一種用於檢測發炎與壓力的惡性循環狀態的方法及組件的製作方法

2023-06-19 00:45:36 3

專利名稱：：一種用於檢測發炎與壓力的惡性循環狀態的方法及組件的製作方法
技術領域：
：本發明是關於NFA分子作為檢測發炎與壓力的惡性循環(viciouscycle)狀態的指標。並證實OPN、IL-6及由身體所產生其它的惡性循環分子的表現與NFA表現具有正相關。
背景技術：
：目前一些與疾病發展相關的壓力與發炎反應的主要指標，包括核因子-KB(NF-KB)、白細胞介素-6(IL-6)、信號轉導及轉錄啟動因子3(STAT3)蛋白質及骨橋蛋白(OPN)。該疾病包括病態行為、老化、肥胖症、骨質疏鬆、骨關節炎、全身骨質流失、疼痛知覺、認知障礙、抑鬱症、糖尿病/胰島素抵抗、動脈粥樣硬化、纖維化、腎結石、再狹窄、器官萎縮、哮喘、動脈粥樣硬化、心血管疾病、慢性阻塞性肺病、腸炎病、肝病、克隆氏症、自身免疫性疾病，包括紅斑性狼瘡、多發性硬化症及類風溼關節炎以及癌症的九種特徵，包括轉移前微環境形成、異常骨髓微環境形成、原發性全身內分泌煽動(primarysystemicendocrineinstigation)及白血病、淋巴瘤以及骨髓瘤的發展與延伸。所有壓力與發炎反應指標在許多生理過程中也具有重要且正面的角色。在臨床試驗上，針對這些關鍵指標於疾病預防與治療上的治療潛力及效益，已經引起了嚴重併發症及此方法的隱藏危險。雖然在長期壓力與慢性發炎期間，許多疾病系經由壓力與發炎反應指標的失調而產生，然而很明顯的是，一旦論及抑制單一因子(譬如NF-κB)是會對人體造成毒性的，且並不可能治癒這些相關的疾病。然而，目前在治療壓力與發炎反應相關的疾病上，若是同時抑制目前已知的壓力與發炎反應的多個指標來進行治療，對於人體而言，則會影響正常的生理功能且造成生理機能的毒性。最初，核因子A(NFA)是經確定為一種ATP·Mg-依賴蛋白磷酸酶的特定細胞膜與細胞質的活化因子A，但後來被描述為一種多受質/多功能的脯胺酸導引蛋白激酶(PDPK)。雖然GSK3/GSK-3β與NFA/GSK-3a長期以來被視為兩種密切相關的信號分子，儘管在激酶結構域上結構相似，但是當根據如本發明中所證實的人類臨床研究時，這些信號分子的功能並非等同於先前在果蠅與齧齒動物中的研究。此外，深入的研究及大多數的注意力都集中在GSK-3β上，卻僅稱之為GSK-3，並未在許多領域的研究上對此GSK-3有進一步詳盡的說明，且抑制此種激酶可能會導致腫瘤形成，這種情況引導出關於如何治療糖尿病而不引發癌症的重要課題。因此，NFA的獨特角色在發明人這10年間的研究已經陸續被確立。在檢測壓力與發炎反應領域，從未有人使用NFA作為檢測的標誌，以及測定受試者在慢性發炎及壓力的惡性循環上的發展。因此，在臨床上檢測壓力與發炎反應領域，NFA為一全新的分子可作為病患體內檢測壓力與發炎反應的指標，並且在進行治療時NFA分子也展現出具有良好的功效，並且較不具生理毒性。
發明內容本發明提供NFA分子作為檢測發炎與壓力的惡性循環狀態的指標。並證實0ΡΝ、IL-6及由身體所產生其它的惡性循環分子的表現與NFA表現具有正相關。針對這些主要發炎與壓力的惡性循環狀態指標提供一新穎的指標分子，並且在臨床上亦可作為治療的標靶，此標靶不會影響基本生理相關功能。透過NFA作為惡性循環的指標確認病患是否身處於發炎與壓力的惡性循環狀態之下，再進行抑制NFA，相較於抑制其它發炎與壓力的惡性循環狀態指標分子將較不易對生理機能造成毒性(在大部分的情況下)且較具功效。此發明成果可以供同時部分抑制所有關鍵的發炎與壓力的惡性循環狀態指標分子如核因子-!^(即-1^)、白細胞介素-6(11^6)、信號轉導及轉錄啟動因子3飢六丁3)蛋白質及骨橋蛋白(OPN)，以終止惡性循環來預防及治療長期壓力與慢性發炎相關的疾病，並且避免造成任何副作用與併發症。NFA與其它已知的發炎與壓力的惡性循環狀態指標分子的異常表現為一主要壓力來源，兩者更共同在惡性循環的形成上扮演著重要的角色。本發明所提出的發炎與壓力的惡性循環狀態指標分子NFA與癌症的12種主要表現特徵息息相關，該特徵包括(圖8):自體生長訊號的充足(Self-sufficiencyingrowthsignals)、對生長抑制訊號的不敏感(Insensitivitytogrowth-1nhibitorysignals)、對細胞凋亡的逃脫(Evasionofapoptosis)、不受限制的複製潛力(Limitlessreplicativepotential)、持續的血管新生(Sustainedangiogenesis)、原發性腫瘤及其轉移的平行發展；癌症的微轉移；轉移的奠基細胞(Parallellprogressionofprimarytumorsandmetastasescancermicrometestasis；metestasisfoundercell)、轉移前與異常的骨髓棲位的形成；骨頭轉移(PremetastaticandaberrantBMnicheformation;bonemetastasis)、原發性的全身性內分泌的煽動(Primarysystemicendocrineinstigation)、腫瘤-基質的協同進化及幹擾；致死細胞在表現型轉換上的可塑性(Tumor-stromacoevolutionandcrosstalk；lethalcellularphenotypicplasticityswitch)、持續地全身機能性的EMT的誘導與致死MTC/MTSC的發展；轉移性幹細胞(SystemicdynamicsustainedEMTinductionandlethalMTC/MTSCprogression；metastaticstemcells)、免疫抑制；對荷爾蒙/化學/免疫療法的多重抗性與異常乾性(Immunosuppression,multiresistencestohormonal/chemo/immuno-therapyandaberrantsternness)、宿主腫瘤間的交互作用；經由致死MTC與致死BMC造成具有癌症轉移特性的局部與全身性環境(Host-tumorinteractions；localandsystemicenvironmentstocancermetastasesvialethalMTCandlethalBMC)。針對慢性壓力及發炎的惡性循環的治療而言，其目前在臨床試驗上的方式是對NF-KB、STAT3、IL-6及/或OPN進行完全的抑制，但是因為這些組合物對於其它組織功能(譬如免疫功能及傷口癒合)是重要的，所以這些試驗引起嚴重的併發症及潛藏危險。於造血及間質幹/前驅細胞、免疫/發炎細胞及間質細胞中，0PN、NF-kB、IL-6、STAT3是在其中廣泛表現且調控壓力與發炎反應的惡性循環的機制，該機制亦被NFA所主導並整合著。在強烈對比下，在進行發炎與壓力的惡性循環狀態相關疾病治療時，NFA較不具毒性且更具功效，可單獨或是協同抑制部分關鍵的指標，進而終止該惡性循環。因此，本發明提供一種用於發炎與壓力的惡性循環狀態指標分子檢測方法與治療的標的，針對此種廣泛表現的惡性循環，進一步預防與治療而不會造成任何副作用與併發症。圖1為免疫組織化學染色圖，其中A為乳房腫瘤的預後不佳基質微環境帶有NFA；B為伴隨地具有在發炎區域內的OPN的大量向上調整；C為伴隨地具有在發炎區域內的IL-6的大量向上調整；D為未具有NFA的預後良好基質微環境；E為僅具有基本的OPN的預後良好基質微環境；F為君具有IL-6(F)的預後良好基質微環境形成對照。圖2為治癒性治療後免疫組織化學染色圖，其中A、B顯示若增生組織的預後不佳基質微環境帶有NFA；C是伴隨地具有在發炎區域內的OPN的大量向上調整；D是伴隨地具有在發炎區域內的IL-6(D)的大量向上調整；E、F是未具有NFA的預後良好基質微環境；G、H是僅具有基本的OPN的預後良好基質微環境；H是僅具有IL-6(H)的預後良好基質微環境形成對照。圖3是NFA為一種新的標靶，用於通過針對長期壓力與發炎反應的惡性循環，將不良的發炎重新導向良好發炎，且將不良的微環境轉變成良好的微環境。圖4是預後不佳基質微環境免疫組織化學染色圖，其顯示在NFA-陽性(E、F、G及H)預後不佳基質微環境內之TGFi31(A)、TNFa(B)、組織因子(C)及VEGF(D)之伴隨地向上調整。圖5是NFA在具有愈益嚴重疾病的血癌病患的BMC中存在。圖6是若預後不佳的腫瘤帶有NFA，則伴隨地具有在腫瘤與基質兩者內的OPN表現的向上調整。圖7是亦可在帶有NFA的預後不佳腫瘤基質內偵測到IL-6、TGFβ1、TNFa、組織因子及VEGF的伴隨地向上調整。``圖8是作為惡性循環與全面癌症控制的潛在標靶的NFA的多方面角色。具體實施例方式為清楚揭露，而非以其方式限制，本發明的詳細描述是區分成以下次段落。A.定義除非另有所指，否則本文中使用的所有技術及科學術語，具有如同本發明所屬
技術領域：
中的一般技術者所普遍熟知之相同意義。本文中指稱之所有專利、申請案、公開申請案及其它出版物，以及基因庫登錄號皆以其全文併入本文供參考。若本章節中所提出的定義與併入本文供參考的專利、申請案、公開申請案及其它出版物中所提出的定義相反或不一致，則以本章節中所提出的定義為主。如本文中所使用的「一」或「一個」是是指「至少一個『或「一或多個」。如本文中所使用的「NFA」一詞是指核脯胺酸導引蛋白激酶FA，亦被稱為肝醣合成酶激酶_3a(ffoodgett,EMBOJ,1990,9:2431_8;Yang,CurrCancerDrugTargets,2004,4591-6)。關於此蛋白質的基因庫登錄號為AAD11986與AAH27984。如本文中所使用的「生物樣本」是指來自一生物來源的任何樣本，包括但不限於骨髓、血液、組織樣本、腹水、胸膜積水、體液或細胞系。如本文中所使用的「抗體」一詞是指一種經單離或重組結合的試劑，其包括必要的變異區序列以專一性鍵結一抗原決定位。因此，抗體是表現所要求生物活性的任何型式的抗體或其片段，例如，結合特定的目標抗原。因此，只要抗體表現所要求的生物活性，例如專一性結合NFA時，用於被廣泛認知及特定地涵蓋單株抗體(包括全長單株抗體)、多株抗體、人類抗體、擬人化抗體、嵌合抗體、奈米抗體、雙價抗體、多重專一抗體(例如雙特異抗體)及抗體片段，包括但不限於scFv、Fab及Fab2。如本文中所使用的「受試者」一詞是指任何生物體，較佳受試者為哺乳動物。舉例之受試者包括但不限於人類。如本文中所使用的「骨橋蛋白(OPN)」一詞是指OPN(iOPN)的細胞內變體，其是涉及一些細胞過程，包括轉移、融合及運動性，且其在惡性循環中具有異常表現。如本文中所使用的「IL-6」一詞是指發燒與急性時相反應的最重要指標及充當促炎細胞因子與抗炎細胞因子兩者的白細胞介素，且其在惡性循環中具有異常表現。如本文中所使用的「基質微環境」一詞是指生物細胞、組織或器官適應對於其連接及功能上輔助框架的進化結果。B.材料與方法受試者關於免疫組織化學分析所使用的臨床病理數據與標本是經由病患醫療記錄的詳細回顧而得，這些病患在1987年至2004年之間，於臺灣省臺北市臺大醫院，進行癌症的最初腫瘤切除手術。將手術切除的標本固定於10%福馬林中，並常規處理以供石蠟包埋。將連續切片使用HE染色法染色以供組織分析。進行觀察病患，直到2006年4月為止。此研究是經由該機構的監督與倫理委員會核准。免疫組織化學分析以福馬林固定、石蠟包埋含有最多腫瘤細胞的腫瘤的組織切片(5ym)於二甲苯中脫蠟，接著於濃度漸減的乙醇中水合。使內生性過氧化酶以3%過氧化氫阻斷，然後以牛血清蛋白阻斷5分鐘。接著，將玻片於0.05MTris緩衝液(pH7.4)稀釋的主要抗體中，於4°C下培養16小時，然後與超級增強劑(superenhancer,SuperSensitiveTMNon-BiotinDetectionSystem,BioGenex,SanRamon,CA)於室溫下一起培養20分鐘，並以polymer-HRP(SuperSensitiveTM)標幟物培養另外30分鐘。最後，免疫染色法系以DAB(3-3，diaminobenzidinetetrahydrochloride)呈色。在抑制酵素反應後，將玻片在室溫下於DS-enhancer(Zymed,SanFrancisco,CA)中培養5分鐘，以防止在兩種染色系統間的交互作用。接著，將玻片與CD34抗體於室溫下一起培養一小時。在清洗後，將玻片與抗小鼠鹼性磷酸酶於室溫下一起培養30分鐘。使用BCIP/NBT溶液以顯現鍵結的抗體。以甲基綠溶液對比染色切片。C.實施例實施例1與2.若腫瘤的預後不佳發炎性基質微環境帶有NFA，則伴隨地具有在發炎區域內的OPN與IL-6的大量向上調整根據目前範例，一旦慢性發炎狀態建立，即通常因為細胞因子、化學激素網絡的惡性循環取得動量(momentum)。因此，即使是一個小的刺激(其是由在基質微環境內所散布的少量異常發炎/基質細胞所引起)在整個組織與器官中，亦可能散播更多全身發炎性反應。經由使用腫瘤的預後不佳與預後良好發炎性基質微環境作為一種模式，顯示若乳房腫瘤的預後不佳基質微環境帶有NFA(圖1A)，則伴隨地具有在發炎區域內的0ΡΝ(圖1B)與IL-6(圖1C)的大量向上調整，其是相較於未具有NFA(圖1D)且僅具有基本的0ΡΝ(圖1E)與IL-6(圖1F)的預後良好基質微環境。超過95%的病患若帶有NFA的存在與基質微環境的發炎區域內的OPN及/或IL-6的大量向上調整，如圖1中所示，即使在可能地治癒性治療後仍具有不佳預後，此證明NFA對於基質治療的關鍵角色。也可以將類似的觀察數據延伸至肺、胃、結直腸、胰腺、前列腺、卵巢、腎臟及口腔。超過35%的病患若帶有NFA的存在與基質微環境的發炎區域內的OPN及/或IL-6的大量向上調整，如圖2中所示，即使在可能地治癒性治療後仍具有不佳預後，此證明在任何癌發展之前，NFA對於基質治療的關鍵角色。如綜合實施例1與實施例2中所示結果顯示NFA為一種新的指標,其是用於針對長期壓力與發炎反應的惡性循環，將不良的發炎重新導向良好的發炎，且將不良的微環境轉變成良好的微環境(圖3)，以供預防及治療一些疾病。實施例3.在NFA-陽性基質微環境內的TGFβ1、TNFα、組織因子及VEGF的伴隨向上調整利用類似方法，在如上述的NFA-陽性(圖4E、F、G及H)預後不佳基質微環境內，可頻繁地偵測出TGFPI(圖4A),TNFa(圖4B)、組織因子(圖4C)及VEGF(圖4D)的伴隨向上調整。綜合以上結果提供了進一步證據，以在異常組織重建、異常傷口癒合及與慢性壓力和慢性發炎有關聯的異常組織修復期間，支持NFA在基質治療中的關鍵角色。實施例4.NFA在具有日益嚴重的血癌病患骨髓細胞(BMC)中表現根據目前範例，在組織、骨骼及血管再造中，BMC的監視是嚴重地影響動態與微妙的平衡，且利用骨髓作為一種優良模式，該結果顯示NFA在具有愈益嚴重疾病的血癌病患骨髓細胞(BMC)中存在(圖5)。綜合實施例1-3，這些結果進一步證明在受傷、傷口癒合、慢性壓力及發炎期間，伴隨著OPN與IL-6的NFA在BMC中的關鍵角色，該BMC是在監視與組織更新及/或修復期間，涉及異常組織、骨骼及血管再造。綜觀來說，在監視、組織重建及傷口癒合過程期間，伴隨著OPN、IL-6、TGF^1、VEGF,TNFa及組織因子的NFA在BMC中存在，於慢性壓力、發炎及異常組織修復相關疾病的發展中扮演著關鍵角色，該疾病包括骨骼疾病(譬如全身性骨質流失)、心血管疾病(譬如動脈粥樣硬化)及發炎相關的疾病以及血管再造。另一方面，這些結果亦證明了NFA在轉移前微環境形成、異常骨髓微環境形成、原發性全身內分泌煽動及白血病、淋巴瘤以及骨髓瘤的發展中的關鍵角色。腫瘤為不被治癒及/或由重複受傷所造成的過度癒合傷口，此是由於異常細胞免疫反應與異常組織修復所致。在上述各個預後不佳的器官與組織基質內，如所證明壓力與發炎的惡性循環的全身散播(實施例1-5)是由NFA的異常表現而產生。NFA的異常表現顯示此一惡性循環的主要指標的含量明顯上升(圖3)。在長期的壓力反應與發炎反應期間，異常傷口癒合、異常組織修復、異常幹細胞微環境及異常組織體內平衡的形成可引起發病或加重某些疾病。實施例5.若預後不佳的腫瘤帶有NFA，則伴隨地具有骨橋蛋白(OPN)表現的向上調整帶有NFA的具侵略性的乳房腫瘤伴隨地具有在NFA+(NFA陽性)腫瘤與NFA+基質兩者內，以排他方式存在的OPN的向上調整，其是與NFA_(NFA陰性)腫瘤及NFA_基質形成對照(圖6)。類似的觀察亦可延伸至NFA+預後不佳的肺腫瘤與基質，其系與NFA—預後良好的腫瘤及基質形成對照，亦可延伸至NFA+預後不佳的GI腫瘤與基質，其是與NFA_預後良好的GI腫瘤及基質形成對照(圖6)。上述帶有NFA的預後不佳腫瘤伴隨地具有在乳房腫瘤與基質內，以排他方式存在的OPN表現的向上調整，其是與如所示的NFA_預後良好的乳房腫瘤及基質形成對照。OPN表現的類似的向上調整亦可在NFA+預後不佳的肺腫瘤與基質中被偵測到，其是與NFA_預後良好的肺腫瘤及基質形成對照，且亦可在NFA+預後不佳的GI腫瘤與基質中被偵測到，其是與如所示的NFA—預後良好之GI腫瘤及基質形成對照。在腫瘤團塊內的NFA與OPN的單一染色法系以DAB呈色。使用BCIP/NBT溶液，以使腫瘤基質內的NFA+波形蛋白(vimentin)+間葉細胞的主要群體局部化。單一與雙重染色法兩者系在連續組織切片上以重複方式執行。單一染色法是以蘇木色素進行對比染色，而雙重染色法是經對比染色。對於腫瘤的進展與轉移而言，OPN被認為是重要的貢獻者。很明確的是，多面向的OPN信號途徑可促進癌細胞增生、抗細胞死亡、細胞外基質侵襲、轉移、侵襲、新生血管形成及原發性全身煽動，以助長癌症進展與轉移。微數組研究(microarraystudies)顯示OPN在與所有已知能力相關的99種基因調整上的潛力，該能力為腫瘤進展與基因組不穩定之使能特徵所需者。該結果提供進一步證據，以證明NFA-腫瘤-EMT-基質-BMC-所調解的惡性循環系涵蓋原發性全身內分泌煽動、異常骨髓微環境形成，包括骨頭轉移與白血病/淋巴瘤/骨髓瘤發展及延伸以及轉移前微環境形成。該結果進一步支持NFA在OPN-腫瘤-EMT-基質-BMC-OPN協同進化的惡性循環中的關鍵角色，該惡性循環對於癌症發展與進展是重要的。實施例6.在NFA-陽性腫瘤-基質微環境內的IL6、TGFβ1、TNFα、組織因子及VEGF的伴隨的向上調整帶有如上述NFA-OPN的侵略性腫瘤亦伴隨地具有在NFA+預後不佳腫瘤基質內的影響癌症發展與進展的許多關鍵指標(譬如IL6、TGFi3UTNFa、組織因子及VEGF)的向上調整，其是個別與NFA—預後良好的腫瘤基質形成對照(圖7)。帶有上述NFA的預後不佳腫瘤亦伴隨地具有在腫瘤基質內的IL6、TGFi3UTNFa、組織因子及VEGF的調整，其是與NFA_預後良好的腫瘤基質形成對照，個別如所示。NFA、IL6、TGFβUTNFa、組織因子及VEGF的單一染色法是以DAB呈色，且以蘇木色素進行對比染色。使用BCIP/NBT溶液，以使腫瘤基質內的NFA+波形蛋白(vimentin)+間葉細胞的主要群體局部化。綜合以上結果提供了進一步證據，以支持NFA的關鍵角色，以供全面癌症控制，特別是包括骨頭轉移。實施例7.NFA為一種關於全面癌症控制的潛在標靶在大群組研究中，超過50%預後不佳的乳癌病患(44/74)顯示帶有如上述的NFA。另一方面，若乳癌病患帶有NFA，則在治療後皆無法具有良好預後，而在67位預後良好的乳癌病患的群體中，無病患顯示帶有NFA。同樣地，56%(44/78)預後不佳的肺癌病患顯示帶有NFA，且在53位預後良好的肺癌病患的群體中，無法偵測出假陽性病例。同樣地，67%(61/91)預後不佳的GI癌症病患顯示帶有NFA，且在治療後，全部具有預後不佳的情況；在總計94位預後良好的GI癌病患中，於治療後無法偵測出假陽性病例。整體來說，於總計457位癌症病患中，包含214位預後良好與243位預後不佳的病例，超過60%(149/243)預後不佳的病患顯示帶有如圖1-4中所述的NFA，且於治療後全部具有預後不佳的情況。214位預後良好的腫瘤患者未顯示帶有NFA。應注意到的是，預後不佳病患的主要群體是與骨頭轉移有關聯。綜合以上結果證明，在測定超過60%癌症病患的不佳臨床預後的病例上，NFA的主要且排他的關鍵角色，以供全面癌症控制。對於免疫監視、細胞死亡、早衰、化學治療、免疫治療及目前靶向治療，許多癌症病患的不佳預後顯然主要是經由NFA+BMC且特別是具有多重抗性的轉移性間質樣癌幹細胞(metastaticmesenchymal-1ikecancerstemcells)的NFA+MTC特性兩者進行測定。因此，NFA是呈現出一種新的描述且先前未被發現的信號標靶，其在影響癌症進展與轉移的腫瘤幹細胞之間質狀態穩定維持上，扮演著舉足輕重的角色。綜上所述，很明確的是，全面癌症控制是經由同時針對自分泌、旁分泌及腫瘤-EMT-基質-BMC協同進化信號的全身內分泌作用進行協助。因此，本發明是提供可以同時針對癌症12種特徵的核心技術，該特徵包括EMT誘發之穩定重編程(stablereprogrammingofEMTinduction)、抗細胞死亡(antiapoptosis)、轉移前微環境形成(premetastaticnicheformation)、全身性免疫抑制(systemicimmunosuppression)、異常腫瘤_基質協同進化(aberranttumor-stromacoevolution)及幹擾(crosstalk)、癌症相關之發炎(cancer-relatedinfIammation)、異常乾性(aberrantsternness)、異常骨髓微環境形成(aberrantbonemarrownicheformation)、骨頭轉移(bonemetastasis)及原發性全身內分泌煽動(primarysystemicendocrineinstigation),以供全面癌症控制(圖8)。權利要求1.一種用於檢測發炎與壓力的惡性循環狀態的方法，其特徵是經由以下步驟進行a.取得一受試者的檢體樣本；b.測定該檢體樣本中NFA分子表現量；以及c.當該檢體樣本具有NFA的表現，則判定所述受試者具有預後不佳的現象。2.如權利要求1所述的方法，其特徵是，所述檢體樣本為骨髓、臍帶血、周邊血液、組織樣本、腹水、胸膜積水或體液。3.如權利要求1所述的方法，其特徵是，所述NFA分子表現量的偵測是通過評估NFA蛋白質、mRNA、DNA或生物活性能力。4.一種用於檢測受試者發炎與壓力的惡性循環狀態的方法，其特徵是，經由以下步驟進行a.取得受試者的檢體樣本；b.測定該檢體樣本中NFA分子表現量；以及c.當該檢體樣本具有NFA的表現，則判定所述受試者具有發炎與壓力的惡性循環狀態的預後不良風險。5.如權利要求4所述的方法，其特徵是，所述檢體樣本為骨髓、臍帶血、周邊血液、組織樣本、腹水、胸膜積水或體液。6.如權利要求4所述的方法，其特徵是，所述NFA分子表現量的偵測是通過評估NFA蛋白質、mRNA、DNA或生物活性能力。7.—種檢測發炎與壓力的惡性循環狀態的組件，包含如權利要求1所述的方法及適當的檢測試劑。8.如權利要求7所述的組件，其特徵是，所述適當的檢測試劑包含一個或一個以上的NFA反應物。全文摘要本發明提供一種檢測發炎與壓力的惡性循環狀態的方法，其包括偵測樣本中是否存在NFA指標；本發明還提供一種利用上述方法來檢測發炎與壓力的惡性循環狀態的組件。文檔編號C12Q1/48GK103038362SQ201180031202公開日2013年4月10日申請日期2011年6月24日優先權日2010年6月24日發明者楊孝德申請人:楊孝德