一種預防或治療骨質疏鬆症的藥物及其製備方法和應用的製作方法

2023-09-23 13:59:05 2

專利名稱：一種預防或治療骨質疏鬆症的藥物及其製備方法和應用的製作方法
技術領域：
本發明屬於藥物技術領域，具體地說，涉及一種預防或治療骨質疏鬆症的藥物及其製備方法和在製備預防和治療骨質疏鬆症的藥物中的應用。
背景技術：
骨質疏鬆症是一種以骨量減少、骨組織顯微結構異常和骨折增加為特徵的一類疾病，常見於老年人特別是絕經期後的婦女，其發病率高、危害性大。統計數據表明由於骨質疏鬆引起的臀部骨折，1990年全世界為170萬人，到2025年預計將達到630萬人。單美國一個國家此項花費1990年為100億美元，預計2040年此項花費將達到2400億美元(Masahiko Sato et al，J.Med.Chem.1999，421)。成年期，骨組織不斷經歷破骨細胞對骨吸收和成骨細胞形成新骨的過程，使骨骼更新並保持形態結構完整性。若破骨細胞和成骨細胞之間平衡失調，骨吸收大於骨形成時，發生骨丟失，引起骨質疏鬆。治療骨質疏鬆症的關鍵就是促進成骨細胞的成骨過程，緩解破骨細胞的破骨過程。大量研究表明組織蛋白酶B(Cathepsin B)和碳酸酐酶II(CarbonicAnhydrase II)與破骨細胞調節的骨吸收有密切關係(Fred H.Drake etal.，J.Biol.Chem.1996，27112511；P.Lehenkar，et al.，Exp.Cell Res.1998，1024)。因此，尋找組織蛋白酶B(Cathepsin B)和碳酸酐酶II(Carbonic Anhydrase II)抑制劑將會發現新的骨質疏鬆症治療藥物。迄今，現有技術中沒有含有式(I和II)化合物老鸛草素(geraniin)作為有效成分在治療骨質疏鬆症方面的報導，也沒有該化合物作為組織蛋白酶B(Cathepsin B)和碳酸酐酶II(Carbonic Anhydrase II)抑制劑的報導。

發明內容
本發明的目的在於提供含有有效量式(I和II)化合物及藥用載體和/或賦形劑所製成的藥物。為了實現上述目的，本發明提供了如下的技術方案一種預防或治療骨質疏鬆症的藥物，其中含有預防或治療骨質疏鬆症有效量的式I化合物(包括溶液中可能存在的另外一種形式II)老鸛草素(geraniin)及可藥用載體和/或賦形劑。 本發明還提供了上述藥物的製備方法，採集新鮮葉下珠(Phyllanthus urinaria)全草涼幹、粉碎，用50％乙醇在常溫下提取4次，提取液在40℃下減壓濃縮至小體積，將濃縮液通過大孔樹脂，先用純水洗脫，然後用25％乙醇洗脫，將25％的洗脫液濃縮至小體積，通過反相矽膠柱層析，分別用水和25％乙腈洗脫，收集25％乙腈洗脫部分，放置即得權利要求1所述的化合物老鸛草素，然後再按藥物常規製備方法配製成所需劑型。
本發明同時提供了上述藥物在製備預防或治療骨質疏鬆症藥中的應用。
本發明化合物用作上述藥物時，可以直接使用，或者以藥物組合物的形式使用。該藥物組合物含有0.1～99％，優選為0.5～90％的本發明化合物，其餘為藥物學上可接受的，對人和動物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
所述的藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料以及藥物製品輔劑。將所述的藥物組合物以單位體重服用量的形式使用。本發明的藥物可經口服和注射(靜注、肌注)兩種形式給藥。
口服可用其固體或液體製劑，如粉劑、片劑、糖衣劑、膠囊、溶液、糖漿、滴丸劑等。
注射可用其固體或液體製劑，如粉針劑、溶液形注射劑等。
為了更好地理解本發明的實質，下面將用本發明的式(I和II)化合物老鸛草素(geraniin)及其與藥物載體或賦形劑組成的藥物的生物活性結果來說明它在醫藥領域中的應用。1、組織蛋白酶B(Cathepsin B)抑制活性試驗其基本原理基於 (1)緩衝液配製緩衝液由100mM醋酸鈉，20mM半胱氨酸，5mMEDTA組成，用6N HCl調至PH5.5。(2)底物為Z-phe-arg AMC(BaChem生產)，儲備液為500mM(溶於DMSO中)，用緩衝液稀釋，每孔加70μL，使終濃度為50μM。(3)陽性對照用亮抑酶肽(leupeptin，CalBioChem生產)，儲備液為10mM，用緩衝液稀釋，對照孔每孔加10μL，使終濃度為30nM。(4)組織蛋白酶B(儲備液由CalBioChem生產)，取12.5μl酶用緩衝液稀釋至10mL，每孔加20μL。(5)化合物配製成25μM濃度作為儲備液(溶於DMSO中)，每孔加5μL，使終濃度為1.25μM。(6)阻斷劑用亮抑酶肽，儲備液為10mM，用緩衝液稀釋至1.2μM。在室溫下孵化60分鐘後加入阻斷劑20μL(終濃度為200nM)。(7)用螢光酶標儀在波長355ex/450em讀數。根據試驗測定得到老鸛草素(geraniin)對組織蛋白酶B(Cathepsin B)的抑制活性IC50為0.37μg/mL。2、碳酸酐酶II(Carbonic Anhydrase II)抑制活性試驗其基本原理基於 (1)緩衝液用HEPES緩衝液，PH6.9。每孔加60μL。(2)底物為對硝基苯乙酸酯(Sigma生產)，儲備液為3mM(先溶於丙酮中，然後用緩衝液稀釋)，每孔加25μL。(3)對照物為6-Ethoxyzolamide，儲備液為10mM(溶於DMSO中，用DMSO稀釋)，對照孔每孔加5μL。(4)碳酸酐酶II(Sigma生產)，儲備液為100μM，每孔加10μL。(5)化合物配製成25μM濃度作為儲備液(溶於DMSO中)，每孔加5μL。(6)阻斷劑為6-Ethoxyzolamid，儲備液為10mM(溶於DMSO中，用DMSO稀釋)，對照孔每孔加5μL。在室溫下孵化120分鐘後加入阻斷劑5μL。(7)用酶標儀在波長405nm測定吸收值。根據試驗測定得到老鸛草素(geraniin)對碳酸酐酶II(CarbonicAnhydrase II)的抑制活性IC50為2.34μg/mL。
實驗證明本發明涉及的老鸛草素(geraniin)化合物具有顯著的抑制組織蛋白酶B(Cathepsin B)和碳酸酐酶II(Carbonic Anhydrase II)的活性。組織蛋白酶B(Cathepsin B)和碳酸酐酶II(Carbonic AnhydraseII)與骨質蔬松密切相關。
具體實施例方式下面結合實施例進一步對本發明的實質內容進行說明，但本發明的內容並不局限於此。
實施例1採集新鮮葉下珠(Phyllanthus urinaria)8公斤，全草涼幹、粉碎，然後用50％乙醇在常溫下提取4次，提取液在40℃下減壓濃縮得浸膏400克，用水溶解，通過大孔樹脂，先用純水洗脫，然後用25％乙醇洗脫。將25％的洗脫液濃縮至小體積，通過反相矽膠柱層析，分別用水和25％乙腈洗脫，收集25％乙腈洗脫部分，放置即得黃色晶體(即老鸛草素geraniin)30克。
該方法分離出的化合物老鸛草素(geraniin)，在溶液中該化合物可能以兩種形式(I和/或II)存在。其化學結構式分別為 分子量為952，分子式C41H28O27，其性狀為黃色結晶，易溶於甲醇、丙酮，微溶於水。
老鸛草素(geraniin)的結構是基於它的質譜和核磁共振數據並通過與文獻中已知化合物的光譜進行對照而確定。負離子FAB-MS顯示m/z 951(M-1)。有關核磁共振數據見表1。
表1老鸛草素(Geraniin)的NMR數據(溶劑為Me2CO-d6)

實施例2按實施例1製得化合物老鸛草素(geraniin)，按化合物晶體與賦形劑重量比1∶1的比例加入賦形劑，制粒壓片。
實施例3按實施例1製得化合物老鸛草素(geraniin)，按常規膠囊製劑方法製成膠囊。
實施例4按實施例1製得化合物老鸛草素(geraniin)，按化合物晶體與賦形劑重量比1∶2的比例加入賦形劑，制粒壓片。
實施例5按實施例1製得化合物老鸛草素(geraniin)，按化合物晶體與賦形劑重量比1∶3的比例加入賦形劑，制粒壓片。
實施例6片劑老鸛草素(geraniin) 100mg澱粉 100mg玉米漿17％ 適量硬脂酸鎂 適量實施例7膠囊劑老鸛草素(geraniin) 100mg澱粉 100mg硬脂酸鎂 適量製備方法將老鸛草素與助劑混合，過篩，在合適的容器中均勻混合，把得到的混合物裝入硬明膠膠囊。
實施例8安瓿劑老鸛草素(geraniin) 50mg製備方法將老鸛草素溶解於2毫升丙二醇中，過濾所得溶液在無菌條件下裝入安瓿瓶中。
權利要求
1.一種預防或治療骨質疏鬆症的藥物，其中含有預防或治療骨質疏鬆症有效量的式I化合物(包括溶液中可能存在的另外一種形式II)老鸛草素(geraniin)及可藥用載體和/或賦形劑。
2.權利要求1的藥物的製備方法，其特徵在於採集新鮮葉下珠(Phyllanthus urinaria)全草涼幹、粉碎，用50％乙醇在常溫下提取4次，提取液在40℃下減壓濃縮至小體積，將濃縮液通過大孔樹脂，先用純水洗脫，然後用25％乙醇洗脫，將25％的洗脫液濃縮至小體積，通過反相矽膠柱層析，分別用水和25％乙腈洗脫，收集25％乙腈洗脫部分，放置即得權利要求1所述的化合物老鸛草素，然後再按藥物常規製備方法配製成所需劑型。
3.權利要求1所述藥物在製備預防或治療骨質疏鬆症藥中的應用。
全文摘要
本發明提供一種預防或治療骨質疏鬆症的藥物及其製備方法和應用。具體地,利用藥用植物葉下珠全草為原料,通過粉碎,酒精提取,大孔樹脂處理,反相矽膠柱層析以乙腈/水洗脫,結晶得到藥用有效成分老鸛草素(geraniin)化合物,然後按藥物常規製劑製備方法製成藥物。
文檔編號A61P19/00GK1378858SQ0211365
公開日2002年11月13日 申請日期2002年4月23日 優先權日2002年4月23日
發明者劉吉開, 董澤軍, 丁智慧, 沈志強 申請人:中國科學院昆明植物研究所