一種實時定量pcr測量樣品中染色體端粒平均長度的絕對值的試劑盒及應用的製作方法

2023-06-11 20:22:31

專利名稱：一種實時定量pcr測量樣品中染色體端粒平均長度的絕對值的試劑盒及應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及試劑盒，特別涉及一種實時定量PCR測量樣品中染色體端粒平均長度的絕對值的試劑盒及應用。
背景技術：
端粒(Telomere)是一段DNA重複序列，位於染色體末端，可以保持染色體的完整性。1990年，Harley等證實端粒的長度可以隨著細胞分裂次數的增多而逐漸變短。這一發現在端粒和細胞衰老之間建立了緊密的聯繫。端粒重複序列的長度可能起著一種分子鐘(molecular clock)的作用。不同年齡的人的體細胞的壽命明顯不同,其端粒的長度也不相 同。是隨著年齡的增長而縮短。來自新生兒的體細胞可在體外傳代培養80—90代，來自70歲老人的體細胞在體外只能傳代培養20 30代，而且端粒的重複序列長度也縮短很多。端粒酶(Telomerase)是細胞中負責端粒延長的一種酶,是基本的核蛋白逆轉錄酶，可將端粒DNA加至真核細胞染色體末端。端粒在不同物種細胞中對於保持染色體穩定性和細胞活性有重要作用，端粒酶能延長縮短的端粒(縮短的端粒其細胞複製能力受限)，從而增強體外細胞的增殖能力。但是，在正常人體細胞中，端粒酶的活性受到相當嚴密的調控。實驗證明，體細胞裡沒有端粒酶的活性，所以體細胞每分裂一次，端粒也就縮短一些。隨著細胞不斷地進行分裂，端粒的長度將越來越短，當達到一個臨界長度時，細胞染色體會失去穩定性，使細胞不能再進行分裂而進入凋亡(apoptosis)。端粒的長度決定了細胞的壽命，因此可用丟失的端粒重複序列的長度來推測細胞有絲分裂的次數，所以端粒被稱為分子鐘或有絲分裂鍾(mitotic clock)。端粒除了涉及到染色體穩定性,細胞的衰老和死亡外,還與腫瘤的發生密切相關。在人體內的各種細胞中，生殖細胞和幹細胞染色體的末端比體細胞染色體的末端長出幾千個鹼基對，並且在這兩類細胞裡能檢測到端粒酶的活性。除此之外，其他所有體細胞裡都未測得端粒酶的活性。惟一的例外是來源於體細胞的惡性腫瘤細胞卻又重新出現了端粒酶活性，發揮其合成端粒重複序列的功能，以補償正常的端粒序列丟失，使端粒的重複序列不會達到導致細胞死亡的臨界長度，從而獲得細胞的「永生性」(immortality)。這樣，惡性腫瘤細胞在體內或體外都能無限制地分裂增殖。上文提到的端粒長度縮短指的是所有染色體末端端粒的平均長度。近年來，很多實驗觀察開始質疑端粒的平均長度與衰老之間的聯繫。一些研究小組提出了於端粒相關的細胞衰老是由單一或某幾個短端粒引起的觀點。這一觀點的正確性也被越來越多的實驗數據所證明。目前，研究端粒長度主要是應用TRF法(mean length of telomere restrictionfragments)。另外,有一些手段可以比較精確的研究染色體中短端粒的情況，例如基於突光原位雜交(Q-FISH)的技術,或者 STELA (single telomere length analysis)技術等。
發明內容
發明目的
本專利涉及一種實時定量PCR測量樣品中染色體端粒平均長度的絕對值試劑盒及其應用。一種用RT-qPCR法測量端粒平均長度絕對值的試劑盒，其特徵在於包括盒體，襯墊，PCR 反應液，Taq 酶，136B4 Forward, 36B4 Reverse, Telomere Forward, TelomereReverse，84-mer，36B4片段，襯墊上設有容器空分別放置PCR反應液，Taq酶，136B4Forward, 36B4 Reverse, Telomere Forward, Telomere Reverse,84-mer ;其中所述的36B4 Forward 的核苷酸序列為5』 CAG CAA GTG GGA AGG TGT AAT CC 3』，見 Seq NO 1 ；36B4 Reverse 的核苷酸序列為5』 CCC ATT CTA TCA TCA ACG GGT ACA A 3』，見Seq NO 2 ；Telomere Forward 的核苷酸序列為5』CGG TTT GTT TGG GTT TGG GTT TGG GTT TGG GTTTGG GTT 3』，見 Seq NO 3 ；Telomere Reverse 的核苷酸序列為5』 GGC TTG CCT TAC CCTTAC CCT TAC CCT TAC CCT TAC CCT 3』，見 Seq NO :4 ;84_mer 的核苷酸序列為(TTAGGG)14的核苷酸序列為含14個TTAGGG重複序列的核苷酸片段,見Seq NO :5 ;36B4片段的核苷酸序列為5』 CAG CAA GTG GGA AGG TGT AAT CCG TCT CCA CAG ACA AGG CCA GGA CTCGTT TGT ACC CGT TGA TGA TAG AAT GGG 3』，見 Seq NO :6。 所述的PCR反應液含有PCR緩衝液、I X SYBR Green master mix，dNTPS。引物的濃度為lOOnM，84-mer和36B4片段的濃度為lug/uL;
一種用RT-qPCR法測量端粒平均長度絕對值的試劑盒的應用，其特徵在於按步驟實
現
A.從人外周血細胞中獲取基因組DNA;
B.使用權利要求I所述的試劑盒繪製標準曲線，用來計算RT-qPCR反應中樣品端粒的總長度和反應中染色體的總拷貝數標準曲線I使用濃度梯度為lao'io^io'KT4，10_5，10_6的人工合成的84-mer寡核苷酸的RT-qPCR反應的Ct值繪製；標準曲線2使用人工合成的75 bp 36B4片段RT-qPCR反應的CT值繪製，其濃度梯度為1，10—1，10_2，10_3，10_4，1(T5,1(T6 ；
C.使用RT-qPCR擴增步驟A中獲得的樣品gDNA中的端粒片段和36B4基因片段，獲得相應的Ct值，並根據標準曲線計算樣品中端粒的總長度和樣品中36B4基因的拷貝數。D.計算樣品中端粒平均長度絕對值
端粒平均長度=端粒總長度/ 36B4拷貝數；
其中PCR反應條件為
95°C變性 10 min，然後 95°C 15sec，60°C I min，共 40 個循環。具體來說
I.引物設計本專利涉及的PCR引物除了常規的用於擴增端粒片段的引物對，還包括一段84 bp的寡核苷酸片段(84-mer)和一段75 bp的36B4片段。2.繪製標準曲線a)將 84-mer 梯度稀釋:1,10—1,10_2,10_3,10_4,10_5,10_6,84-mer寡核苷酸鏈總長度計算方法如下(假設每個反應需未稀釋84-mer 60pg,即60X 1(T12 g,已知 84-mer 的分子量為 26667. 2)
lmol=6. 02 X IO23 個微粒數 平均一個 84-mer 的質量為2. 6667 X IO4 / ( 6. 02 X IO23)= 0. 44 X l(T19g ;
每個PCR反應體系中未稀釋84-mer總量為60 X 1(T12 / (0. 44 X 1(T19 )= I. 36 XIO9 個；由於84-mer的長度為84bp，因此每個PCR反應體系中未稀釋84-mer總長度為I. 36 XIO9 X 84 = I. 18 X IO5 kb ；
同理可得不同稀釋濃度84-mer在每個反應體系中的總長度，繪製標準曲線I。b)繪製75 bp的36B4片 段拷貝數標準曲線
將 75 bp 的 36B4 梯度稀釋1，10' 1(T2，1(T3，1(T4，1(T5，1(T6 ；
36B4片斷為75 bp，相對分子量為23268. 1，單個36B4 75 bp片段質量為2. 32681 X IO4/ ( 6. 02X IO23) = 0. 38X 10_19 g ；
假設反應體系中最高濃度75 bp的36B4含量為200 pg，那麼每個反應體系中75 bp36B4的拷貝數為200 X 1(T12 / 0. 38 X 1(T19 = 5. 26X IO9 ;相當於在二倍體的染色體組中含有5. 26 X 109/2=2. 63 X IO9個36B4基因拷貝。同理可得不同稀釋濃度反應體系中75 bp 36B4拷貝數，作標準曲線2。3. RT-qPCR擴增gDNA樣品中端粒和36B4基因；
4.RT-QPCR擴增gDNA樣品中端粒和36B4基因(內參)，並通過兩個標準曲線計算gDNA樣品中端粒的總長度及樣品中gDNA總拷貝數，即可以計算端粒平均長度端粒平均長度=樣品中端粒總長度/ gDNA總拷貝數。原理說明
I、實時螢光定量PCR (RT-qPCR)原理
無論是對遺傳病(如地中海貧血和血友病)、傳染病(如肝炎和愛滋病)或腫瘤進行基因診斷，還是研究藥物對基因表達水平的影響，或者監控藥物和療法的治療效果，定量PCR技術都可以發揮很大作用。定量PCR技術的最新進展是實時螢光定量。該技術藉助於螢光信號來檢測PCR產物，一方面提高了靈敏度，另一方面還可以做到PCR每循環一次就收集一個數據，建立實時擴增曲線，準確地確定CT值，從而根據CT值確定起始DNA拷貝數，做到了真正意義上的DNA定量。根據最終得到的數據不同，定量PCR可以分為相對定量和絕對定量兩種。典型的相對定量如比較經過不同方式處理的兩個樣本中基因表達水平的高低變化，得到的結果是百分比；絕對定量則需要使用標準曲線確定樣本中基因的拷貝數或濃度。CT值的定義是擴增產物的螢光信號達到設定的閾值時所經過的擴增循環數。定量PCR的數學原理 理想的PCR反應
X=X0 X 2n 非理想的PCR反應
X=X0 (1+Et)n ；n:擴增反應的循環次數X :第n次循環後的產物量X0 :初始模板量Ex :擴增效率
在擴增產物達到閾值線時
Xct=X0 (I+Ex)CT,(I)
其中Xct :為螢光擴增信號達到閾值強度時所擴增產物的量，在閾值線設定以後，它為常數，設定為M ;方程式(I)兩邊同時取對數得
IogM=IogX0 (1+Ex)CT(2)
整理方程式(2)得
IogX0=-Iog(1+Ex)*CT+logM(3)
IogX0與CT呈線性關係，根據樣品擴增的CT值可以計算出樣品中的所含的模板量。2,SYBR Green I螢光染料技術原理SYBR Green I是ー種只與DNA雙鏈結合的熒 光染料。當它與DNA雙鏈結合吋，發出螢光JAdna雙鏈上釋放出來時，螢光信號急劇減弱。因此，在ー個體系內，其信號強度代表了雙鏈DNA分子的數量。SYBR Green螢光染料法定量PCR的基本過程是I、開始反應，當SYBR Green染料與DNA雙鏈結合時發出螢光。2、DNA變性吋，SYBR Green染料釋放出來，螢光急劇減少。3、在聚合延伸過程中，引物退火併形成PCR產物。4、聚合完成後，SYBR Green染料與雙鏈產物結合，定量PCR系統檢測到螢光的淨增量加大。
2、RT-qPCR測量端粒長度原理
如圖5所示，緑色區域為端粒區，S卩(TTAGGG) η重複序列；藍色箭頭為與端粒特異性結合的引物。由幹與端粒結合的引物數量跟端粒的長度呈正相關，端粒長，其可結合的引物數量多，螢光強度大，可以理解為拷貝數多；反之則拷貝數少，螢光強度弱。所以使用RT-qPCR法，得到各個樣品的CT值，即可間接反映每個樣品中端粒的平均長度。有益效果
端粒的縮短被認為與細胞的衰老和癌症等疾病的發生密切相關。同時，細胞內每條染色體兩端的端粒並不是以相同的速度縮短，有的端粒因為某些原因會突然大幅度變短，形成相對短的端粒。當這些短端粒達到或超過某ー極限，就會導致細胞的衰來死亡，或者如癌症等的疾病。因此，準確地檢測細胞端粒長度，對預防衰老和預防癌症的發生都能起到非常大的幫助。本發明採用試劑盒形式可以方便，快捷測定端粒的平均長度的絕對值，適用エ業生產或檢測。


圖I.標準曲線1，用於計算每個RT-qPCR反應中端粒的總長度，橫軸為端粒長度，単位為Kb，PCR反應的Ct值與端粒長度在圖I所示的範圍內呈線性關係。通過優化樣品的濃度，使其PCR反應的CT值落在標準曲線線性範圍內，應此使用此標準曲線計算所得數值等於端粒在每個PCR反應中的總長度。圖2.標準曲線2，用於計算36B4在每個反應中的拷貝數，間接計算每個反應中染色體的拷貝數，即每個PCR反應中端粒的總拷貝數。橫軸為36B4的拷貝數，PCR反應的CT值與36B4拷貝數的LOG值在途中所示範圍內呈線性關係。圖3.使用RT-qPCR法和TRF法測得的端粒平均長度絕對值的相關性。圖4為本發明的示意圖，其中盒體1，襯墊2，PCR反應液3，Taq酶4，136B4Forward 5， 36B4 Reverse 6， Telomere Forward 7， Telomere Revers e 9,84-mer 10，36B4片段Io圖5. RT-qPCR法檢測端粒長度的示意圖，其中有圓圈的區域為藍色，無圓圈區域為綠色。
具體實施例方式RT-QPCR 使用 PCR 反應液購自 Qiagen。實施例I外周血基因組DNA (gDNA)的提取
I).血液樣品分裝成I mL/管，幹-70で儲存。2).將樣品解凍，每管樣品加入O. 8 mL檸檬酸緩衝液，混勻後12000轉離心Imin,去上清。 3).加入I mL IX檸檬酸緩衝液，震蕩後12000轉離心I min，去上清。4).カロ 入 375 uL O. 2M 的 Na2OAc,震蕩後加入 25 uL 10% 的 SDS 和 5 uLproteinase K (20 mg/mL H2O),震蕩混勻後 55 度孵育 I h。5).加入 120 uL 酚 / 氯仿 / 異戊醇(v/v :25/24/1),震蕩 30 sec 後於 12000 轉離心2 min。6).將水相層移至新的I. 5 mL離心管仲，加入I mL，冷的100%こ醇，混勻並於-20度孵育15 min。7). 12000轉離心2 min，去上清並烘乾。8).加入180 uL 10 1的TE緩衝液，震蕩後於55で孵育10 min。9).加入20 uL，2M的醋酸鈉溶液，混勻後加入500 uL，冷的100%こ醇，混勻後於12000轉離心I min,去上清。10).用I mL，80%的こ醇洗滌沉澱，之後於12000轉離心I min，去上清。11).真空乾燥沉澱10 min。12).將沉澱重新溶解於200 uL TE緩衝液中，55 °C孵育過夜，獲得gDNA。實施例2 RT-QPCR法測端粒平均長度的絕對值
I、ー種用RT-qPCR法測量端粒平均長度絕對值的試劑盒，包括盒體1，襯墊2，PCR反應液3，Taq 酶 4, 136B4 Forward 5, 36B4 Reverse 6, Telomere Forward 7, TelomereRevers e 9,84-mer 10，36B4片段11，襯墊2上設有容器空腔分別放置PCR反應液3，Taq酶 4, 136B4 Forward 5, 36B4 Reverse 6, Telomere Forward 7, Telomere Reverse 8,84-mer 10，36B4 片段 11 ；
其中所述的 36B4 Forward 的核苷酸序列為5』 CAG CAA GTG GGA AGG TGT AAT CC
3，；
36B4 Reverse 的核苷酸序列為5』 CCC ATT CTA TCA TCA ACG GGT ACA A 3』 ；Telomere Forward 的核苷酸序列為:5，CGG TTT GTT TGG GTT TGG GTT TGG GTT TGGGTT TGG GTT 3』 ；
Telomere Reverse 的核苷酸序列為5，GGC TTG CCT TAC CCT TAC CCT TAC CCT TACCCT TAC CCT 3，；
84-mer的核苷酸序列為(TTAGGG) 14的核苷酸序列為含14個TTAGGG重複序列的核苷酸片段；
36B4片段的核苷酸序列為5』 CAG CM GTG GGA AGG TGT AAT CCG TCT CCA CAG ACAAGG CCA GGA CTC GTT TGT ACC CGT TGA TGA TAG AAT GGG 3』。2、利用84-mer繪製總長度標準曲線1)>84-mer的RT-qPCR反應條件RT_qPCR反應體系為20 uL，以84-mer為模板，取84-mer I uL, 100 nM 引物 Telomere Forward I uL, 100 nM引物Telomere ReverseluL,餘量為 PCR 反應液。RT-qPCR 反應條件95°C 10 min, 40 個循環(95°C 15 sec, 60 °C I min)
2)、繪製標準曲線
A)將 84-mer 梯度稀釋1，10ィ，1(Γ2，1(Γ3，1θΛ 1(Γ5，10'84-mer寡核苷酸鏈總長度計算方法如下
假設姆個反應需未稀釋84-mer 60pg,即60X 1(T12 g,已知84-mer的相對分子量為26667. 2 ；
平均ー個 84-mer 的質量為2.6667 X IO4 / 6. 02 X IO23 = O. 44 X 1(Γ19 ;
每個PCR反應體系中未稀釋84-mer總量為60 X 1(Γ12 / O. 44 X 1(Γ19 = I. 36X 109，因此每個PCR反應體系中未稀釋84-mer總長度為1.36 X IO9X 84= I. 18 X105kb ；
同理可得不同稀釋濃度84-mer在每個反應體系中的總長度，繪製標準曲線I (圖1)，標準曲線方程為log (TL) =-4. 86CT+40. 14，其中TL為總長度。3、利用36B4繪製標準曲線
O 36B4 75 bp的RT-qPCR反應條件RT-qPCR反應體系為20 uL，以36B4為模板，取 36B4 IuL , 100 nM 36B4 Forward IuL, 100 nM 36B4 Reverse luL，餘量為 PCR 反應液。RT-qPCR 反應條件95 °C 10 min, 40 個循環(95°C 15 sec, 60 °C I min)
將 75 bp 的 36B4 梯度稀釋1，ΚΓ1，1(Γ2，1(Γ3，1θΛ 1(Γ5，1(Γ6 ；
36Β4為75 bp，相對分子量為23268. I ；
平均ー個 36B4 75 bp 質量為 2. 32681 X IO4 / 6. 02 X IO23 = 0. 38 X 1(T19 g ；
假設反應體系中最高濃度75 bp 36B4含量為200 pg，那麼每個反應體系中75 bp 36B4的拷貝數為:200 X 10ィ2 / 0. 38 X 10ィ9 /2= 2. 63 X IO9 ；
同理可得不同稀釋濃度反應體系中75 bp 36B4拷貝數，作標準曲線2 (圖2)。標準曲線方程為log (TC) =-5. llCT+39. 57 ，其中TC為36B4基因的拷貝數。因為36B4基因是單拷貝基因，是做RT-qPCR常用的內參基因之一，所以知道了 gDNA中36B4的拷貝數就等於知道了樣品中染色體的拷貝數，才可以計算端粒平均長度的絕對值。4、RT-qPCR擴增gDNA樣品中端粒和75 bp的36B4 (內參)
實施例I所獲得gDNA樣品中端粒的RT-qPCR反應條件RT_qPCR反應體系為20 uL，gDNA I uL, 100 nM Telomere Forward I uL, 100 nM Telomere Reverse I uL (這裡的引物跟84mer的引物是ー樣的)，餘量為PCR反應液；PCR反應條件為95°C 10 min, 40個循環(95で 15 sec, 600C I min)。步驟gDNA樣品中75 bp的36B4的RT-qPCR反應條件RT-qPCR反應體系為20 uL，其中36B4 I uL ,100 nM 引物36B4 Forward I uL，100 nM 引物36B4 Reverse I uL，餘量為PCR反應液。RT-qPCR反應條件95°C 10 min, 40個循環(95°C 15 sec,60°C I min)。將步驟(4)獲得的gDNA樣品中端粒和36B4的Ct值，分別代入兩個標準曲線方程， 即 log (TL) = (CT (telomere)-40. 14) / -4. 86，其中 TL 為樣品中端粒總長度；L0G (TC) = (CT(36b4)-39. 57) / -5. 11，其中TC為樣品中端粒拷貝數，即可以計算端粒平均長度=端粒總長度/端粒拷貝數。
因為84mer是(TTAGGG)14，相當於人工合成的端粒重複序列，與細胞中的端粒序列並無區別，所以用人工合成的端粒序列做標準曲線是可以用於計算樣品中真正的端粒的長度的；同理人工合成的36B4片段也可用於計算樣品中的36B4拷貝數。另外，計算平均長度的公式只是ー個簡單的數學計算，比如一輛汽車行駛的日平均裡程=總的行駛裡程/天數，這樣的公式是不用詳細推導的，同理，樣品中端粒的平均長度、端粒的總長度和端粒的拷貝數(即染色體拷貝數)之間的關係也是顯而易見的，無需推導。對比例TRF法測端粒的平均長度(參考Aubert等，Telomere lengthmeasurement—しaveats ana a critical assessment of tne available technologiesand tools. Mutat Res. 2012 Feb I; 730 (1-2) : 59-67.)
1).將0.5ug gDNA樣品用Hae III (購自NEB)酶完全消化； 2).消化後的gDNA片段由瓊脂糖凝膠電泳分離，然後轉移至尼龍膜上；
3).使用放射性32P標記的探針32P-(TTAGGG) 7與尼龍膜上的端粒片段雜交；
4).通過放射自顯影檢測各個樣品端粒片段的長度。將TRF法測得的端粒長度取對數，然後將其與RT-qPCR法測得的樣品端粒平均長度絕對值做圖，可得如圖3所示，各數據點的趨勢線為一條直線，顯示本專利涉及的RT-qPCR法所測得的端粒平均長度絕對值與經典的TRF法所測得的結果有很強的相關性，是可信賴的結果。
權利要求
1.一種用RT-qPCR法測量端粒平均長度絕對值的試劑盒，其特徵在於包括盒體，襯墊，PCR 反應液，Taq 酶，136B4 Forward, 36B4 Reverse, Telomere Forward, TelomereReverse，84-mer，36B4片段，襯墊上設有容器空分別放置PCR反應液，Taq酶，136B4Forward, 36B4 Reverse, Telomere Forward, Telomere Reverse,84—mer ; 其中所述的36B4 Forward的核苷酸序列為Seq NO :1 ; 36B4 Reverse的核昔酸序列為Seq NO 2 ； Telomere Forward的核昔酸序列為見Seq NO 3 ； Telomere Reverse 的核昔酸序列為 Seq NO -A ； 84-mer的核苷酸序列為Seq NO 5 ； 36B4片段的核苷酸序列為見Seq NO :6。
2.根據權利要求I所述的一種用RT-qPCR法測量端粒平均長度絕對值的試劑盒，其特徵在於所述的PCR反應液含有PCR緩衝液、I X SYBR Green master mix, dNTPs。
3.一種用RT-qPCR法測量端粒平均長度絕對值的試劑盒的應用，其特徵在於按步驟實現 從人外周血細胞中獲取基因組DNA ； 使用權利要求I所述的試劑盒繪製標準曲線，用來計算RT-qPCR反應中樣品端粒的總長度和反應中染色體的總拷貝數標準曲線I使用濃度梯度為LIO'IO^IO'IO^KT5，10_6的人工合成的84-mer寡核苷酸作為模板，RT-qPCR反應的Ct值繪製；標準曲線2使用人工合成的36B4片段作為模板，RT-qPCR反應的CT值繪製，其濃度梯度為1，10—1，10_2，10_3，10_4，10_5，10_6 ;使用RT-qPCR擴增步驟A中獲得的樣品gDNA中的端粒片段和36B4基因片段，獲得相應的Ct值，並根據標準曲線計算樣品中端粒的總長度和樣品中36B4基因的拷貝數；計算樣品中端粒平均長度絕對值端粒平均長度=端粒總長度/ 36B4拷貝數；其中PCR反應條件為95°C變性10 min，然後95°C 15sec，60°C I min，共40個循環。
全文摘要
本發明涉及試劑盒，特別涉及一種實時定量PCR測量樣品中染色體端粒平均長度的絕對值的試劑盒及應用；一種用RT-qPCR法測量端粒平均長度絕對值的試劑盒，其特徵在於包括盒體，襯墊，PCR反應液，Taq酶，136B4Forward，36B4Reverse，TelomereForward，TelomereReverse，84-mer，36B4片段，襯墊上設有容器空分別放置PCR反應液，Taq酶，136B4Forward，36B4Reverse，TelomereForward，TelomereReverse，84-mer；端粒的縮短被認為與細胞的衰老和癌症等疾病的發生密切相關。同時，細胞內每條染色體兩端的端粒並不是以相同的速度縮短，有的端粒因為某些原因會突然大幅度變短，形成相對短的端粒。當這些短端粒達到或超過某一極限，就會導致細胞的衰來死亡，或者如癌症等的疾病。因此，準確地檢測細胞端粒長度，對預防衰老和預防癌症的發生都能起到非常大的幫助。本發明採用試劑盒可以方便，快捷測定端粒的平均長度的絕對值，使用工業生產或檢測。
文檔編號G01N21/64GK102660650SQ20121016516
公開日2012年9月12日 申請日期2012年5月25日 優先權日2012年5月25日
發明者全利, 葉亞東, 葉汝章, 張娟, 朱兆雲, 朱文華, 滕凌, 潘鸝, 胡娟, 路易斯伊格納羅, 郝小江 申請人:雲南路易斯中藥現代化工程技術研究中心