兩種組合物在製備聯合治療糖尿病腎病藥物中的應用的製作方法
2023-06-07 09:37:01
兩種組合物在製備聯合治療糖尿病腎病藥物中的應用的製作方法
【專利摘要】本發明公開了兩種組合物在製備聯合治療糖尿病腎病藥物中的應用，所述兩種組合物分別是組合物A和組合物B，所述組合物A由下列原料藥構成：人參、水蛭、土鱉蟲、制乳香、赤芍、降香、檀香、全蠍、蟬蛻、蜈蚣、冰片、炒酸棗仁；所述組合物B由下列重量份的原料藥構成：人參、黃精、蒼朮、苦參、茯苓、麥冬、炙何首烏、地黃、山茱萸、黃連、佩蘭、荔枝核、淫羊藿、知母、丹參、葛根、地骨皮；組合物A和組合物B在製備聯合抑制Akt/mTOR信號轉導通路活化的藥物中的應用。本發明採用組合物A和組合物B聯合治療糖尿病腎病的效果好，沒有明顯副作用。
【專利說明】兩種組合物在製備聯合治療糖尿病腎病藥物中的應用
【技術領域】
[0001]本發明屬於藥物應用領域，具體來說是兩種中藥組合物聯合在治療糖尿病腎病中的應用。
【背景技術】
[0002]糖尿病腎病(diabetic nephropathy, DN)作為糖尿病最常見的慢性微血管併發症之一，嚴重影響著糖尿病患者的生活質量。DN發病機制非常複雜，至今尚未完全闡明。遺傳因素、糖脂代謝紊亂、腎素-血管緊張素系統(renin-ang1tensin system, RAS)失調、腎小球血液流變學和血流動力學的改變、炎症浸潤、以及多種生長因子和細胞因子的表達異常均參與了 DN的發生和發展。在眾多發病因素中，血管內皮生長因子(vascularendothelial growth factor, VEGF)在DN病變中具有重要作用，可刺激內皮細胞增殖分化、抑制內皮細胞凋亡、增強血管通透性，還可上調黏附分子及炎症因子等的表達，從而加劇DN的惡化。此外，VEGF的異常表達還可刺激PI3K/Akt/mT0R信號轉導通路激活，該信號通路被激活後，下遊蛋白分子發生磷酸化，從而導致核糖體生物合成增強，產生促增殖和抗凋亡效應，最終引起腎小球內皮細胞、繫膜細胞增殖，表現為成纖維細胞的增生和細胞外基質(extracellular matrix, ECM)的積聚，導致腎小球硬化、腎臟纖維化。早在機體發生胰島素抵抗階段，持續高血糖狀態就可誘導腎臟多種細胞表型中Akt/mTOR信號通路的激活，因而，對該信號通路及VEGF的深入研究有助於完善DN發病機制，為開發新藥提供理論依據。
[0003]到目前為止，尚無逆轉或阻斷DN進展的藥物。現代醫學對DN的治療主要是對症治療，如降糖、降壓、糾正脂代謝紊亂及低蛋白飲食等，臨床常用血管緊張素轉換酶抑制齊[J (ang1tensin converting enzyme inhibitor, ACEI)和血管緊張素 II 受體拮抗劑(ang1tensin II receptor antagonist, ARB),它們通過抑制RAS系統而降低系統血壓和腎內血壓，改善腎小球濾過膜的通透性，減少尿白蛋白排洩，產生腎臟保護作用。然而，DN發病機制非常複雜，此類單靶點藥物只能延緩DN的進展，並不能完全阻斷其發展為終末期腎病，而且容易導致低血壓、高血鉀、血管神經性水腫和過敏性皮炎等毒副作用。
【發明內容】
[0004]本發明的目的是提供兩種組合物在聯合治療糖尿病腎病中的應用，
本發明所採用的技術方案是:
兩種組合物在製備聯合治療糖尿病腎病藥物中的應用，所述兩種組合物分別是組合物A和組合物B，所述組合物A由下列重量份的原料藥構成:人參3-10、水蛭3-11、土鱉蟲5-10、制乳香1-5、赤芍3-9、降香1-5、檀香1_5、全蠍3_9、蟬蛻3_12、蜈蚣1_3、冰片1_7、炒酸棗仁3-10 ;所述組合物B由下列重量份的原料藥構成:人參42-160、黃精50-200、蒼朮30-100、苦參20-60、茯苓35-100、麥冬50-200、制何首烏35-100、地黃50-120、山茱萸50-200、黃連 20-60、佩蘭 30-60、荔枝核 75-150、淫羊藿 30-60、知母 30-100、丹參 35-120、葛根50-200、地骨皮30-100。
[0005]作為優選方式，所述組合物A由如下重量份數的原料藥製成:
人參6 水蛭10 土鱉蟲7 制乳香2 赤芍5 降香2 檀香2 全蠍7 蟬蛻7 蜈蚣I 冰片5 炒酸棗仁5 ；
所述組合物B由如下重量份數的原料藥製成:
人參42、黃精200、蒼朮30、苦參60、茯苓35、麥冬200、制何首烏35、地黃120、山茱萸50、黃連60、佩蘭30、荔枝核150、淫羊藿30、知母100、丹參35、葛根200、地骨皮30。
[0006]或所述組合物A由如下重量份數的原料藥製成:
人參6 水蛭11 土鱉蟲7 制乳香2 赤芍5 降香2 檀香2 全蠍3 蟬蛻7 蜈蚣I 冰片5 炒酸棗仁5 ；
所述組合物B由如下重量份數的原料藥製成:
人參102、黃精136、蒼朮68、苦參56、茯苓83、麥冬136、制何首烏83、地黃102、山茱萸136、黃連56、佩蘭56、荔枝核136、淫羊藿56、知母68、丹參89、葛根136、地骨皮83。
[0007]或所述組合物A由如下重量份數的原料藥製成:
人參10 水蛭8 土鱉蟲7制乳香2 赤芍5 降香2 檀香2 全蠍9 蟬蛻7 蜈蚣I 冰片5 炒酸棗仁5 ；
所述組合物B由如下重量份數的原料藥製成:
人參160、黃精50、蒼朮100、苦參20、茯苓100、麥冬50、
制何首烏100、地黃50、山茱萸200、黃連20、佩蘭60、荔枝核75、淫羊藿60、知母30、丹參120、葛根50、地骨皮100。
[0008]所述組合物A的活性成分由以下步驟製成:
a平均粒徑小於100 Mffl的全蠍、水蛭、蜈蚣、土鱉蟲、蟬蛻及制乳香藥粉； b冰片藥粉；
c由降香和檀香提取的揮髮油； d人參用乙醇提取後的醇提液經濃縮後的醇提浸膏；
e提取成分c後的降香和檀香藥渣的水提液、赤芍和炒酸棗仁加水煎煮後的水提液以及提取成分d後的人參藥渣的水提液過濾、混勻後濃縮成的水提浸膏。
[0009]所述組合物B的活性成分由以下步驟製成: a、按照原料藥重量比例稱取中藥材，淨選、碎斷；
b、佩蘭、蒼朮加5-9倍量水提取揮髮油，提取3-6小時，揮髮油另器收集，水溶液過濾後備用;
C、山茱萸用5-9倍量50-90%乙醇做溶劑，浸潰12-48小時後，進行滲漉，收集滲漉液，回收乙醇,並濃縮成60°C測定相對密度為1.30-1.35的稠膏，烘乾，備用；
d、人參、麥冬、淫羊藿、知母、葛根，加6-10倍量50-90%乙醇，回流提取1-3次，每次1-3小時，提取液過濾，回收乙醇，濃縮成稠膏，烘乾，備用；
e、黃精、苦參、生地、制何首烏、茯苓、黃連、丹參、荔枝核、地骨皮，加7-11倍量水，煎煮1-2次，每次1-3小時，提取液過濾，與步驟b中佩蘭、蒼朮提油後的水溶液合併，濃縮成清膏，加乙醇調節醇濃度為50-80%，冷藏放置，過濾，濾液回收乙醇，濃縮至稠膏，烘乾，備用；
步驟c所得山茱萸幹膏、步驟d所得醇提幹膏、步驟e所得水提醇沉幹膏與步驟b所得揮髮油共同構成該中藥組合物的活性成分。
[0010]為實現上述技術方案，將組合物A和組合物B的製成膠囊劑、片劑、顆粒劑、散劑、口服液或丸劑。
[0011]其中，所述組合物A的膠囊劑的製備過程如下:
a)按照重量份比例稱取各原料藥；
b)藥材粉碎工藝:
將全蠍、水蛭、蜈蚣、土鱉蟲和蟬蛻五種蟲藥經淨選、水洗處理後和淨選炮製後的制乳香按處方配料，由粉碎機進行粉碎，藥粉細度達到80目以上；粗粉後的藥粉經各種超微粉碎技術進行超微粉碎，使藥粉平均粒徑小於100 Mffl;待粉碎的藥材經清洗烘乾滅菌後，配料；
c)提取濃縮和乾燥工藝:
降香和檀香先加水提取揮髮油後再用水提取，赤芍和炒酸棗仁加水煎煮，水提液過濾後，待濃縮成浸膏；人參用乙醇提取後，再用水提取，醇提液回收乙醇後，濃縮成醇提浸膏，水提液過濾與所有的水提液混勻後濃縮成水提浸膏；
d)製劑工藝:
在沸騰制粒乾燥機中加入超微粉碎粉，再將步驟c)所得提取浸膏噴入制粒；將製成的顆粒經整粒，加入冰片細粉，噴入由降香和檀香提取的揮髮油，混勻後由膠囊充填機充填，製成膠囊。
[0012]組合物B的顆粒劑的製備過程如下:
a、按照原料藥重量比例稱取中藥材，淨選、碎斷；
b、佩蘭、蒼朮合併，加5-9倍量水，水蒸汽法提取揮髮油，提取3-6小時，揮髮油另器收集，水溶液過濾後備用；
C、山茱萸用5-9倍量50-90%乙醇做溶劑，浸潰12-48小時後，進行滲漉，收集滲漉液，回收乙醇,並濃縮成60°C測定相對密度為1.30-1.35的稠膏，烘乾，備用；
d、人參、麥冬、淫羊藿、知母、葛根，加6-10倍量50-90%乙醇，回流提取1-3次，每次1-3小時，提取液過濾，回收乙醇，濃縮成稠膏，烘乾，備用；
e、黃精、苦參、生地、制何首烏、茯苓、黃連、丹參、荔枝核、地骨皮，加7-11倍量水，煎煮1-2次，每次1-3小時，提取液過濾，與步驟b中佩蘭、蒼朮提油後的水溶液合併，濃縮成清膏，加乙醇調節醇濃度為50-80%，冷藏放置，過濾，濾液回收乙醇，濃縮至稠膏，烘乾，備用；
f、將步驟c所得山茱萸幹膏、步驟d所得醇提幹膏、步驟e所得水提醇沉幹膏混合均勻，粉碎，加入輔料制粒；
g、步驟b所得揮髮油加入乙醇溶解，噴入步驟f所得的顆粒，混勻，密閉，分裝，即得。
[0013]作為優選方式，組合物A和組合物B在製備聯合抑制Akt/mTOR信號轉導通路活化的藥物中的應用。
[0014]為了驗證組合物A和組合物B的在聯合治療糖尿病腎病中的作用，做了如下實驗:
多種因素參與了 DN腎臟病理和功能的改變，人們對與其有關的細胞因子和細胞信號傳導途徑進行了大量的研究，發現高糖可以激活多種細胞內信號因子從而導致靶器官損傷，PI3K/Akt/mT0R通路就是其中與DM腎小球硬化有著密切聯繫的信號途徑之一。
[0015]1.mTOR 簡介
哺乳動物雷帕黴素革巴蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)是大環內酯類抗生素雷帕黴素在哺乳動物體內作用的靶分子。mTOR形成了結構和功能各不相同的兩個蛋白複合物，分別為mTORCl (mTOR complex1n mT0RC2，其中mT0RC2對雷帕黴素的抑制作用不敏感，主要以mTORCl參與Akt/mTOR通路的信號傳導，並發揮相應作用。當體內營養物質、能量水平、各類生長因子如胰島素及胰島素樣生長因子(insulin-like growth factor,IGF)等信號發生變化後，mTORCl可通過促使下遊的核糖體S6蛋白激酶I (ribosomalprotein S6 kinase 1，S6K1)和真核細胞翻譯起始因子4E結合蛋白l(4E_Binding Protein1，4E-BP1)磷酸化，從而調節mRNA翻譯、蛋白質合成、細胞周期進展和能量代謝等重要功能，在細胞的增殖、生長、分化過程中起著中心調控點的作用。mTOR對於低等和高等動物的生長和發育都是必不可少的，將mTOR基因敲除的小鼠死於胚胎早期。
[0016]2.PI3K/Akt/mT0R 與糖尿病腎病
憐脂酸肌醇 3 激酶 / 蛋白激酶 B (phosphoinositide3-kinase/protein kinase B,PI3K/PKB)是細胞內獨立於其他通路的一個較新的信號轉導系統，mTOR位於該通路下遊從而構成PI3K/PKB/mT0R通路。PKB是反轉錄病毒Akt_8的癌基因V_akt編碼的蛋白產物，故又稱Akt。在各種細胞因子作用下，PI3K活化生成3位磷酸化的磷脂產物而引起Akt與膜結合，在磷脂醯肌醇依賴的蛋白激酶(PI3K-dependent kinase, F1DK)作用下，PKB的蘇氨酸和絲氨酸殘基發生磷酸化而進入胞質和胞核，直接或間接通過結節性硬化複合體(tuberous sclerosis complex, TSC)激活 mTOR 蛋白，調節下遊效應分子 S6K1 和 4E-BP1 的表達，從而調節細胞生長、增殖及細胞周期的變化，參與細胞大小甚至生物體大小的調控。
[0017]在DM高糖狀態下，腎臟多種細胞表型的PI3K/Akt/mT0R信號通路均被激活，進而引起血管平滑肌增殖、繫膜細胞肥大增殖、細胞外基質積聚，促進DN早期腎臟的肥大。最近研究表明，無論I型或2型DM動物模型，Akt/mTOR信號轉導通路都被激活，而使用雷帕黴素特異性阻斷mTOR通路則可以抑制繫膜擴張及腎臟肥大，從而延緩DN的進展。利用單側腎切除的小鼠模型研究代償性腎臟肥大的機制時，證實在單側腎切除後，殘腎的mTOR通路被激活，其下遊效應分子P70S6K和4E-BP1磷酸化增加，引起腎臟肥大，而使用雷帕黴素特異性阻斷mTOR及其下遊蛋白S6K1和4E-BP1的磷酸化，顯著抑制腎臟肥大。
[0018]此外，Akt/mTOR信號通路在DM階段就參與影響體內對胰島素的敏感性，並能促進低氧誘導因子(hypoxia inducible factor la, HIF-1 α )、血管內皮細胞生長因子(Vascular endothelial grow factor, VEGF)、轉化生長因子 β I (transforming growthfactor β I, TGF-β I)、結締組織生長因子(connective tissue growth factor, CTGF)等的表達，加劇DN的惡化。同時，VEGF、TGF-M與Ang II等因子表達的增強又能反作用於Akt/mTOR通路，促使該通路激活。由此可見，VEGF、TGF- β I等生長因子能與Akt/mTOR信號通路相互影響，加快DN的進展。
[0019]Akt/mTOR信號轉導通路的過度活化在胰島素抵抗、DM及DN發病中產生重要推動作用，雷帕黴素通過抑制Akt/mTOR通路的活化，不僅能改善胰島素抵抗，還可降低VEGF、TGF-β等因子的表達，從而減輕DM早期腎臟損害和晚期腎小球基底膜增厚，減少尿白蛋白排洩，延緩DN的進展。然而，由於雷帕黴素具有全身免疫抑制等毒副作用，影響其廣泛長期應用。
[0020]材料與方法
I實驗材料 1.1實驗動物
SPF級健康雄性SD大鼠80隻，體重200± 10g，購自中國食品藥品檢定研究院，許可證編號:SCXK (京)2007-0017。
[0021]1.2實驗用藥
高糖高脂鼠料，配方:20%蔗糖，10%豬油，5%蛋黃粉，2.5%膽固醇，1%膽酸鹽，61.5%普通飼料，購自北京科澳協力飼料有限公司，許可證編號=SCXK (京)2009-0012。
[0022]1.3實驗試劑
小鼠VEGF單克隆抗體美國Santa Cruz公司
SP法檢測試劑盒SP-9001，9002北京中杉金橋生物公司
兔抗大鼠Akt多克隆抗體美國SAB公司兔抗大鼠P-Akt多克隆抗體美國SAB公司兔抗大鼠mTOR多克隆抗體美國b1world公司兔抗大鼠p-mTOR多克隆抗體美國b1world公司鼠抗人GAPDH單克隆抗體美國Santa Cruz公司辣根酶標記山羊抗兔IgG抗體北京中杉金橋生物公司 DAB增強顯色試劑盒天根生物工程公司
考馬斯亮藍蛋白測定試劑盒南京建成生物工程研究所聚偏二氟乙烯膜(PVDF，0.45um)美國Solarb1公司十二烷基磺酸鈉(SDS)美國Solarb1公司
溴酌■藍美國Solarb1公司
甘氨酸(Gly)美國Solarb1公司
丙烯醯胺美國Solarb1公司
N, N』 -甲叉雙丙烯醯胺美國Solarb1公司
過硫酸銨(APS)美國Solarb1公司
四甲基乙二胺(TEMED)美國Solarb1公司
苯甲基磺醯氟化物(PMSF) 美國Amresco公司抑妝酶(Aproptinin)美國Amresco公司
亮抑肽酶(Leupeptin)美國Amresco公司
膜蛋白酶抑制劑(Ttypsinin inhibitor) 美國Amresco公司抑制金屬蛋白酶(EGTA)美國Amresco公司
乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-Na2)華美生物公司預染中分子量蛋白(marker)上海捷瑞生物工程公司三羥甲基氨基甲烷(Tris)天津市華東試劑廠
DAB顯色試劑盒北京中山生物技術公司
考馬斯亮藍蛋白定量試劑盒南京建成生物技術公司牛血清白蛋白(BSA)美國Sigma公司
脫脂奶粉完達山乳製品有限公司
【權利要求】
1.兩種組合物在製備聯合治療糖尿病腎病藥物中的應用，所述兩種組合物分別是組合物A和組合物B，所述組合物A由下列重量份的原料藥構成:人參3-10、水蛭3-11、土鱉蟲5-10、制乳香1-5、赤芍3-9、降香1-5、檀香1_5、全蠍3_9、蟬蛻3_12、蜈蚣1_3、冰片1_7、炒酸棗仁3-10 ;所述組合物B由下列重量份的原料藥構成:人參42-160、黃精50-200、蒼朮30-100、苦參20-60、茯苓35-100、麥冬50-200、制何首烏35-100、地黃50-120、山茱萸50-200、黃連 20-60、佩蘭 30-60、荔枝核 75-150、淫羊藿 30-60、知母 30-100、丹參 35-120、葛根50-200、地骨皮30-100。
2.根據權利要求1所述的應用，其特徵在於，所述組合物A由如下重量份數的原料藥製成: 人參6 水蛭10 土鱉蟲7 制乳香2 赤芍5 降香2 檀香2 全蠍7 蟬蛻7 蜈蚣I 冰片5 炒酸棗仁5 ； 所述組合物B由如下重量份數的原料藥製成: 人參42、黃精200、蒼朮30、苦參60、茯苓35、麥冬200、制何首烏35、地黃120、山茱萸50、黃連60、佩蘭30、荔枝核150、淫羊藿30、知母100、丹參35、葛根200、地骨皮30。
3.根據權利要求1所述的應用，其特徵在於，所述組合物A由如下重量份數的原料藥製成: 人參6 水蛭11 土鱉蟲7 制乳香2 赤芍5 降香2 檀香2 全蠍3 蟬蛻7 蜈蚣I 冰片5 炒酸棗仁5 ； 所述組合物B由如下重量份數的原料藥製成: 人參102、黃精136、蒼朮68、苦參56、茯苓83、麥冬136、制何首烏83、地黃102、山茱萸136、黃連56、佩蘭56、荔枝核136、淫羊藿56、知母68、丹參89、葛根136、地骨皮83。
4.根據權利要求1所述的應用，其特徵在於，所述組合物A由如下重量份數的原料藥製成: 人參10 水蛭8 土鱉蟲7制乳香2 赤芍5 降香2 檀香2 全蠍9 蟬蛻7 蜈蚣I 冰片5 炒酸棗仁5 ； 所述組合物B由如下重量份數的原料藥製成: 人參160、黃精50、蒼朮100、苦參20、茯苓100、麥冬50、 制何首烏100、地黃50、山茱萸200、黃連20、佩蘭60、荔枝核75、淫羊藿60、知母30、丹參120、葛根50、地骨皮100。
5.根據權利要求1-4任一項所述的應用，其特徵在於，所述組合物A的活性成分由以下步驟製成: a平均粒徑小於100 Mffl的全蠍、水蛭、蜈蚣、土鱉蟲、蟬蛻及制乳香藥粉； b冰片藥粉； c由降香和檀香提取的揮髮油； d人參用乙醇提取後的醇提液經濃縮後的醇提浸膏； e提取成分c後的降香和檀香藥渣的水提液、赤芍和炒酸棗仁加水煎煮後的水提液以及提取成分d後的人參藥渣的水提液過濾、混勻後濃縮成的水提浸膏； 所述組合物B的活性成分由以下步驟製成: a、按照原料藥重量比例稱取中藥材，淨選、碎斷； b、佩蘭、蒼朮加5-9倍量水提取揮髮油，提取3-6小時，揮髮油另器收集，水溶液過濾後備用; C、山茱萸用5-9倍量50-90%乙醇做溶劑，浸潰12-48小時後，進行滲漉，收集滲漉液，回收乙醇,並濃縮成60°C測定相對密度為1.30-1.35的稠膏，烘乾，備用； d、人參、麥冬、淫羊藿、知母、葛根，加6-10倍量50-90%乙醇，回流提取1-3次，每次1-3小時，提取液過濾，回收乙醇，濃縮成稠膏，烘乾，備用； e、黃精、苦參、生地、制何首烏、茯苓、黃連、丹參、荔枝核、地骨皮，加7-11倍量水，煎煮1-2次，每次1-3小時，提取液過濾，與步驟b中佩蘭、蒼朮提油後的水溶液合併，濃縮成清膏，加乙醇調節醇濃度為50-80%，冷藏放置，過濾，濾液回收乙醇，濃縮至稠膏，烘乾，備用； 步驟c所得山茱萸幹膏、步驟d所得醇提幹膏、步驟e所得水提醇沉幹膏與步驟b所得揮髮油共同構成該中藥組合物的活性成分。
6.根據權利要求1-4任一項所述的應用，其特徵在於，所述組合物A和組合物B的製劑劑型為膠囊劑、片劑、顆粒劑、散劑、口服液或丸劑。
7.根據權利要求6所述的應用，其特徵在於，所述組合物A的膠囊劑的製備過程如下: a)按照重量份比例稱取各原料藥； b)藥材粉碎工藝: 將全蠍、水蛭、蜈蚣、土鱉蟲和蟬蛻五種蟲藥經淨選、水洗處理後和淨選炮製後的制乳香按處方配料，由粉碎機進行粉碎，藥粉細度達到80目以上；粗粉後的藥粉經各種超微粉碎技術進行超微粉碎，使藥粉平均粒徑小於100 Mffl ;待粉碎的藥材經清洗烘乾滅菌後，配料； c)提取濃縮和乾燥工藝: 降香和檀香先加水提取揮髮油後再用水提取，赤芍和炒酸棗仁加水煎煮，水提液過濾後，待濃縮成浸膏；人參用乙醇提取後，再用水提取，醇提液回收乙醇後，濃縮成醇提浸膏，水提液過濾與所有的水提液混勻後濃縮成水提浸膏； d)製劑工藝: 在沸騰制粒乾燥機中加入超微粉碎粉，再將步驟c)所得提取浸膏噴入制粒；將製成的顆粒經整粒，加入冰片細粉，噴入由降香和檀香提取的揮髮油，混勻後由膠囊充填機充填，製成膠囊。
8.根據權利要求6所述的應用，其特徵在於，所述組合物B的顆粒劑的製備過程如下: a、按照原料藥重量比例稱取中藥材，淨選、碎斷； b、佩蘭、蒼朮合併，加5-9倍量水，水蒸汽法提取揮髮油，提取3-6小時，揮髮油另器收集，水溶液過濾後備用； C、山茱萸用5-9倍量50-90%乙醇做溶劑，浸潰12-48小時後，進行滲漉，收集滲漉液，回收乙醇,並濃縮成60°C測定相對密度為1.30-1.35的稠膏，烘乾，備用； d、人參、麥冬、淫羊藿、知母、葛根，加6-10倍量50-90%乙醇，回流提取1-3次，每次1-3小時，提取液過濾，回收乙醇，濃縮成稠膏，烘乾，備用； e、黃精、苦參、生地、制何首烏、茯苓、黃連、丹參、荔枝核、地骨皮，加7-11倍量水，煎煮1-2次，每次1-3小時，提取液過濾，與步驟b中佩蘭、蒼朮提油後的水溶液合併，濃縮成清膏，加乙醇調節醇濃度為50-80%，冷藏放置，過濾，濾液回收乙醇，濃縮至稠膏，烘乾，備用； f、將步驟C所得山茱萸幹膏、步驟d所得醇提幹膏、步驟e所得水提醇沉幹膏混合均勻，粉碎，加入輔料制粒；g、步驟b所得揮髮油加入乙醇溶解，噴入步驟f所得的顆粒，混勻，密閉，分裝，即得。
9.根據權利要求1-4任一項所述的應用，其特徵在於，組合物A和組合物B在製備聯合抑制Akt/mTOR信號轉導通路活化的藥物中的應用。
【文檔編號】A61K36/8969GK104127526SQ201310158393
【公開日】2014年11月5日 申請日期:2013年5月2日 優先權日:2013年5月2日
【發明者】吳以嶺, 魏聰, 丁英鈞 申請人:河北以嶺醫藥研究院有限公司