞很可能會發生凋亡。除了促進細胞退出細胞周期，發生分化，誘導細胞凋亡之外，HDACs抑制劑還能通過其它方式影響腫瘤細胞的生長。HDACs抑制劑能夠激活第I類和第II類組織相容性蛋白基因的轉錄，還能上調輔助刺激因子CD40，CD89禾卩CD86，細胞間粘附因子ICAM1，以及I型和H型幹擾素的水平，因此可以放大免疫細胞的識別和激活。例如，HDACs抑制劑能夠提高腫瘤細胞對異基因混合白細胞反應的敏感度(Maeda，Towatari,KosugiandSaito,Up-regulationofcostimulatory/adhesionmoleculesbyhistonedeacetylaseinhibitorsinacutemyeloidleukemiacells.Jrn/maZ2000，96:p.3847-56.)。另外，由於實體瘤的迅速增殖，需要新生血管提供腫瘤細胞所需的氧氣和營養物質，HDACs抑制劑能夠阻止組織缺氧導致的表皮生長因子(VEGF)的表達，從而抑制新生血管的形成(Sasakawa,Naoe,Noto，Inoue,Sasakawa,Matsuo，MandaandMutoh，AntitumorefficacyofFK228,anovelhistonedeacetylaseinhibitor,dependsontheeffectonexpressionofangiogenesisfactors.Jbwra"/2003,66:p.897-906.，Kim,Kwon,Lee,Baek,Jang,Lee,Moon,Kim，Lee，Chung,KimandKim，Histonedeacetylasesinduceangiogenesisbynegativeregulationoftumorsuppressorgenes.Jowna/2001,7:p.437-43.)。現有的HDACs抑制劑大多對HDACs的各個亞型不具有選擇性。因此，找到一類能具有選擇性的可以用作HDACs抑制劑的化合物具有非常重大的意義。
發明內容本發明涉及基於組蛋白去乙醯化酶設計的一類氧肟酸類小分子化合物，藥理試驗證明本發明化合物對於組蛋白去乙醯化酶具有很好的選擇性，本發明化合物及其藥用製劑可以用於治療由於組蛋白去乙醯化酶活性失調而導致的一系列疾病，或者可以用於治療與細胞分化或增殖相關的疾病，例如實體瘤、白血病等疾病。本發明涉及下列通式I的化合物(I)通式I化合物的立體異構體、水合物或藥學上可接受的鹽也包括在本發明範圍內。其中Ar表示芳香基，具體代表下列基團苯環、吡啶環或被1~4個X取代基取代的含有02個氮原子、硫原子或氧原子的五元或六元芳香環，其中取代基X是氫、卣素、氨基、羥基、硝基、氰基、C廣C4的烴基、C-C4的烷氧基、d-C4的氨基烷基、C,-C4的烷基胺基、Q-C4的醯基、d-C4的醯胺基、Q-C4的垸氧基羰基、與苯環或含有12個氮原子或1個硫原子或1個氧原子的五元或六元雜環連接的d-d的烷基或烷氧基；R,表示氫、Q-Q的烴基、與Y取代的苯氧基連接的C2-C6的烴基，Y是氫、d-Q的烴基或d-C4的烴氧基。上述化合物中Ar優選表示對甲基苯基。R!優選乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、戊基、己基或辛基。Ri還可以優選2-(o-甲基苯氧基)乙基、2-苯氧基乙基、2-(p-甲基苯氧基)乙基、3-苯氧基丙基、3-&-甲基苯氧基)丙基、4-苯氧基丁基或4-(p-甲基苯氧基)丁基。本發明還涉及一類通式II的新中間體，II這類中間體是全新的，用於製備通式I化合物，其Ar，R,的定義同通式I。fc表示氫或CVQ的垸基。本發明還涉及這一類化合物的製備方法。本發明所述的化合物的合成方法如下-將化合物(III)與滷代烴(R,X)進行反應得到中間體(11)，中間體(n)再與羥胺溶液反應得到通式(I)化合物，(in)化合物(III)與滷代烴(R!X)進行反應的反應溫度為03(TC，反應時間為212小時。反應所用的溶劑為常用溶劑，如DMF等，反應液中還需加入鹼，如氫化鈉，正丁基鋰等。若R2為氫，通式(II)化合物轉化為目標產物(I)的反應條件為以二氯甲烷或氯仿作為溶劑，在DMF的催化下，通式(II)化合物先與醯氯反應生成活性中間體，將此活性中間體滴加入鹽酸羥胺溶液中，以三乙胺作為鹼，鹽酸羥胺溶液由鹽酸羥胺，水和四氫呋喃配製。若R2為d-Q的垸基，通式(II)化合物轉化為目標產物(I)的反應條件為將通式(II)化合物滴加入新鮮配製的羥胺溶液中，隨即加入氫氧化鉀調節反應液使成鹼性。通式(I)所述的化合物，可以採用常見的分離方法進行純化，如重結晶、柱層析等。藥理學試驗顯示，本發明的化合物具有周期抑制和凋亡誘導活性，可以用於治療由於組蛋白去乙醯化酶活性失調而導致的一系列疾病，例如實體瘤、血瘤以及神經退行性疾病等。本發明所述的化合物可以添加藥學上可接受的載體製成常見的藥用製劑，如片劑、膠囊、粉劑、糖漿、液劑、懸浮劑、針劑，可以加入香料、甜味劑、液體或固體填料或稀釋劑等常用藥用輔料。本發明所說的化合物在臨床上的給藥方式可以採用口服、注射等方式。本發明的化合物臨床所用劑量為0.01mg500mg/天，也可根據病情的輕重或劑型的不同偏離此範圍。本發明的優點在於，所述化合物及其藥用製劑能有效調節組蛋白去乙醯化酶的活性，對於不同亞型的組蛋白去乙醯化酶(HDAC1和HDAC4)具有很好的選擇性和抑制活性，其中一個化合物對HDAC1和HDAC4的選擇性高達2282.8倍，是目前已報導的氧肟酸類HDAC抑制劑中對HDAC1和HDAC4選擇性最好的化合物。這些化合物可以用於治療基因表達異常引起的如腫瘤、內分泌紊亂、免疫系統疾病、遺傳病和神經系統疾病。下面是本發明化合物部分藥理學實驗及結果，藥理部分化合物用代號表示，其對應的結構式見實施例中相同代號所表示的結構式-一、本發明化合物對人白血病細胞U937細胞粒細胞分化的影響(參考Nebbioso，A.;Clarke,N.等人報導的方法，Nat.Med.2005，11,77-84.)將U937細胞懸浮於10nL連接有phycoerythrine的CDllc中(CDllc-PE),對照樣品加入至IO^L連接有PE的鼠IgGl中，於黑暗中4'C孵育30分鐘，再懸浮於500^L碘化丙吡的PBS溶液中(0.25嗎/mL)。用FACS流式細胞儀檢測樣品，使用CellQuest軟體(BectonDickinson)獲取並分析數據。本發明化合物1116對人白血病細胞U937細胞粒細胞分化的影響數據圖參見附圖1。圖1是藥物濃度為5時，30小時內，對照化合物SAHA和本發明部分化合物對U937細胞的粒細胞分化誘導率，其中SAHA誘導率為42.25%，化合物ll，12,和16的分化誘導率達61.86%，62.06%和68.53%。二、本發明化合物對人白血病細胞U937細胞細胞周期的影響(參考Nebbioso,A.;Clarke,N.等人報導的方法，NatMed.2005,11,77-84.)收集細胞(2.5X105),懸浮於500^L低滲緩衝溶液(0.1%TritonX-IOO，0."/。擰檬酸鈉,5(Hig/mL碘化丙吡(PI)以及RNAseA)中。於黑暗中(C孵育30分鐘，再懸浮於500碘化丙吡的PBS溶液中(0.25pg/mL)。用FACS流式細胞儀檢測樣品，使用CellQuest軟體(BectonDickinson),及ModFitLT軟體(第3版，Verity)獲取並分析數據。所有試驗均進行兩次或兩次以上。本發明化合物1116對人白血病細胞U937細胞細胞周期的影響數據圖參見附圖2。從圖2中可以看出，濃度為5時，30小時內，對照化合物SAHA使U937細胞停滯於G2期，化合物1115使細胞周期停滯於G1期，而化合物16使細胞周期停滯於S期。三、本發明化合物對人白血病細胞U937細胞凋亡的影響(參考Altucci，L.;Rossin，A.等人報導的方法，Nat.Med.2001,7，680-68)以活化的caspase3作為檢測細胞凋亡的指標(B-Bridge)。用FACS流式細胞儀檢測樣品，使用CellQuest軟體(BectonDickinson)獲取並分析數據。本發明化合物1116對人白血病細胞U937細胞凋亡的影響數據圖參見附圖2。從圖2中可以看出，濃度為5pM時，30小時內，對照化合物SAHA對U937細胞的凋亡誘導率為18.65%，而化合物11對細胞凋亡的誘導率為16.69%。四、本發明化合物對p21蛋白表達水平的影響(參考Nebbioso，A.;Clarke,N.等人報導的方法，Nat,Med.2005,11,77-84.)約100|xg總蛋白提取物由15%聚丙烯醯胺凝膠電泳分離，Westernblots檢測。以tubulin作為等量蛋白上樣內參。結果見圖3。從圖3中可以看出，本發明化合物均可不同程度的促進微管蛋白的乙醯化。五、本發明化合物化合物對a-微管蛋白乙醯化水平的影響(參考Mai,A.;Massa,A.等人報導的方法，J.Med.Chem.2005，48，3344-3353.)約50嗎含有a-微管蛋白的總蛋白提取物由10%聚丙烯醯胺凝膠電泳分離，Westernblots檢測。以ERKs作為等量蛋白上樣內參。結果見圖3。從圖3中可以看出，本發明化合物均可不同程度的促進微管蛋白的乙醯化。六、本發明化合物對HDACs的抑制作用(參考HeltwegB，JungM等所報導方法，AnalBiochem2002;302:175-83.)使用市售的HDACs抑制活性檢測試劑盒(AK-500，BIOMOL)，以FlurordeLysTM作為底物，HeLa細胞的核提取物中含有不同亞型的HDACs，以及其它一些細胞核因子，這個核提取物可以用於檢測化合物對HDACs的一般抑制活性。具體操作步驟為首先用適量DMSO配製化合物的原液，然後按梯度稀釋化合物，每個化合物有5個不同濃度用於檢測。試驗是在96孔的白色聚苯乙烯微孔板上進行的，具體操作是將含有HDACs的HeLa核提取物與FlurordeLysTM底物以及不同濃度的待檢測化合物混合，於25'C孵化，20分鐘後，加入FlurordeLysTM顯色劑，使用螢光檢測器於360460nm檢測微孔板內各個小孔的螢光強度，各個濃度的化合物重複3遍。試驗結果見表1。表1本發明化合物對HDACs的抑制作用tableseeoriginaldocumentpage98>2.217160.057SAHA0.053--七、本發明化合物對HDAC1和HDAC4的抑制試驗(參考LovelandBE,JohnsTG,MackayIR等人報導的方法，BiochemInt1992;27:501-10)ZR75.1細胞在IP緩衝液(50mMpH值為7.0的Tri-HCl，180mM氯化納溶液，0.15%NP-40,10%甘油，1.5mM氯化鎂溶液，1mM高錳酸鈉溶液以及0.5mM氟化鈉溶液)中裂解，裂解過程中加入蛋白酶抑制劑(Sigma)。加入lmMDTT，0.2mMPMSF，在冰浴中放置10分鐘，於13000rmp離心30分鐘。取1000嗎提取物，加IP緩衝溶液至l毫升，再預先加入20^LA/Gplus瓊脂糖(SantaCruz)於搖床上4'C下孵育30分鐘至1小時。取上清液至新的試管中，加入抗體(約34嗎)，於搖床上4'C下過夜使充分免疫共沉澱。HDACl的抗體購於Sigma。陰性對照為與純化的IgG(SantaCruz)免疫共沉澱的等量蛋白提取物。次日，分別在各個免疫共沉澱物中加入20pLA/G和瓊脂糖(SantaCruz)，繼續孵育2小時。簡單離心，並用冷的IP緩衝溶液多次洗滌以回收未結合的A/G。樣品在PBS中洗滌兩次，再懸浮至20(iL無菌PBS中。HDAC抑制試驗按照試劑盒生產商(Upstate)的使用說明進行。即將與HDACl(或HDAC4)或純化的IgG免疫共沉澱的樣品分別混合均勻。再取10免疫共沉澱物與事先放射標記並連接有strep加vidine瓊脂頭(Upstate)的"H-組蛋白H4共同孵育。每個試管中需要加入120,000cpm乙醯化的3H-組蛋白H4多肽，1XHDAC緩衝溶液，10nL免疫共沉澱物，再加入HDAC抑制劑(或不加抑制劑作為對照)，最終體積約為200pL。樣品在緩慢旋轉的狀態下於37'C孵育過夜。次日，加入50nL反應終止溶液，取100pL樣品，經簡單離心後用計數器檢測，重複兩次檢測。試驗共進行4組。結果見表2。表2是本發明化合物對HDAC1和HDAC4的抑制作用tableseeoriginaldocumentpage10從表2可以看出，本發明化合物對HDAC1的抑制活性比SAHA弱，但化合物12，15和16對HDAC4的抑制活性遠遠強於SAHA，化合物12對HDAC1和HDAC4的選擇性高達2282.8倍，化合物15和16對HDAC1禾BHDAC4的選擇性分別為201.46和716.72,而SAHAHDAC1和HDAC4的選擇性僅為1.09。八、本發明化合物對腫瘤細胞的抑制試驗共選用四種腫瘤細胞，分別為HCT116，A549，PC3和HEPG2。將細胞接種於96孔的平板中(每孔約有4000個細胞)，24小時後，將不同濃度的化合物加入至細胞中，48小時後，各小孔中分別加入MTT的PBS溶液(濃度為5mg/ml),於37卩孵育4小時，除去MTT，每個小孔中分別加入100nlDMSO(含量為100%)，於570nm下檢測(採用ThermoMultiskanSpectrum)。化合物110對腫瘤細胞的的抑制活性數據參見表3，化合物1116對腫瘤細胞的抑制活性數據參見表4。可以看出，化合物對不同株腫瘤細胞具有選擇性，化合物對HCT119細胞的細胞毒作用普遍較強。表3本發明化合物對腫瘤細胞的抗增殖作用tableseeoriginaldocumentpage11表4本發明化合物對腫瘤細胞的抗增殖作用tableseeoriginaldocumentpage11圖1是本發明化合物對人白血病細胞U937細胞粒細胞分化的影響。圖2是本發明化合物對人白血病細胞U937細胞細胞周期和凋亡的影響(圖中每個化合物所對應柱狀圖中從左至右四個柱子依次代表G1、S、G2、Apo)。圖3是本發明化合物對p21蛋白表達水平以及a-微管蛋白乙醯化水平的影響具體實施方式移取10.6mL甲苯(0.1mol)，溶於150mLCH2Cl2中，再移取7.96mL氯乙醯氯(O.lmol)，冰浴冷卻至0。C，緩慢加入26.7gA1C13(0.2mol),加畢，加熱至微沸，8小時後，停止加熱，室溫攪拌過夜。將所得混合物傾倒入200g碎冰中，分液，取有機層，水層再用CH2Cl2(50mLx2)萃取，合併有機層，用飽和食鹽水(20mL)洗滌，乾燥。濃縮得2-氯-p-甲基苯乙酮粗品，直接進行下一步反應。將該粗品用95X乙醇溶解(100mL)，加入硫脲11.4g(0.15mol)，攪拌使充分溶解，加熱回流2h，冷卻至室溫。所得的灰白色沉澱過濾，加少量水得濁液，再用2NKOH調節pH至鹼性，用乙酸乙酯(100mLx3)萃取，合併萃取液，用飽和食鹽水(20mL)洗滌，乾燥。濃縮得粗品，重結晶後得12.3g，產率為69.3%。取5-p-甲基苯基噻唑-2-氨基A5.0g(26.3mmol)和對甲醯基苯甲酸甲酯5.2g(31.6mmol)溶於無水甲苯中，加熱回流，反應過程中生成的水用分水器去除，反應2h後，將反應液冷卻至室溫。將析出的黃色沉澱.抽濾，用少量冷的甲苯洗滌，置入反應瓶中，加入甲醇(50mL)，於室溫攪拌10min.，緩慢加入NaBH41.2gG1.6mmol)，隨後，室溫攪拌30min。將反應液濃縮至千，加入50mL水，再用乙酸乙酯(30mLx2)萃取，合併乙酸乙酯液，用10mL飽和食鹽水洗滌。在乙酸乙酯液中滴加濃鹽酸使仲胺成鹽，抽濾得產品鹽酸鹽。將鹽酸鹽用2NNaOH溶液游離後，乙酸乙酯(30mLx2)萃取，合併乙酸乙酯液，用lOmL飽和食鹽水洗漆，無水NaS04乾燥，蒸除溶劑後得粗品，重結晶得5.47g，產率為61.3%。實施例15-，甲基苯基噻唑-2-氨基的製備實施例24-((5-p-甲基苯基噻唑-2-胺基)甲基傳甲酸甲酯的製備實施例34-((乙基(5-p-甲基苯基噻唑-2-基)胺基)甲基傳甲酸甲酯的製備4-((5-p-甲基苯基噻唑-2-胺基)甲基)苯甲酸甲酯1.3g(3.85mmol)溶於無水DMF中，冰浴冷卻至0。C，緩慢加入60%NaH0.185g(4.62mmol)，加畢，於室溫攪30min。移取溴乙烷0.56mL(7.7mmo1)，用2mL無水DMF稀釋後，緩慢地加入反應液中，加畢，室溫攪拌3h。在反應液中加入20mL水，再用乙酸乙酯(50mLx2)萃取。合併有機相，用飽和食鹽水(lOmL)洗滌，乾燥，濃縮至幹，柱層析得淺黃色油狀物0.84g，產率為59.8%。將(￡)-3-(5-((苄基(乙基)胺基)甲基)呋喃-2-基)丙烯酸乙酯0.35g(1.0mmol)加入至新鮮配製的羥胺溶液中，隨即加入0.03g(0.5mmol)氫氧化鉀，室溫攪拌2h。將反應液傾倒至20mL水中，用2N的鹽酸調節pH至7，加乙酸乙酯萃取(15mLx2)，合併乙酸乙酯液，依次用飽和NaHC03溶液，水，飽和食鹽水洗滌，無水NaSCV千燥，濃縮，重結晶得產品0.15g，產率為41.7%。lH畫R(DMSO-A，300MHz，J，ppm)1.18(t，3H)，2.26(s，3H),3.51(q,2H),4.74(s,2H)，7.00(s,1H),7.17(d,2H,J=7.9)，734(d,2H，J=8.0)，7.73(d,4H,J=8.0);MS(ESI)m/z366(M-l);IR(KBr)v(cm-1)=3449,3253,2975,1609,1547。羥胺溶液的配製方法為取鹽酸羥胺1.28g(18.4mmol)，加入3.2mL甲醇，加熱至4(TC，另取1.03g(18.4mmol)氫氧化鉀，加入6.0mL甲醇充分溶解後，傾倒於鹽酸羥胺的甲醇溶液中，攪拌2min，冷卻至0'C,抽濾除去無機鹽，即得羥胺溶液。製備方法將實施例3中的溴乙烷用溴丙烷替換，其它製備方法同實施例3和4。Yield:40.2%;&NMR(DMSO-4300MHz,3,ppm)0.88(t,3H)，1.64(m，2H)，3.43(t，2H)，4.78實施例4A^羥基-4-((乙基(5-，甲基苯基噻唑-2-基)胺基)甲基)苯甲醯胺(1)的製備實施例5JV-羥基-4-((丙基(5-化甲基苯基噻唑-2-基)胺基)甲基)苯甲醯胺(2)的製備(s,2H),7.07(s,1H)，7.17(d,2H,J-7.9),7.40(d,2H，J=8.0)，7.71(d,4H,J=8.0)，8.98(s，1H)，11.13(s,1H);MS(ESI)m/z380(M-l);IR(KBr)v(cm1)=3462，2954,1630,1550。實施例6iV-羥基-4-((異丙基(5-,甲基苯基噻唑-2-基)胺基)甲基)苯甲醯胺(3)的製備formulaseeoriginaldocumentpage14製備方法將實施例3中的溴乙烷用2-溴丙烷替換，其它製備方法同實施例3和4。Yield:38.5%;'H薩R(DMSO-4300MHz,<5，ppm)1.23(s,3H)，1.26(s，3H),2.29(s,3H),4.36(m，1H)，4.67(s，2H),7.05(s，1H),7.16(d，2H,J=8.0)，7.42(d,2H,J=8.3),7.68(d,2H,J=8.1),7.70(d,2H，J=8.3),8.90(s，1H)，11.08(s,1H);MS(ESI)m/z382(M+1);IR(KBr)v(cm")=3439:2975,1658,1644。實施例7W-羥基-4-((丁基(5-p-甲基苯基噻唑-2-基)胺基)甲基)苯甲醯胺(4)的製備formulaseeoriginaldocumentpage14製備方法將實施例3中的溴乙烷用溴丁烷替換，其它製備方法同實施例3和4。Yield:40.5%;'H麗R(DMSCW6,300MHz,J，ppm)0.89(t，3H),1.33(m,2H)，1.61(m，2H)，2.29(s,3H)，3,46(t,2H),4.77(s,2H)，7.07(s，1H),7.17(d,2H，J=8.1)，7.40(d，2H，J=8.1),7.72(d:4H,J=7.2),9.04(s,1H)，U.20(s，1H);MS(ESI)m/z418(M+Na);IR(KBr)v(cm")=3288，292，2854,1687。實施例8W-羥基-4-((異丁基(5卞-甲基苯基噻唑-2-基)胺基)甲基)苯甲醯胺(5)的製備formulaseeoriginaldocumentpage14製備方法將實施例3中的溴乙垸用異溴丁烷替換，其它製備方法同實施例3和4。Yield:41.7%;&NMR(DMSO-4300MHz,3,ppm)0.90(s，3H),0.92(s,3H)，2.16(m，1H),2.3(s,3H)，4.81(s，2H),5.75(s,2H),7.07(s,1H),7.18(d,2H，J=8.1)，7.39(d，2H，J=8.4),7.71(d，4H,J=8.1)，9.0(s,1H),11.14(s,IH);MS(ESI)m/z3%(M+l);IR(KBr)v(cm。=3286,2922,2850,1627。實施例9AL羥基-4-((戊基(5-p-甲基苯基噻唑-2-基)胺基)甲基)苯甲醯胺(6)的製備formulaseeoriginaldocumentpage15製備方法將實施例3中的溴乙垸用溴戊烷替換，其它製備方法同實施例3和4。Yield:42.4%;丄HNMR(DMSO-A,300MHz，&ppm)0.85(t,3H),1.27(m,4H)，1.63(m,2H),2.3(s,3H)，3.46(t,2H)，4,78(s，2H)，7.08(s，IH)，7.1(d，2H，J=8.1),7.4(d，2H，J=7.8)，7.71(d，4H，J=8.1),9.02(s,IH),lU9(s,IH);MS(ESI)m/z410(M+l);IR(KBr)v(cm-1)=3281,2960，2946,1619，1639。實施例10AL羥基-4-((己基(5-，甲基苯基噻唑-2-基)胺基)甲基)苯甲醯胺(7)的製備formulaseeoriginaldocumentpage15製備方法將實施例3中的溴乙烷用溴己烷替換，其它製備方法同實施例3和4。Yield:44.1%;'HNMR(DMSO-^,300MHz,<5，ppm)0.84(t,3H),1.27(m，6H),1.61(m,2H),2.3(s,3H)，3.46(t，2H),4.77(s,2H)，7.07(s，IH)，7.17(d,2H,J=8.1)，7.39(d，2H,J=8.1)，7.72(t，4H,J=8.1)，9.01(s，IH)，11.18(s，IH);MS(ESI)ra/z424(M+l);IR(KBr)v(cm")=3217，2932，2854,1687。實施例11iV-羥基-4-((辛基(5-p-甲基苯基噻唑-2-基)胺基)甲基)苯甲醯胺(8)的製備製備方法將實施例3中的溴乙烷用溴辛烷替換，其它製備方法同實施例3和4。Yield:44.6%;'HNMR(DMSO-c4，300MHz,&ppm)0.84(t,3H)，1.25(m,10H),1.61(m,2H)，2.3(s,3H)，3.46(t，2H)，4.77(s，2H),7.08(s,1H),7.17(d,2H，J-7.8),7.39(d,2H，J=7.8)，7.71(d,4H,J=7.8),9.0(s，1H),1.7(s,1H);MS(ESI)m/z450(M-1);IR(KBr)v(cm")=3288，2932,2847，1616,1538。實施例12A^羥基-4-((苯甲基(5-，甲基苯基噻唑-2-基)胺基)甲基)苯甲醯胺(9)的製備製備方法將實施例3中的溴乙烷用溴苄替換，其它製備方法同實施例3和4。Yield:42.5%;NMR(DMSO-《，300MHz,&ppm)2.3(s,3H),4.77(s,2H),4.80(s,2H)，7.09(s:1H)，7.18(d，2H，J=8.0)，7;287.36(m，5H),7.39(d，2H，J=8.1),7.71(d,2H,J=7.9),7.73(d,2H,J=7.9)，8,99(s，1H),11.16(s，1H);MS(ESI)m/z428(M-1);IR(KBr)v(cm")=3443，2925，2847,1634。實施例13^-羥基-4-(((2-(0-甲基苯氧基)乙基)(4-/7-甲基苯基噻唑-2-基)胺基)甲基)苯甲醯胺(10)的製備製備方法將實施例3中的溴乙烷用2-(o-甲基苯氧基)乙基溴替換，其它製備方法同實施例3和4。Yield:41.9%;'HNMR(DMSO-^，300MHz,&ppm)2.1(s,3H)，2.3(s,3H),3.98(t,2H),4.27(t,2H),4.88(s,2H)，6.83(t,1H),6.97(d，1H,J=7.8),7.09(s,1H),7.09~7.13(m,2H),7.17(d,1H,J-8.0),7.41(d,1H，J=8.0),7.71(dd，4H,J-6.7),8.96(s，1H),11.14(s,IH);MS(ESI)m/z472(M-1);IR(KBr)v(cm-1)=3438,2932，1648，1541。實施例14iV-羥基-4-(((2-苯氧基乙基)(4，甲基苯基噻唑-2-基)胺基)甲基)苯甲醯胺(11)的製備製備方法將實施例3中的溴乙烷用2-苯氧基乙基溴替換，其它製備方法同實施例3和4。Yield:41.2%;'HNMR(DMSO-^，300MHz,<5，ppm)2.31(s,3H),3.94(t，2H)，4.28(t，2H)，4.86(s,2H),6.91~6.97(m，3H),7.12(s,IH)，7.18(d，2H,J=8.1),7.25~7.31(m,2H)，7.42(d,2H,J=8.1):7.71(d,2H，J=8.1)，7.72(d,2H,J=7.8)，9.02(s，1H)，lU8(s,IH);MS(ESI)m/z458(M-1);IR(KBr)v(cm4)=3447,2925,1638,1541。實施例15;V-羥基-4-(((2-(p-甲基苯氧基)乙基)(4，甲基苯基噻唑-2-基)胺基)甲基)苯甲醯胺(12)的製備製備方法將實施例3中的溴乙烷用2-(p-甲基苯氧基)乙基溴替換，其它製備方法同實施例3和4。Yield:45.2%;^NMR(DMSO-^，300MHz,5,ppm)2.22(s，3H)，2.25(s,3H),3.91(t,2H),4.24(t,2H)，4.84(s,3H),6.84(d,2H,J=8.4)，7.07(d,2H，J=8.1),7.12(s,1H),7.18(d，2H,J=8.1),7.41(d,2H,J=8.1),7.72(d,2H,J=8.1)，7.73(d，2H，J=8.1),9.05(s,1H),11.17(s，IH);MS(ESI)m/z472(M-1);IR(KBr)v(cm-1)=3615，3566,3459,2911，1648。實施例16W-羥基-4-(((3-苯氧基丙基)(4，甲基苯基噻唑-2-基服基)甲基)苯甲醯胺(13)的製備製備方法將實施例3中的溴乙烷用3-苯氧基丙基溴替換，其它製備方法同實施例3和4。Yield:43.3%;NMR(DMSO-t/6，300MHz,&ppm)2.11(m,2H),2.30(s,3H)，3.67(t,2H),4.02(t，2H)，4.79(s，3H)，6.90~6.93(m，3H)，7.09(s,1H),7.16(d,2H，J-7.8),7.25~7.30(m，2H)，7.40(d,2H，J=7.8),7.72(t,4H),9.0(s，1H)，1L17(s,1H);MS(ESI)m/z472(M-l);IR(KBr)v(cm—1)=3459，1633,1548。實施例17W-羥基-4-(((3-(p-甲基苯氧基)丙基)(4，甲基苯基噻唑-2-萄胺基)甲基)苯甲醯胺(14)的製備製備方法將實施例3中的溴乙垸用3-(p-甲基苯氧基)丙基溴替換，其它製備方法同實施例3和4。Yield:46.1%;!HNMR(DMSO-cf6，300MHz，&ppm)2.06(m，2H)，2.22(s,3H),2.30(s,3H),3.66(t,2H)，3.98(t,2H),4.78(s,2H),6.81(d,2H,J=8.7),7.65(d,2H,J=8.4)，7.09(s，1H),7.16(d，2H,J=8.1),7.39(d，2H，〗=8.1),7.71(d,2H,J=8.1)，7.72(d，2H，J=8.1),9.10(s,1H),11.2(s，1H);MS(ESI)m/z486(M-l);IR(KBr)v(cm—1)=3444,2918,1634,1548。實施例18^-羥基-4-(((4-苯氧基丁基)(4-/;-甲基苯基噻唑-2-基)胺基)甲基)苯甲醯胺(15)的製備formulaseeoriginaldocumentpage19製備方法將實施例3中的溴乙垸用4-苯氧基丁基溴替換，其它製備方法同實施例3和4。Yield:43.5%;'H畫R(DMSO-rf6，300MHz,J,ppm)1.62(m，4H)，2.14(s，3H)，3.41(t，2H),3,84(s,2H),4.63(s,2H)，6.73~6.78(m，3H),6.93(s,1H),6.99(d,2H，J=8.1),7.03~7.14(m，2H),7.25(d,2H，J=8.1)，7.56(d,4H，J=8.2)，8.86(s，1H)，11.02(s,1H);MS(ESI)m/z488(M+1);IR(KBr)v(cm')=3594,3416,2847,1644。實施例19^-羥基-4-(((4-0>甲基苯氧基)丁基)(4，甲基苯基噻唑-2-基)胺基)甲基)苯甲醯胺(16)的製備製備方法將實施例3中的溴乙烷用4-(/7-甲基苯氧基)丁基溴替換，其它製備方法同實施例3和4。Yield:41.3%;NMR(DMS0-4，300MHz,(5,ppm)1.76(m,4H),2.22(s,3H),2.97(s,3H)，3.57(t,2H),3.95(t,2H)，4.78(s,2H),6.84(d,2H,J=8.4)，7.06(d，2H,J=8.4),7.08(s，1H)，7.15(d，2H,J=8.1),7.39(d，2H，J-8.1)，7,71(d，2H,J=8.1)，7.72(d,2H,J=8.1)，9.07(s，1H)，11.19(s，1H);MS(ESI)m/z502(M+1);IR(KBr)v(cm-1)=3594,3409,2932,2678,1633。權利要求1、通式(I)的化合物、其立體異構體、水合物或藥學上可接受的鹽其中Ar表示苯環、吡啶環或被1～4個X取代基取代的含有0～2個氮原子、硫原子或氧原子的五元或六元芳香環，其中取代基X是氫、滷素、氨基、羥基、硝基、氰基、C1-C4的烴基、C1-C4的烷氧基、C1-C4的氨基烷基、C1-C4的烷基胺基、C1-C4的醯基、C1-C4的醯胺基、C1-C4的烷氧基羰基、與苯環或含有1～2個氮原子或1個硫原子或1個氧原子的五元或六元雜環連接的C1-C4的烷基或烷氧基；R1表示氫、C1-C8的烴基、與Y取代的苯氧基連接的C2-C6的烴基，Y是氫、C1-C4的烴基或C1-C4的烴氧基。2、權利要求l的化合物，其中Ar表示對甲基苯基。3、權利要求1的化合物，其中R,表示乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、戊基、己基或辛基。4、權利要求l的化合物，其中R!表示2-(o-甲基苯氧基)乙基、2-苯氧基乙基、2-(p-甲基苯氧基)乙基、3-苯氧基丙基、3-(p-甲基苯氧基)丙基、4-苯氧基丁基或4-(p-甲基苯氧基)丁基。5、一種通式UI)的化合物中間體formulaseeoriginaldocumentpage2(II)其中Ar、R!的定義同權利要求l;R2表示氫或d-Q的烷基。6、一種藥物組合物，其中含有權利要求1的化合物和藥學上可接受的載體。7、權利要求l的化合物用於製備治療與細胞分化或增殖相關的疾病的藥物的用途。8、權利要求7的用途，其中與細胞分化或增殖相關的疾病是實體瘤或白血病。全文摘要本發明涉及藥物化學領域，具體涉及一類氧肟酸類組蛋白去乙醯化酶抑制劑(I)，本發明還公開了這些化合物的製備方法、含其的藥物製劑及其醫藥用途。文檔編號A61K31/426GK101230049SQ20081002020公開日2008年7月30日申請日期2008年2月27日優先權日2008年2月27日發明者盧塞爾·安徒生,安吉拉·奈伯遜,尤啟冬,波楊,紅蘇申請人:中國藥科大學