知母總皂苷在製備治療或預防糖尿病的藥物中的應用的製作方法
2023-10-06 15:43:24
專利名稱：知母總皂苷在製備治療或預防糖尿病的藥物中的應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及知母總皂苷的新的醫藥用途，具體地涉及知母總皂苷在製備治療或預防糖尿病的藥物中的應用。
背景技術：
知母是百禾科(liliaceae)植物知母(Anemarrhena asphodeloides Bge.)的乾燥根莖。大量研究證明，知母總皂苷是其主要活性成分，17種單體皂苷已見報導，但尚未見有關知母總皂苷抑制α-葡萄糖苷酶活性，降低餐後血糖；促進糖代謝，平衡血糖，降低血脂，促進胰島素分泌，保持血糖長期穩定的藥物的報導。
發明內容
本發明提供了知母總皂苷在製備治療或預防糖尿病的藥物中的應用。
本發明提供了知母總皂苷在抑制α-葡萄糖苷酶，降低餐後血糖；促進糖代謝，平衡血糖，降低血脂，促進胰島素分泌，保持血糖長期穩定方面的應用。
本發明所述的知母總皂苷，其中100％＞知母總皂苷的含量≥50％，100％＞菝蕷皂苷元的含量≥30％，其可以通過如下方法製備知母藥材粉碎成粗粉，加乙醇浸泡，然後常溫超聲提取，提取液合併過濾，濾液濃縮，濃縮液上大孔吸附樹脂，不同醇溶液洗脫，洗脫液減壓濃縮至濃膏，乾燥得知母總皂苷；但不限於此。
具體實施例方式
製備例1製備知母總皂苷知母藥材粉碎成粗粉，加70％乙醇先浸泡4小時，然後常溫超聲提取三次，溶劑倍數為4∶4∶3，提取時間每次3小時，提取液合併過濾，濾液減壓濃縮至乙醇含量30％左右，濃縮液上處理好的AB-8大孔吸附樹脂，上樣後的AB-8大孔吸附樹脂分別用30％乙醇洗脫2個柱體積，50％乙醇洗脫1個柱體積，95％乙醇洗脫2個柱體積，95％乙醇洗脫液減壓濃縮至濃膏，將濃膏真空乾燥得知母總皂苷；其總皂苷含量54％，菝蕷皂苷元的含量32.3％。
製備例2製備知母總皂苷知母藥材粉碎成粗粉，加70％乙醇先浸泡4小時，然後常溫超聲提取三次，溶劑倍數為4∶4∶3，提取時間每次3小時，提取液合併過濾，濾液減壓濃縮至乙醇含量30％左右，濃縮液上處理好的AB-8大孔吸附樹脂，上樣後的AB-8大孔吸附樹脂分別用30％乙醇洗脫2個柱體積，50％乙醇洗脫1個柱體積，95％乙醇洗脫2個柱體積，95％乙醇洗脫液減壓濃縮至濃膏，將濃膏真空乾燥得知母總皂苷；其總皂苷含量84％，菝蕷皂苷元的含量52.3％。
試驗例一對α-葡萄糖苷酶的體外抑制實驗1.材料知母總皂苷按製備例1製備；大鼠山東省天然藥物工程技術研究中心提供拜糖蘋德國拜耳醫藥保健有限公司，批號1011812.方法取大白鼠上端小腸20g，加4℃預冷的PH6.8磷酸緩衝液60ml，勻漿，4℃、4000rpm離心20min，取上清分裝入試管中，-20℃冷凍保存備用；取酶液(小腸勻漿液)0.2ml加PH6.8磷酸緩衝液0.7ml，37℃水浴10min，加入0.5mol/L蔗糖0.1ml，反應20min後，加入1ml0.1mol/LNaCO3終止反應；酶法測定葡萄糖濃度，分3組，空白對照組，知母總皂苷組和拜糖蘋組，每組三管，平行測定；將在37℃，每分鐘1L溶液中生成0.01mmol葡萄糖定義為一個酶活力單位，見表1。
表1知母總皂苷對α-葡萄糖苷酶活性的體外抑制
試驗例二對正常小鼠血糖的影響實驗1.材料小白鼠山東省天然藥物工程技術研究中心提供；知母總皂苷按製備例2方法製備；2.方法取小白鼠50隻，雌雄各半，體重24-28g，測空腹血糖，隨機分為5組正常對照組，知母總皂苷4個劑量組(50mg/Kg、150mg/Kg、450mg/Kg、1350mg/Kg)。連續灌胃7天，末次給藥7h後斷尾採血，測血糖濃度；然後斷頭處死小鼠，取血液離心分離血清，置-20℃冰箱保存，做胰島素放射免疫測定備用；小鼠剖腹，自肝內門靜脈按10ml/只的劑量，用注射器將生理鹽水緩慢注入肝臟，將肝臟中殘留血液衝洗掉，取出肝臟，稱重，按1g肝加入PH7.4等滲磷酸鹽緩衝液50ml用組織研磨器製備勻漿，取勻漿液0.5ml，加入4％的磺基水楊酸溶液0.5ml，充分混勻，離心，棄沉澱，蒽酮法測定肝糖原含量，見表2。
表2知母總皂苷對正常小鼠血糖、血胰島素水平和肝糖原含量的影響
與正常對照組相比*P＜0.05，**P＜0.01試驗例三對糖尿病模型小鼠血糖的影響實驗1.材料小白鼠山東省天然藥物工程技術研究中心提供；知母總皂苷按製備例方法製備；優降糖天津力生製藥廠產品，批號9903042.方法取小白鼠150隻，雌雄各半，體重24-28g，10隻為正常對照組，其餘尾靜脈注射四氧嘧啶55mg/Kg，72h後測空腹血糖，選取血糖值＞11mmo/L的高血糖小鼠60隻，按血糖高低隨機分為6組糖尿病模型對照組、優降糖組和知母總皂苷4個劑量組(50mg/Kg，150mg/Kg，450mg/Kg，1350mg/Kg)，使各組的血糖無顯著性差異。灌胃給藥10d，於末次給藥後7h，斷尾採血，測血糖濃度；然後斷頭處死小鼠，取血液離心分離血清，置-20℃冰箱保存，做胰島素放射免疫測定備用；小鼠剖腹，自肝內門靜脈按10ml/只的劑量，用注射器將生理鹽水緩慢注入肝臟，將肝臟中殘留血液衝洗掉，取出肝臟，稱重，按1g肝加入PH7.4等滲磷酸鹽緩衝液50ml用組織研磨器製備勻漿，取勻漿液0.5ml，加入4％的磺基水楊酸溶液0.5ml，充分混勻，離心，棄沉澱，蒽酮法測定肝糖原含量，見表3。
表3知母總皂苷對四氧嘧啶高血糖小鼠血糖、血胰島素水平和肝糖原含量的影響
與正常對照組相比△P＜0.05，△△P＜0.01；與模型對照組相比*P＜0.05，**P＜0.01試驗例四對正常小鼠糖耐量的影響實驗1.材料知母總皂苷按製備例1製備；大鼠山東省天然藥物工程技術研究中心提供拜糖蘋德國拜耳醫藥保健有限公司，批號1011812.方法取小白鼠60隻，雌雄各半，體重24-28g，測空腹血糖，隨機分為6組正常對照組、拜糖蘋組和知母總皂苷4個劑量組(50mg/Kg、150mg/Kg、450mg/Kg、1350mg/Kg)，使各組的血糖無顯著性差異。給藥後，以10g/Kg劑量澱粉灌胃，分別於給澱粉後0.5h、1h、2h測血糖，見表4。
表4知母總皂苷對正常小鼠糖耐量的影響
與正常對照組相比*P＜0.05，**P＜0.01
試驗例五對糖尿病小鼠糖耐量的影響實驗1.材料知母總皂苷按製備例1製備；大鼠山東省天然藥物工程技術研究中心提供拜糖蘋德國拜耳醫藥保健有限公司，批號1011812.方法取小白鼠150隻，雌雄各半，體重24-28g，10隻作為正常對照組，其餘尾靜脈注射四氧嘧啶55mg/Kg，72h後測空腹血糖，選取血糖值＞11mmo/L的高血糖小鼠50隻，隨機分為5組拜糖蘋組和知母總皂苷4個劑量組(50mg/Kg、150mg/Kg、450mg/Kg、1350mg/Kg)，使各組的血糖無顯著性差異。給藥後，以10g/Kg劑量澱粉灌胃，分別於給澱粉後0.5h、1h、2h測血糖，見表5。
表5知母總皂苷對四氧嘧啶模型小鼠糖耐量的影響
與模型對照組相比*P＜0.05，**P＜0.0權利要求
1.知母總皂苷在製備治療或預防糖尿病的藥物中的應用。
2.根據權利要求1所述的應用，知母總皂苷在抑制α-葡萄糖苷酶，降低餐後血糖；促進糖代謝，平衡血糖，降低血脂，促進胰島素分泌，保持血糖長期穩定方面的應用。
3.根據權利要求1或2所述的應用，其中知母總皂苷中100％＞知母總皂苷含量≥50％，100％＞菝蕷皂苷元含量≥30％。
4.一種知母總皂苷的製備方法將知母藥材粉碎，加70％乙醇浸泡4小時，常溫超聲提取三次，溶劑倍數為4，4，3，提取時間為3小時，合併濾液，過濾後減壓濃縮至醇含量為30％，上處理好的AB-8大孔樹脂，用30％乙醇洗脫2個柱體積，50％乙醇洗脫1個柱體積，95％乙醇洗脫2個柱體積，收集95％乙醇洗脫液，濃縮至膏，真空乾燥即得。
全文摘要
本發明提供了知母總皂苷在製備治療或預防糖尿病的藥物中應用，具體地提供了知母總皂苷在抑制α－葡萄糖苷酶，降低餐後血糖；促進糖代謝，平衡血糖，降低血脂，促進胰島素分泌，保持血糖長期穩定方面的應用。
文檔編號A61K31/7042GK1679866SQ20051005463
公開日2005年10月12日 申請日期2005年3月7日 優先權日2004年3月8日
發明者劉志峰, 李春梅, 雷慶忠, 李大磊, 李慎軍 申請人:山東綠葉天然藥物研究開發有限公司