一種植物生長調節劑應用於鏈黴菌菌劑製備的方法與流程

2023-10-09 08:34:09 2

本發明涉及一種植物生長調節劑應用於鏈黴菌菌劑製備的方法，屬於肥料生產技術領域。

背景技術：

鏈黴菌是目前研究和應用最廣泛的生防因子之一，開發應用的產品涉及殺菌、殺蟲、除草、生長調節、抗病毒等多種製劑。在微生物產生的20000多種活性物質中，鏈黴菌佔到60％以上，是一類作物有益菌，具有明顯的促生、抗病作用，越來越多地被應用於果樹、蔬菜等多種作物栽培中。

較高的活菌密度是確保應用效果的關鍵，研製適於規模化生產的高效菌劑及其擴培工藝具有重要意義。專利cn200810079467.4提供一種適於酒紅土褐鏈黴菌生長的「液體制種，固體發酵」新工藝，實現了有效活菌數高，發酵周期短的技術要求；專利cn201310078132.1將玫瑰黃鏈黴菌發酵液按比例轉接於玉米芯中，得到微生物殺菌劑顆粒劑；專利cn201410058407.x將固體發酵種子接入產孢培養基分裝至淺盤，蓋上滅菌紗布，發酵4-5d，得到鏈黴菌孢子產品。專利cn201610538598.9提供了一種弗氏鏈黴菌固體培養基，該培養基包括玉米粉、豆粕粉、秸稈粉、草炭土等。現有鏈黴菌劑製備工藝主要集中在低成本固體發酵技術開發上，對提高菌劑濃度及活性物質產出技術報導較少。

近年來研究發現植物生長調節物質不僅是控制植物生長發育的重要手段，也對微生物尤其是大型真菌培養具有促進作用。專利cn201310237936.1在pda加富培養基上，添加三十烷醇，增強了猴頭菌絲的生長活力，使母種培育時間縮短；專利cn201510002947.0公開玉米粉、維生素b、豆粕、硫酸銨、三十烷醇等的混合物可顯著提高香菇產量；專利cn201510056506.9公開了一種球等鞭金藻培養基，包括：kno3，kh2po4，檸檬酸鐵銨，胺鮮酯，vb等，該培養基具有生長速率快、細胞密度大的特點；專利cn201510603655.2公開婦科千金片藥渣、麥麩、硫酸鋅、三十烷醇、甘油等，可顯著提高成熟的靈芝子實體中多糖的含量。截止目前未見報導有植物生長調節物質對鏈黴菌培養的影響。

技術實現要素：

本發明旨在設計一種植物生長調節劑應用於鏈黴菌菌劑製備的方法，其特徵在於，包括如下步驟：

1)菌種搖床培養，培養基配方組成：蔗糖1％-3％、蛋白腖0.5％-1％、磷酸氫二鉀0.05％-0.1％、硫酸銨1％-2％、其餘為水，培養條件：溫度28℃-30℃、溼度30％-50％、轉速200r/min-240r/min，接種量2％，培養周期：10h-12h；

2)種子液製備，培養基配方組成：蔗糖1％-3％、蛋白液1％-3％、磷酸氫二鉀0.05％-0.1％、硫酸銨1％-2％、其餘為水，培養條件：溫度28℃-30℃、罐壓0.05mpa、空氣流量7m3/h，攪拌轉速80r/min，接種量5％，培養周期16h-18h，發酵過程添加三十烷醇進行補料；

3)發酵液製備，培養基配方組成：葡萄糖1％-3％、蛋白液1％-3％、磷酸氫二鉀0.5％-1％、硫酸銨1％-2％、植物生長調節劑0.3％-0.6％、其餘為水，培養條件：溫度28℃-30℃、罐壓0.05mpa、空氣流量10m3/h,攪拌轉速40r/min，接種量2％，培養周期60h-66h；

4)菌劑的固定，果樹枝條粉碎後過100目篩處理，將步驟3)菌液過濾後均勻噴灑在果樹枝條粉末上，30℃-50℃條件下烘乾。

進一步，步驟1)搖瓶裝量為50ml/250ml。

進一步，步驟2)發酵8-10h進行補料。

進一步，步驟2)發酵過程中補料為0.1％的三十烷醇。

進一步，步驟3)所述植物生長調節劑為復硝酚鈉、三十烷醇、胺鮮酯的一種或幾種混合。

進一步，步驟1)、2)、3)培養基滅活方法為控制溫度114℃-116℃，壓力0.09-0.11mpa，時間20min-25min。

進一步，步驟1)、2)、3)培養基滅活後，加入碳酸鈣調節ph值為6.4-6.7。

進一步，步驟4)所述果樹枝條為蘋果、梨樹、桃樹的一種或幾種混合。

進一步，步驟4)所述菌液與果樹枝條比例為1:10。

本發明還要求保護使用上述方法製備得到的菌劑在降解果樹枝條、秸稈、木薯渣、動物糞便等製備生物有機肥的應用。

本發明所用的鏈黴菌yic24為：中國科學院煙臺海岸帶研究所於2015年12月09日在中國科學院微生物研究所保藏，保藏編號為cgmccno.11848。

本發明的優越性體現在：

1)種子罐培養效率高。種子培養過程以補料形式添加三十烷醇，可有效縮短細胞分裂周期，提高菌種活性，降低生產成本。

2)發酵液活力高。發酵培養基中添加植物生長素，可顯著提高鏈黴菌產纖維素酶活性，同時單位時間內菌體密度也有明顯上升。

3)固化性能穩定。利用果樹枝條粉末吸附性將菌體有效固定，提高菌體對外界不利環境適應性及穩定性，菌劑保質期達到24個月。

具體實施方式

以下結合實例對本發明的原理和特徵進行描述，所舉實例只用於解釋本發明，並非用於限定本發明的範圍。

實施例1

1)菌種搖床培養，培養基配方組成：蔗糖10g、蛋白腖5g、磷酸氫二鉀0.5g、硫酸銨10g，加水1l，搖瓶裝量為50/250ml，培養基滅活溫度114-116℃、滅活壓力0.09-0.11mpa，時間20-25min，滅活後加碳酸鈣調節ph約6.5，之後接種培養，培養條件：溫度28℃、溼度35％、轉速200r/min，接種量2％，培養周期：10h；

2)種子液製備，培養基配方組成：蔗糖200g、蛋白液200g、磷酸氫二鉀10g、硫酸銨200g，加水20l，滅活溫度114-116℃、壓力0.09-0.11mpa，時間20-25min，滅活後加碳酸鈣調節ph約6.5，接種培養，培養條件：溫度28℃、罐壓0.05mpa、空氣流量7m3/h，攪拌轉速80r/min，接種量5％，培養周期18h，其中發酵9h時補料20g三十烷醇；

3)發酵液製備，培養基配方組成：葡萄糖10kg、蛋白液10kg、磷酸氫二鉀5kg、硫酸銨10kg、植物生長調節劑復硝酚鈉3kg，加水至1000l，培養基滅活溫度114-116℃、壓力0.09-0.11mpa，時間20-25min，滅活後加碳酸鈣調節ph約6.5，接種培養，培養條件：溫度28℃-30℃、罐壓0.05mpa、空氣流量10m3/h，攪拌轉速40r/min，接種量2％，培養周期60h；

4)菌劑的固定，蘋果樹枝條粉碎後過100目篩處理，將步驟3)菌液過濾後，按菌液：果樹枝條為1：10的量均勻噴灑在果樹枝條粉末上，30℃-50℃條件下烘乾，制出菌劑成品10噸。

5)取菌劑2kg與一噸粉碎果樹枝條混合翻堆後腐熟，10天即可腐熟完成得到生物有機肥。

實施例2

1)菌種搖床培養，培養基配方組成：蔗糖40g、蛋白腖10g、磷酸氫二鉀1.4g、硫酸銨30g，加水2l，搖瓶裝量為50/250ml，培養基滅活溫度114-116℃、滅活壓力0.09-0.11mpa，時間20-25min，滅活後加碳酸鈣調節ph6.4-6.7，之後接種培養，培養條件：溫度28℃、溼度35％、轉速240r/min，接種量2％，培養周期：12h；

2)種子液製備，培養基配方組成：蔗糖800g、蛋白液800g、磷酸氫二鉀28g、硫酸銨600g，加水40l，滅活溫度114-116℃、壓力0.09-0.11mpa，時間20-25min，滅活後加碳酸鈣調節ph約6.4-6.7，接種培養，培養條件：溫度28℃、罐壓0.05mpa、空氣流量7m3/h，攪拌轉速80r/min，接種量5％，培養周期18h，其中發酵9h時補料40g三十烷醇；

3)發酵液製備，培養基配方組成：葡萄糖40kg、蛋白液20kg、磷酸氫二鉀14kg、硫酸銨20kg、植物生長調節劑12kg(復硝酚鈉和三十烷醇按2:1混合)，加水至2000l，培養基滅活溫度114-116℃、壓力0.09-0.11mpa，時間20-25min，滅活後加碳酸鈣調節ph約6.4-6.7，接種培養，培養條件：溫度28℃-30℃、罐壓0.05mpa、空氣流量10m3/h，攪拌轉速40r/min，接種量2％，培養周期65h；

4)菌劑的固定，蘋果樹枝條粉碎後過100目篩處理，將步驟3)菌液過濾後，按菌液：果樹枝條為1：10的量均勻噴灑在果樹枝條粉末上，30℃-50℃條件下烘乾，制出菌劑成品20噸。

5)取菌劑1kg與一噸粉碎秸稈攪拌混合腐熟發酵，12天左右秸稈腐熟完成。

實施例3

1)菌種搖床培養，培養基配方組成：蔗糖30g、蛋白腖10g、磷酸氫二鉀1.0g、硫酸銨20g，加水1l，搖瓶裝量為50/250ml，培養基滅活溫度114-116℃、滅活壓力0.09-0.11mpa，時間20-25min，滅活後加碳酸鈣調節ph6.4-6.7，之後接種培養，培養條件：溫度28℃、溼度35％、轉速240r/min，接種量2％，培養周期：12h；

2)種子液製備，培養基配方組成：蔗糖600g、蛋白液600g、磷酸氫二鉀20g、硫酸銨400g，加水20l，滅活溫度114-116℃、壓力0.09-0.11mpa，時間20-25min，滅活後加碳酸鈣調節ph約6.4-6.7，接種培養，培養條件：溫度28℃、罐壓0.05mpa、空氣流量7m3/h，攪拌轉速80r/min，接種量5％，培養周期18h，其中發酵10h時補料20g三十烷醇；

3)發酵液製備，培養基配方組成：葡萄糖30kg、蛋白液30kg、磷酸氫二鉀10kg、硫酸銨20kg、植物生長調節劑6kg(復硝酚鈉和胺鮮酯按1:1混合)，加水至1000l，培養基滅活溫度114-116℃、壓力0.09-0.11mpa，時間20-25min，滅活後加碳酸鈣調節ph約6.4-6.7，接種培養，培養條件：溫度28℃-30℃、罐壓0.05mpa、空氣流量10m3/h，攪拌轉速40r/min，接種量2％，培養周期66h；

4)菌劑的固定，蘋果樹、梨樹枝條粉碎後過100目篩處理，將步驟3)菌液過濾後，按菌液：果樹枝條為1：10的量均勻噴灑在果樹枝條粉末上，30℃-50℃條件下烘乾，制出菌劑成品10噸。

5)取菌劑施於秸稈田，一畝地菌劑用量1kg，可改善土壤結構、減少有機肥用量。

以上所述僅為本發明的較佳實施例，並不用以限制本發明，凡在本發明的精神和原則之內，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發明的保護範圍之內。