獨一味提取物、含有該提取物的藥物組合物及質量控制方法

2023-10-11 17:07:39

專利名稱：：獨一味提取物、含有該提取物的藥物組合物及質量控制方法
技術領域：
：本發明涉及一種獨一味提取物及含有該提取物的藥物組合物及質量控制方法，屬藥物領域。
背景技術：
：獨一味是藏族習用藥材，為唇形科植物獨一味Lamio-phlomisrotata(Benth.)Kudo的根及根狀莖、全草，生長於海拔3000m以上的高原或高山上。獨一味性微寒，味苦，有小毒；功效活血，行瘀消腫，止痛；主治跌傷筋骨，閃腰挫氣，關節積黃水。其化學成分有黃酮類成分，環烯醚萜類化合物，苯乙醇苷類等，報導的藥理活性有，鎮痛作用、止血作用、抗炎作用、抗腫瘤，對骨髓粒系祖細胞(CFU-D)的影響(見張鳳等，獨一味的化學成分及藥理作用，藥學實踐雜誌2008年第26巻第3期)。關於獨一味及製劑的質量控制方法，《中國藥典》2005年版一部(第184和541頁)收載有獨一味藥材和獨一味膠囊劑，規定了黃酮類成分(木犀草素和/或總黃酮)的檢測項目。眾所周所，從植物中獲得純的有用價值的化合物極為困難，成本很高，同時也為了避免難以預料的副作用，一般不使用植物中的有效純化合物，而使用藥用植物提取物直接作用藥用原料，成本低而且應用簡便。但植物提取物的一個缺陷是，由於植物採收季節和產地不同都會造成有效成分含量的波動，同時，如果主要有效成分及其含量不清楚，都會給藥品的質量控制造成很大困難，因此，為了保持植物藥的質量穩定，清楚知道植物中各基本藥效成分及其含量是很重要的。由於黃酮類成分並非是獨一味製劑中的主要活性成分之一，因此僅僅通過對黃酮類成分的質量控制，尚不能完全監控獨一味製劑的質量。山梔苷甲酯是獨一味中環烯醚萜類化合物之一，張承忠等人(藏藥獨一味中的環烯醚萜甙.中草藥.1992年第23巻第10期第509、510和560頁)首次從藏藥獨一味中得到山梔苷甲酯。8-0-乙醯山梔苷甲酯是從獨一味根的正丁醇提取物中分得4個環烯醚萜苷(見易進海等，藏藥獨一味根環烯醚357-360)，目前，尚沒有將兩個化合物同時作為質量控制的指標成分報導。
發明內容本發明的技術方案是提供了一種獨一味提取物，本發明的另一技術方案是提供了含有該提取物的藥物組合物及其質量控制方法。本發明提供一種獨一味提取物，它含有山梔苷甲酯和8-o-乙醯山梔苷甲酯，總重量不低於5mg/g。它含有山梔苷甲酯和8-0-乙醯山梔苷甲酯的總重量為6.1-19.7mg/g。進一步優選地，山梔苷甲酯與8-o-乙醯山梔苷甲酯的比值範圍為0.27-5.25。更進一步優選地，山梔苷甲酯與8-0-乙醯山梔苷甲酯的比值範圍為0,81-5.25。本發明獨一味提取物是獨一味藥材的水或有機溶劑提取物。本發明還提供了一種藥物組合物，它含有所述的獨一味提取物為活性成分，加上藥學上可接受的輔料或輔助性成分製備而成的藥劑。所述的藥劑是膠囊劑、片劑、顆粒劑、丸劑、口服液、軟膠囊劑或滴丸劑。本發明還提供了一種檢測獨一味藥材及其提取物或含有獨一味提取物的藥物組合物的質量的方法，它是以山梔苷甲酯和8-o-乙醯山梔苷甲酯為指標成分進行質量檢測。其中，獨一味提取物中含有山梔苷甲酯和8-o-乙醯山梔苷甲酯，總重量不低於5mg/g。控制獨一味藥材及其提取物或含有獨一味提取物的藥物組合物的質量的方法，是以山梔苷甲酯和8-o-乙醯山梔苷甲酯為指標成分進行質量控制。本發明提取物藥效穩定，可控性強。通過將山梔苷甲酯和8-o-乙醯山梔苷甲酯作為指標成分控制提取物的質量，藥效明確，可控性強，本發明質量控制方法準確可靠、穩定可控，使用該方法測定獨一味藥材或製劑中山梔苷甲酯的含量能夠有效地監控獨一味藥品的質量。以下通過具體實施方式對本發明作進一步的詳細描述，但並不限制本發明，本領域技術人員可以根據本發明作出各種改變和變形，只要不脫離本發明的精神，均應屬於本發明所附權利要求的範圍。具體實施例方式實施例1本發明藥物原料提取物的製備取獨一味藥材1000g，粉碎，加水煎煮3次，第1次2小時，第2、3次分別為1小時，每次加水量為8倍，合併煎液，濾過，濾液濃縮為相對密度1.30(85°C)的清膏，在8(TC以下乾燥，粉碎，得膏率為15-25%。實施例2本發明藥物原料提取物的製備取獨一味藥材1000g，粉碎，加20倍水浸漬24小時，水溫為85'C，濾過，濾液濃縮為相對密度1.30(85°C)的清膏，乾燥，粉碎，得膏率為12-18%實施例3本發明藥物原料提取物的製備取獨一味藥材1000g，粉碎，在壓力提取罐中加水加壓提取3次，第1次2小時，第2、3次分別為1小時，每次加水量為8倍，溫度為12(TC，合併提取液，濾過，濃縮，乾燥，粉碎，得膏率為18-25%。實施例4本發明藥物原料提取物的製備取獨一味藥材1000g，粉碎，加水煎煮3次，第1次2小時，第2、3次分別為1小時，每次加水量為8倍，合併煎液，濾過，濃縮，加乙醇至溶液含醇量為30%，靜置12小時，取上清液，濃縮，乾燥，粉碎，得膏率為10-18%。實施例5本發明藥物原料提取物的製備取獨一味藥材1000g，粉碎，加20倍量70%乙醇滲漉提取，提取液回收乙醇，濃縮，乾燥，粉碎，得膏率為12-20°/0。實施例6本發明藥物原料提取物的製備取獨一味藥材1000g，粉碎，加20倍量30%乙醇滲漉提取，提取液回收乙醇，濃縮，乾燥，粉碎，得膏率為12-20%。實施例7本發明藥物原料提取物的製備取獨一味藥材1000g，粉碎，加8倍量70%乙醇回流提取3次，提取液回收乙醇，濃縮，乾燥，粉碎，得膏率為15-23%。實施例8本發明藥物顆粒劑的製備取獨一味1000g，粉碎，加水煎煮三次，每次1小時，合併煎液，濾過，濾液濃縮成相對密度為1.30的清膏，在8(TC以下乾燥，加入適量的澱粉，製成顆粒，乾燥，裝入膠囊，製成1000粒，即得。實施例9本發明獨一味藥材質量控制方法山梔苷甲酯、8-O-乙醯山梔苷甲酯照高效液相色譜法(附錄VID)色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以乙腈為流動相A，以水為流動相B，按下表中的規定進行梯度洗脫；檢測波長為235nm。理論板數按山梔苷甲酯峰計算應不低於3000。時間(分鐘)流動相A(%)流動相B(%)01199111359—1891—8235451882對照品溶液的製備精密稱取山梔苷甲酯、8-0-乙醯山梔苷甲酯對照品適量，加甲醇製成每lml含山梔苷甲酯、8-0-乙醯山梔苷甲酯各30Pg的混合溶液，即得。供試品溶液的製備取獨一味藥材(過三號篩)0.6g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入7Ca甲醇25ml，密塞，稱定重量，加熱回流60分鐘，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續濾液2ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，即得。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10W，注入液相色譜儀，測定，即得。實施例10獨一味提取物中山梔苷甲酯和8-o-乙醯山梔苷甲酯的含量測定山梔苷甲酯、8-0-乙醯山梔苷甲酯照高效液相色譜法(附錄VID)測定。色譜條件與系統適用性試驗以十八垸基矽垸鍵合矽膠為填充劑；以乙腈為流動相A，以水為流動相B，按下表中的規定進行梯度洗脫；檢測波長為235nm。理論板數按山梔苷甲酯峰計算應不低於3000。時間(分鐘)流動相A(%)流動相B(%)01199111149—1591—8514351585對照品溶液的製備精密稱取山梔苷甲酯、8-0-乙醯山梔苷甲酯對照品適量，加甲醇製成每lml含山梔苷甲酯、8-O-乙醯山梔苷甲酯各30Pg的混合溶液，即得。供試品溶液的製備取獨一味提取物，研細，取約0.2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70。/。甲醇25ml，密塞，稱定重量，加熱回流60分鐘，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各IOW，注入液相色譜儀，測定，即得。取08070546、08080358兩批藥材，分別採用以上7種提取方法提取，測所得浸膏的山梔苷甲酯含量，結果如下單位(mg/g)tableseeoriginaldocumentpage7次，第1次2小時，第2、3次分別為1小時，每次加水量為8倍，合併煎液，濾過，濃縮，加乙醇至溶液含醇量為30%，靜置12小時，離心，取下層固體，乾燥，粉碎即得。方法2:直接將獨一味藥材超微粉碎所得粉末。方法3:取獨一味藥材1000g，粉碎，加水煎煮3次，第1次2小時，第2、3次分別為1小時，每次加水量為8倍，合併煎液，濾過，濃縮，按藥液體積加入0.4%的殼聚糖做澄清劑，靜置12小時，取上清液，濃縮，乾燥，粉碎即得。以下通過藥效學試驗進行證明本發明的有益效果。試驗例1本發明獨一味提取物止血、止痛試驗1.實驗目的採用醋酸致小鼠扭體法、小鼠斷尾出血法、二甲苯致小鼠耳廓腫脹試驗，比較樣品1-31獨一味提取物的鎮痛、止血、抗炎作用。2.實驗材料(1)藥物樣品1-31:獨一味提取物，為棕色至棕褐色浸膏，由本實驗室自製，臨用前均用生理鹽水配置成適當濃度備用；複方對乙醯氨基酚片白色片劑，規格0.3g/片，吉林省百康藥業有限責任公司生產，批號20060102，臨用前用生理鹽水配製成適當濃度，備用；雲南白藥白色粉末，規格4g/瓶，雲南白藥集團有限公司生產，批號071054，臨用前用生理鹽水配製成適當濃度，備用。醋酸地塞米松片，浙江仙據製藥股份有限公司，規格0.75mg/片，批號080182。(2)動物昆明種小鼠，體重1822g。由四川省中藥研究所提供，動物使用許可證號:SCXK(川)2008—10。動物級別三級。(3)試劑冰醋酸規格500ml/瓶，分析純，由中國成都化學試劑廠產品，批號20070503，吸取冰醋酸0.3ml加入生理鹽水至50ml，配成0.6%醋酸溶液供實驗用。生理鹽水規格500ml/瓶，無色澄明液體，由四川科倫藥業股份有限公司生產，批號B070414。二甲苯，成都科龍化工試劑廠，批號20050702。(4)儀器FA1004型電子天平，量程100g，精密度0.lmg，上海良平儀器儀表有限公司生產。秒表上海秒表廠產品。3.l對醋酸致小鼠疼痛反應的影響取昆明種小鼠330隻，雌雄各半，按體重性別隨機分成10組，每組10隻，雌雄各半。空白對照組每鼠口服灌胃生理鹽水10ml/kg體重，陽性對照組灌服複方對乙醯氨基酚0.23g/kg(按照處方中阿司匹林的含量計)體重，給藥各組分別灌服樣品1-31組3g(生藥)/kg體重。每日給藥1次，連續給藥3天，末次給藥後30min，各組小鼠腹腔注射0.6%醋酸溶液0.2ml/鼠，觀察記錄各鼠在腹腔注射醋酸後15rnin內扭體次數，進行組間比較其顯著差異性。結果見表l。_表l對醋酸致小鼠疼痛反應的影響_^^動物數扭體次數抑制率糹且力UfU裡,□、,、za—丄、,。/、(只)(次，x土s)(%)與空白對照組比較P*〈0.05，P**〈0.01NS1048.9±11,0—0.23mg/kg1016.7±10.0**65.83g生藥/kg1019.1±9.0林60.93g生藥/kg1020.7±12.l林57.73g生藥/kg1017.6±9.9林64.03g生藥/kg1023.9±11.8**51.13g生藥/kg1022.2±10.2**54.63g生藥/kg1018.1±9.5**63.03g生藥/kg1017.2±9.1**64.83g生藥/kg1019.5±8.0林60.13g生藥/kg1019.7±11.2**59.73g生藥/kg1020.3±9.9**58.53g生藥/kg1023.9±12.6**51.13g生藥/kg1020.8±8.8林57.53g生藥/kg1022.3±9.0林54.43g生藥/kg1024.9±13.6**49.13g生藥/kg1046.3±15.85.33g生藥/kg1040.9±14.216.43g生藥/kg1024.8±10.2**49.33g生藥/kg1040.8±9,516.63g生藥/kg1045.9±10.56.13g生藥/kg1024.2±8.0**50.53g生藥/kg1046.4±10.55,13g生藥/kg1046.3±9.95.33g生藥/kg1042.7±11.212.73g生藥/kg1023.9±10.6**51.13g生藥/kg1022.8±8.8**53.43g生藥/kg1022.4±9.0**54.23g生藥/kg1017.9±13.6**63.43g生藥/kg1027.3±9.9*44.23g生藥/kg1028.9±11.2*40.93g生藥/kg1030.7±10.2*37.23g生藥/kg1029.6±9.9*39.5HIJKn;l2r3l-557s0l2345678901-2345678901昭j昭j1234567891111111111222222222233對對品品品品品品品品品品品品品品品品品品品品品品品品品品品品品品品白性樣樣樣樣樣樣樣樣樣樣樣樣樣樣樣樣樣樣樣樣樣樣樣樣樣樣樣樣樣樣樣空陽表1結果表明，與空白對照組比較，樣品1-31之中，除樣品15、16、18、19、21、22、23，其餘樣品均能抑制醋酸所致小鼠疼痛，其中樣品1_14、24-27有非常顯著差異(P〈0.01)，樣品17、20、28-31有顯著的差異(P〈0.05)。3.2對小鼠斷尾出血時間的影響取昆明種小鼠330隻，按體重性別隨機分成10組，每組10隻，雌雄各半。陰性對照組每鼠口服灌胃生理鹽水10ml/kg體重，陽性對照組灌服雲南白藥1.2g(生藥)/kg體重，給藥各組分別灌服樣品1-31組3.0g(生藥)/kg體重。每日給藥1次，連續給藥3天，末次給藥後lh，用利剪將小鼠尾尖3腿處剪斷，放入37。C生理鹽水中，讓血液自行溢出時開始計時，直到出血自行停止為止，計算出血時間，進行組間比較其顯著差異性。實驗結果見表2。表2對小鼠斷尾出血時間的影響^女爆、動物數出血時間與空白對照組比較P*<0.05，P**<0.0110NS10516.3±119.81.210313.4±100.6**3g生藥/kg10308.3±104.4林3g生藥/kg10329.5±118,9林3g生藥/kg10318.8±115.2**3g生藥/kg10375.6±106.6**3g生藥/kg10330.4±110.8**3g生藥/kg10368.8±116.1**3g生藥/kg10318.l士lll,5林3g生藥/kg10310.2±94.5**3g生藥/kg10403.7±102.8林3g生藥/kg10380.3±95.9林3g生藥/kg10339.5±108.2**3g生藥/kg10353.8±120.6**3g生藥/kg10345.6±117.5林3g生藥/kg10314.4±110.8**3g生藥/kg10508.0±99.53g生藥/kg10513.1±112.93g生藥/kg10405.0±106.2**3g生藥/kg10507.9±102.83g生藥/kg]0496.6±100.13g生藥/kg10401.8±94,5**3g生藥/kg10521.8±99.53g生藥/kg10498.O士lOl.93g生藥/kg10511.8±94.53g生藥/kg10355.O士IOO.2林3g生藥/kg10369.9±96.8**3g生藥/kg10344.6±100.l林3g生藥/kg10363.I士IOO.4林3g生藥/kg10441.8±99.5*3g生藥/kg10346.6±100.1*3g生藥/kg10433.1±89,9*3g生藥/kg10411.8±109.5*78901234567892222222222自自昭w藥123456789亂自______________________SI!1St豐4ST1.T4si1Ih41冬冬冬本特特特待待特特特特特持持持待特特特持料持特特空雲表2結果表明，與空白對照組比較，樣品1-31之中，除樣品15、16、18、19、21、22、23，其餘樣品均能縮短斷尾小鼠的出血時間，其中樣品1-14、24-27有非常顯著差異(P〈0.01)，樣品17、20、28-31有顯著的差異(P〈0.05)。3.3藥物對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響取雄性小鼠，20~24g，隨機分為空白對照組、陽性對照組，樣品1-31組，每組10隻。各受試藥物組小鼠均按表20-1設計的劑量以20ml/kg的給藥容量灌胃給藥，連續5天，空白對照組給予等容積蒸餾水，陽性對照組灌胃予醋酸地塞米松(77mg/kg)，於末次給藥後lh各組小鼠右耳廓兩面均勻塗抹二甲苯，每隻30(il，2h後脫頸椎處死小鼠，沿耳廓邊緣剪下左、右兩耳，5mm打孔器在兩耳相同部位取下耳片，電子分析天平稱重，用右耳片重量減去左耳片重量，即得到腫脹度，並計算耳腫脹抑制率。實驗結果見表3。耳腫脹抑制率={(空白對照組腫脹度一藥物組腫脹度)/空白對照組腫脹表3對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響(7±s)組別劑量動物數(只)耳腫脹度(mg)抑制率(％)與空白對照組相比P<0.05，PO.01NS106.84±1.46—77mg/kg105,12±1.00**25.]3g生藥/kg105.01±0.92**26.83g生藥/kg105.24±2.06**23.43g生藥/kg105.24±1.22**23.43g生藥/kg104.75±1.35**30.63g生藥/kg104.59士1.33**32.93g生藥/kg104.90士1.88"28.43g生藥/kg105.17±1.50**24.43g生藥/kg105.12±1.00**25.13g生藥/kg105.21士0.92**23.83g生藥/kg104.24±2.06**38.03g生藥/kg105.24士1.22"23.43g生藥/kg105.15±1.35**24.73g生藥/kg104.59±1.33**32.93g生藥/kg104.90±1.88**28.43g生藥/kg106.17±1.509.83g生藥/kg106.24±1.228.83g生藥/kg104.59±].33**32.93g生藥/kg106.75±1.351.33g生藥/kg106.77±1.881,03g生藥/kg104.17±1.50**39.03g生藥/kg105.75±1.3515.93g生藥/kg106.59±1.333.73g生藥/kg106.20±1.889.43g生藥/kg104.17±1.50**39.03g生藥/kg105.14士1.22"24.93g生藥/kg104.75±1.35**30.63g生藥/kg104.59±1.33**32.93g生藥/kg105.67±1.65*17.13g生藥/kg105.97±0.90*12.73g生藥/kg105.90±1.88*13.7.3g生藥/kg05.88±1.50*14,01234901234567890122222222223PT13i自自昭w松1234567白塞樣樣樣樣樣樣樣樣樣樣樣樣樣樣樣樣樣樣樣樣樣樣樣樣樣樣樣樣樣樣樣空地表3結果表明，與空白對照組比較，樣品1-31之中，除樣品15、16、18、19、21、22、23，其餘樣品均能縮短斷尾小鼠的出血時間，其中樣品1-14、17、20、24-27有非常顯著差異(P〈0.01)，樣品28-31有顯著的差異(P〈0.05)。4結論通過鎮痛、止血和抗炎三個藥效學試驗結果表明，本發明獨一味提取物含有山梔苷甲酯和8-o-乙醯山梔苷甲酯，總重量不低於5mg/g時，發揮了明顯的藥效。其中，以含有山梔苷甲酯和8-o-乙醯山梔苷甲酯的總重量為6.1-19.711^/8的藥效較佳。其中，山梔苷甲酯與8-o-乙醯山梔苷甲酯的比值範圍為0.27-5.25時，具有顯著的藥效，優選地，山梔苷甲酯與8-o-乙醯山梔苷甲酯的比值範圍為0.81-5.25，具有極顯著的藥效。綜上所述，本發明提取物藥效穩定，可控性強。通過將山梔苷甲酯和8-o-乙醯山梔苷甲酯作為指標成分控制提取物的質量，藥效明確，可控性強，本發明質量控制方法準確可靠、穩定可控，使用該方法測定獨一味藥材或製劑中山梔苷甲酯的含量能夠有效地監控獨一味藥品的質量。權利要求1、一種獨一味提取物，其特徵在於它含有山梔苷甲酯和8-o-乙醯山梔苷甲酯，總重量不低於5mg/g。2、根據權利要求l所述的獨一味提取物，其特徵在於它含有山梔苷甲酯和8-o-乙醯山梔苷甲酯的總重量為6.1-19.7mg/g。3、根據權利要求2所述的獨一味提取物，其特徵在於山梔苷甲酯與8-o-乙醯山梔苷甲酯的比值範圍為:0.27-5.25。4、根據權利要求3所述的獨一味提取物，其特徵在於山梔苷甲酯與8-o-乙醯山梔苷甲酯的比值範圍為0.81-5.25。5、根據權利要求1-4任一項所述的獨一味提取物，其特徵在於它是獨一味藥材的水或有機溶劑提取物。6、一種藥物組合物，它含有權利要求1-5任一項所述的獨一味提取物為活性成分，加上藥學上可接受的輔料或輔助性成分製備而成的藥劑。7、根據權利要求6所述的藥物組合物，其特徵在於所述的藥劑是膠囊劑、片劑、顆粒劑、丸劑、口服液、軟膠囊劑或滴丸劑。8、一種檢測獨一味藥材及其提取物或含有獨一味提取物的藥物組合物的質量的方法，其特徵在於是以山梔苷甲酯和8-0-乙醯山梔苷甲酯為指標成分進行質量檢測。9、根據權利要求8所述的檢測方法，其特徵在於獨一味提取物中含有山梔苷甲酯和8-o-乙醯山梔苷甲酯，總重量不低於5mg/g。全文摘要本發明提供一種獨一味提取物，它含有山梔苷甲酯和8-O-乙醯山梔苷甲酯，總重量不低於5mg/g。本發明還提供了一種檢測獨一味藥材及其提取物或含有獨一味提取物的藥物組合物的質量的方法，它是以山梔苷甲酯和8-O-乙醯山梔苷甲酯為指標成分進行質量檢測。本發明提取物藥效穩定，可控性強。通過將山梔苷甲酯和8-O-乙醯山梔苷甲酯作為指標成分控制提取物的質量，藥效明確，可控性強，本發明質量控制方法準確可靠、穩定可控，使用該方法測定獨一味藥材或製劑中山梔苷甲酯的含量能夠有效地監控獨一味藥品的質量。文檔編號A61K36/53GK101612192SQ20091006013公開日2009年12月30日申請日期2009年7月28日優先權日2009年7月28日發明者盧勝明,廖立東,張康寧,婷楊,豔鄧,闕文彬申請人:甘肅獨一味生物製藥股份有限公司