卵磷脂載體囊泡及其製備方法

2023-06-07 10:59:01 2

專利名稱：卵磷脂載體囊泡及其製備方法
技術領域：
本申請涉及卵磷脂載體組合物和製備卵磷脂載體組合物的方法。
背景技術：
為了在含水環境中儲存和處理活性成分，需要對這些目標化合物進行分散和穩定。通常使用的用於分散的方法包括乳化，其中通過表面活性劑，或將目標化合物研磨或剪切成納米顆粒並將納米顆粒分散到表面活性劑中，來分散和穩定活性成分的液滴。然而，這些表面活性劑乳液常常不穩定，而且表面活性劑可能有毒或具有不應有的性質，如難聞的氣味和/或分散體具有渾濁的外觀。這些性質使得這些乳液不適合進行用於消費的活性成分的分散。磷脂和其它成膜脂質被廣泛用於包封在含水環境中輸送的活性成分。特別地，當乾燥的磷脂在水溶液中水化時就形成磷脂雙層囊泡，由此形成被含水隔室分隔的同軸的多個磷脂雙層，其被稱為多層囊泡(MLV)。磷脂也可以被處理成單層囊泡(UV)。這些單層囊泡和多層囊泡可以被分成三類一平均直徑範圍在20至IOOnm的小單層囊泡(SUV);平均直徑範圍在150至IOOOnm的大單層囊泡(LUV);平均直徑範圍在150至5000nm的多層囊泡。磷脂磷脂醯膽鹼(PC)是商用磷脂囊泡的基本組分，通常添加了一定量的帶電脂質，如磷脂醯甘油。卵磷脂是由動 物或植物原料通過溶劑提取油水化而獲得的混合物，所述溶劑提取油包含丙酮可溶的磷脂，其主要是磷脂醯膽鹼(PC)、磷脂醯乙醇胺(PE)和磷脂醯肌醇(PI)，還結合了不同量的其它物質，如甘油三酯、脂肪酸和糖。卵磷脂是用於製備磷脂雙層的磷脂醯膽鹼的常用原料(Keller, B.C，2001, Trendsin Food Science Technology, 12，25-31 )。由於已經表明磷脂囊泡的分散能力和穩定性取決於囊泡中磷脂醯膽鹼的量，高PC含量的脂質混合物(即高於80%的PC)被用於形成磷脂囊泡載體。儘管曾經嘗試以較低的PC含量來形成用於包封薑黃素化合物的分散的脂質體，但是這些嘗試未得到包封薑黃素的分散的囊泡。Takahashi等.J.0f OleoSc1., 2007, 56, 35-42 (嘗試製備低 PC 含量的脂質體)和 Takahashi 等.J.0f Agr.and FoodChem.，57，9141-9146 (說明和證實低PC含量的脂質體不起作用)均通過引用全部併入本申請。在許多方案中，磷脂醯膽鹼是由卵磷脂通過使用丙酮的脫油方法分離的，然後採用乙醇提取，最後進行液相色譜步驟以獲得高含量磷脂醯膽鹼(即總脂質含量中的PC高於80%)。為了抑制磷脂囊泡的水解，使用離子緩衝液控制和維持囊泡環境的pffiVernooi j，E.等，Journal of Controlled Release, 2002，79，299-303)。然而，高 PC 含量的卵憐脂製備成本高，製備方法需要的某些有機溶劑使得組合物不適於人使用。就此而言，需要採用最少的組分使得活性成分穩定分散的磷脂囊泡載體，以及不需要有毒溶劑和昂貴的高PC含量脂質混合物的方法。發明概述在本發明的某些實施方案中，包含穩定、均一的分散體的組合物包含具有膜和水相的囊泡，包含磷脂醯膽鹼含量為約80w/w%或更低的卵磷脂的囊泡，以及結合到囊泡膜中的活性成分；穩定、均一的分散體還包含經處理的水。在某些實施方案中，經處理的水含有低於IOOppm的硬離子和/或其電導率低於每釐米20 μ S (microSiemen)。在某些實施方案中，囊泡的體積加權平均直徑為約120nm或更小。在其它實施方案中，囊泡的膜為磷脂雙層。穩定、均一的分散體可以是透明的分散體。穩定、均一的分散體也可以包含穩定齊U，例如聚山梨醇酯或聚氧乙烯烷基醚。在某些實施方案中，穩定、均一的分散體也可以包含醇，醇可以是短鏈脂肪醇，例如甲醇、乙醇、丙醇的同分異構體或丁醇的同分異構體。在某些實施方案中，活性成分為親脂性化合物，親脂性化合物可以是氣味劑、天然香精、精油、著色劑、維生素、維生素的鹽、具有藥理活性的維生素的代謝物、具有藥理活性的維生素的代謝物的鹽、植物化學成分、油溶性酸、油溶性醇、必需脂肪酸、月見草油、紅花油、魚油、來自海洋生物的脂質、環孢菌素A、異丙酚、脂溶性蛋白酶抑制劑、抗逆轉錄病毒化合物、抗生素、類胡蘿蔔素、留體激素、黃酮類、蛋白質、酶、輔酶、塗料、油墨和農藥中的至少一種。

在其它實施方案中，組合物包含囊泡,所述囊泡包含磷脂醯膽鹼含量為約80w/w%或更低的卵磷脂，以及活性成分；組合物還包括經處理的水。在某些實施方案中，囊泡的膜是磷脂雙層。組合物還可以包含穩定劑，例如聚山梨醇酯或聚氧乙烯烷基醚。在某些實施方案中，組合物還可以包含醇。還是在其它實施方案中，包含均一的混合物的組合物包含磷脂醯膽鹼含量為約80w/w%或更低的卵磷脂、活性成分和醇。均一的混合物還可以包含經處理的水，相對於卵磷脂基於重量計算，水的含量可以為約10%或更低。均一的混合物還可以包含油。相對於卵磷脂基於重量計算，均一的混合物的醇的含量為約50%或更低。還是在其它實施方案中，生產囊泡載體組合物的方法包括在經處理的水中水化磷脂醯膽鹼含量為80w/w%或更低的卵磷脂，以形成具有膜和水相的卵磷脂囊泡；將活性成分結合到卵磷脂囊泡的膜中，以形成膜裝載的卵磷脂囊泡。這種生產囊泡載體組合物的方法還包括在結合活性成分之前，處理卵磷脂囊泡以製備卵磷脂囊泡單層，所述處理可以包括均質化或高剪切混合。在某些實施方案中，經處理的水可以包含醇。該方法還可以包括在水化之前向卵磷脂加入穩定劑，或在結合活性成分之前或之後向卵磷脂囊泡加入穩定劑。這種方法還可以包括在將活性成分結合到卵磷脂囊泡的膜中之後，處理膜裝載的卵磷脂囊泡以減小膜裝載的卵磷脂囊泡的尺寸，所述加工可以包括均質化或高剪切混合。在某些實施方案中，這種生產囊泡載體組合物的方法還包括乾燥組合物至固體形式和/或將組合物結合到乳劑或糊劑中。
還是在其它實施方案中，這種生產具有膜和水相的囊泡載體組合物的方法包括混合磷脂醯膽鹼含量為約80w/w%或更低的卵磷脂、活性成分和醇，以形成均一的液體混合物；將均一的液體混合物與經處理的水水化，以形成卵磷脂囊泡，其中活性成分被結合到卵磷脂囊泡的膜中。這種生產囊泡載體組合物的方法還可以包括在油與磷脂醯膽鹼含量為約80w/w%或更低的卵磷脂、活性成分和醇的混合物混合期間，和/或在經處理的水與磷脂醯膽鹼含量為約80w/w%或更低的卵磷脂、活性成分和醇的混合物混合期間進行加熱。在某些實施方案中，相對於卵磷脂基於重量計算，加入的經處理的水可以高達約10%。在某些實施方案中，相對於卵磷脂基於重量計算，加入的醇的量為約50%或更低。在某些實施方案中，該方法還包括在水化均一的液體混合物之後，處理卵磷脂囊泡以製備卵磷脂囊泡單層，所述處理可以包括均質化或高剪切混合。還是在其它實施方案中，形成均一的混合物的方法包括混合磷脂醯膽鹼含量為約80w/w%或更低的卵磷脂、活性成分和醇，相對於卵磷脂基於重量計算，加入的醇的量可以為約50%或更低。該方法還可以包括將經處理的水與磷脂醯膽鹼含量為約80w/w%或更低的卵磷脂、活性成分和醇的混合物混合，相對於卵磷脂基於重量計算，加入的經處理的水可以聞達約10%。還是在其它實施方案中，生產囊泡載體組合物的方法包括在經處理的水中水化磷脂醯膽鹼含量高於約80w/w%的卵磷脂，以形成具有膜和水相的卵磷脂囊泡；將活性成分結合到卵磷脂囊泡的膜中，以形成膜裝載的卵磷脂囊泡。在某些實施方案中，該方法的卵磷脂可以包含磷脂醯甘油。在某些實施方案中，該方法的活性成分是選自環孢菌素A、異丙酚、脂溶性蛋白酶抑制劑、抗逆轉錄病毒化合物、抗生素、類胡蘿蔔素、留體激素、黃酮類、酶和輔酶的藥物活性成分。在某些實施方案中，該方法還包括在結合活性成分之前，處理卵磷脂囊泡以製備卵磷脂囊泡單層，所 述處理可以包括均質化和高剪切混合。在某些實施方案中，該方法還包括在水化之前向卵磷脂加入穩定劑，或在結合活性成分之前或之後向卵磷脂囊泡加入穩定劑。該方法還可以包括在將活性成分結合到卵磷脂囊泡的膜中之後，處理膜裝載的卵磷脂囊泡以減小膜裝載的卵磷脂囊泡的尺寸，所述處理可以包括均質化和高剪切混合。還是在其它實施方案中，這種生產具有膜和水相的囊泡載體組合物的方法包括混合磷脂醯膽鹼含量高於80w/w%的卵磷脂、活性成分和醇，以形成均一的液體混合物；將均一的液體混合物與經處理的水水化以形成卵磷脂囊泡，其中活性成分被結合到卵磷脂囊泡的膜中。在某些實施方案中，該方法的卵磷脂可以包含磷脂醯甘油。在某些實施方案中，該方法的活性成分是選自環孢菌素A、異丙酚、脂溶性蛋白酶抑制劑、抗逆轉錄病毒化合物、抗生素、類胡蘿蔔素、留體激素、黃酮類、酶和輔酶的藥物活性成分。在某些實施方案中，該方法還包括在油與磷脂醯膽鹼含量高於約80w/w%的卵磷月旨、活性成分和醇的混合物混合期間，和/或在經處理的水與磷脂醯膽鹼含量高於約80w/w%的卵磷脂、活性成分和醇的混合物混合期間進行加熱。在某些實施方案中，相對於卵磷脂基於重量計算，加入的經處理的水高達約10%。在某些實施方案中，相對於卵磷脂基於重量計算，加入的醇高達約50%或更低。在某些實施方案中，該方法還包括在水化均一的液體混合物之後，處理卵磷脂囊泡以製備卵磷脂囊泡單層，所述處理可以包括均質化或高剪切混合。


圖認為根據本發明的實施方案，在經處理的水和(從左至右)0、10、20、30、40或50%乙醇中，分散在水化的卵磷脂載體囊泡中的魚油組合物的照片。圖1B為根據本發明的實施方案，說明圖1A中顯示的魚油組合物的濁度的圖。圖1C為根據本發明的實施方案，顯示由圖1A所示的魚油組合物獲取的顆粒尺寸分布數據的圖。圖2麼為根據本發明的實施方案，在經處理的水和(從左至右)0、10、20、30、40或50%乙醇，以及聚山梨醇酯中，分散在水化的卵磷脂載體囊泡中的魚油組合物的照片。圖2B為根據本發明的實施方案，測定圖2A所示的魚油組合物的濁度的圖。圖2C為根據本發明的實施方案，顯示由圖2A所示的魚油組合物獲取的顆粒尺寸分布數據的圖。圖3為根據本發明的實施 方案，在經處理的水和30%乙醇中，以及含有和不含有聚山梨醇酯時分散在水化的卵磷脂載體囊泡中的魚油組合物的照片。圖4A為根據本發明的實施方案，在t=0和12個月時，在經處理的水和聚山梨醇酯中，分散在水化的卵磷脂載體囊泡中的精油組合物的照片。圖4B為根據本發明的實施方案，顯示在t=0時，由如圖4A所示的精油組合物獲取的顆粒尺寸分布數據的圖。圖4C為根據本發明的實施方案，顯示在t=12個月時，由如圖4A所示的精油組合物獲取的顆粒尺寸分布數據的圖。圖5A為根據本發明的實施方案，在經處理的水和穩定劑中，分散在水化的卵磷脂載體囊泡中的磷蝦油組合物的照片。圖5B為根據本發明的實施方案，顯示由如圖5A所示的磷蝦油組合物獲取的顆粒尺寸分布數據的圖。圖6A為根據本發明的實施方案，在經處理的水和30%異丙醇中，分散在水化的卵磷脂載體囊泡中的魚油組合物的照片。圖6B為根據本發明的實施方案，顯示由如圖6A所示的在30%異丙醇中的魚油組合物獲取的顆粒尺寸分布數據的圖。圖7A為根據本發明的實施方案，在經處理的水和5%異丁醇中，分散在水化的卵磷脂載體囊泡中的魚油組合物的照片。圖7B為根據本發明的實施方案，顯示由如圖7A所示的在5%異丁醇中的魚油組合物獲取的顆粒尺寸分布數據的圖。圖8A為根據本發明的實施方案，含有(I)精油(香芹酚)和聚山梨醇酯；(2 )精油；以及(3)單獨的卵磷脂(無精油)的水化的卵磷脂載體囊泡組合物的照片。圖SB為根據本發明的實施方案，顯示由圖8A的含有精油和聚山梨醇酯的組合物(1)獲取的顆粒尺寸分布數據的圖。圖SC為根據本發明的實施方案，顯示由圖8A的含有精油的組合物(2)獲取的顆粒尺寸分布數據的圖。圖8D為根據本發明的實施方案，顯示由圖8A的含有單獨的卵磷脂的組合物(3)獲取的顆粒尺寸分布數據的圖。發明詳述在本發明的多個方面，水化的卵磷脂載體囊泡(HLCV)組合物包含磷脂醯膽鹼含量最高為約80w/w%的卵磷脂和經處理的水。經處理的水水化卵磷脂形成HLCV。在某些實施方案中，HLCV可以含有至少一種分散於其中的活性成分。然而，在某些實施方案中，HLCV組合物包含醇，醇可以幫助形成活性成分的HLCV分散體，確保在經處理的水中適當水化。在其它實施方案中，HLCV組合物還包含一種或多種穩定劑。在某些實施方案中，在含醇或不含醇的情況下，活性成分溶解在均一的液體混合物中的卵磷脂中。本發明的其它方面涉及製備HLCV組合物和均一的混合物的方法。在本發明的其它實施方案中，水化的卵磷脂載體囊泡(HLCV)組合物基本上由具有膜和水相的囊泡和經處理的水組成。在這些實施方案中，術語「基本上由……組成」是指通常不存在不是囊泡的卵磷脂顆粒和基於卵磷脂的顆粒(或納米顆粒)的組合物，所述囊泡的含義見如下文所定義的術語。然而，這些實施方案包含與上下文描述的實施方案相同的囊泡。而且，這些實施方案還可以包含任何下文描述的活性成分和/或其它組分(例如，穩定齊U、醇和/或油)。實際上，除了通常排除非囊泡的基於卵磷脂的材料(例如，非囊泡卵磷脂顆粒和納米顆粒，和/或被非囊泡卵磷脂包被的活性成分的納米晶體)的組合物的存在，這些實施方案可以具有與上下文所述的實施方案相同的組成(例如，它們可以採用相同的材料和方法製成，可以含有相同的活性成分和其它組分，如醇、穩定劑、油等)。根據本發明的內容，使用卵磷脂分散活性成分可應用於被攝取的化合物，也應用於許多其他領域，包括但不限於農業、園藝、營養食品、藥物(用於疾病的診斷、治療和緩解)、化妝品和個人護理用品、芳香劑和著色劑、環境治理、無機和複合材料、塗料和油墨、催化領域和其它需要低成本天然分散劑的領域。就本發明所有的實施方案而言，考慮可以將包括水溶性物質的其它試劑任選地添加到水化的卵磷脂載體囊泡分散體，以增強其用於特定應用中的適用性，例如加入水溶性抗氧化劑，如抗壞血酸以改善營養產品的保存期限。特定添加劑的選擇對於本領域技術人員是顯而易見的。本發明的多個方面提供了大批量食品級或工業級卵磷脂在溶解水不溶性和部分水不溶性物質中的應用，這種方式具有成本效益，可廣泛用於消費品，包括食品、飲料和營養添加劑，以及其它有效的商品化取決於原材料的成本，排除使用高PC含量卵磷脂(含有超過80w/w%磷脂醯膽鹼的卵磷脂)的應用中。本發明使用的「卵磷脂」被定義為通過溶劑提取油的水化從動物和植物原料獲得的複雜混合物，如 Joint World Health Organization/United Nations Food SafetyAgency Evaluation Committee for Food Additives (JECFA) (Food and AgricultureOrganization of the United Nations, Food and Nutrition Paper52, "Compendium ofFood Additive Specifications" (FNP52)，Addendum2 (1993))中定義的，該文獻通過引用全文併入本申請。這種複雜混合物包含可溶於丙酮的磷脂，所述磷脂主要包括磷脂醯膽鹼、磷脂醯乙醇胺和磷脂醯肌醇，以及較少量的甘油三酯、脂肪酸和糖。本發明使用的「囊泡」被定義為具有成膜脂質組分和水相的組合物。在某些實施方案中，成膜脂質組分為磷脂雙層膜。而且，如在本發明內容和權利要求書全文中所使用的，術語「囊泡」和「介質(vehicle)」互換使用。本發明使用的「活性成分」是指任何被選擇的和能夠被結合到囊泡中的化合物。例如，在某些實施方案中，活性成分可以是親脂性的，其包括許多下文討論的兩性分子化合物。與在水中相比，親脂性化合物更易溶於脂肪、油、脂質和有機溶劑，如乙醇、甲醇、乙醚、丙酮、氯仿和苯中。在它們的結構中，親脂性化合物可以包含親水性部分，如留醇中的羥基和長鏈脂肪酸中的羧基。在某些實施方案中，親脂性化合物與囊泡的成膜脂質組分相結合。在某些實施方案中，親脂性化合物具有範圍在約O至約8的log P值。在某些實施方案中，親脂性活性成分具有範圍在約2至約7的log P值。本發明使用的術語「親脂性化合物」和「親脂性活性成分」可互換使用，是指相比在水中，在有機溶劑、脂肪和油中具有更大溶解性的化合物。術語「親脂性」還包括許多兩性分子化合物，其包括具有疏水和親水區域的化合物。實際上，分子可以包含喜水性(親水性)部分，如留醇中的羥基和長鏈脂肪酸中的羧基。這對於許多本發明的實施方案提供的用於形成含水分散體的組合物和方法所針對的許多(生物)活性物質是適用的。在這種情況下，分子還可以被描述為兩親的。本發明的方法和組合物包括可以這樣描述的實體，以及可以分散在水化的卵磷脂囊泡雙層中的實體；某些實施方案顯示在實施例中。通常，兩親分子位於雙層的各部分，它們的親水性部分與極性表面相連，疏水部分指向雙層內部中的磷脂的醯基鏈。本發明使用的「分散體」是指基於卵磷脂的分散相，其通常均一地分布在大量水溶液中。進一步地，如果本發明使用的分散體不受物理不穩定性的影響，它是穩定的，所述物理不穩定性是由可見的相分離來表明的，如當囊泡通過沉澱或乳液分層聚集和分離(即聚集體分別落到瓶底或升至混合物的頂部)時，或當結合的親脂性材料從囊泡分離並形成可見的聚集體。也就是說，在不含活性成分的穩定的HLCV分散體中，基本上分散體中的所有囊泡在分布時沒有可見的凝集。對於包含活性成分的穩定組合物，除了上文討論的囊泡穩定性，活性成分與囊泡保持適當的連接。例如，如果親脂性化合物被結合到HLCV分散體中，親脂性化合物的疏水區域與磷脂囊泡膜的非極性區域相連(接觸)。對於包含具有結合到HLCV分散體中的親水部分的親脂性化合物而言，親脂性化合物的親水區域與極性區域相連，疏水區域與磷脂囊泡膜的非極性區域相連。同樣地，含有結合的活性成分的穩定的HLCV還意味著基本上存在於組合物中的所有活性成分均被結合到囊泡膜中/與囊泡膜相連。在其膜中具有活性成分的囊泡載體還被稱為裝載的載體囊泡，特別指被結合在囊泡的磷脂膜中以穩定化合物，免於在大量水溶液中聚集或降解的活性成分。相應地，被結合到磷脂膜環境中從而分散在含水介質中的活性成分在其它環境(例如食物、飲料、胃腸道或消化道)中穩定。
本發明使用的「經處理的水」被定義為含有低於IOOppm硬離子的水，在某些實施方案中低於60ppm硬離子。硬離子形成水中的硬度，水中常見的游離硬離子為鈣和鎂離子。經處理的水是指游離硬離子的水平降低的水，或者未經處理水的水平就降低(即軟水)或者如果處理是必須的。硬度是通過如ASTM方法D1126 「水中硬度標準測試法」中所述的EDTA滴定法測定的。降低硬度的處理可以包括螯合。天然軟水(即具有低於約IOOppm硬離子的硬度的水)被認為是用於本發明目的的經處理的水。在某些實施方案中，水基本上不含緩衝離子，在其它實施方案中，水已經通過蒸餾、去離子化、反滲透或類似的技術純化，使得電導率低於約每釐米20 μ S。緩衝離子是對抗其pH變化的離子，例如磷酸鹽、檸檬酸鹽、乙酸鹽和三(羥甲基)甲基氨基離子。本發明的實施方案認為水的質量對卵磷脂囊泡的最終分散和穩定性有影響。含有不穩定的囊泡和/或具有寬泛或歪曲尺寸分布的囊泡(即使穩定)的組合物能夠形成雲霧狀(渾濁的)分散體。相應地，儘管穩定劑的添加或存在不是必須的，但在穩定劑不存在時，HLCV變白的可能性反而取決於水的純度，即當水純度提高，變白的可能性降低。水化的卵磷脂載體囊泡(HLCV)本發明的實施方案涉及水化的卵磷脂載體囊泡，其中結合了一種或多種活性成分。採用低PC含量的卵磷脂和經處理的水(CW)製備HLCV。低PC含暈的卵磷脂用於製備HLCV的卵磷脂具有低PC含量。本發明使用的低PC含量的卵磷脂意味著卵磷脂的範圍從非脫油(粗)卵磷脂到磷脂醯膽鹼含量為約80w/w%或更低的卵磷脂。實際上，在某些實施方案中，卵磷脂的PC含量低於但不包括80w/w%。例如，HLCV分散體可以由已知的適合消費的食品級原料製備，包括如美國食品藥品監督管理局的「一般認為安全(GRAS)」列出的原料。相應地，本發明的實施方案中的食品級卵磷脂的磷脂醯膽鹼含量為約20%至約80w/w%。在其它實施方案中，卵磷脂的磷脂醯膽鹼含量為約20%至約70w/w%。在其它實施方案中，卵磷脂的磷脂醯膽鹼含量為約20%至約60w/w%。在其它實施方案中，卵磷脂的磷脂醯膽鹼含量為約20%至約50w/w%。在其它實施方案中，卵磷脂的磷脂醯膽鹼含量為約20%至約40w/w%。在其它實施方案中，卵磷脂的磷脂醯膽鹼含量為約20%至約30w/w%。在某些實施方案中，使用未經脫油的卵磷脂，其磷脂醯膽鹼含量為約20%至約25w/w%。活性成分親脂性活性成分的非限制性例子包括:氣味劑，如天然和合成的芳香劑和精油(其在下文中更詳細描述)；調味化合物和味道調節劑，如天然香精和精油，例如來自蘋果、橙子和檸檬的(包括這些化合物與載體油的組合)；著色劑，如基於卟啉的大環類；維生素，如維生素A、D、E和K以及它們的藥理活性代謝物、鹽和化合物，例如維生素D、維生素E醋酸酯和維生素A的棕櫚酸酯；植物化學物質，如植物留醇和精油，例如谷留醇、異黃酮類、薑黃素類和多酚化合物；油溶性酸和醇，如乳醯乳酸和必需脂肪酸，例如亞油酸和亞麻酸、二十碳五烯酸(20:5η-3)和二十二碳六烯酸(22:6η_3)以及它們的天然原料，如月見草油、紅花油和魚油；藥物，如環孢菌素Α、異丙酚、脂溶性蛋白酶抑制劑、抗逆轉錄病毒藥物、抗生素和其它藥物類別的親脂性成員；類胡蘿蔔素，如β_胡蘿蔔素和番茄紅素；留族激素，如雌激素、雌二醇和可的松；黃酮類，如白藜蘆醇；蛋白質、酶、輔酶和很多其它親脂性生物活性化合物。然而，對於本領域普通技術人員顯而易見的是，化合物不限於特定類別的食品、飲料、藥物和營養添加劑的親脂性成分。 本發明使用的精油是包含來自植物的揮發性芳香化合物的濃縮的疏水性液體。除了輸送有特色的香味之外，精油不必須是具有共同的特定化學性質的一類。它們因其作為氣味劑和調味劑的用途而被熟知，並且發現它們在傳統醫藥中的廣泛應用(傳統醫藥由世界衛生組織定義，是指基於不同文化的特有的理論、信仰和經驗，用於維持健康和預防、診斷、改善或治療身體和精神疾病的知識、技巧和實踐)。座在某些實施方案中，HLCV組合物包含醇。在某些實施方案中，向經處理的水加入醇用於卵磷脂水化以形成HLCV。在其它實施方案中，如果活性成分在卵磷脂組合物中不容易溶解，醇的加入可以改善活性成分在均一的液體混合物中的溶解性。根據本發明的實施方案，醇是短鏈醇。短鏈醇的例子包括甲醇、乙醇、丙醇的同分異構體和丁醇的同分異構體。促進活性成分溶解所需的醇的量會變化，這取決於醇的類型和特定的活性成分，可以由本領域普通技術人員憑經驗確定。在某些實施方案中，添加醇幫助卵磷脂中的活性成分溶解以形成均一的液體混合物，相對於卵磷脂和活性成分的組合重量而言，基於重量計算，加入的醇的範圍為約5%至約50%。如本發明所討論的，向卵磷脂和活性成分加入醇可以加熱或不加熱，添加油或不添加油。在某些實施方案中，向經處理的水加入醇用於卵磷脂的水化。在某些實施方案中，加入的醇為脂肪族短鏈醇(例如甲醇、乙醇、丙醇或丁醇)。醇的量可以變化，這將取決於活性成分的性質。例如，就卵磷脂水化而言，高達總計40%v/v的醇可以存在於HLCV組合物中。在某些實施方案中，分散體可以通過標準的工業方法乾燥成例如粉末、顆粒或塊狀。穩定劑在本發明的 其它方面，HLCV還包含至少一種穩定劑。穩定劑的非限制性例子包括聚山梨醇酯(聚氧乙烯)山梨醇酐單酯、聚氧乙烯烷基醚(PAE)等。穩定劑的加入是任選的，通常取決於將被分散在HLCV中的活性成分的性質。對於某些應用，加入聚山梨醇酯或PAE可以提高穩定性。同樣地，對聚山梨醇酯或PAE的需要可以由本領域普通技術人員憑經驗確定。本發明使用的術語「聚山梨醇酯」包括一類乳化劑，它們是由聚氧乙烯衍生的聚山梨醇酐(山梨醇的衍生物)與脂肪酸單酯化而衍生得到的油狀液體。PAE類分子適於用在不涉及HLCV攝入的應用中。本領域普通技術人員顯而易見的是，對於不涉及HLCV攝入的應用，適合的PAE可以替代本發明描述的包括和/或使用聚山梨醇酯的方法和組合物中的聚山梨醇酯。正如保持澄清所證明的，本發明的包含聚山梨醇酯的HLCV沒有可察覺的苦味，在水、很多果汁和其它飲料中稀釋、巴氏滅菌和存儲時物理性質穩定。以下的聚山梨醇酯是可以使用的非限制性例子:聚氧乙烯(20)山梨醇酐單油酸酯，聚氧乙烯(20)山梨醇酐單月桂酸酯，聚氧乙烯(20)山梨醇酐單棕櫚酸酯和單硬脂酸酯。在某些實施方案中，使用聚氧乙烯
(20)山梨醇酐單油酸酯(即聚山梨醇酯80)，或聚氧乙烯(20)山梨醇酐單月桂酸酯。可以採用已知的方法確定聚山梨醇酯的有效量。在某些實施方案中，例如，以介於約1:3和約1:20之間的聚山梨醇酯與卵磷脂的摩爾比來使用聚山梨醇酯。在其它實施方案中，以介於約1:5和1:10之間的摩爾比例來使用聚山梨醇酯。在其它實施方案中，以介於約1:7和1:9之間的摩爾比例來使用聚山梨醇酯。出於確定摩爾比例的目的，卵磷脂的分子量假定為800。
製備HLCV的方法本發明的實施方案涉及製備水化的卵磷脂載體囊泡(HLCV)的方法。在某些實施方案中，在不使用任何有機溶劑、醇或相反的情況下製備至少一種活性成分裝載於其中的HLCV。然而，在某些實施方案中，儘管不需要或不使用其它/額外的有機溶劑，但可以使用醇以促進HLCV的製備。在本發明的某些方面，形成HLCV組合物的方法包括在經處理的水中水化和處理低PC含量的卵磷脂，然後加入至少一種活性成分。在本發明的其它方面，活性成分可以與低PC含量的卵磷脂、醇以及最少量的水混合，以形成均一的液相(不形成囊泡)，然後通過水化和處理形成分散的囊泡。在其它方面，形成具有活性成分分散於其中的HLCV組合物的方法包括在經處理的水中使用高PC含量(即高於80w/w%的磷脂醯膽鹼)的卵磷脂。卵磷脂的水化在某些實施方案中，低磷脂醯膽鹼含量的卵磷脂一但暴露於經處理的水就被水化，形成分散在CW中的水化的卵磷脂載體囊泡。在本發明的多個方面，卵磷脂與足夠的經處理的水水化，從而有效地實施處理步驟(例如均質化、超聲處理、微流化、高剪切混合等)。實際上，在任何乾燥或進一步的混合步驟之前，按重量計算，HLCV分散體包含至少與卵磷脂一樣多的經處理的水(即CW與卵磷脂的比例至少為1:1)。在某些實施方案中，例如，可以以3份水比I份卵磷脂(按重量計算)水化卵磷脂。在其它實施方案中，按重量計算，可以以高達4份水比I份卵磷脂，或5份水比I份卵磷脂水化卵磷脂。在其它實施方案中，可以以高於5份水比I份卵磷脂水化卵磷脂。在這些實施方案中，CW和卵磷脂的相對量是相對於單獨的卵磷脂的。在其它實施方案中，在至少一種活性成分存在時水化卵磷脂。在這些實施方案中，按重量計算，卵磷脂與活性成分的比例至少為1:1，並且通常可以高達約5:1。然而，除了本領域普通技術人員顯而易見的商業或實際處理的限制條件所施加的上限外，該比例沒有特別的上限。在這些實施方案中，按重量計算，加入的經處理的水的比例為CW與卵磷脂和活性成分總量的比例為約3:1至 約5:1。加入的活性成分與卵磷脂的比例可以以高達至約1:1,這是必須的。例如，當卵磷脂和活性成份的總重量為200至250mg (卵磷脂+活性成分)時，CW的量可以為Iml (lOOOmg)。對本領域普通技術人員顯而易見的是，就任何進一步用於組合物的最終所需應用的生產或製造步驟而言，經處理的水相對於卵磷脂、或卵磷脂和活性成分的量通常僅受到HLCV組合物的所需濃度和活性成分的限制。HLCV中活性成分的裝載在某些實施方案中，在加入至少一種活性成分之前，製備HLCV組合物(即水化卵磷脂並且隨後處理)以形成分散的囊泡。當活性成分是液體時(例如在高達經處理的水的沸點或經處理的水和醇的混合物的沸點的溫度下為液體形式)，這些在裝載活性成分之前形成HLCV的方法是最有效的，使得活性成分易於溶解在水化的卵磷脂囊泡組合物中。這些處理之後(即預先形成的囊泡)加入活性成分的方法特別適合於如精油、親脂性調味化合物和含有親脂性組分的調味化合物的混合物的成分。該方法對於裝載前已經過處理(例如經過均質化或高剪切混合)形成UV的HLCV最有效。相應地，如果活性成分可以結合到水化的卵磷脂組合物中，那麼活性成分就可以添加到「預先形成的」卵磷脂囊泡中。如上文所討論的，活性成分的溶解可能需要加入醇、加熱或這些的任意組合。本領域普通技術人員顯而易見的是，低溶解性的活性成分，如果少量添加將隨時間緩慢地結合到囊泡組合物中。本領域普通技術人員還知道，在分散的HLCV中的結合程度取決於活性成分在液相中溶解的速率和時間。沒有醇或加熱的幫助，log Kow (即辛醇:水分配係數)小於約4.5的活性成分將不能在合理的時間內被結合。然而，log Kow為4.5或更大的活性成分可以更快地被結合。這些活性成分的溶解性，包括通過加熱和/或醇增強的溶解性可以由本領域普通技術人員憑經驗確定。可以在處理之前或之後將穩定劑加到卵磷脂組合物。在某些實施方案中，處理之後將穩定劑加到HLCV組合物。在其它實施方案中，卵磷脂和穩定劑的混合物在處理之前在Cff中水化。向HLCV加入活性成分後，通過高剪切混合或均質化處理混合物以形成其中含有被結合的活性成分的分散的HLCV組合物。誘明度本發明的另一方面為可以調控卵磷脂載體分散體的尺寸分布，使得分散體基本上目視澄清(透明的)。這裡出於描述發明的目的，將亞微米範圍(〈1，OOOnm)內的分散體顆粒和結構的平均直徑定義為體積加權平均直徑，尺寸通常為單峰分布。囊泡的體積加權平均直徑可以通過任何已知的技術確定。例如，採用電子顯微鏡或動態光散射確定體積加權平均直徑。一旦確定平均囊泡尺寸， 就可以採用本領域熟知的標準方法減小囊泡的尺寸，包括但不限於超聲處理、微流化和高壓均質化。在某些實施方案中，本發明的方法製備的其中具有活性成分的卵磷脂載體囊泡在分散體中保持清澈(或透明)。澄清是指透明而不是半透明。這種透明度是通過製成其中顆粒的平均直徑為120nm或更小,優選小於IOOnm,更優選小於80nm的分散體來實現的。此夕卜，尺寸分布幾乎不包括引起雲霧狀的較大直徑顆粒，這種顆粒可以由變白來證明。出於描述本發明的目的，這種較大顆粒的存在可以通過雲霧狀或模糊來定量，下文稱之為濁度。透明的分散體為低濁度的分散體。分散體的濁度可以相對於已知的濁度標準來表示。亞顯微顆粒，甚至直徑明顯小於光波長的顆粒通過光散射導致的濁度是包括顆粒尺寸和波長的許多變量的複雜函數。通常，較大顆粒，即導致濁度(變白、雲霧狀、模糊)顆粒的存在是通過在較大波長下散射來顯示的。這種光的散射導致含水分散體可見的濁度(即不澄清)。相對濁度的定量測量值是採用常規UV/可見光分光計測定的800、860和/或900nm處的相對吸光度。這樣，分散體的不穩定性導致的濁度容易通過分光光度法在需要的範圍內定量。當含有或不含有分散的活性成分的HLCV組合物可以如願地是透明的或幾乎透明時，透明度就不是本發明任何實施方案的要求。例如，如果要將組合物加到食品中，溶液的澄清度通常是無關緊要的，因此不必要減小囊泡的尺寸。然而，例如如果要將組合物加到透明或半透明的飲品中，將根據需要調節雲霧狀或濁度以滿足消費者的期望。均一的液體混合物

在某些實施方案中，在水化之前向卵磷脂加入活性成分。在這些實施方案中，活性成分可以在室溫下溶解在基於卵磷脂的混合物中，該混合物也可以包含醇，也可以包括最少量的經處理的水和/或油。在某些實施方案中，均一的液體混合物中卵磷脂的重量高於均一的液體混合物的任何其它單一成分。也就是說，當卵磷脂不比所有其它組合的成分更充足時，其添加量要比任何其它單一組分更多。這樣，卵磷脂可以用作均一的液體混合物的溶劑。某些活性成分經加熱可以更容易溶解。因此，在某些實施方案中，活性成分與卵磷脂混合，可以包含醇、最少量的醇、油，可以在升高的溫度下混合。例如加熱溫度選自約60°C至約80°C。本領域普通技術人員可以考慮活性成分和組合物組分的性質來確定所需的溫度。例如，加熱溫度不應超過組合物的沸點，其由組合物的各種組分控制。如本領域普通技術人員理解的，加熱溫度不應超過沸點最低的組合物組分的沸點。例如，如果卵磷脂組合物中存在醇時，那麼最高的理想加熱溫度不應超過醇的沸點(其通常為沸點最低的組分)。在某些實施方案中，卵磷脂和至少一種活性成分在形成囊泡之前首先溶解在均一的液體混合物中。例如，植物甾醇的熔點高於100°C (例如，β -谷甾醇的Tmp為136至140°C)，因此植物留醇在囊泡形成之後不能有效地結合到HLCV組合物中。相應地，在本發明的某些實施方案中，其中具有至少一種活性成分的組合物是通過首先將活性成分和卵磷脂一起溶解以形成單一相的均一的液體混合物製備的。在某些實施方案中，加入醇幫助活性成分溶解在卵磷脂中。在某些實施方案中，向卵磷脂和活性成分的混合物加入多達約50%的醇(相對於卵磷脂基於重量計算)。如所討論的，在某些實施方案中，可以加入最少量的經處理的水以幫助活性成分溶解在卵磷脂和醇的混合物中。例如，相對於卵磷脂的重量計算，可以加入不超過10%重量(w/w)的經處理的水。對於本領域普通技術人員顯而易見的是，過量的水會阻礙單一相的形成。為了進一步促進含有卵磷脂、活性成分的均一的液體混合物的形成，可以首先將活性成分溶解在油中(如果必須就加熱)在某些實施方案中，為了促進活性成分在卵磷脂中溶解以形成均一的液體混合物，首先可以將活性成分溶解在油中。例如，活性成分可以首先溶解在非極性、疏水性載體物質，如天然油中，然後與HLCV組合物混合。活性成分在油中的溶解也可以與加熱和/或添加醇一起進行。油的例子包括由植物，如大豆、玉米、橄欖、向日葵、油菜籽、橄欖提取的甘油三酯種子油。油還包括動物油，如魚油或磷蝦油以及精油。精油包括但不限於香茅、丁香葉、桉樹、葡萄柚、檸檬、酸橙、野薄荷/薄荷、橙子、牛至、胡椒薄荷、綠薄荷、八角茴香、橘子、茶樹、百裡香和冬青的油，實施方案包括這些油的主要化學成分，如百裡酚、香芹酚、檸檬烯、薄荷醇、香芹酮、水楊 酸甲酯、桉葉油素、citranal、菔烯和松油烯-4-醇的應用。均一的液體混合物然後在CW中混合併水化形成囊泡。在某些實施方案中，即如果短鏈醇並未以充足的量存在於包含卵磷脂的混合物中，就向CW加入短鏈醇。足量的短鏈醇不少於使得最終的卵磷脂水化溶液的醇濃度至少為約5v/v%，且不超過約40v/v%的量。在某些實施方案中，最終卵磷脂水化溶液的醇濃度為約20%v/v至約30%v/v。在保持含有卵磷脂的均一的液體組合物為液體狀態的溫度下進行卵磷脂水化。通過水化形成HLCV之後，通過均質化或高剪切混合處理HLCV以形成活性成分結合到HLCV組合物中的分散體。由高PC含暈的卵磷脂形成的HLCV在本發明的另外的方面，生產HLCV組合物的方法使用了高PC含量的卵磷脂(即磷脂醯膽鹼含量超過80%w/w的卵磷脂)。在該方法中，按照本發明公開的用於活性成分在低PC含量卵磷脂中溶解的方法之一，將高PC含量的卵磷脂(或者可選擇地，基本上純的磷脂醯膽鹼)與活性成分混合。本發明描述的用於在水化和處理後加入活性成分，或者在水化和處理前通過形成均一的液體混合物的方法和中間組合物也適用於採用高PC含量卵磷脂製備HLCV。這種HLCV適合用於藥物應用。實際上，在這些實施方案中，卵磷脂具有高PC含量使得其適合製藥應用。例如，在這些實施方案中，按重量計算，HCLV含有90w/w%或更高的PC，用於吸入或可注射產品。根據製劑在體內實現期望的性能的要求，可以加入其它純化的磷脂。在某些實施方案中，用於胃腸道外使用的異丙酚的藥學可接受的製劑可以通過在經處理的水中水化磷脂醯膽鹼和磷脂醯甘油的含醇混合物，再以高壓均質器均質化，然後與異丙酚孵育來製備。任選地，可以在水化期間或處理後加入藥學可接受的穩定劑，如聚山梨醇酯。本發明公開的用於卵磷脂的不採用有機溶劑的處理方法也適用於藥學上可接受的磷脂醯膽鹼。基於卵磷脂和其他成分的均一的液體混合物的替代方法可以與那些藥學上可接受的活性成分一起使用，所述藥學上可接受的活性成分可溶於磷脂醯膽鹼-醇的混合物，所述磷脂醯膽鹼-醇的混合物對應於關於低PC含量卵磷脂的實施方案所描述的那些，如需要還加入少量的經處理的水(相對於磷脂高達10%w/w)，以形成均一的液體混合物。如本發明所述，活性成分可以先溶解在藥學上可接受的油，如脂肪酸的甘油三酯(其中脂肪酸可以是相同的或混合的)中，如必須就同時加熱。講一步的處理、鈍化形成HLCV後，可以根據需要進一步處理組合物。例如，為了減小囊泡尺寸，分散體可以經過高剪切混合或高壓均質化。如果可行，相比醇不存在時在相同的組分上進行的相應尺寸減小處理，醇存在時減小尺寸所需的能量降低。較低能量處理具有商業上的利益，使得處理能量成本較低，能夠使用較寬範圍的處理設備。例如，在醇存在時，可以在給定能量輸入情況下較大程度地實現尺寸減小；在某些情況下，這樣能夠形成目視清澈的HLCV外觀，而在醇不存在時，這樣的目視澄清度是不能實現的。本發明公開的HLCV組合物可以通過任何標準的工業乾燥方法，如噴霧乾燥或冷凍乾燥被乾燥成固體形 式，例如粉末、薄片或塊狀，可選擇地或隨後被結合到糊劑或乳劑中。其它進一步的處理步驟可以包括:調節組合物的pH，加入防腐劑或抗微生物劑，或加入調味劑以增強組合物的味道。Sffl根據本發明的實施方案的HLCV分散體基本上不含非分散性的活性成分(即活性成分一旦分散在HLCV組合物中，活性成分基本上保持分散並且沒有任何明顯程度的由分散體沉澱析出)。本發明的某些方面的用於生產的組合物、中間溶液和方法採用相對便宜的食品級卵磷脂，特別是按重量計PC含量低於約80%的卵磷脂提供了水不溶性材料的基於水的分散體。儘管不限制於任何應用，根據本發明的某些實施方案的HLCV可以用於製備基本上清澈的脂溶性活性成分的水分散體，所述脂溶性活性成分可以用於飲料或營養添加劑，因為在水、果汁和其它飲料中稀釋、巴士滅菌和存儲時，分散體是物理上穩定的。脂溶性成分可以包括抗氧化劑(例如維生素E)。根據預期應用的需要，分散體可以被濃縮和乾燥成粉末和再水化。本發明的組合物和方法還公開了食品級原料，例如已經被美國食品藥品監督管理局的「一般認為安全(GRAS ) 」認可應用的原料。本發明的HLCV組合物可以採用廣泛應用於食品和飲料工業的常規設備處理。水化的卵磷脂載體囊泡的組分是相對便宜的。此外，食品/飲料/營養添加劑成分裝載到載體中可以提升生產水平，生產用於相關消費者和其它產品的性價比高的製劑。本發明的HLCV分散體實際上的性質如同真正的溶液，可以被用於製備口服消費或其他被引入口腔的產品。某些本發明的組合物的特別益處在於它們提供的水分散體在用於最終產品時基本上目視清澈，存儲、加入某些果汁和其它飲料、暴露於高溫，如巴士滅菌期間保持澄清。在某些實施方案中，基於卵磷脂的基質還提供了水不溶性材料增強的化學穩定性，例如抗氧化性，以及抑制這些材料不良氣味和味道以及差的口感。某些脂質本身被認為是可選擇的食品或營養添加劑成分，例如磷脂醯膽鹼以及特別的從海洋生物如磷蝦獲得的脂質。明確的是本發明描述的HLCV、中間體和製備方法可以任選使用這些脂質。提出以下實施例僅用於說明的目的，不限制本申請的範圍或內容。
實施例實施例1-1魚油的HLCV分散體(Ω -3製劑)20g 魚油(EPAX1050)、30g 卵憐脂(Cargill Lecigran)、0.5g 維生素 E 和 4ml 乙醇在瓶中混合。混合混合物同時加熱至65°C約60分鐘，直到溶液的外觀是均一的。將該混合物加到250ml已經加熱至65°C的純化水中，並混合5分鐘。50ml該水化的魚油卵磷脂分散體樣品與適當體積的乙醇混合以形成包含約0、10、20、30、40和50% (v/v)乙醇的分散體。出於確定加入乙醇的量的目的，已經存在的小體積(來自均一的卵磷脂相)被忽略。該系列中的每一分散體在約600巴和65°C的入口溫度下被均質化(Niro Soavi NS1001L均質器)4回。然後，在經處 理的水中將分散體稀釋至約3mg/ml魚油。圖1A顯示了這些分散體的照片。如圖1B所示，在800和900nm處測定這些分散體的濁度。採用Microtrac(USA) 『Nanotracl50』動態光散射儀在室溫下獲得顆粒尺寸分布的測量值，該動態光散射儀以780nm固態雷射工作，對反射光強度的波動進行可控的對照法(都卜勒頻移)分析。顯示了組合物的囊泡的體積加權平均直徑(圖1C)。如所顯示的，將體積加權分布和95%通過直徑一起作圖(其中95%的囊泡小於該直徑)。體積加權平均直徑在30%乙醇處(約28nm)處最小。實施例1-2如實施例1-1製備HLCV Ω-3分散體，除了加入1.0g聚山梨醇酯80。圖2A顯示了在含O、10、20、30、40和50%乙醇的情況下，這些含聚山梨醇酯的Ω-3製劑中的每一種的照片。圖2B和2C分別顯示了這些製劑由動態光散射得到的濁度和顆粒尺寸分布數據。如圖所示，在含30%乙醇、聚山梨醇酯時，最小的體積加權平均直徑為約35nm。圖3 —起顯示了在含30%乙醇、含或不含聚山梨醇酯時，這些Ω-3製劑的照片。實施例2精油的HLCV分散體IOg 卵磷脂(Lecigran, Cargill 或 Ultralec, ADM)在 IOOml 蒸懼水中混合併水化，然後在室溫、約400巴下通過Niro Soavi NS1001L均質器進行均質化6回，以形成HLCV。以卵磷脂:聚山梨醇酯為5:1的重量比加入聚山梨醇酯80並混合。然後採用蒸餾水將分散體稀釋至200ml。加入精油:百裡酹(0.7g)、桉葉油素(1.0g)、水楊酸甲酯(0.65g)和薄荷醇(0.46g)並混合，以形成這些精油基本上透明的水分散體。得到的分散體經0.2微米過濾器過濾。稀釋透明的分散體並加入甜味劑以形成不含乙醇的精油漱口水。圖4A顯示了兩個精油分散體樣品的照片，一個是新鮮製備的(t=0)，一個是在室溫下儲存12個月的(t=12個月)。圖4B和圖4C給出了這些樣品Nanotrac顆粒尺寸分布分析的結果。在每種情形中，體積加權平均直徑都被確定為37 (+/l)nm。為了對比，圖4顯示了累積量(再分布柱狀圖上疊加S型曲線)；兩個樣品的尺寸排列數據基本上無法區分。實施例3檸檬油的HLCV分散體5g卵磷脂(Lecigran, Cargill或Ultralec, ADM)在IOOml經處理的水中混合併水化，然後在約400巴的壓力、65°C的入口溫度下通過Niro Soavi NS1001L均質器進行均質化4回。以卵磷脂:聚山梨醇酯為5:1的重量比加入聚山梨醇酯80並混合。以卵磷脂:梓檬油為5:1的重量比加入檸檬油並混合，以形成檸檬油的HLCV分散體。得到的基本上透明的分散體經0.2微米過濾器過濾。實施例4飲料中的檸檬油的HLCV分散體6g 卵磷脂(Lecigran, Cargill 或 Ultralec, ADM)在 IOOml 蒸懼水中混合併水化，然後在約400巴的壓力、65°C的入口溫度下通過Niro Soavi NS1001L均質器進行均質化。以卵磷脂:聚山梨醇酯為5:1的重量比加入1.2g聚山梨醇酯80並混合。以卵磷脂:檸檬油為5:1的重量比加入檸檬油並混合。混合後，分散體在相同的條件下通過相同的均質器再處理4回。得到的基本上透明的分散體可以經0.2微米過濾器過濾。將透明的分散體加到蔗糖和檸檬酸的溶液，以製備檸檬口味的飲品。實施例5植物甾醇的HLCV分散體IOg 卵憐脂(Lecigran, Cargill 或 Ultralec, ADM)和 2g 植物留醇(Cardioaid, ADM或Corowise, Cargill)在約70°C下溶解在llml90%的乙醇中，卵磷脂:甾醇的重量比為5:I。一旦所有的組分溶解，將溶液加到蒸餾水並混合，然後通過APV Rannie7.30.VH均質器在65°C的入口溫度、約600巴下進行均質化6回，以形成植物甾醇HLCV。實施例6水性飲料中的HLCV
以卵磷脂:聚山梨醇酯為5:1的重量比，將實施例1-1的HLCV分散體在室溫下與聚山梨醇酯80混合。然後在運動飲品中稀釋分散體以形成清澈的(低濁度)含魚油的水性飲料。實施例7海洋生物脂質將20g磷奸油(從南極磷奸提取的油)、30g卵磷脂(Cargill Lecigran)、0.5g維生素E、l.0g聚山梨醇酯80和4ml無水乙醇在瓶中混合。混合混合物同時加熱至65°C約60分鐘,直至溶液的外觀是均一的。將該混合物加到400ml已經加熱至65°C的純化水中，混合5分鐘。分散體在約600巴、65°C的入口溫度下通過Niro Soavi NS1001L均質器進行均質化6回。得到的分散體是半透明的，具有磷蝦油的特徵性粉紅色。圖5A和圖5B分別顯示了該磷蝦油HLCV組合物的照片和顆粒尺寸數據。可見體積加權平均直徑為64nm。實施例8乙醇、異丙醇或異丁醇中的魚油將20g 魚油(EPAX1050)、30g 卵憐脂(Cargill Lecigran)、。.5g 維生素 E、1.0g 聚山梨醇酯80和4ml乙醇在瓶中混合。在每種情況下，混合組合物同時加熱至65°C約60分鐘，直至溶液的外觀是均一和單相的。將這些混合物加到250ml已經加熱至65°C的純化水中，混合5分鐘。將50ml水化的魚油和卵磷脂分散體的樣品與另外的純化水和醇混合，以形成總體積為IOOml的在約30% (v/v)乙醇、30% (v/v)異丙醇或5% (v/v)異丁醇中的水化的分散體。每種分散體在約600巴、65°C的入口溫度下通過Niro SoaviNSlOOlL均質器進行均質化4回。在純化水中將分散體稀釋至約3mg/ml魚油。圖6A-6B分別顯示了異丙醇魚油HLCV組合物的照片和顆粒尺寸數據。圖7A-7B分別顯示了異丁醇魚油HLCV組合物的照片和顆粒尺寸數據。圖3顯示了 30%乙醇樣品的外觀。實施例9-1精油:香芹酚(不含聚山梨醇酯)在200ml已經加熱至65°C的純化水中稀釋IOg卵磷脂(Cargill Lecigran)。混合分散體並水化10分鐘，然後在約550巴、65°C的入口溫度下通過Niro Soavi NS1001L均質器進行均質化6回。向該分散體加入Ig香芹酚,在65°C下維持溶液並混合I小時，然後在混合時使之冷卻至室溫，形成香芹酚在HLCV中的分散體。實施例9-2精油:香芹酚(含聚山梨醇酯)按照實施例9-1製備香芹酚的HLCV組合物，除了均質化後，加入Ig聚山梨醇酯80並攪拌分散體10分鐘，隨後加入Ig香芹酚並在65°c下混合I小時。然後在混合時使分散體冷卻至室溫，形成香芹酚在HLCV中的分散體。實施例9-3精油:卵磷脂對照製備如實施例9-1的HLCV組合物，但不加入香芹酚。圖8A為實施例9-1 、9-2 (2)和9_3 (3)的HLCV組合物照片。採用聚山梨醇酯80製備的香芹酚樣品(I)的外觀與卵磷脂對照(3)很相似。儘管某種程度上不太透明，但是不含聚山梨醇酯80的香芹酚樣品(2)的外觀清楚地展示了不需要聚山梨醇酯80的香芹酚在HLCV中的完整分散體。圖8B、8C和8D分別顯示了樣品9-1 (1),9-2 (2)和9_3 (3)的顆粒尺寸數據，其體積加權平均直徑分別為56nm、97nm和37nm。圖8C表明當不使用聚山梨醇酯時，一些較大直徑顆粒存在時存在歪曲的分布，這與圖8A中所見的透明度下降和較大的平均(根據體積計算)直徑很好地對應。然而，很重要而值得注意的是通過動態雷射散射測定亞微米顆粒尺寸適用於定量表徵平均尺寸，但僅僅適用於定量表徵顆粒尺寸在均值分布上的相似性和區別(即柱狀圖顯示了差別，但不應依賴其提供更多的信息)。如貫穿實施例和附圖所討論和例舉的，在經處理的水存在下，低PC含量的HLCV裝載了活性成分(也可以包含醇和/或穩定劑)，以形成分散的組合物。圖1A、2A、3、4A、5A、6A、7A和8A的照片顯示裝載到HLCV中的活性成分的公開的例子，其被圖1C、2C、4B、4C、5B、6B、7B、8B、8C和8D中相應的顆粒尺寸數據所證實。當已經參考特定的示例性實施方案說明和描述本發明時，本領域普通技術人員將明白可以在不背離本發明的精神和範圍的情況下，對所述的實施方案進行各種修飾和改變，本發明的精神和範圍如以下權利要求書所定義。
權利要求
1.一種包含穩定、均一的分散體的組合物，其包含: 具有膜和水相的囊泡，所述囊泡包含: 磷脂醯膽鹼含量為約80w/w%或更低的卵磷脂，以及 被結合到所述囊泡的膜中的活性成分；以及 經處理的水。
2.根據權利要求1所述的組合物，其中所述經處理的水含有低於IOOppm的硬離子。
3.根據權利要求1所述的組合物，其中所述經處理的水的電導率低於每釐米200μ S。
4.根據權利要求1所述的組合物，其中所述囊泡的體積加權平均直徑為約120nm或更小。
5.根據權利要求1所述的組合物，其中所述囊泡的膜為磷脂雙層。
6.根據權利要求1所述的組合物，其中所述組合物是透明的分散體。
7.根據權利要求1所述的組合物，所述組合物還包含穩定劑。
8.根據權利要求7所述的組合物，其中所述穩定劑為聚山梨醇酯或聚氧乙烯烷基醚。
9.根據權利要求1所述的組合物，所述組合物還包含醇。
10.根據權利要求9所述的組合物，其中所述醇為具有6個或更少碳的脂肪醇。
11.根據權利要求10所述的組合物，其中所述醇為選自甲醇、乙醇、丙醇的同分異構體和丁醇的同分異構體的脂肪醇。`
12.根據權利要求1所述的組合物，其中所述活性成分是親脂性化合物。
13.根據權利要求12所述的組合物，其中所述親脂性化合物為選自氣味劑、天然香精、精油、著色劑、維生素、維生素的鹽、藥理活性維生素的代謝物、藥理活性維生素的代謝物的鹽、植物化學成分、油溶性酸、油溶性醇、必需脂肪酸、月見草油、紅花油、魚油、來自海洋生物的脂質、環孢菌素A、異丙酚、脂溶性蛋白酶抑制劑、抗逆轉錄病毒化合物、抗生素、類胡蘿蔔素、留體激素、黃酮類、蛋白質、酶、輔酶、塗料、油墨和農藥中的至少一種。
14.一種組合物，其包含: 囊泡，所述囊泡包含: 磷脂醯膽鹼含量為約80w/w%或更低的卵磷脂，以及 活性成分；以及 經處理的水。
15.根據權利要求14所述的組合物，其中所述囊泡為磷脂雙層。
16.根據權利要求14所述的組合物，所述組合物還包含穩定劑。
17.根據權利要求14所述的組合物，其中所述穩定劑為聚山梨醇酯或聚氧乙烯烷基醚。
18.根據權利要求14所述的組合物，所述組合物還包含醇。
19.一種組合物,所述組合物包含: 磷脂醯膽鹼含量為約80w/w%*更低的卵磷脂； 活性成分；以及 醇的均一混合物。
20.根據權利要求19所述的組合物，所述組合物還包含經處理的水。
21.根據權利要求20所述的組合物，其中相對於卵磷脂，基於重量計算，所述經處理的水的量為約10%或更少。
22.根據權利要求19所述的組合物，所述組合物還包含油。
23.根據權利要求19所述的組合物，其中相對於卵磷脂，基於重量計算，所述醇的量為約50%或更少。
24.一種生產囊泡載體組合物的方法，其包括: 在經處理的水中水化磷脂醯膽鹼含量為80w/w%或更低的卵磷脂，以形成具有膜和水相的卵磷脂囊泡；以及 將活性成分結合到卵磷脂囊泡的膜中，以形成膜裝載的卵磷脂囊泡。
25.根據權利要求24所述的方法，所述方法還包括在結合活性成分之前，處理卵磷脂囊泡以製備卵磷脂囊泡單層。
26.根據權利要求25所述的方法，其中所述處理卵磷脂囊泡包括均質化和高剪切混口 ο
27.根據權利要求24所述的方法，其中所述活性成分結合在卵磷脂囊泡中包括加熱。
28.根據權利要求24所述的方法，其中所述經處理的水還包含醇。
29.根據權利要求24所述的方法，所述方法還包括在水化之前通過加入穩定劑將穩定劑包含在卵磷脂中，或在活性成分結合之前或之後通過加入穩定劑將穩定劑包含在卵磷脂囊泡中。
30.根據權利要求24所述的方法，所述方法還包括在活性成分結合到卵磷脂囊泡膜中之後，處理膜裝載的卵磷脂囊泡，以減小膜裝載的卵磷脂囊泡的尺寸。
31.根據權利要求30所述的方法，其中所述卵磷脂囊泡的處理包括均質化或高剪切混口 ο
32.根據權利要求24所述的方法，所述方法還包括將所述組合物乾燥成固體形式。
33.根據權利要求24所述的方法，所述方法還包括將所述組合物結合到乳劑或糊劑中。
34.一種生產含有膜和水相的囊泡載體組合物的方法，所述方法包括: 混合磷脂醯膽鹼含量為約80w/w%或更低的卵磷脂、活性成分和醇，以形成均一的液體混合物；以及 採用經處理的水水化所述均一的液體混合物，以形成活性成分被結合到卵磷脂囊泡的膜中的卵磷脂囊泡。
35.根據權利要求34所述的方法，所述方法還包括在混合磷脂醯膽鹼含量為約80w/w%或更低的卵磷脂、活性成分和醇期間加熱。
36.根據權利要求34所述的方法，所述方法還包括將油與磷脂醯膽鹼含量為約80w/w%或更低的卵磷脂、活性成分和醇的混合物混合。
37.根據權利要求34所述的方法，所述方法還包括將經處理的水與磷脂醯膽鹼含量為約80w/w%或更低的卵磷脂、活性成分和醇的混合物混合。
38.根據權利要求37所述的方法，其中相對於卵磷脂，基於重量計算，所述經處理的水的用量高達約10%。
39.根據權利要求34所述的方法，所述方法還包括在水化均一的液體混合物之後，處理卵磷脂囊泡以製備卵磷脂囊泡單層。
40.根據權利要求39所述的方法，其中所述處理卵磷脂囊泡包括均質化或高剪切混口 ο
41.根據權利要求34所述的方法，其中相對於卵磷脂，基於重量計算，所述醇的量為約50%或更少。
42.一種形成均一的組合物的方法，所述方法包括: 混合磷脂醯膽鹼含量為約80w/w%或更低的卵磷脂、活性成分和醇。
43.根據權利要求42所述的方法，所述方法還包括將經處理的水與磷脂醯膽鹼含量為80w/w%或更低的卵磷脂、活性成分和醇的混合物混合。
44.根據權利要求43所述的方法，其中相對於卵磷脂，基於重量計算，所述經處理的水的用量高達約10%。
45.根據權利要求42所述的方法，其中相對於卵磷脂，基於重量計算，所述醇的量為約50%或更少。
46.一種生產囊泡載體組合物的方法，所述方法包括: 在經處理的水中水化磷脂醯膽鹼含量高於約80w/w%的卵磷脂，以形成具有膜和水相的卵磷脂囊泡；以及 將活性成分結合到卵磷脂囊泡的膜中，以形成膜裝載的卵磷脂囊泡。
47.根據權利要求46所述的方法，其中所述卵磷脂還包含磷脂醯甘油。
48.根據權利要求46所述的`方法，其中所述活性成分為選自環孢菌素A、異丙酚、脂溶性蛋白酶抑制劑、抗逆轉錄病毒化合物、抗生素、類胡蘿蔔素、留體激素、黃酮類、酶和輔酶的藥物活性成分。
49.根據權利要求46所述的方法，所述方法還包括在結合活性成分之前，處理卵磷脂囊泡以製成卵磷脂囊泡單層。
50.根據權利要求49所述的方法，其中所述處理卵磷脂囊泡包括均質化和高剪切混口 ο
51.根據權利要求46所述的方法，所述方法還包括在水化之前通過加入穩定劑將穩定劑包含在卵磷脂中，或在活性成分結合之前或之後通過加入穩定劑將穩定劑包含在卵磷脂囊泡中。
52.根據權利要求46所述的方法，所述方法還包括在活性成分結合到卵磷脂囊泡的膜中之後，處理膜裝載的卵磷脂囊泡，以減小膜裝載的卵磷脂囊泡的尺寸。
53.根據權利要求52所述的方法，其中所述卵磷脂囊泡的處理包括均質化或高剪切混口 ο
54.—種生產含有膜和水相的囊泡載體組合物的方法，所述方法包括: 混合磷脂醯膽鹼含量超過約80w/w%的卵磷脂、活性成分和醇，以形成均一的液體混合物；以及 採用經處理的水水化所述均一的液體混合物，以形成活性成分被結合到卵磷脂囊泡的膜中的卵磷脂囊泡。
55.根據權利要求54所述的方法，其中所述卵磷脂還包括磷脂醯甘油。
56.根據權利要求54所述的方法，其中所述活性成分為選自環孢菌素A、異丙酚、脂溶性蛋白酶抑制劑、抗逆轉錄病毒化合物、抗生素、類胡蘿蔔素、留體激素、黃酮類、酶和輔酶的藥物活性成分。
57.根據權利要求54所述的方法，所述方法還包括在混合磷脂醯膽鹼含量高於約80w/w%的卵磷脂、活性成分和醇期間加熱。
58.根據權利要求54所述的方法，所述方法還包括將油與磷脂醯膽鹼含量高於約80w/w%的卵磷脂、活性成分和醇的混合物混合。
59.根據權利要求54所述的方法，所述方法還包括將經處理的水與磷脂醯膽鹼含量高於約80w/w%的卵磷脂、活性成分和醇的混合物混合。
60.根據權利要求54所述的方法，其中相對於卵磷脂，基於重量計算，所述經處理的水的用量高達約10%。
61.根據權利要求54所述的方法，所述方法還包括水化均一的液體混合物之後，處理卵磷脂囊泡以製備卵 磷脂囊泡單層。
62.根據權利要求61所述的方法，其中所述卵磷脂囊泡的處理包括均質化或高剪切混合 ο
63.根據權利要求54所述的方法，其中相對於卵磷脂，基於重量計算，所述醇的量為約50%或更少。
全文摘要
一種水化的卵磷脂載體囊泡組合物包含在經處理的水中的卵磷脂衍生的成膜脂質囊泡，該囊泡用於結合活性成分以形成分散的組合物。一種製備水化的卵磷脂載體囊泡的方法包括在經處理的水存在時使用含有不超過約80%w/w磷脂醯膽鹼的卵磷脂。
文檔編號A61K47/30GK103200932SQ201180041112
公開日2013年7月10日 申請日期2011年6月23日 優先權日2010年6月23日
發明者C·G·S·埃利, D·F·霍奇森 申請人:布萊特賽德創新有限公司