治療心腦血管疾病的複方燈盞細辛製劑及其製備方法和應用的製作方法
2023-06-11 12:48:21
專利名稱：治療心腦血管疾病的複方燈盞細辛製劑及其製備方法和應用的製作方法
技術領域：
本發明是一種治療心腦血管疾病的複方燈盞細辛製劑及其製備方法和應用，屬於中藥的技術領域。
背景技術：
腦血管疾病臨床上主要分為出血性腦血管病和缺血性腦血管病，缺血性腦血管病(動脈粥樣硬化性血栓性腦梗塞、腦栓塞和腔隙性腦梗塞)最為常見，約為出血性腦血管病的3倍。大量的流行病學研究表明，腦血栓形成又佔到整個腦血管病的40～60％，腦出血佔16～39％，蛛網膜下腔出血佔10％左右，腦栓塞約佔3～8％。世界衛生組織1971～1974年統計的6391例按診斷分類的腦卒中，結果腦梗塞最常見，平均佔40％以上；其次為腦內出血，佔16％；蛛網膜下腔出血在8％以上；腦栓塞佔3.5～5％。美國Framingham18年隨訪發現腦血栓形成佔57％，腦栓塞佔15％，腦出血佔5％，蛛網膜下腔出血佔12％。隨著工業化程度的增長，以及人民群眾生活水平的提高，飲食結構的改變，高血壓，高血糖，高血脂，吸菸，飲酒等人群的增多，腦血管病的發病率呈逐年上升趨勢。缺血性腦血管病是中老年人的常見疾病，其發病急，死亡率、致殘率均較高，是中老年人三大主要死因之一。對於腦梗塞的治療原則以減少血栓形成，減少腦組織壞死，保護腦細胞為主，西醫藥的治療主要有溶栓、抗凝、抗血小板聚集、腦保護、血管擴張、鈣拮抗治療。這些藥物如同大多數化學藥一樣，臨床應用也受到越來越多顯現出來的副作用的限制。常用的抗血栓治療有溶栓劑(尿激酶，鏈激酶等)、抗凝劑(肝素、雙香豆素、華法令、新抗凝片等)、鈣離子拮抗劑(氟桂嗪、尼莫地平、尼卡地平、腦益嗪、硝苯地平、利多氟嗪等)，大多具有見效快的特點，但易出現出血性疾病、胃腸道反應以及過敏、頭痛、頭暈、噁心、低血壓、皮疹等不良反應，並常常受到併發症的影響而應用受限，故臨床應用非常謹慎。而中國專利公報公開的專利申請號為03136116、名稱為「一種治療血液粘稠症的中藥製劑及其製備方法」的申請，這份發明使用了比較多的中藥材配伍，製備比較複雜，特別是製備中藥注射劑是很困難的，不利於控制其生產質量。鑑於此，十分有必要研發一種配伍簡單合理，療效可行的中藥組方。
發明內容
本發明的目的在於提供一種治療心腦血管疾病的複方燈盞細辛中藥製劑及其製備方法和應用；本發明針對現有技術，本方根據風痰流竄經絡，血脈痺阻，經隧不通，氣不能行，血不能濡，故肢體廢而不用成半身不遂的病因病機，遵「治風先治血，血行風之滅」之理，採取活血化瘀通絡之法。以性味苦溫的燈盞細辛為君，用之化瘀通絡；赤芍味苦微寒，入血分，涼血熱，散瘀血，通經絡，治血熱瘀滯，助君藥以達活血化瘀、散瘀通絡之效，用之為臣。二藥合用具有活血化瘀，通經活絡的功能。組方有用藥精簡力專、作用途徑直接之長，無偏溫偏涼之弊，有較為明顯的用藥特色。本發明不僅對於治療心腦血管疾病如冠心病、心絞痛、心律失常、腦血栓、老年性痴呆等有較好的療效，還可以用於治療肝腎綜合症、心肺病、糖尿病及其併發症等疾病。而且本發明選用的燈盞細辛細辛、赤芍，主要含燈盞細辛花素、芍藥苷，工藝合理可行，製備過程中不會產生過敏性物質，更加安全有效，可供病人長期使用。
本發明是這樣構成的按照重量百分比計算，它是由燈盞細辛1～99％和赤芍99～1％與適當的輔料製備而成。
優選為按照重量百分比計算，它是由燈盞細辛20～80％和赤芍80～20％與適當的輔料製作而成。
準確的說按照重量百分比計算，它是由赤芍60％與燈盞細辛40％製作而成。
所述組方中的赤芍與燈盞細辛可以是藥材或者是由相應比例藥材製備得到的提取物，其中燈盞細辛提取物可以是燈盞細辛醇提取物、燈盞細辛水提取物、燈盞細辛水提醇沉提取物、燈盞細辛半仿生提取物、燈盞細辛超臨界萃取物或者以上各提取物的精製品；赤芍提取物可以是赤芍醇提取物、赤芍水提取物、赤芍水提醇沉提取物、赤芍半仿生提取物、赤芍超臨界萃取物或者以上各提取物的精製品。
所述的製劑為直接用於注射給藥的小容量注射液、直接供靜脈滴注的靜脈輸液、需稀釋後用於靜脈滴注的注射用濃溶液和用冷凍乾燥法或噴霧乾燥法製得的注射用無菌粉末和無菌塊狀物，片劑、膠囊劑、顆粒劑、滴丸劑、丸劑、軟膠囊劑、口服液體製劑、口腔崩解片或分散片劑。
製劑中含有黃酮類成分和苷類成分，以重量百分比計算，注射劑中黃酮類成分和苷類成分含量之和不低於製劑中扣除輔料量和水分量的總固體量的25％。
所述的治療心腦血管疾病的複方燈盞細辛製劑的製備方法取赤芍藥材，粉碎後加入水或乙醇溶液提取，合併提取液，過濾，濃縮得赤芍粗提物，也可在此基礎上採用乙醇沉澱法、柱層析法、萃取法、絮凝沉澱法中的一種或幾種聯合使用進行適當精製，得赤芍精提物；取燈盞細辛藥材，粉碎後加入水或乙醇溶液提取，合併提取液，過濾，濃縮得燈盞細辛粗提物，也可在此基礎上採用乙醇沉澱法、柱層析法、萃取法、絮凝沉澱法中的一種或幾種聯合使用進行適當精製，得燈盞細辛精提物，將燈盞細辛粗提物或精提物與赤芍粗提物或精提物混合均勻，加輔料製成不同的製劑。
優選為燈盞細辛加5～12倍量水煎煮1～5次，每次0.5～2小時，濾過，合併濾液，濾液減壓濃縮，加乙醇使含醇量達30～80％，不斷攪拌，靜置6～24小時，抽濾，濾液減壓回收乙醇並濃縮，用鹽酸調pH值，保溫，傾棄上清液，抽濾，沉澱用水洗至pH值，真空乾燥，得燈盞細辛提取物；赤芍加3～10倍量水煎煮1～5次，每次0.5～2小時，濾過，合併濾液，減壓濃縮，加乙醇使含醇量達40～80％，攪拌均勻，靜置6～24小時，抽濾，濾液減壓回收乙醇並濃縮，用水飽和的正丁醇提取1～5次，合併正丁醇液，用水洗1～3次，減壓回收正丁醇，殘留物加乙醇溶解，上聚醯胺柱，用乙醇洗脫，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空乾燥，得赤芍提取物，將燈盞細辛提取物與赤芍提取物混合均勻，加輔料製成不同的製劑。
準確的說燈盞細辛加10倍量水煎煮3次，每次0.5小時，濾過，合併濾液，濾液減壓濃縮至相對密度50℃時1.09～1.11，加乙醇使含醇量達55％，不斷攪拌，靜置12小時，抽濾，濾液減壓回收乙醇並濃縮至相對密度50℃時1.10～1.12，用鹽酸調pH值至2，55℃保溫6小時，傾棄上清液，抽濾，沉澱用水洗至pH值3～4，真空乾燥，得燈盞細辛提取物；赤芍加8倍量水煎煮3次，每次1小時，濾過，合併濾液，減壓濃縮至相對密度50℃時1.06～1.08，加乙醇使含醇量達60％，攪拌均勻，靜置12小時，抽濾，濾液減壓回收乙醇並濃縮至相對密度50℃時1.18～1.20，用1/2倍量水飽和的正丁醇提取4次，合併正丁醇液，用1/8倍量水洗1次，減壓回收正丁醇，殘留物加45％乙醇7500ml溶解，上聚醯胺柱，1500g，Φ12cm，徑高比1∶6，吸附流速0.5BV/h，BV-溼柱體積＝幹樹脂重量的5倍體積，用45％乙醇22500ml洗脫，洗脫流速1BV/h，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空乾燥，得赤芍提取物，將燈盞細辛提取物與赤芍提取物混合均勻，加輔料製成不同的製劑。
所述製劑中的注射用無菌塊狀物這樣製備取燈盞細辛提取物、赤芍提取物和10g甘露醇，加1800ml注射用水，攪拌使溶解，用飽和氫氧化鈉溶液調pH值至7.0～7.5，加注射用水至2000ml，混勻，煮沸30分鐘，分裝於已處理好的輸液瓶中，塞入丁基橡膠塞及薄膜，軋鋁蓋，流通蒸汽滅菌30分鐘，冷藏24小時，在無菌條件下用0.45μm和0.22μm微孔濾膜濾過，濾液分裝，每瓶2.0ml，冷凍乾燥，第一階段的平衡凍結溫度為0℃時的平衡時間為1.5小時，即擱板溫度與產品溫度基本一致的時間；第二階段凍結溫度從0℃到最低共熔溫度-16℃時，擱板溫度與產品溫度平衡時間為1.5小時；第三階段繼續降溫至-45℃，約需1.5小時，保持此溫度1.5小時，直至產品完全凍牢，即開始抽真空，進入乾燥程序，在45℃恆溫下-抽真空，使乾燥室的氣壓降至13.332～266.64Pa，在此壓力下緩慢升溫，2～4℃/h，至最低共熔點溫度，時間約為12小時，升華乾燥完成後，繼續在13.332Pa低壓條件下，升溫乾燥以除去殘餘水分，時間約為12～15小時，保持35℃以上乾燥3小時，壓蓋，即得。
所述製劑中的注射液和注射用濃溶液這樣製備取燈盞細辛提取物、赤芍提取物，加入適量注射用水溶解，按體積加入1.0％的活性炭，煮沸，保持微沸30min，稍冷濾過，濾液加注射用水至規定量，用飽和氫氧化鈉溶液調pH值至7.0～7.5，煮沸，4℃冷藏過夜，粗濾、精濾，加注射用水，分裝到安剖瓶，封口滅菌即得小容量注射液或注射用濃溶液。
所述製劑中的葡萄糖或氯化鈉靜脈輸液這樣製備取燈盞細辛提取物、赤芍提取物，加入適量注射用水溶解，加入規定量的葡萄糖或氯化鈉，混合溶解後按體積加入1.0％的活性炭，煮沸，保持微沸30min，稍冷濾過，濾液加注射用水至規定量，再用飽和氫氧化鈉溶液調pH值至7.0～7.5，煮沸，4℃冷藏過夜，粗濾、精濾，加注射用水，分裝，滅菌即得。
所述製劑中的注射用無菌粉末這樣製備取燈盞細辛提取物、赤芍提取物，加1800ml注射用水，攪拌使溶解，用飽和氫氧化鈉溶液調pH值至7.0～7.5，加注射用水至2000ml，混勻，煮沸30分鐘，分裝到搪瓷盤中，冷凍乾燥，第一階段的平衡凍結溫度為0℃時的平衡時間為1.5小時，即擱板溫度與產品溫度基本一致的時間；第二階段凍結溫度從0℃到最低共熔溫度-16℃時，擱板溫度與產品溫度平衡時間為1.5小時；第三階段繼續降溫至-45℃，約需1.5小時，保持此溫度1.5小時，直至產品完全凍牢，即開始抽真空，進入乾燥程序，在45℃恆溫下-抽真空，使乾燥室的氣壓降至13.332～266.64Pa，在此壓力下緩慢升溫，2～4℃/h，至最低共熔點溫度，時間約為12小時，升華乾燥完成後，繼續在13.332Pa低壓條件下，升溫乾燥以除去殘餘水分，時間約為12～15小時，保持35℃以上乾燥3小時，在無菌條件下分裝到西林瓶中，即得。
所述製劑中的注射用無菌粉末還可以這樣製備取燈盞細辛提取物、赤芍提取物，混勻，加入適量注射用水溶解，按體積加入1.0％的活性炭，煮沸，保持微沸30min，稍冷濾過，濾液加注射用水至規定量，用飽和氫氧化鈉溶液調pH值至7.0～7.5，煮沸，4℃冷藏過夜，粗濾、精濾，在進風溫度為150℃，出風溫度為60℃，氣流速度為20m·s-1的條件下噴霧乾燥得粉末，分裝，即得。
本發明中燈盞細辛提取物可以是黃酮類成分含量大於90％的總黃酮有效部位，赤芍提取物可以是苷類成分含量大於90％的總苷有效部位。
本發明中赤芍及赤芍提取物還可以用等量的白芍及白芍提取物替代。
所述的製劑也可以用於製備治療肝腎綜合症、心肺病、糖尿病及其併發症等疾病的藥物。
也就是說，本發明製備的產品可以用於治療肝腎綜合症、心肺病、糖尿病及其併發症等疾病。
與現有技術相比，本方根據風痰流竄經絡，血脈痺阻，經隧不通，氣不能行，血不能濡，故肢體廢而不用成半身不遂的病因病機，遵「治風先治血，血行風之滅」之理，採取活血化瘀通絡之法。以性味苦溫的燈盞細辛為君，用之化瘀通絡；赤芍味苦微寒，入血分，涼血熱，散瘀血，通經絡，治血熱瘀滯，助君藥以達活血化瘀、散瘀通絡之效，用之為臣。二藥合用具有活血化瘀，通經活絡的功能。組方有用藥精簡力專、作用途徑直接之長，無偏溫偏涼之弊，有較為明顯的用藥特色，通過合理可行的工藝，製備過程中不會產生過敏性物質，保證了產品的安全有效，可供病人長期使用。
本申請人在研製過程中，對每個環節都進行了詳細的研究提取工藝路線研究通過對方中藥物所含化學成分研究，分析每味藥材的有效成分與藥理作用，結合不同提取溶劑、不同提取方法的藥效學試驗研究及指標成分的轉移率，確定了本方的基本工藝路線。
組方配比及拆方研究我們以小鼠急性腦缺血的保護作用為評價指標，對方中兩味藥材組成配比進行最佳處方篩選，結果表明燈盞細辛與赤芍用量之比為1∶1.5為該方的最佳配方。同時以小鼠急性腦缺血作用為指標進行拆方研究，結果表明各給藥組均能延長急性腦缺血小鼠的呼吸維持時間，兩藥合用的作用強度顯著優於單味用藥組(P＜0.01)。
提取方法和提取條件的選擇方中兩味藥材經不同提取溶劑、不同提取方法以及單獨提取、合併提取，以化學指標成分及藥效學試驗等指標進行動態跟蹤，試驗結果提示兩味藥材不宜混合提取，以水煎煮提取製備的樣品生理活性較強，製劑中有效成分的提取率高，製劑質量易於控制。試驗中對溶劑用量、提取時間、提取次數等進行了正交試驗，篩選最優提取工藝。
分離、純化工藝在藥材的提取物中，除有效成分外，尚含許多雜質成分，為保證產品的質量和有利於產品的質量控制，需進一步精製純化，儘可能地除去水提液中的大分子粘液質、蛋白質、澱粉及固體微粒等雜質，提高有效成分的含量。經不同方法對比試驗，兩味藥材的煎煮液均可採用乙醇處理。燈盞細辛酸化精製；赤芍用正丁醇提取(試驗採用大孔吸附樹脂吸附分離、正丁醇提取等方法進行理化性質研究及藥效學試驗，結果表明赤芍中的活性成分之一酚酸類成分主要存在於水洗液和流穿液中，而對大鼠局灶性腦缺血(MCAO)腦血流量的影響以及對小鼠急性腦缺血的保護作用試驗結果均顯示水洗液和流穿液仍有較強的藥理活性，說明大孔吸附樹脂分離不能將有效成分有效富集)。經純化精製的樣品綜合指標好，主要成分的純度和收率較高，產品質量易於控制，經試驗研究方法的考察和對精製組分(半成品)的藥效學試驗結果表明，該工藝合理、可行。
除鞣質方法選擇赤芍中含有鞣質，必須進行除鞣質處理。經各種除鞣質方法的對比研究，採用對鞣質吸附力極強的聚醯胺除鞣質。結果表明，該法去除鞣質效果較好，有效成分損失少，芍藥苷的轉移率高，樣品中的鞣質檢查符合規定，小鼠的異常毒性檢查可達120倍以上(經對市售幾種中藥注射劑進行對比檢查，小鼠的異常毒性大多在60倍左右)，明顯高於其他除鞣質方法。說明本品用聚醯胺去除鞣質的方法可行，製劑的安全性得到有效保證。
半成品乾燥方法的選擇經對不同乾燥條件的試驗對比，結果表明，真空乾燥對有效成分的影響較小，乾燥速度快，溫度低，樣品質地疏鬆，易於溶解。
製劑成型工藝研究經對附加劑的選擇及用量、pH值的影響、滅菌條件的優選、冷凍乾燥工藝等試驗，確定了製劑成型工藝的基本參數及製劑半成品投料的處方。
此外，本發明還在實施方式中提供了其他提取工藝、多種製劑的詳細製作工藝，可以直接用於指導實際生產。
申請人進行了一系列實驗，可以證明本發明提供的藥物具有有效的效果。
實驗例1不同配方的藥效學比較研究(1)對急性血瘀大鼠血液流變性的影響大鼠70隻，雌雄各半，體重270±20g連續給藥12天，末次給藥後1h，除正常對照組外其餘各組均sc注射腎上腺素0.8mg/kg，共兩次，兩次間隔4h。在兩次之間(前後各間隔2小時)，將大鼠浸入冰水中5min，禁食。次日晨股動脈採血，肝素鈉抗凝，測定血流變各指標。
組別 血漿粘度 紅細胞壓積 還原粘度正常對照1.52±0.34 0.43±0.11 7.78±0.29模型對照2.15±0.18 0.55±0.04 8.39±3.43赤芍2g/kg 1.96±0.24 0.48±0.27 8.20±2.54燈盞細辛2g/kg 1.81±0.18 0.45±0.08 8.10±1.72白芍2g/kg 1.98±0.27 0.49±0.39 8.21±1.33燈盞白芍提取液 1.70±0.45 0.44±0.87 7.85±1.33燈盞赤芍提取液 1.68±0.19 0.43±0.15 7.81±1.64結果表明，燈盞花主要成分是燈盞花素總黃酮，化學名為4，5，6-三羥基黃酮-7-葡萄糖醛酸甙，具有抑制血小板積聚、抑制凝血功能、改善微循環的作用，能抑制鈣泵對鈣離子的轉運；赤芍能降低血漿脂質過氧化物，減少鈣沉積於動脈壁，影響鈣代謝，平衡抗動脈粥樣硬化；燈盞細辛和赤芍配伍後有較強改善血瘀模型血液狀態的能力，能使血瘀大鼠血漿粘度、紅細胞壓積、血小板聚集顯著降低，本發明組方能夠聯合增效。該實驗還證明用等量的白芍及白芍提取物替代赤芍及赤芍提取物得到的製劑具有基本相同的效果。
(2)對血瘀模型家兔血液流變性的影響家兔64隻，隨機分為8組，每組8隻，♀♂各半。各組動物先耳緣靜脈注射(iv)給藥。空白及模型對照組注射生理鹽水(NS)1ml/kg，陽性藥組iv葛根素注射液30mg/kg(以NS配成30mg/ml)，實驗組分別注射0.25mg/ml的藥液(以NF配成)，給藥量均為1ml/kg，連續給藥兩周(14d)，於給藥的第2、13d，除空白對照組外，各兔分別經耳緣靜脈注10％高分子右旋糖酐5ml/kg，每日兩次，造成血瘀模型。末次給藥後，再次注射10％高分子右旋糖酐5ml/kg，15min後，心臟採取空腹血6ml，進行血液流變學指標檢測，其中血小板聚集率用LBY-NJ2型血小板聚集儀，採用比濁法測定其它採用LBY-N6A+旋轉式錐板粘度儀測定。
對家兔血小板聚集和纖維蛋白原的影響(x±s，n＝6)組別 劑量 體重(kg) 血小板聚集(％) 纖維蛋白原(g/L)空白組- 2.41±0.2216.33±1.73 2.87±3.18模型組- 2.49±0.1639.06±17.13 2.65±1.29陽性藥組 30mg/kg 2.38±0.1512.48±0.36 3.04±2.88燈盞∶赤芍(1∶99) 2g/kg 2.40±0.2713.11±0.23 2.91±1.53燈盞∶赤芍(1∶4) 2g/kg 2.39±0.3513.02±3.05 2.95±1.32燈盞∶赤芍(2∶3) 2g/g 2.37±0.1312.50±0.40 3.03±0.87燈盞∶赤芍(4∶1) 2g/kg 2.40±0.1513.19±0.30 2.90±0.69燈盞∶赤芍(99∶1) 2g/g 2.41±0.2713.23±0.42 2.96±0.58初步實驗表明，燈盞、赤芍配伍有效，本申請人還在工藝研究過程中進行了詳細的組方配比與拆方研究。
實驗例2提取工藝研究為了解本方對腦血管疾病作用的有效部位和主要有效成分，我們對本方提取溶劑、提取方法(合煎、單煎)，以及組方配比、不同給藥途徑、不同提取分離、精製純化方法的藥效學和化學成分的動態變化進行了研究。試驗結果表明其藥理活性與藥液中的物質基礎有關，複方藥效優於任何單味藥；血管內給藥作用明顯優於血管外給藥；兩味藥材純化精製後不但保留了有效成分，而且製劑質量得到有效提高，達到靜脈注射用製劑的質量要求。
1提取溶劑、提取方法的選擇 以小鼠急性腦缺血的保護作用為評價指標，採用系統溶劑法，對兩味藥材分別提取、混合提取、分別提取後混合樣品進行試驗。
1.1樣品製備 取燈盞細辛、赤芍藥材，分別用醋酸乙酯、正丁醇、乙醇和水依次提取，分段制樣，得樣品TR1(A)、TR1(B)、TR1(C)、TR1(D)、TR2(A)、TR2(B)、TR2(C)、TR2(D)、TR3(A)、TR3(B)、TR3(C)、TR3(D)、TR4(A)、TR4(B)、TR4(C)、TR4(D)提取物。上述各樣品，於水浴上進一步除去殘留溶劑，加適量水微熱溶解，調pH值至6，充分攪拌，滴加5％明膠溶液至無沉澱產生，再加乙醇使含醇量為75％，靜置12小時，濾過，濾液回收乙醇，濃縮近幹，加水稀釋至每1ml含2.0g生藥，調pH值至7.0，煮沸，放冷，濾過，冷藏24小時，用0.45μm微孔濾膜濾過，濾液分裝，滅菌，備用。對上述樣品進行藥效學試驗比較，考察該方提取溶媒、提取方法。
1.2實驗方法及結果取昆明種小鼠約180隻，體重18～22g，雌雄兼用，隨機分為18組，每組10隻(雌雄各半)。樣TR-12.4g生藥/kg；樣TR-23.6g生藥/kg；樣TR-36.0g生藥/kg；樣TR-46.0g生藥/kg；陽性對照藥4.0ml/kg；模型組給予等容積的生理鹽水。各組均通過尾靜脈給藥，給藥容積為10ml/kg。靜脈給藥15min後，仰臥位固定，用0號手術縫線兩端結紮雙側頸總動脈(合併迷走神經)後中間剪斷。記錄小鼠的呼吸維持時間，結果見下表。
試驗結果表明，除TR-1(A)、TR-1(B)、TR-1(D)、TR-2(A)、TR-3(A)、TR-3(D)六個樣品外，各給藥組均能延長急性腦缺血的小鼠呼吸維持時間，與模型組比較差異顯著(P＜0.05、P＜0.01)。其中乙醇和正丁醇提取液作用比較明顯，與模型組比較有顯著性差異(P＜0.05、P＜0.01)，而醋酸乙酯和水提液的作用較上述兩種溶劑的作用差。
試驗結果提示第一，該方中的有效成分主要為極性較大的物質，同時說明有機溶劑提取後，水提液中仍有活性成分，為排除溶劑使用先後對藥理作用的影響，兩味藥材分別選擇水、乙醇等進行驗證試驗。第二，樣品4的作用明顯比樣品3強，說明兩藥分開提取比合併提取效果好。
對急性腦缺血小鼠呼吸維持時間的影響(x±s，n＝10)
與模型組比較*P＜0.05 **P＜0.01注樣品TR1為燈盞細辛藥材單獨提取，樣品TR2為赤芍藥材單獨提取。樣品TR3為兩味藥材混合提取，樣品TR4為分別單獨提取後，提取物混合制樣。A-醋酸乙酯提取，B-正丁醇提取，C-為乙醇提取，D為水煮提取。陽性對照藥複方丹參注射液，上海通用藥業股份有限公司產品，批號0302182。
2單獨提取或合併提取工藝選擇為進一步確定本方的提取工藝，以小鼠急性腦缺血的保護作用為評價指標，對方中兩味藥材單獨提取或合併提取工藝進行試驗比較。
2.1樣品製備單獨水煎煮提取取燈盞細辛100g，加12倍量水煎煮3次，每次0.5小時，濾過，合併濾液，濃縮至每1ml含生藥2g的濃度，加乙醇使含醇量為60％，攪拌，靜置24小時，濾過，濃縮，再加乙醇使含醇量為70％，靜置24小時，濾過，濾液回收乙醇，濃縮近幹，得燈盞細辛提取物；再取赤芍藥材150g，加10倍量水煎煮3次，每次1小時，濾過，合併濾液，濃縮至每1ml含生藥2g的濃度，加乙醇使含醇量為60％，攪拌，靜置12小時，濾過，回收溶劑並濃縮至每1ml含2g生藥，滴加5％明膠溶液至無沉澱產生，再加乙醇使含醇量為75％，靜置12小時，濾過，濾液回收乙醇，濃縮近幹，得赤芍提取物。取赤芍和燈盞細辛提取物加注射用水120ml微熱溶解，調pH值至7.0，補加注射用水至125ml，煮沸，放冷，濾過，冷藏24小時，用0.45μm微孔濾膜濾過，濾液分裝，滅菌，即得(每1ml含生藥2.0g)。
合併水煎煮提取取燈盞細辛100g、赤芍藥材150g，加10倍量水煎煮3次，每次1小時，濾過，合併濾液，濃縮至每1ml含生藥2g的濃度，加乙醇使含醇量為60％，攪拌，靜置24小時，濾過，濾液回收乙醇至並濃縮至每1ml含生藥2g，滴加5％明膠溶液至無沉澱產生，再加乙醇使含醇量為75％，靜置12小時，濾過，濾液回收乙醇，濃縮近幹，得提取物，加注射用水120ml微熱溶解，調pH值至7.0，補加注射用水至125ml，煮沸，放冷，濾過，冷藏24小時，用0.45μm微孔濾膜濾過，濾液分裝，滅菌，即得(每1ml含生藥2.0g)。
陽性對照藥複方丹參注射液，規格2ml/支。上海通用藥業股份有限公司第三公司，批號0302182。
藥物稀釋方法 臨用前用0.9％的氯化鈉注射液稀釋至適當的濃度，備用。
2.2藥效學試驗方法及結果對小鼠急性腦缺血的保護作用 取昆明種小鼠約40隻，體重18～22g，雌雄兼用，隨機分為4組，每組10隻(雌雄各半)。樣TF1、2給藥劑量為2.5g生藥/kg；陽性對照藥4.0ml/kg；模型組給予等容積的生理鹽水。各組均通過尾靜脈給藥，給藥容積為10ml/kg。靜脈給藥15min後，仰臥位固定，用0號手術縫線兩端結紮雙側頸總動脈(合併迷走神經)後中間剪斷。記錄小鼠的呼吸維持時間，試驗結果見下表。
對急性腦缺血小鼠呼吸維持時間的影響(x±s，n＝10)
與模型組比較*P＜0.05、**P＜0.01TF-1合併提取樣，TF-2單獨提取樣，下同試驗結果表明，各給藥組均能延長急性腦缺血的小鼠呼吸維持時間，與模型組比較差異顯著(P＜0.05、P＜0.01)，其中兩味藥材分開提取作用較明顯(P＜0.01)，組間比較無顯著性差異(P＞0.05)。
2.3樣品中指標成分的轉移率分別取上述樣品，依法測定燈盞細辛中野黃芩苷和赤芍中芍藥苷的含量，計算轉移率，結果見下表。
不同提取方法指標成分轉移率試驗結果 分開提取樣品的野黃芩苷和芍藥苷轉移率均明顯高於合併提取樣品，主要是由於在煎煮過程中，提取液pH值較低(pH＝4～5)，影響有效成分的提取，尤其對野黃芩苷的影響較大。
綜上，乙醇和水是燈盞細辛和赤芍的有效提取溶劑，單獨提取和合併提取的提取物均能延長急性腦缺血小鼠呼吸維持時間。儘管組間比較無顯著性差異，但單獨提取的作用明顯優於合併提取；水煎煮提取野黃芩苷和芍藥苷在樣品中的轉移率較高，分開提取野黃芩苷和芍藥苷轉移率明顯高於合併提取。結合藥效學試驗結果分析，本品中野黃芩苷和芍藥苷為本方有效物質，故本方宜以價廉的水為溶劑煎煮提取，兩味藥材不宜合併煎煮。
3組方配比與拆方研究 本方為驗方，臨床應用組方配比不盡相同，為進一步探討本發明產品(凍乾粉針)組方配比及組方的合理性，以小鼠急性腦缺血、缺氧的保護作用為評價指標，對方中兩味藥材組成配比及拆方進行藥效學試驗研究。
3.1組方配比研究3.1.1處方-1(燈盞細辛∶赤芍＝1∶1)取燈盞細辛120g，加12倍量水煎煮3次，每次0.5小時，濾過，合併濾液，濃縮至每1ml含生藥2g的濃度，加乙醇使含醇量為60％，攪拌，靜置24小時，濾過，濃縮，再加乙醇使含醇量為70％，靜置24小時，濾過，濾液回收乙醇，濃縮近幹，得燈盞細辛提取物。再取赤芍120g，加10倍量水煎煮3次，每次1小時，濾過，合併濾液，濃縮至每1ml含生藥2g的濃度，加乙醇使含醇量為60％，攪拌，靜置12小時，濾過，濃縮，滴加5％明膠溶液至無沉澱產生，再加乙醇使含醇量為75％，靜置12小時，濾過，濾液回收乙醇，濃縮近幹，得赤芍提取物。取赤芍和燈盞細辛提取物加注射用水適量微熱溶解，調pH值至7.0，補加注射用水至120ml，煮沸，放冷，濾過，冷藏24小時，用0.45μm微孔濾膜濾過，濾液分裝，滅菌，即得(每1ml含生藥2g)。
處方-2(燈盞細辛∶赤芍＝1∶1.5)取燈盞細辛120g，赤芍180g，分別按上法操作得提取物。取兩提取物加適量注射用水微熱溶解，調pH值至7.0，補加注射用水至150ml，同法操作即得。
處方-3(燈盞細辛∶赤芍＝1∶2)取燈盞細辛120g，赤芍240g，分別按上法操作。取兩提取物加適量注射用水微熱溶解，調pH值至7.0，補加注射用水至180ml，同法操作即得。
處方-4(燈盞細辛∶赤芍＝2∶1)取燈盞細辛180g，赤芍90g，分別按上法操作。取兩提取物加適量注射用水微熱溶解，調pH值至7.0，補加注射用水至135ml，同法操作即得。
藥物稀釋方法臨用前用0.9％的氯化鈉注射液(廣西浦北製藥廠，批號A0301153)稀釋至適當的濃度，備用。
3.1.2試驗方法及結果對小鼠急性腦缺血的保護作用取昆明種小鼠約210隻，體重18～22g，雌雄兼用，隨機分為21組，每組10隻(雌雄各半)。各劑量組按下表給藥；模型組給予等容積的生理鹽水。各組均通過尾靜脈給藥，給藥容積為10ml/kg。靜脈給藥15min後，仰臥位固定，用0號手術縫線兩端結紮雙側頸總動脈(合併迷走神經)後中間剪斷。記錄小鼠的呼吸維持時間，試驗結果見下表。
對急性腦缺血小鼠呼吸維持時間的影響(x±s，n＝10)
與模型組比較*P＜0.05、**P＜0.01，與處方2比較#P＜0.05、##P＜0.01CF-1～CF-4處方1～處方4，下同。
結果表明，4種不同配比組方的提取物均能不同程度延長急性腦缺血小鼠呼吸維持時間。按改進寇氏法計算各配比組方的半數有效量(ED50)由小到大依次為處方2(1.09g生藥/kg)＜處方3(1.54g生藥/kg)＜處方1(1.60g生藥/kg)＜處方4(1.66g生藥/kg)。處方2的ED50顯著小於處方1、4；處方2小於處方3，但差別不顯著。由上可知，處方2效果最佳，即燈盞細辛與赤芍用量之比為1∶1.5。
3.2組方拆方研究3.2.1樣品製備燈盞細辛樣品取燈盞細辛300g，加12倍量水煎煮3次，每次0.5小時，濾過，合併濾液，濃縮至每1ml含生藥2g的濃度，加乙醇使含醇量為60％，攪拌，靜置24小時，濾過，濃縮，再加乙醇使含醇量為70％，靜置24小時，濾過，濾液回收乙醇，濃縮近幹，得燈盞細辛提取物。加注射用水適量微熱溶解，調pH值至7.0，補加注射用水至150ml，煮沸，放冷，濾過，冷藏24小時，用0.45μm微孔濾膜濾過，分裝，滅菌，即得(每1ml含生藥2g)。
赤芍樣品取赤芍450g，加10倍量水煎煮3次，每次1小時，濾過，合併濾液，濃縮至每1ml含生藥2g的濃度，加乙醇使含醇量為60％，攪拌，靜置12小時，濾過，濃縮，滴加5％明膠溶液至無沉澱產生，再加乙醇使含醇量為75％，靜置12小時，濾過，濾液回收乙醇，濃縮近幹，得赤芍提取物。加注射用水適量微熱溶解，調pH值至7.0，補加注射用水至225ml，煮沸，放冷，濾過，冷藏24小時，用0.45μm微孔濾膜濾過，分裝，滅菌，即得(每1ml含生藥2g)。
二藥合用樣品取燈盞細辛300g、赤芍450g，分別按上述方法提取，得提取物。兩提取物合併，加注射用水適量微熱溶解，調pH值至7.0，補加注射用水至375ml，煮沸，放冷，濾過，冷藏24小時，用0.45μm微孔濾膜濾過，分裝，滅菌，即得(每1ml含生藥2g)。
3.2.2試驗方法及結果3.2.2.1對小鼠急性腦缺血的保護作用取昆明種小鼠50隻，體重18～22g，雌雄兼用，隨機分為5組，每組10隻(雌雄各半)。樣CFYJ-1給藥劑量為1.0g生藥/kg，樣CFYJ-2給藥劑量為1.5g生藥/kg，樣CFYJ-3給藥劑量為2.5g生藥/kg；陽性對照組4.0ml/kg；模型組給予等容積的生理鹽水。各組均通過尾靜脈給藥，給藥容積為10ml/kg。靜脈給藥15min後，仰臥位固定，用0號手術縫線兩端結紮雙側頸總動脈(合併迷走神經)後中間剪斷。記錄小鼠的呼吸維持時間，試驗結果見下表。
對急性腦缺血小鼠呼吸維持時間的影響(x±s，n＝10)
與模型組比較*P＜0.05、**P＜0.01與CFJY-3組比較#P＜0.05、##P＜0.01CFJY-1燈盞細辛CFJY-2赤芍CFJY-3燈盞細辛+赤芍試驗結果表明，各給藥組均能延長急性腦缺血小鼠的呼吸維持時間，與模型組比較差異顯著(P＜0.05、P＜0.01)；燈盞細辛與赤芍合併用藥組，作用強度顯著優於單味用藥組(P＜0.01)，說明複方的作用明顯優於單方。
3.2.2.2處方交互作用分析為進一步研究兩藥合用後可能存在的交互作用，採用L4(23)正交實驗進行交互作用分析，結果見下表。
L4(23)正交實驗表及結果(x±s，n＝10)
從上表的結果直觀分析，各因素影響藥效的順序為，燈盞細辛對於藥效的貢獻略大於赤芍(A＞B)；正交實驗方差分析表明，燈盞細辛或赤芍對於藥效均有極顯著影響(P＜0.01)，而且兩藥存在明顯的交互作用(P＜0.01)。交互作用分析如下
將不用藥試驗組作為基數(23.60)，燈盞細辛藥效＝(32.66-23.60)，赤芍藥效＝(32.23-23.60)，燈盞+赤芍藥效＝(58.73-23.60)。由於(58.73-23.60)＞(32.66-23.60)+(32.23-23.60)，故燈盞細辛與赤芍存在交互作用，說明兩藥合用具有協同效果。
4.系統工藝研究4.1燈盞細辛提取工藝研究
4.1.1煎煮工藝的正交試驗正交試驗因素水平表設計根據試驗結果，加水量、煎煮時間、煎煮次數是影響煎煮效率的主要因素，按每個因素3水平，用L9(34)正交表安排試驗。以野黃芩苷收率為考察指標，對提取工藝進行探討。
因素水平表
燈盞細辛煎煮工藝條件L9(34)正交試驗安排及結果
方差分析表
F0.05(2，2)＝19.00 F0.01(2，2)＝99.00結果分析從上表中的結果直觀分析，各因素影響提取效率的順序為C＞B＞A，其中提取次數和提取時間對提取工藝影響較大；方差分析結果表明，提取次數有極顯著性差異(P＜0.01)，提取時間有顯著性差異(P＜0.05)，兩者結論一致。最佳工藝條件為A3B1C3，在A因素中最佳工藝和次佳工藝的極差較小，從節省能源和時間的角度考慮，次佳工藝為A2B1C3。故以最佳工藝A3B1C3和次佳工藝A2B1C3進行重複試驗(結果見下表)。
正交試驗重複結果
從上表結果可見，甲乙兩工藝的野黃芩苷收率無明顯差異，從省工省時、降低能耗的角度，選擇乙工藝進行生產。即加藥材重量10倍的水(第一次多加3倍量)，煎煮3次，每次0.5小時。
4.1.2燈盞細辛純化方法的選擇燈盞細辛的有效成分為黃酮類化合物，該類化合物為多元酚類，可溶於水、乙醇，在酸性條件下析出沉澱，不溶於水，在中性和弱鹼性條件下溶解，故採用乙醇沉澱、酸化處理的方法精製除雜。
4.1.2.1醇沉工藝的正交試驗正交試驗因數水平表設計藥液的相對密度、醇沉濃度(根據試驗結果，野黃芩苷在50％乙醇中溶解度較好，故醇濃度範圍定在45-65％試驗)、放置時間是影響醇沉工藝的主要因素，按每個因素3水平，用L9(34)正交表安排試驗(下表)。以野黃芩苷提取率為考察指標，對提取工藝進行探討。
因素水平表
樣品製備取相當於100g生藥的水煎液9份，分別濃縮至所需濃度，按正交試驗表所示條件進行試驗。取樣測定野黃芩苷濃度，計算野黃芩苷量，以野黃芩苷轉移率為指標進行評價，結果見下表。
燈盞細辛醇沉工藝條件L9(34)正交試驗安排及結果
方差分析表
F0.05(2，2)＝19.00 F0.01(2，2)＝99.00。
結果分析從上表中的結果直觀分析，各因素影響醇沉效率的順序為A＞B＞C，其中相對密度和乙醇濃度對轉移率影響較大；方差分析結果表明，相對密度對轉移率有極顯著性影響(P＜0.01)，乙醇濃度對轉移率有顯著性影響(P＜0.05)，兩者結論一致，最佳工藝條件為A3B1C3，次佳工藝A2B2C2。在A、B因素中，最佳工藝和次佳工藝的極差較小，B因素中乙醇濃度低於50％時醇沉液濾過較困難，C因素為次要因素，綜合考慮，以最佳工藝A3B1C3和次佳工藝A2B2C2進行重複試驗(結果見下表)。
正交試驗重複結果
從上表結果可見，甲乙兩工藝的野黃芩苷轉移率無明顯差異，但甲工藝由於乙醇濃度過低，溶液不易沉清，樣品過濾時較困難，故選擇乙工藝進行生產。即煎煮液濃縮至相對密度為1.10(50℃)、加乙醇使含醇量為55％，攪拌，放置12小時，濾過，濾液減壓回收乙醇。
4.1.2.2酸化條件的優化燈盞細辛中黃酮類為多元酚類，在酸性條件下可析出沉澱，不溶於水，在中性和弱鹼性條件下溶解，故採用酸化處理的方法製備燈盞細辛提取物。
酸化工藝正交試驗因數水平表設計藥液的相對密度、pH值、保溫溫度、放置時間是影響酸化工藝的主要因素，按每個因素3水平，用L9(34)正交表安排試驗(下表)。以野黃芩苷提取率考察指標，對酸化工藝進行考察。
因素水平表
樣品製備取相當於50g生藥的藥液18份，濃縮至所需濃度，按正交試驗表所示條件試驗，收集沉澱物，用70％乙醇溶解至500ml，測定野黃芩苷含量，以野黃芩苷的轉移率為評價指標進行評價。
正交工藝試驗結果酸化工藝條件L9(34)正交試驗安排及結果
方差分析表
F0.05(2，9)＝4.26 F0.01(2，9)＝8.02。
結果分析從結果直觀分析，各因素影響酸化效率的順序為B＞C＞A＞D，其中pH值、保溫溫度和相對密度對工藝影響較大；方差分析結果表明，各因素均有極顯著性差異(P＜0.01)，最佳工藝條件為A2B2C3D2，在C、D因素中最佳工藝和次佳工藝的極差較小，綜合考慮，選次佳工藝為A2B2C2D1。以最佳工藝A2B2C3D2和次佳工藝A2B2C2D1進行重複試驗，結果見下表。
正交試驗重複結果
從上結果可見，甲乙兩工藝的野黃芩苷收率無明顯差異，從省工省時的角度，選擇乙工藝進行生產。即藥液濃縮至相對密度1.11(50℃)，用鹽酸調pH值至2，於55℃保溫6小時。
4.1.3燈盞細辛提取物乾燥方法的選擇取燈盞細辛1500g，加10倍量水煎煮3次，每次0.5小時，濾過，合併濾液，濾液減壓濃縮至相對密度1.10(50℃)，加2倍量85％乙醇，不斷攪拌，靜置12小時，抽濾，濾液減壓回收乙醇並濃縮至相對密度1.10(50℃)，用鹽酸調pH值至2，55℃保溫6小時，傾棄上清液，抽濾，沉澱用水洗至pH值3～4，均分為3份。按條件進行乾燥，取乾燥品測定提取物在不同條件下乾燥後野黃芩苷的損失率，試驗結果見下表。
不同乾燥條件對野黃芩苷的影響
試驗結果表明，在各乾燥條件下野黃芩苷的轉移率無明顯差異，真空乾燥速度快，乾燥時間短，樣品質地疏鬆，故選用60～80℃真空乾燥。
4.2赤芍的提取工藝研究4.2.1煎煮工藝的正交試驗正交試驗因素水平表設計加水量、煎煮時間、煎煮次數是影響煎煮效率的主要因素，按每個因素3水平，用L9(34)正交表安排試驗。以芍藥苷提取率和固體物收率為考察指標，對提取工藝進行探討。
因素水平表
赤芍煎煮工藝條件L9(34)正交試驗安排及結果
芍藥苷收率方差分析表
F0.05(2，2)＝19.00 F0.01(2，2)＝99.00。
總固體收率方差分析表
F0.05(2，2)＝19.00 F0.01(2，2)＝99.00。
結果分析從結果直觀分析，以芍藥苷收率為考察指標時，各因素影響提取效率的順序為C＞B＞A，其中提取次數和提取時間對提取工藝影響較大；方差分析結果表明，提取次數有極顯著性差異(P＜0.01)，提取時間有顯著性差異(P＜0.05)，兩者結論一致，最佳工藝條件為A3B2C3，在A因素中最佳工藝和次佳工藝的極差較小，從節省能源和時間的角度考慮，次佳工藝為A2B2C3。從結果直觀分析，以總固體收率為考察指標時，各因素影響提取效率的順序為C＞B＞A，其中提取次數和提取時間對提取工藝影響較大；方差分析結果表明，提取次數及提取時間有顯著性差異(P＜0.05)，兩者結論一致，最佳工藝條件為A2B2C3，此工藝條件與以芍藥苷收率為考察指標的次佳工藝一致。綜合分析上述兩項考察指標，以最佳工藝甲A3B2C3和乙A2B2C3進行重複試驗(結果見下表)。
正交試驗重複結果
從結果可見，甲乙兩工藝的芍藥苷及總固體收率無明顯差異，從省工省時、降低能耗的角度，選擇乙工藝進行生產。即加藥材重量8倍的水(第一次多加2倍量)，煎煮3次，每次1小時，濾過，合併濾液，適當濃縮，備用。
4.2.2 赤芍提取液分離純化分離純化方法的選擇在赤芍水煎煮提取物中，除有效成分外，尚含許多雜質成分，為保證產品的質量和有利於產品的質量控制，需進一步精製純化，儘可能地除去水提液中的大分子粘液質、蛋白質、澱粉及固體微粒等雜質。試驗曾採用乙醇沉澱、放置冷藏、離心、正丁醇萃取、過D101樹脂等提取方法處理，試驗結果表明，用乙醇沉澱、正丁醇提取的方法純化樣品的綜合指標好，主要成分的收率較高，產品質量易控制。
4.2.2.1醇沉工藝的正交試驗正交試驗因數水平表設計藥液的相對密度、醇沉濃度、放置時間是影響醇沉工藝的主要因素，按每個因素3水平，用L9(34)正交表安排試驗。以芍藥苷轉移率為考察指標，對醇沉工藝進行考察。
因素水平表
樣品製備取相當於100g生藥的水煎液9份，分別濃縮至所需濃度。按正交試驗表進行試驗，藥液濾過，測定總體積。取樣測定芍藥苷濃度，計算芍藥苷量，以芍藥苷的轉移率為評價指標進行評價，結果見下表。
赤芍醇沉工藝條件L9(34)正交試驗安排及結果
方差分析表
F0.05(2，2)＝19.00 F0.01(2，2)＝99.00。
結果分析從結果直觀分析，各因素影響醇沉效率的順序為B＞A＞C，其中相對密度和乙醇濃度對提取工藝影響較大；方差分析結果表明，相對密度和乙醇濃度有顯著性意義(P＜0.05)，兩者結論一致，最佳工藝條件為A1B3C1。在有顯著性影響的B因素中，最佳工藝和次佳工藝的極差較小，C因素極差較小，從節能省時考慮，故次佳工藝為A1B2C2。為進一步證實該工藝的合理性，以最佳工藝A1B3C1和次佳工藝A1B2C2進行重複試驗。
正交試驗重複結果
結果可見，甲乙兩工藝的芍藥苷轉移率無明顯差異，而乙工藝有明顯的省時，低耗的優點，選擇乙工藝進行生產。即煎煮液濃縮至相對密度為1.07(50℃)、加乙醇使含醇量為60％，攪拌，放置12小時，濾過，濾液減壓回收乙醇，濃縮，備用。
4.2.2.2正丁醇分離提取條件考察赤芍中主要含單萜類和酚酸類化合物，該類化合物極性較大，精製純化應選擇極性較大的有機溶劑。試驗結果表明，正丁醇對上述成分具有較好的選擇性溶解，故選擇正丁醇進行精製純化。
正丁醇提取次數的研究取本品600g，水煎煮濃縮乙醇沉澱處理，回收乙醇，濃縮至相對密度1.19(50℃、每毫升含生藥1.5克；pH4)，均分為4份，1份用於測定總固體物重、芍藥苷含量，另3份分別用1/2倍量水飽和的正丁醇各萃取5次，分取正丁醇液，測定芍藥苷含量和總固體物重，計算芍藥苷和總固體物轉移率，試驗結果見下表。
試驗結果表明，正丁醇萃取5次，總固體物轉移率為17.37％，芍藥苷總量轉移率大於97％，說明正丁醇提取可除去大量的雜質。正丁醇萃取4次，芍藥苷總量的轉移率已達95％以上，總固體物轉移率為16.39％，正丁醇萃取5次，芍藥苷總量的轉移率僅增加1.55％，總固體物轉移率增加0.98％。為降低生產成本，減少工序，保證質量，可確定用1/2倍量水飽和正丁醇提取4次。為進一步考察正丁醇提取的效率，對正丁醇萃取工藝進行驗證試驗。
正丁醇萃取提取次數考察試驗結果(n＝3)
水洗正丁醇提取液對芍藥苷含量的影響在上述工藝處理過程中，樣品中仍殘留部分糖和無機鹽等極性較強的成分，為儘可能純化樣品，正丁醇液用少量水洗，試驗結果表明，水洗後總固體物可降低12％左右，芍藥苷總量的保留率達95％以上。
正丁醇提取液水洗用量的考察取正丁醇提取驗證試驗提取液混勻，精密測定總固體物重、芍藥苷含量。取正丁醇提取液4份，每份200ml，分別用不同量的水洗1次，分取正丁醇液，測定芍藥苷和總固體物，計算保留率，試驗結果見下表。
不同量水洗正丁醇液試驗結果
試驗結果表明，用1/8倍量(25ml)水洗正丁醇液，芍藥苷總量的保留率較高，總固體物減少相對較多。
正丁醇提取液水洗次數的考察取正丁醇提取液3份，每份200ml，分別用1/8倍量的水洗3次，分取水層液，測定芍藥苷和總固體物損失率，試驗結果見下表。
正丁醇液水洗次數試驗結果(n＝3)
試驗結果表明，正丁醇液用水洗1次，總固體物降低較明顯，水洗2次後，總固體物變化較小，而芍藥苷累計損失相對較大，故可確定用1/8倍量水洗正丁醇液1次。
4.2.2.3除鞣質方法的選擇赤芍中含有鞣質，正丁醇提取樣品在未經處理前的鞣質檢查不合格，必須進行除鞣質處理。除鞣質的方法主要有石灰乳法、聚醯胺法、明膠法、改良明膠法和鹼性醇沉澱法、酸性沉澱法等，根據本品的特點，試驗中曾採用明膠法進行試驗，結果發現芍藥苷的損失率較大，除鞣質效果不理想。鞣質為多元酚化合物，易被聚醯胺吸附，且吸附力極強，不易被醇洗脫，因此，利用單萜苷和小分子酚酸類物質在醇溶液中不易被聚醯胺吸附，而鞣質在醇溶液中仍能被吸附的性質與鞣質分離。試驗結果表明，該法去除中藥注射液中的鞣質效果較好，有效成分損失少，樣品中的鞣質檢查符合規定。在異常毒性試驗中，發現殘留鞣質對小鼠的毒性較大，通過聚醯胺除鞣質，可以使小鼠的異常毒性(無小鼠死亡)從傳統的除鞣質方法的30倍增加到120倍(致死濃度的倍數)，說明本品用聚醯胺去除鞣質的方法可行。下面通過試驗對聚醯胺除鞣質的條件進行考察樣品製備 取赤芍藥材，按製備工藝製備回收正丁醇後的殘留物，減壓乾燥，粉碎，備用。
吸附容量的考察 取樣品3.10g，加45％乙醇溶解至120ml，分別各取20ml(約0.6g生藥/ml)加入已處理好聚醯胺1、2、3、4、5、6g，不時攪拌，靜態吸附3小時，濾過，濾液水浴揮至近幹，殘渣加水適量溶解，調pH至7，加水定容至10ml，濾過，取濾液1ml，加新配製的1％雞蛋清5ml，搖勻，放置10分鐘，觀察溶液渾濁或沉澱情況，結果見下表。
聚醯胺吸附容量考察結果
「+」表示有渾濁或沉澱，「±」表示有不明顯渾濁，「-」即表示無渾濁或沉澱。
試驗結果表明，聚醯胺吸附容量小於每1g吸附4.0g生藥時，可去除樣品中的鞣質，吸附容量＝上柱液中生藥量/聚醯胺乾重。為保證產品的質量，規定吸附容量為每3g生藥使用1g聚醯胺。
洗脫溶媒濃度的選擇 取樣品若干份，每份分別用l20ml15％、30％、45％、60％、75％乙醇溶解，上已處理好聚醯胺柱(24g，徑高比1∶6，Φ3cm)，分別用15％、30％、45％、60％、75％乙醇各360ml洗脫，洗脫速度2ml/min。自下口流出有色液時，收集洗脫液，洗脫液用相應濃度的乙醇定容至600ml，取樣測定芍藥苷濃度和總固體物重。再取樣品溶液100ml，水浴揮至近幹，殘渣加水適量溶解，調pH至7，加水定容至10ml，濾過，分別取濾液依法進行鞣質檢查。
試驗結果和洗脫曲線表明，芍藥苷量和總固體物重隨乙醇濃度的增大而增加，當乙醇濃度增大至45％時，芍藥苷含量趨於平衡，芍藥苷轉移率達95％以上，說明45％乙醇可使芍藥苷有效解析；在此條件下總固體物重也趨於平衡，總固體物轉移率為77.27％，降低了22.73％，達到純化精製的目的；且低於60％乙醇洗脫液鞣質檢查均為陰性，說明選擇小於60％乙醇洗脫，鞣質未被解析下來。綜合考慮，洗脫溶媒濃度定為45％乙醇。
洗脫溶媒濃度選擇試驗結果
吸附流速 取樣品若干份，每份3.10g(合生藥72g，固形物4.3％)，加45％乙醇溶解至120ml，上已處理好的聚醯胺柱(24g，徑高比1∶6，Φ3cm)，分別以0.5、1、1.5、2、2.5、3ml/mi n的流速進行動態吸附，補加45％乙醇液洗脫，自下口流出有色液時收集洗脫液120ml。取洗脫液20ml，水浴揮至近幹，殘渣加水適量溶解，調pH至7，加水定容至10ml，濾過，分別取濾液依法進行鞣質檢查，結果見下表。
聚醯胺吸附流速考察結果
注溼柱體積(BV)是幹樹脂重量的5倍。
吸附時間240、120、80、60、48、40min試驗結果表明，吸附流速小於1.5ml/min(0.75BV/h)時，鞣質被聚醯胺有效吸附，吸附流速大於2ml/min(1BV/h)時，流穿液中鞣質檢查不合格，為保證產品質量，吸附流速應控制在1ml/min(即每小時0.5BV)，直至成分開始流出。
洗脫溶媒用量 取樣品若干份，每份分別用45％乙醇溶解至120ml，上已處理好聚醯胺柱(24g，徑高比1∶6，Φ3cm)，以1ml/min吸附流速進行動態吸附，分別用120、240、360、480、600ml，45％乙醇為洗脫劑，以2ml/min的流速進行動態洗脫，自下口流出有色液時，分別收集洗脫液，取樣測定芍藥苷量和總固體物重，計算轉移率，結果見下表。
聚醯胺洗脫劑用量考察結果
試驗結果表明，芍藥苷量和總固體物重隨45％乙醇用量的增大而增加，當乙醇用量增大至3BV時，芍藥苷含量趨於平衡，芍藥苷轉移率達95％以上，說明3倍量45％乙醇可使芍藥苷解析基本完全；在此條件下總固體物重也趨於平衡，總固體物轉移率為76.51％，從提高工作效率和經濟效率角度考慮，洗脫溶媒用量定為3倍柱體積45％乙醇。
洗脫流速 取樣品若干份，每份分別用45％乙醇溶解至120ml，上已處理好聚醯胺柱(24g，徑高比1∶6，Φ3cm)，以1ml/min吸附流速進行動態吸附，用360ml(3BV)45％乙醇為洗脫劑，分別以1、2、3、4、5ml/min的流速進行動態洗脫。收集洗脫液用45％乙醇定容至600ml，取樣測定芍藥苷濃度和總固體物重。取樣品溶液100ml，水浴揮至近幹，殘渣加水適量溶解，調pH至7，加水定容至10ml，濾過，分別取濾液依法進行鞣質檢查，結果見下表。
聚醯胺洗脫流速試驗結果
試驗結果表明，洗脫流速為2ml/min(即1BV/h)時芍藥苷洗脫率和總固體物轉移率最高分別達96.78％、77.51％，隨洗脫流速加快而降低。洗脫流速大於3ml/min(即1.5BV/h)，芍藥苷洗脫率和總固體物轉移率下降明顯，而1ml/min、2ml/min洗脫流速的解析量無明顯差異，各洗脫流鞣質檢查均為陰性，為縮短生產時間，提高生產效率，選用2ml/min(即1BV/h)的解析速度。
4.2.3赤芍半成品乾燥方法的選擇取聚醯胺上柱工藝驗證試驗的剩餘流穿液和洗脫液，合併，混勻，測定芍藥苷含量。取相當於200g生藥的流穿液和洗脫液3份，分別減壓回收乙醇，殘留物按條件進行乾燥，取乾燥品測定殘留物在不同條件下乾燥後芍藥苷含量和總固體物重，計算芍藥苷損失率，試驗結果見下表。
不同乾燥條件對芍藥苷和總固體物的影響
試驗結果表明，60～80℃真空乾燥對芍藥苷的影響較小，損失率為1.5％左右，且真空乾燥速度快，溫度低，樣品質地疏鬆，易於粉碎，故選用60～80℃真空乾燥。
4.3製劑成型工藝研究4.3.1附加劑選擇及其用量確定經以甘露醇、葡萄糖、右旋糖苷對產品凍幹劑的外觀性狀、色澤、疏鬆程度、是否有絨毛狀物質形成等觀察比較，結果以加入一定量的甘露醇時，產品外觀形狀、成型性好，溶解性好，質量穩定，試驗結果見下表。
填充劑加入量與凍幹品成型的關係
試驗結果表明，100ml藥液中加入甘露醇的量達到0.5g以上時，可保持樣品凍幹前的體積和形狀，無硬殼，色澤好，不萎縮，樣品呈疏鬆多孔狀結構，復水性好。從成品色澤、溶解性、成形性、經濟等方面綜合考慮，故確定每處方量可加甘露醇10g。
4.3.2配液pH值確定本品處方中兩味藥材主要含黃酮類、單萜類、酚酸類化合物，在中性或鹼性條件下溶解性較好，故在配液時調節適宜的pH值，有利於藥物的溶解，增加製劑的穩定性，但pH值超過7.5時，藥液易變為淺墨綠色，色澤加深，在預試驗基礎上，對配液時pH值的調節進行了試驗。
取提取物5份，每份10.0g(赤芍提取物7.20g，燈盞細辛提取物2.30g，甘露醇0.50g)，分別加注射用水60ml，攪拌用飽和氫氧化鈉溶液調不同pH，使溶解，定容至100ml，加0.5％的活性碳，混勻煮沸滅菌30分鐘，放冷。用0.45μm和0.22μm微孔濾膜濾過，檢查滅菌後注射液的澄明度、色澤及pH值的變化，結果見下表。
不同pH值對注射劑澄明度及色澤的影響
注「+」表示不合格，「-」合格試驗結果表明，當配液pH值高於7.0以上時，注射劑澄明度均合格，配液pH值高於7.5以上時，藥液滅菌後色澤加深，易變為淺墨綠色。滅菌後pH值下降0.6～1.0左右，故本品配液時pH值應控制在6.50～7.50，成品pH值控制在5.50～7.0。
4.3.3冷凍乾燥工藝4.3.3.1最低共熔點的測定為保證產品的質量，預凍溫度應控制在所測藥液低共熔點以下10～20℃左右，使溶劑、溶質固化。最低共熔點採用電阻法測定。
最低共熔點的測定結果
從測定結果可知，本製劑的最低共熔點在-16℃。即在冷凍過程中，必須將物料預凍至-16℃以下，才能開始進行升華乾燥。
4.3.3.2預凍操作 預凍操作分為三個階段第一階段預凍至冰剛好形成的溫度，即平衡凍結溫度；第二階段預凍至產品的最低共熔溫度，使產品凍結；第三階段繼續降溫至最低共熔點溫度以下，使產品完全凍牢。預凍速度對產品的質量有一定影響，因此，應根據具體樣品對預凍三個階段的參數進行測定，總結經驗，以指導生產。
凍結過程中擱板溫度、產品溫度與時間的關係
第一階段的平衡凍結溫度為0℃時的平衡時間為1.5小時，即擱板溫度與產品溫度基本一致的時間；第二階段凍結溫度從0℃到最低共熔溫度-16℃時，擱板溫度與產品溫度平衡時間為1.5小時；第三階段繼續降溫至-45℃，約需1.5小時，保持此溫度1.5小時，直至產品完全凍牢，即開始抽真空，進入乾燥程序。
4.3.3.3乾燥程序 在恆溫下(-45℃)抽真空，使乾燥室的氣壓降至13.332～266.64Pa，在此壓力下緩慢升溫(2～4℃/h)至最低共熔點溫度，時間約為12小時，升華乾燥完成後，繼續在低壓條件下(13.332Pa)升溫乾燥以除去殘餘水分，時間約為12～15小時，保持35℃以上乾燥3小時，記錄擱板溫度與產品溫度，繪製擱板溫度隨時間變化的曲線。
實驗例3製劑藥效學研究(1)對血瘀模型家兔血液流變性的影響家兔40隻，隨機分為4組，每組8隻，♀♂各半，分別為空白對照組、模型對照組、陽性藥對照組及本發明注射液組。各組動物先耳緣靜脈注射(iv)給藥。空白及模型對照組注射生理鹽水(NS)1ml/kg，陽性藥組iv葛根素注射液30mg/kg(以NS配成30mg/ml)，實驗組分別注射0.25mg/ml的藥液(以NF配成)，給藥量均為1ml/kg，連續給藥兩周(14d)，於給藥的第2、13d，除空白對照組外，各兔分別經耳緣靜脈注10％高分子右旋糖酐5ml/kg，每日兩次，造成血瘀模型。末次給藥後，再次注射10％高分子右旋糖酐5ml/kg，15min後，心臟採取空腹血6ml，進行血液流變學指標檢測，其中血小板聚集率用LBY-NJ2型血小板聚集儀，採用比濁法測定其它採用LBY-N6A+旋轉式錐板粘度儀測定。
對家兔血小板聚集和纖維蛋白原的影響(x±s，n＝6)組別劑量(mg/kg) 體重(kg) 血小板聚集(％) 纖維蛋白原(g/L)空白組 - 2.31±0.1515.54±2.46 2.53±1.16模型組 - 2.45±0.0838.27±15.05 2.73±1.41陽性藥組 30 2.37±0.1112.74±3.47 3.12±1.83本發明實驗組 0.25 2.32±0.2414.80±1.36 2.69±2.32結果表明本發明製劑對血瘀型疾病療效好。
(2)對大鼠慢性肝損傷的作用健康Wistar大鼠，體重120～160g，隨機分為4組正常對照組、CCl4模型組、本發明粉針劑組。採用CCl4製備大鼠肝纖維化模型，秋水仙鹼組、配伍組於造模的第1天開始給藥，均為灌胃給藥，本發明粉針劑3.40g/kg；正常對照組、CCl4模型組給予等量的0.9％NaCl溶液。各組動物於造模10w後斷頭處死。取血分離血清測定肝功能。
各組大鼠肝功能變化(x±s)組別 nALT(IU/L)Glb(ρB/g/L) Alb(ρB/g/L)正常組10 35.50±2.42 25.74±2.13 34.20±1.57模型組9115.27±11.2832.58±3.19 26.95±2.14本發明粉針劑組11 59.72±13.39 26.23±2.80 33.01±3.63結果表明，本發明製劑對大鼠慢性肝損傷有顯著改善作用。
具體的實施方式本發明的實施例1燈盞細辛3000g 赤芍4500g燈盞細辛加10倍量水煎煮3次，每次0.5小時，濾過，合併濾液，濾液減壓濃縮至相對密度50℃時1.09～1.11，加乙醇使含醇量達55％，不斷攪拌，靜置12小時，抽濾，濾液減壓回收乙醇並濃縮至相對密度50℃時1.10～1.12，用鹽酸調pH值至2，55℃保溫6小時，傾棄上清液，抽濾，沉澱用水洗至pH值3～4，真空乾燥，得燈盞細辛提取物；赤芍加8倍量水煎煮3次，每次1小時，濾過，合併濾液，減壓濃縮至相對密度50℃時1.06～1.08，加乙醇使含醇量達60％，攪拌均勻，靜置12小時，抽濾，濾液減壓回收乙醇並濃縮至相對密度50℃時1.18～1.20，用1/2倍量水飽和的正丁醇提取4次，合併正丁醇液，用1/8倍量水洗1次，減壓回收正丁醇，殘留物加45％乙醇7500ml溶解，上聚醯胺柱，1500g，Φ12cm，徑高比1∶6，吸附流速0.5BV/h，BV-溼柱體積＝幹樹脂重量的5倍體積，用45％乙醇22500ml洗脫，洗脫流速1BV/h，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空乾燥，得赤芍提取物。
本發明的實施例2燈盞細辛3000g 赤芍4500g燈盞細辛加10倍量水煎煮3次，每次0.5小時，濾過，合併濾液，濾液減壓濃縮至相對密度50℃時1.09～1.11，加乙醇使含醇量達55％，不斷攪拌，靜置12小時，抽濾，濾液減壓回收乙醇並濃縮至相對密度50℃時1.10～1.12，用鹽酸調pH值至2，55℃保溫6小時，傾棄上清液，抽濾，沉澱用水洗至pH值3～4，真空乾燥，得燈盞細辛提取物；赤芍加8倍量水煎煮3次，每次1小時，濾過，合併濾液，減壓濃縮至相對密度50℃時1.06～1.08，加乙醇使含醇量達60％，攪拌均勻，靜置12小時，抽濾，濾液減壓回收乙醇並濃縮至相對密度50℃時1.18～1.20，用1/2倍量水飽和的正丁醇提取4次，合併正丁醇液，用1/8倍量水洗1次，減壓回收正丁醇，殘留物加45％乙醇7500ml溶解，上聚醯胺柱，1500g，Φ12cm，徑高比1∶6，吸附流速0.5BV/h，BV-溼柱體積＝幹樹脂重量的5倍體積，用45％乙醇22500ml洗脫，洗脫流速1BV/h，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空乾燥，得赤芍提取物。
取燈盞細辛提取物、赤芍提取物和10g甘露醇，加1800ml注射用水，攪拌使溶解，用飽和氫氧化鈉溶液調pH值至7.0～7.5，加注射用水至2000ml，混勻，煮沸30分鐘，分裝於已處理好的輸液瓶中，塞入丁基橡膠塞及薄膜，軋鋁蓋，流通蒸汽滅菌30分鐘，冷藏24小時，在無菌條件下用0.45μm和0.22μm微孔濾膜濾過，濾液分裝，每瓶2.0ml，冷凍乾燥，第一階段的平衡凍結溫度為0℃時的平衡時間為1.5小時，即擱板溫度與產品溫度基本一致的時間；第二階段凍結溫度從0℃到最低共熔溫度-16℃時，擱板溫度與產品溫度平衡時間為1.5小時；第三階段繼續降溫至-45℃，約需1.5小時，保持此溫度1.5小時，直至產品完全凍牢，即開始抽真空，進入乾燥程序，在45℃恆溫下-抽真空，使乾燥室的氣壓降至13.332～266.64Pa，在此壓力下緩慢升溫，2～4℃/h，至最低共熔點溫度，時間約為12小時，升華乾燥完成後，繼續在13.332Pa低壓條件下，升溫乾燥以除去殘餘水分，時間約為12～15小時，保持35℃以上乾燥3小時，壓蓋，即得注射用無菌塊狀物，靜脈滴注，一次2支，一日1次，用250ml0.9％生理鹽水溶解後使用，每支裝200mg；以重量百分比計算，注射劑中黃酮類成分和苷類成分含量之和不低於製劑中扣除輔料量和水分量的總固體量的25％。
本發明的實施例3燈盞細辛3000g 赤芍4500g燈盞細辛加10倍量水煎煮3次，每次0.5小時，濾過，合併濾液，濾液減壓濃縮至相對密度50℃時1.09～1.11，加乙醇使含醇量達55％，不斷攪拌，靜置12小時，抽濾，濾液減壓回收乙醇並濃縮至相對密度50℃時1.10～1.12，用鹽酸調pH值至2，55℃保溫6小時，傾棄上清液，抽濾，沉澱用水洗至pH值3～4，真空乾燥，得燈盞細辛提取物；赤芍加8倍量水煎煮3次，每次1小時，濾過，合併濾液，減壓濃縮至相對密度50℃時1.06～1.08，加乙醇使含醇量達60％，攪拌均勻，靜置12小時，抽濾，濾液減壓回收乙醇並濃縮至相對密度50℃時1.18～1.20，用1/2倍量水飽和的正丁醇提取4次，合併正丁醇液，用1/8倍量水洗1次，減壓回收正丁醇，殘留物加45％乙醇7500ml溶解，上聚醯胺柱，1500g，Φ12cm，徑高比1∶6，吸附流速0.5BV/h，BV-溼柱體積＝幹樹脂重量的5倍體積，用45％乙醇22500ml洗脫，洗脫流速1BV/h，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空乾燥，得赤芍提取物。
取燈盞細辛提取物、赤芍提取物，加入適量注射用水溶解，按體積加入1.0％的活性炭，煮沸，保持微沸30min，稍冷濾過，濾液加注射用水至規定量，用飽和氫氧化鈉溶液調pH值至7.0～7.5，煮沸，4℃冷藏過夜，粗濾、精濾，加注射用水，分裝到安剖瓶，封口滅菌即得小容量注射液或注射用濃溶液。
本發明的實施例4燈盞細辛3000g 赤芍4500g
燈盞細辛加10倍量水煎煮3次，每次0.5小時，濾過，合併濾液，濾液減壓濃縮至相對密度50℃時1.09～1.11，加乙醇使含醇量達55％，不斷攪拌，靜置12小時，抽濾，濾液減壓回收乙醇並濃縮至相對密度50℃時1.10～1.12，用鹽酸調pH值至2，55℃保溫6小時，傾棄上清液，抽濾，沉澱用水洗至pH值3～4，真空乾燥，得燈盞細辛提取物；赤芍加8倍量水煎煮3次，每次1小時，濾過，合併濾液，減壓濃縮至相對密度50℃時1.06～1.08，加乙醇使含醇量達60％，攪拌均勻，靜置12小時，抽濾，濾液減壓回收乙醇並濃縮至相對密度50℃時1.18～1.20，用1/2倍量水飽和的正丁醇提取4次，合併正丁醇液，用1/8倍量水洗1次，減壓回收正丁醇，殘留物加45％乙醇7500ml溶解，上聚醯胺柱，1500g，Φ12cm，徑高比1∶6，吸附流速0.5BV/h，BV-柱體積＝幹樹脂重量的5倍體積，用45％乙醇22500ml洗脫，洗脫流速1BV/h，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空乾燥，得赤芍提取物。
取燈盞細辛提取物、赤芍提取物，加入適量注射用水溶解，加入規定量的葡萄糖或氯化鈉，混合溶解後按體積加入1.0％的活性炭，煮沸，保持微沸30min，稍冷濾過，濾液加注射用水至規定量，再用飽和氫氧化鈉溶液調pH值至7.0～7.5，煮沸，4℃冷藏過夜，粗濾、精濾，加注射用水，分裝，滅菌即得葡萄糖或氯化鈉靜脈輸液。
本發明的實施例5燈盞細辛3000g 赤芍4500g燈盞細辛加10倍量水煎煮3次，每次0.5小時，濾過，合併濾液，濾液減壓濃縮至相對密度50℃時1.09～1.11，加乙醇使含醇量達55％，不斷攪拌，靜置12小時，抽濾，濾液減壓回收乙醇並濃縮至相對密度50℃時1.10～1.12，用鹽酸調pH值至2，55℃保溫6小時，傾棄上清液，抽濾，沉澱用水洗至pH值3～4，真空乾燥，得燈盞細辛提取物；赤芍加8倍量水煎煮3次，每次1小時，濾過，合併濾液，減壓濃縮至相對密度50℃時1.06～1.08，加乙醇使含醇量達60％，攪拌均勻，靜置12小時，抽濾，濾液減壓回收乙醇並濃縮至相對密度50℃時1.18～1.20，用1/2倍量水飽和的正丁醇提取4次，合併正丁醇液，用1/8倍量水洗1次，減壓回收正丁醇，殘留物加45％乙醇7500ml溶解，上聚醯胺柱，1500g，Φ12cm，徑高比1∶6，吸附流速0.5BV/h，BV-溼柱體積＝幹樹脂重量的5倍體積，用45％乙醇22500ml洗脫，洗脫流速1BV/h，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空乾燥，得赤芍提取物。
取燈盞細辛提取物、赤芍提取物，加1800ml注射用水，攪拌使溶解，用飽和氫氧化鈉溶液調pH值至7.0～7.5，加注射用水至2000ml，混勻，煮沸30分鐘，分裝到搪瓷盤中，冷凍乾燥，第一階段的平衡凍結溫度為0℃時的平衡時間為1.5小時，即擱板溫度與產品溫度基本一致的時間；第二階段凍結溫度從0℃到最低共熔溫度-16℃時，擱板溫度與產品溫度平衡時間為1.5小時；第三階段繼續降溫至-45℃，約需1.5小時，保持此溫度1.5小時，直至產品完全凍牢，即開始抽真空，進入乾燥程序，在45℃恆溫下-抽真空，使乾燥室的氣壓降至13.332～266.64Pa，在此壓力下緩慢升溫，2～4℃/h，至最低共熔點溫度，時間約為12小時，升華乾燥完成後，繼續在13.332Pa低壓條件下，升溫乾燥以除去殘餘水分，時間約為12～15小時，保持35℃以上乾燥3小時，在無菌條件下分裝到西林瓶中，即得注射用無菌粉末。
本發明的實施例6燈盞細辛3000g 赤芍4500g燈盞細辛加10倍量水煎煮3次，每次0.5小時，濾過，合併濾液，濾液減壓濃縮至相對密度50℃時1.09～1.11，加乙醇使含醇量達55％，不斷攪拌，靜置12小時，抽濾，濾液減壓回收乙醇並濃縮至相對密度50℃時1.10～1.12，用鹽酸調pH值至2，55℃保溫6小時，傾棄上清液，抽濾，沉澱用水洗至pH值3～4，真空乾燥，得燈盞細辛提取物；赤芍加8倍量水煎煮3次，每次1小時，濾過，合併濾液，減壓濃縮至相對密度50℃時1.06～1.08，加乙醇使含醇量達60％，攪拌均勻，靜置12小時，抽濾，濾液減壓回收乙醇並濃縮至相對密度50℃時1.18～1.20，用1/2倍量水飽和的正丁醇提取4次，合併正丁醇液，用1/8倍量水洗1次，減壓回收正丁醇，殘留物加45％乙醇7500ml溶解，上聚醯胺柱，1500g，Φ12cm，徑高比1∶6，吸附流速0.5BV/h，BV-溼柱體積＝幹樹脂重量的5倍體積，用45％乙醇22500ml洗脫，洗脫流速1BV/h，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空乾燥，得赤芍提取物。
取燈盞細辛提取物、赤芍提取物，混勻，加入適量注射用水溶解，按體積加入1.0％的活性炭，煮沸，保持微沸30min，稍冷濾過，濾液加注射用水至規定量，用飽和氫氧化鈉溶液調pH值至7.0～7.5，煮沸，4℃冷藏過夜，粗濾、精濾，在進風溫度為150℃，出風溫度為60℃，氣流速度為20m·s-1的條件下噴霧乾燥得粉末，分裝，即得注射用無菌粉末。
本發明的實施例7燈盞細辛100g 赤芍9900g燈盞細辛加5倍量水煎煮0.5小時，濾過，合併濾液，濾液減壓濃縮，加乙醇使含醇量達30％，不斷攪拌，靜置6小時，抽濾，濾液減壓回收乙醇並濃縮，用鹽酸調pH值，保溫，傾棄上清液，抽濾，沉澱用水洗至pH值，真空乾燥，得燈盞細辛提取物；赤芍加3倍量水煎煮0.5小時，濾過，合併濾液，減壓濃縮，加乙醇使含醇量達40％，攪拌均勻，靜置6小時，抽濾，濾液減壓回收乙醇並濃縮，用水飽和的正丁醇提取1次，合併正丁醇液，用水洗1次，減壓回收正丁醇，殘留物加乙醇溶解，上聚醯胺柱，用乙醇洗脫，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空乾燥，得赤芍提取物，將燈盞細辛提取物與赤芍提取物混合均勻，加入大豆油混勻，壓製法制丸，即得軟膠囊劑。
本發明的實施例8燈盞細辛9900g 赤芍100g燈盞細辛加12倍量水煎煮5次，每次2小時，濾過，合併濾液，濾液減壓濃縮，加乙醇使含醇量達80％，不斷攪拌，靜置24小時，抽濾，濾液減壓回收乙醇並濃縮，用鹽酸調pH值，保溫，傾棄上清液，抽濾，沉澱用水洗至pH值，真空乾燥，得燈盞細辛提取物；赤芍加10倍量水煎煮5次，每次2小時，濾過，合併濾液，減壓濃縮，加乙醇使含醇量達80％，攪拌均勻，靜置24小時，抽濾，濾液減壓回收乙醇並濃縮，用水飽和的正丁醇提取5次，合併正丁醇液，用水洗3次，減壓回收正丁醇，殘留物加乙醇溶解，上聚醯胺柱，用乙醇洗脫，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空乾燥，得赤芍提取物，將燈盞細辛提取物與赤芍提取物混合均勻，加入PEG400混勻，滴製法制丸，即得滴丸劑。
本發明的實施例9燈盞細辛2000g 赤芍8000g燈盞細辛加12倍量水煎煮5次，每次2小時，濾過，合併濾液，濾液減壓濃縮，加乙醇使含醇量達80％，不斷攪拌，靜置24小時，抽濾，濾液減壓回收乙醇並濃縮，用鹽酸調pH值，保溫，傾棄上清液，抽濾，沉澱用水洗至pH值，真空乾燥，得燈盞細辛提取物；赤芍加10倍量水煎煮5次，每次2小時，濾過，合併濾液，減壓濃縮，加乙醇使含醇量達80％，攪拌均勻，靜置24小時，抽濾，濾液減壓回收乙醇並濃縮，用水飽和的正丁醇提取5次，合併正丁醇液，用水洗3次，減壓回收正丁醇，殘留物加乙醇溶解，上聚醯胺柱，用乙醇洗脫，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空乾燥，得赤芍提取物，將燈盞細辛提取物與赤芍提取物混合均勻，加入2％羧甲基纖維素鈉，擠出-滾圓法制丸，即得微丸劑。
本發明的實施例10燈盞細辛8000g赤芍2000g燈盞細辛加5倍量水煎煮0.5小時，濾過，合併濾液，濾液減壓濃縮，加乙醇使含醇量達30％，不斷攪拌，靜置6小時，抽濾，濾液減壓回收乙醇並濃縮，用鹽酸調pH值，保溫，傾棄上清液，抽濾，沉澱用水洗至pH值，真空乾燥，得燈盞細辛提取物；赤芍加3倍量水煎煮0.5小時，濾過，合併濾液，減壓濃縮，加乙醇使含醇量達40％，攪拌均勻，靜置6小時，抽濾，濾液減壓回收乙醇並濃縮，用水飽和的正丁醇提取1次，合併正丁醇液，用水洗1次，減壓回收正丁醇，殘留物加乙醇溶解，上聚醯胺柱，用乙醇洗脫，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空乾燥，得赤芍提取物，將燈盞細辛提取物與赤芍提取物混合均勻，，加入3％甲基纖維素，加水溼潤，製成顆粒，乾燥，加入1％羧甲基澱粉鈉，壓片，即得分散片劑。
本發明的實施例11燈盞細辛100g 白芍9900g燈盞細辛加5倍量水煎煮0.5小時，濾過，合併濾液，濾液減壓濃縮，加乙醇使含醇量達30％，不斷攪拌，靜置6小時，抽濾，濾液減壓回收乙醇並濃縮，用鹽酸調pH值，保溫，傾棄上清液，抽濾，沉澱用水洗至pH值，真空乾燥，得燈盞細辛提取物；白芍加3倍量水煎煮0.5小時，濾過，合併濾液，減壓濃縮，加乙醇使含醇量達40％，攪拌均勻，靜置6小時，抽濾，濾液減壓回收乙醇並濃縮，用水飽和的正丁醇提取1次，合併正丁醇液，用水洗1次，減壓回收正丁醇，殘留物加乙醇溶解，上聚醯胺柱，用乙醇洗脫，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空乾燥，得白芍提取物，將燈盞細辛提取物與白芍提取物混合均勻，制丸，即得丸劑。
本發明的實施例12燈盞細辛9900g 白芍100g燈盞細辛加12倍量水煎煮5次，每次2小時，濾過，合併濾液，濾液減壓濃縮，加乙醇使含醇量達80％，不斷攪拌，靜置24小時，抽濾，濾液減壓回收乙醇並濃縮，用鹽酸調pH值，保溫，傾棄上清液，抽濾，沉澱用水洗至pH值，真空乾燥，得燈盞細辛提取物；白芍加10倍量水煎煮5次，每次2小時，濾過，合併濾液，減壓濃縮，加乙醇使含醇量達80％，攪拌均勻，靜置24小時，抽濾，濾液減壓回收乙醇並濃縮，用水飽和的正丁醇提取5次，合併正丁醇液，用水洗3次，減壓回收正丁醇，殘留物加乙醇溶解，上聚醯胺柱，用乙醇洗脫，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空乾燥，得白芍提取物，加入蒸餾水，即得口服液。
本發明的實施例13燈盞細辛2000g 白芍8000g燈盞細辛加12倍量水煎煮5次，每次2小時，濾過，合併濾液，濾液減壓濃縮，加乙醇使含醇量達80％，不斷攪拌，靜置24小時，抽濾，濾液減壓回收乙醇並濃縮，用鹽酸調pH值，保溫，傾棄上清液，抽濾，沉澱用水洗至pH值，真空乾燥，得燈盞細辛提取物；白芍加10倍量水煎煮5次，每次2小時，濾過，合併濾液，減壓濃縮，加乙醇使含醇量達80％，攪拌均勻，靜置24小時，抽濾，濾液減壓回收乙醇並濃縮，用水飽和的正丁醇提取5次，合併正丁醇液，用水洗3次，減壓回收正丁醇，殘留物加乙醇溶解，上聚醯胺柱，用乙醇洗脫，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空乾燥，得白芍提取物，將燈盞細辛提取物與白芍提取物混合均勻，制粒，即得顆粒劑。
本發明的實施例14燈盞細辛8000g 白芍2000g燈盞細辛加5倍量水煎煮0.5小時，濾過，合併濾液，濾液減壓濃縮，加乙醇使含醇量達30％，不斷攪拌，靜置6小時，抽濾，濾液減壓回收乙醇並濃縮，用鹽酸調pH值，保溫，傾棄上清液，抽濾，沉澱用水洗至pH值，真空乾燥，得燈盞細辛提取物；白芍加3倍量水煎煮0.5小時，濾過，合併濾液，減壓濃縮，加乙醇使含醇量達40％，攪拌均勻，靜置6小時，抽濾，濾液減壓回收乙醇並濃縮，用水飽和的正丁醇提取1次，合併正丁醇液，用水洗1次，減壓回收正丁醇，殘留物加乙醇溶解，上聚醯胺柱，用乙醇洗脫，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空乾燥，得白芍提取物，將燈盞細辛提取物與白芍提取物混合均勻，加水溼潤，製成顆粒，裝膠囊，即得膠囊劑。
本發明的實施例15燈盞細辛3000g 赤芍4500g燈盞細辛加10倍量水煎煮3次，每次0.5小時，濾過，合併濾液，濾液減壓濃縮至相對密度50℃時1.09～1.11，加乙醇使含醇量達55％，不斷攪拌，靜置12小時，抽濾，濾液減壓回收乙醇並濃縮至相對密度50℃時1.10～1.12，用鹽酸調pH值至2，55℃保溫6小時，傾棄上清液，抽濾，沉澱用水洗至pH值3～4，真空乾燥，得燈盞細辛提取物；赤芍加8倍量水煎煮3次，每次1小時，濾過，合併濾液，減壓濃縮至相對密度50℃時1.06～1.08，加乙醇使含醇量達60％，攪拌均勻，靜置12小時，抽濾，濾液減壓回收乙醇並濃縮至相對密度50℃時1.18～1.20，用1/2倍量水飽和的正丁醇提取4次，合併正丁醇液，用1/8倍量水洗1次，減壓回收正丁醇，殘留物加45％乙醇7500ml溶解，上聚醯胺柱，1500g，Φ12cm，徑高比1∶6，吸附流速0.5BV/h，BV-溼柱體積＝幹樹脂重量的5倍體積，用45％乙醇22500ml洗脫，洗脫流速1BV/h，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空乾燥，得赤芍提取物，混勻，乙醇制粒，即得顆粒劑。
本發明的實施例16燈盞細辛3000g 赤芍4500g燈盞細辛加10倍量水煎煮3次，每次0.5小時，濾過，合併濾液，濾液減壓濃縮至相對密度1.09～1.11(50℃)，真空乾燥，得燈盞細辛提取物；赤芍加8倍量水煎煮3次，每次1小時，濾過，合併濾液，減壓濃縮至相對密度1.06～1.08(50℃)，真空乾燥，得赤芍提取物；將燈盞細辛提取物和赤芍提取物混合，制粒，壓片，即得片劑。
本發明的實施例17燈盞細辛3000g 赤芍4500g燈盞細辛加10倍量水煎煮3次，每次0.5小時，濾過，合併濾液，濾液減壓濃縮至相對密度1.09～1.11(50℃)，加乙醇醇沉兩次，第一次使含醇量達55％，第二次使含醇量達85％，抽濾，濾液減壓回收乙醇並濃縮至相對密度1.10～1.12(50℃)，真空乾燥得燈盞細辛提取物；赤芍加8倍量水煎煮3次，每次1小時，濾過，合併濾液，減壓濃縮至相對密度1.06～1.08(50℃)，加乙醇醇沉兩次，第一次使含醇量達50％，第二次使含醇量達80％，抽濾，濾液減壓回收乙醇並濃縮至相對密度1.10～1.12(50℃)，真空乾燥得赤芍提取物；將燈盞細辛提取物和赤芍提取物混合，加入糖漿，即得糖漿劑。
本發明的實施例18燈盞細辛3000g 赤芍4500g燈盞細辛加10倍量水煎煮3次，每次0.5小時，濾過，合併濾液，濾液減壓濃縮至相對密度1.09～1.11(50℃)，用鹽酸調pH值至4，加入等體積乙酸乙酯，萃取4次，合併乙酸乙酯，減壓回收溶劑，真空乾燥得燈盞細辛提取物；赤芍加10倍量水煎煮3次，每次1小時，濾過，合併濾液，減壓濃縮至相對密度1.06～1.08(50℃)，用水飽和的正丁醇提取4次，合併正丁醇液，用1/8倍量水洗1次，減壓回收正丁醇，真空乾燥得赤芍提取物；將燈盞細辛提取物和赤芍提取物混合，加入煉蜜，制丸，即得丸劑。
本發明的實施例18燈盞細辛3000g 赤芍4500g燈盞細辛加10倍量水煎煮3次，每次0.5小時，濾過，合併濾液，過AB-8大孔樹脂柱，先用6倍樹脂體積水和4倍樹脂體積10％乙醇衝洗，再用5倍樹脂體積50％乙醇解吸，收集解吸液，減壓回收乙醇，真空乾燥得燈盞細辛提取物；赤芍加10倍量水煎煮3次，每次1小時，濾過，合併濾液，過ZTC-1型大孔樹脂柱，先用4倍樹脂體積水和3倍樹脂體積10％乙醇衝洗，再用5倍樹脂體積60％乙醇解吸，收集解吸液，減壓回收乙醇，真空乾燥得赤芍提取物；將燈盞細辛提取物和赤芍提取物混合，加入蒸餾水，即得口服液。
本發明的實施例19燈盞細辛3000g 赤芍4500g燈盞細辛加10倍量80％乙醇回流提取3次，每次1小時，濾過，合併濾液，減壓回收乙醇濃縮至相對密度1.09～1.11(50℃)，真空乾燥得燈盞細辛提取物；赤芍加10倍量70％乙醇回流提取3次，每次1小時，濾過，合併濾液，減壓回收乙醇濃縮至相對密度1.09～1.11(50℃)，真空乾燥得赤芍提取物；將燈盞細辛提取物和赤芍提取物混合，制粒，即得顆粒劑。
燈盞細辛提取物可以是黃酮類成分含量大於90％的總黃酮有效部位或者按本發明製備方法制的或者市售的，赤芍提取物可以是苷類成分含量大於90％的總苷有效部位或者按本發明製備方法制的或者市售的。
權利要求
1.一種治療心腦血管疾病的複方燈盞細辛製劑，其特徵在於按照重量百分比計算，它是由燈盞細辛1～99％和赤芍99～1％和適當的輔料製作而成。
2.按照權利要求1所述的治療心腦血管疾病的複方燈盞細辛製劑，其特徵在於按照重量百分比計算，它是由燈盞細辛20～80％和赤芍80～20％和適當的輔料製作而成。
3.按照權利要求1或2所述的治療心腦血管疾病的複方燈盞細辛製劑，其特徵在於按照重量百分比計算，它是由赤芍60％與燈盞細辛40％和適當的輔料製作而成。
4.按照權利要求1～3任意一項所述的治療心腦血管疾病的複方燈盞細辛製劑，其特徵在於所述組方中的赤芍與燈盞細辛可以是藥材或者是由相應比例藥材製備得到的提取物，其中燈盞細辛提取物可以是燈盞細辛醇提取物、燈盞細辛水提取物、燈盞細辛水提醇沉提取物、燈盞細辛半仿生提取物、燈盞細辛超臨界萃取物或者以上各提取物的精製品；赤芍提取物可以是赤芍醇提取物、赤芍水提取物、赤芍水提醇沉提取物、赤芍半仿生提取物、赤芍超臨界萃取物或者以上各提取物的精製品。
5.按照權利要求1～4任意一項所述的治療心腦血管疾病的複方燈盞細辛製劑，其特徵在於所述的製劑為直接用於注射給藥的注射液、直接供靜脈滴注的靜脈輸液、需稀釋後用於靜脈滴注的注射用濃溶液和用冷凍乾燥法或噴霧乾燥法製得的注射用無菌粉末和無菌塊狀物以及片劑、膠囊劑、顆粒劑、滴丸劑、丸劑、軟膠囊劑、口服液體製劑、口腔崩解片或分散片劑。
6.按照權利要求1～5中任意一項所述的治療心腦血管疾病的複方燈盞細辛製劑，其特徵在於製劑中含有黃酮類成分和苷類成分，以重量百分比計算，注射劑中黃酮類成分和苷類成分含量之和不低於製劑中扣除輔料量和水分量的總固體量的25％。
7.按照權利要求1～4中任意一項所述的治療心腦血管疾病的複方燈盞細辛製劑，其特徵在於燈盞細辛提取物可以是黃酮類成分含量大於90％的總黃酮有效部位，赤芍提取物可以是苷類成分含量大於90％的總苷有效部位。
8.按照權利要求1～4中任意一項所述的治療心腦血管疾病的複方燈盞細辛製劑，其特徵在於用等量的白芍及白芍提取物替代赤芍及赤芍提取物。
9.如權利要求1～5中任意一項所述的治療心腦血管疾病的複方燈盞細辛製劑的製備方法，其特徵在於取赤芍藥材，粉碎後加入水或乙醇溶液提取，合併提取液，過濾，濃縮得赤芍粗提物，或在此基礎上採用乙醇沉澱法、柱層析法、萃取法、絮凝沉澱法中的一種或幾種聯合使用進行適當精製，得赤芍精提物；取燈盞細辛藥材，粉碎後加入水或乙醇溶液提取，合併提取液，過濾，濃縮得燈盞細辛粗提物，或在此基礎上採用乙醇沉澱法、柱層析法、萃取法、絮凝沉澱法中的一種或幾種聯合使用進行適當精製，得燈盞細辛精提物，將燈盞細辛粗提物或精提物與赤芍粗提物或精提物混合均勻，加輔料製成不同的製劑。
10.按照權利要求9所述的治療心腦血管疾病的複方燈盞細辛製劑的製備方法，其特徵在於燈盞細辛加5～12倍量水煎煮1～5次，每次0.5～2小時，濾過，合併濾液，濾液減壓濃縮，加乙醇使含醇量達30～80％，不斷攪拌，靜置6～24小時，抽濾，濾液減壓回收乙醇並濃縮，用鹽酸調pH值，保溫，傾棄上清液，抽濾，沉澱用水洗至pH值，真空乾燥，得燈盞細辛提取物；赤芍加3～10倍量水煎煮1～5次，每次0.5～2小時，濾過，合併濾液，減壓濃縮，加乙醇使含醇量達40～80％，攪拌均勻，靜置6～24小時，抽濾，濾液減壓回收乙醇並濃縮，用水飽和的正丁醇提取1～5次，合併正丁醇液，用水洗1～3次，減壓回收正丁醇，殘留物加乙醇溶解，上聚醯胺柱，用乙醇洗脫，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空乾燥，得赤芍提取物，將燈盞細辛提取物與赤芍提取物混合均勻，加輔料製成不同的製劑。
11.按照權利要求10所述的治療心腦血管疾病的複方燈盞細辛製劑的製備方法，其特徵在於燈盞細辛加10倍量水煎煮3次，每次0.5小時，濾過，合併濾液，濾液減壓濃縮至相對密度50℃時1.09～1.11，加乙醇使含醇量達55％，不斷攪拌，靜置12小時，抽濾，濾液減壓回收乙醇並濃縮至相對密度50℃時1.10～1.12，用鹽酸調pH值至2，55℃保溫6小時，傾棄上清液，抽濾，沉澱用水洗至pH值3～4，真空乾燥，得燈盞細辛提取物；赤芍加8倍量水煎煮3次，每次1小時，濾過，合併濾液，減壓濃縮至相對密度50℃時1.06～1.08，加乙醇使含醇量達60％，攪拌均勻，靜置12小時，抽濾，濾液減壓回收乙醇並濃縮至相對密度50℃時1.18～1.20，用1/2倍量水飽和的正丁醇提取4次，合併正丁醇液，用1/8倍量水洗1次，減壓回收正丁醇，殘留物加45％乙醇7500ml溶解，上聚醯胺柱，1500g，Φ12cm，徑高比1∶6，吸附流速0.5BV/h，BV-溼柱體積＝幹樹脂重量的5倍體積，用45％乙醇22500ml洗脫，洗脫流速1BV/h，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空乾燥，得赤芍提取物，將燈盞細辛提取物與赤芍提取物混合均勻，加輔料製成不同的製劑。
12.按照權利要求9～11中任意一項所述的治療心腦血管疾病的複方燈盞細辛製劑的製備方法，其特徵在於所述製劑中的注射用無菌塊狀物這樣製備取燈盞細辛提取物、赤芍提取物和10g甘露醇，加1800ml注射用水，攪拌使溶解，用飽和氫氧化鈉溶液調pH值至7.0～7.5，加注射用水至2000ml，混勻，煮沸30分鐘，分裝於已處理好的輸液瓶中，塞入丁基橡膠塞及薄膜，軋鋁蓋，流通蒸汽滅菌30分鐘，冷藏24小時，在無菌條件下用0.45μm和0.22μm微孔濾膜濾過，濾液分裝，每瓶2.0ml，冷凍乾燥，第一階段的平衡凍結溫度為0℃時的平衡時間為1.5小時，即擱板溫度與產品溫度基本一致的時間；第二階段凍結溫度從0℃到最低共熔溫度-16℃時，擱板溫度與產品溫度平衡時間為1.5小時；第三階段繼續降溫至-45℃，約需1.5小時，保持此溫度1.5小時，直至產品完全凍牢，即開始抽真空，進入乾燥程序，在45℃恆溫下-抽真空，使乾燥室的氣壓降至13.332～266.64Pa，在此壓力下緩慢升溫，2～4℃/h，至最低共熔點溫度，時間約為12小時，升華乾燥完成後，繼續在13.332Pa低壓條件下，升溫乾燥以除去殘餘水分，時間約為12～15小時，保持35℃以上乾燥3小時，壓蓋，即得。
13.按照權利要求9～11中任意一項所述的治療心腦血管疾病的複方燈盞細辛製劑的製備方法，其特徵在於所述製劑中的注射液和注射用濃溶液這樣製備取燈盞細辛提取物、赤芍提取物，加入適量注射用水溶解，按體積加入1.0％的活性炭，煮沸，保持微沸30min，稍冷濾過，濾液加注射用水至規定量，用飽和氫氧化鈉溶液調pH值至7.0～7.5，煮沸，4℃冷藏過夜，粗濾、精濾，加注射用水，分裝到安剖瓶，封口滅菌，即得。
14.按照權利要求9～11中任意一項所述的治療心腦血管疾病的複方燈盞細辛製劑的製備方法，其特徵在於所述製劑中的葡萄糖或氯化鈉靜脈輸液這樣製備取燈盞細辛提取物、赤芍提取物，加入適量注射用水溶解，加入規定量的葡萄糖或氯化鈉，混合溶解後按體積加入1.0％的活性炭，煮沸，保持微沸30min，稍冷濾過，濾液加注射用水至規定量，再用飽和氫氧化鈉溶液調pH值至7.0～7.5，煮沸，4℃冷藏過夜，粗濾、精濾，加注射用水，分裝，滅菌即得。
15.按照權利要求9～11中任意一項所述的治療心腦血管疾病的複方燈盞細辛製劑的製備方法，其特徵在於所述製劑中的注射用無菌粉末這樣製備取燈盞細辛提取物、赤芍提取物，加1800ml注射用水，攪拌使溶解，用飽和氫氧化鈉溶液調pH值至7.0～7.5，加注射用水至2000ml，混勻，煮沸30分鐘，分裝到搪瓷盤中，冷凍乾燥，第一階段的平衡凍結溫度為0℃時的平衡時間為1.5小時，即擱板溫度與產品溫度基本一致的時間；第二階段凍結溫度從0℃到最低共熔溫度-16℃時，擱板溫度與產品溫度平衡時間為1.5小時；第三階段繼續降溫至-45℃，約需1.5小時，保持此溫度1.5小時，直至產品完全凍牢，即開始抽真空，進入乾燥程序，在45℃恆溫下-抽真空，使乾燥室的氣壓降至13.332～266.64Pa，在此壓力下緩慢升溫，2～4℃/h，至最低共熔點溫度，時間約為12小時，升華乾燥完成後，繼續在13.332Pa低壓條件下，升溫乾燥以除去殘餘水分，時間約為12～15小時，保持35℃以上乾燥3小時，在無菌條件下分裝到西林瓶中，即得。
16.按照權利要求9～11中任意一項所述的治療心腦血管疾病的複方燈盞細辛製劑的製備方法，其特徵在於所述製劑中的注射用無菌粉末還可以這樣製備取燈盞細辛提取物、赤芍提取物，混勻，加入適量注射用水溶解，按體積加入1.0％的活性炭，煮沸，保持微沸30min，稍冷濾過，濾液加注射用水至規定量，用飽和氫氧化鈉溶液調pH值至7.0～7.5，煮沸，4℃冷藏過夜，粗濾、精濾，在進風溫度為150℃，出風溫度為60℃，氣流速度為20m·s-1的條件下噴霧乾燥得粉末，分裝，即得。
17.如權利要求1～4中任意一項所述的治療心腦血管疾病的複方燈盞細辛製劑的應用，其特徵在於所述的製劑用於製備治療肝腎綜合症、心肺病、糖尿病及其併發症等疾病的藥物。
全文摘要
本發明提供了一種治療心腦血管疾病的複方燈盞細辛製劑及其製備方法和應用，它是由燈盞細辛1～99％、赤芍99～1％和適當的輔料製作而成的，與現有技術相比，本方遵「治風先治血，血行風之滅」之理，採取活血化淤通絡之法，以性味苦溫的燈盞細辛為君，用之化淤通絡；赤芍味苦微寒，入血分，涼血熱，散淤血，通經絡，治血熱淤滯，助君藥以達活血化淤、散淤通絡之效，用之為臣；二藥合用具有活血化淤，通經活絡的功能。組方有用藥精簡力專、作用途徑直接之長，無偏溫偏涼之弊，有較為明顯的用藥特色，通過合理可行的製備工藝，保證了產品的安全有效，可供病人長期使用。
文檔編號A61K36/28GK1762434SQ20051010625
公開日2006年4月26日 申請日期2005年9月23日 優先權日2004年9月24日
發明者於文勇 申請人:貴陽雲巖西創藥物科技開發有限公司