治療腦血管病的藥用組合物的製作方法

2023-09-24 05:23:45 2

專利名稱：治療腦血管病的藥用組合物的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種其有效成分來自中藥原料藥提取物的藥物組合物，該藥物組合物可用於治療缺血性腦血管疾病。
背景技術：
腦血管病是指腦部動脈或支配腦的頸部動脈發生病變，從而引起顱內血液循環障礙，腦組織受損的一組疾病。腦血管病分出血性和缺血性兩種，缺血性腦血管病稱腦血栓或腦梗塞，在我國，腦血栓佔腦血管病的大多數。腦血管病已經成為危害人類健康的高發病之一，腦血管病以其「高發病率、高病死率、高致殘率、高復發率」極大地危害著人類的健康。臨床藥理學研究表明，Ca2+對血管的舒縮調節和細胞功能的調節起十分重要的作用，在腦缺血缺氧時，血管平滑肌組織和神經細胞的Ca2+內流增加，造成血管痙攣和神經組織病理改變。近年來大量研究證實，西藥二氫吡啶鈣拮抗劑類藥物，如尼莫地平可通過腦血管擴張作用改善腦血流供應，並可以抑制細胞內Ca2+超負荷而引起腦細胞損傷死亡，因而對缺血性腦卒有治療作用。以尼莫地平為代表的二氫吡啶鈣拮抗劑作用於L型鈣通道受體，阻滯Ca2+內流，減輕或防止細胞內Ca2+超載引起的一系列病理改變，是目前臨床上用於治療缺血性腦血管病的常用藥物。
但是，對目前的治療技術研究結果還揭示，隨著人們工作和生活節奏的加快，各種競爭的日益激烈，用腦強度增大，腦血管病的發病率也呈現上升趨勢，發病人群範圍也有擴大的趨勢。由於缺血性腦血管疾病的發病率很高，復發的概率很高，還會引發併發症，因而致殘率很高，目前沒有良好的治療措施。因此，尋找和開發針對缺血性腦血管疾病的藥物對於提高這類疾病的治療效果將具有重要的意義和前景。
縱觀世界新藥的研究方向，80年代以前主要是研究開發單一的化學藥物及其製劑；80年代以後開始發展生物技術藥物和天然植物藥物，藥物研究方向趨於多樣性。經過對中藥成分進行篩選和復配得到的中藥製劑，其副作用小，安全性高，具有化學合成藥不能比擬的優勢。

發明內容
本發明提供了一種來自天然中藥成分的藥物組合物，由中藥中的特定有效部位復配而成，可用於缺血性腦血管疾病的治療。
本發明的藥物組合物中包括香豆素類成分和葛根提取物成分，其均來自中藥原料，即，所述藥物組合物含有香豆素類提取物和葛根的脂溶性提取物，所述香豆素類提取物中至少含有歐前胡素和異歐前胡素，且每克提取物中含有的總香豆素成分以歐前胡素計不少於300毫克；所述葛根的脂溶性提取物每1克中含異黃酮以葛根素計不少於300毫克，且含葛根素和大豆苷元分別不少於15毫克。
優選地，所述香豆素類提取物中每克含有歐前胡素不少於80毫克。
根據本發明優選的方案，所述香豆素類提取物可以來自白芷原料藥中的香豆素類有效成分，所述葛根脂溶性提取物則為葛根原料藥的乙醇提取物。
本發明尤其提供了一種可用於治療缺血性腦血管的藥物組合物，其中的香豆素類提取物與葛根的脂溶性有效成分的比例約為1∶3-2∶1，優選為大約1∶1-2∶1，更優選為2∶1左右。
發明詳述本發明所稱「香豆素類成分」(coumarin)是指本領域公知的以順式鄰羥基桂皮酸內酯為母核的不同取代基化合物，而本發明藥物組合物中所採用的香豆素類提取物可以是通過任何可行的方法從原料中提取得到滿足要求的成分。其中除含有歐前胡素和異歐前胡素外，還可以包括任何屬於香豆素類的有效部位，例如其有效成分還包括選自氧化前胡素、比克白芷素、脫水比克白芷素、別歐前胡素等中的一種或數種。該提取物可以是來自任何含有這些成分的中藥原料，根據本發明的優選方案，該提取物來自白芷原料藥中香豆素類有效成分，尤其是白芷d超臨界提取物，具有如圖1所示的指紋圖譜。
本發明優選採用通過超臨界二氧化碳流體對白芷原料(例如白芷飲片)進行萃取得到的香豆素類提取物。在萃取過程中可以採用C2-C3低級醇作為攜帶劑，萃取壓力20-35Mpa，萃取溫度30-50℃。其中，低級醇可以包括乙醇、丙醇、異丙醇等，該低級醇的濃度約為1％～15％(以待提取藥材的重量計)。優選方案是採用乙醇或異丙醇為攜帶劑，濃度為10％左右。提取過程的完成以提取產物的組成符合本發明要求為基準，一般可控制在大約3小時以上。
本發明藥物組合物中的葛根提取物可以是通過以下方法得到的將葛根原料(可以先加工成適當的粉末)用60％濃度以上的乙醇提取，提取液製成浸膏，通過水沉工藝分為上清液和沉澱兩部分(沉澱可用醇，例如乙醇和異丙醇溶解)，分別經過色譜柱純化，例如大孔吸附樹脂，乙醇梯度洗脫，得到所述的葛根脂溶性提取物，該提取物優選具有如圖2所示的指紋圖譜。
上述得到的提取物可以通過任何常規的檢測分析方法得知其是否符合要求，如薄層色譜法、紫外分光光度法以及其他如《中國藥典》2000年版一部附錄所收載的分析方法，這些都屬於本領域常規操作。
需要說明的是本申請文件中所使用的術語「香豆素類提取物」、「香豆素類有效部位」及「總有效部位」或「有效部位」的含義是相同的；本發明中所使用的表述「葛根脂溶性提取物」、「葛根異黃酮類有效部位」或「葛根有效部位」的含義也是相同。
藥效學實驗證明，本發明的藥物組合物由於所述兩種植物提取物的活性成分的協同作用，具有活血祛瘀和腦缺血保護作用。所以，本發明的藥物組合物可用於製備缺血性腦血管疾病的藥物，而本發明的實施也為篩選和利用中藥活性成分提供治療缺血性腦血管病的新藥提供可能。除以上所述活性成分外，其中還可包括藥劑學上可接受的藥物輔劑，通過常規製藥工藝製成不同劑型。有關白芷香豆素類有效部位和葛根異黃酮有效部位的性質的測定及提取方法可參照具體實施方案的描述，但不限於所記載的方案。


圖1分別為異歐前胡素(a)、歐前胡素(b)和白芷總有效部位(c)的HPLC色譜圖，其中圖a為歐前胡素標準品圖譜，b為白芷總有效部位圖譜。
圖2為葛根有效部位的HPLC色譜圖，其中圖中A為葛根素的圖譜，B為葛根提取物圖譜。
具體實施方案一、白芷提取物1、白芷香豆素類有效部位的提取白芷藥材飲片粉碎，過20目篩，稱取藥粉450g，置1L萃取釜中，待製冷裝置與萃取釜和分離釜及加溫裝置正常工作後，打開壓縮泵加壓到30MP，溫度30℃，加大約10％的乙醇攜帶劑，以45kg/h的CO2流速循環萃取，分離釜的壓力和溫度分別為5MP，40℃，提取3h後，分取提取物，揮幹攜帶劑，得白芷的超臨界總有效部位提取物，置於冰箱中備用。
2、白芷提取物的薄層色譜法定性分析取上述白芷提取物40mg，置10ml量瓶中，加醋酸乙酯適量，振搖使溶解，定容至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另取歐前胡素和異歐前胡素對照品，分別加醋酸乙酯製成1mg/ml的溶液作為對照品溶液。按照薄層色譜法(《中國藥典》2000年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述溶液各5μl，分別點於同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的矽膠G薄層板上，以石油醚(60℃～90℃)-乙醚(3∶2)為展開劑，在25℃以下展開，取出，晾乾，置紫外燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯示相同顏色的螢光斑點。結果顯示，本提取物中含有歐前胡素和異歐前胡素。
3、總香豆素的紫外分光光度法分析條件紫外分光光度儀(島津UV-260)；稀釋溶劑甲醇-乙醚(4∶1)；
對照品歐前胡素；吸收波長302nm。
具體操作按照紫外分光光度法(《中國藥典》2000年版一部附錄VA)測定，以吸收度(A)對溶液濃度(C，μg/ml)繪製標準曲線。
結果顯示本提取物每1g含香豆素類化合物以歐前胡素(C16H14O4)計，不少於300mg。
4、HPLC色譜分析條件色譜柱為LiChrosorb ODS C18(150×4.6mm，5μm)；流動相甲醇-水(60∶40)；流速1.0ml/min；檢測波長302nm；以甲醇作為溶解劑。
具體操作按照高效液相色譜法(《中國藥典》2000年版一部附錄VIB)用外標法進行測定。
HPLC法指紋圖譜分析如圖1所示，在色譜分析條件下，白芷總有效部位提取物的HPLC指紋圖中可得到6個共有峰，與歐前胡素和異歐前胡素標準品HPLC法(《中國藥典》2000年版一部附錄VIB)測定結果對照(圖1中波峰4為歐前胡素，波峰6為異歐前胡素。)，作為白芷總有效部位定性鑑別的指標峰。同時，用面積歸一化法以歐前胡素為標準進行測定，其中有效部位含量大於80％。
實驗結果顯示，上述白芷香豆素類有效成份提取物中包括歐前胡素、異歐前胡素、氧化前胡素、比克白芷素、脫水比克白芷素、別歐前胡素等中的任何一種或數種的組合。
二、葛根提取物取葛根飲片，粉碎，過20目篩，稱取藥粉用6倍量85％的乙醇提取兩次，每次3小時，過濾，合併提取液，揮幹溶劑。浸膏通過水沉工藝分為上清液和沉澱兩部分，分別經過色譜柱純化(沉澱可先用醇，例如乙醇或異丙醇溶解)，例如，大孔吸附樹脂，乙醇梯度洗脫，得葛根提取物I、II，合併為葛根提取物。
1、性狀測定(1)用薄層色譜法鑑別，按照薄層色譜法(《中國藥典》2000年版一部附錄VIB)，取葛根素為對照品，甲醇溶解，在用羧甲基纖維素鈉為粘合劑的矽膠G板上以氯仿-甲醇-水(7∶2.5∶0.25)為展開劑，置紫外燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材相應的位置上顯示相同顏色的螢光斑點；另取大豆苷元，甲醇溶解作為對照品溶液，在用羧甲基纖維素鈉為粘合劑的矽膠G板上以氯仿-甲醇(8.3∶1.7)為展開劑，置紫外燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照品相應的位置上顯示相同顏色的螢光斑點。
(2)取葛根提取物25mg，加入甲醇定容，葛根素和大豆苷元為對照品溶液，在色譜條件下， (色譜柱ODS C18(150mm×4.6mm，5μm)甲醇∶水(42∶58)為流動相；流速1.0ml/min；檢測波長250nm)下測定，計算供試品圖譜各主要色譜峰對於葛根素色譜峰的相對保留時間，以相對保留時間0.128、0.161、0.22、0.349和1.00的5個色譜峰為共有峰，作為葛根有效部位用指紋圖譜定性分析的指標峰。具體見圖2，其中峰2為葛根素，峰5為大豆苷元。
2、含量測定(1)按照紫外分光光度法(《中國藥典》2000年版一部附錄VA)測定。甲醇溶解，葛根素作為對照品，在250nm下測定其吸收度，以吸收度(A)對溶液濃度(C，μg/ml)繪製標準曲線，本品每1g含異黃酮類以葛根素計不得少於350mg。
(2)按照(《中國藥典》2000年版一部附錄VID)測定，甲醇∶水(42∶58)為流動相，檢測波長為250nm，甲醇溶解定容，葛根素、大豆苷元分別作為對照品，測定本品每1g含葛根素不得少於15mg，含大豆苷元不得少於15mg。
三、配伍比例的篩選研究將上述白芷香豆素類有效部位和葛根異黃酮有效部位按比例配伍後考察對KCL誘發兔腦基底動脈收縮的抑制作用。採用西安交通大學實驗動物中心提供的健康家兔，雌雄不限，體重2.0±0.25kg。
供試液製備白芷香豆素類有效部位供試液稱取白芷有效部位0.1g，用蒸餾水作溶劑，超聲振蕩得淡黃色乳濁液，定容到10mL，得濃度為10.0mg/ml白芷樣品，置於冰箱中，備用。
葛根異黃酮類有效部位供試液稱取葛根有效部位0.3g，加水至容量瓶的4/5刻度，置超聲振蕩儀中溶解成乳濁液，定容到10mL，得濃度為30.0mg/ml的葛根樣品溶液，置於冰箱中，備用。
標本製備及測定方法2kg以上的兔，雌雄不拘，股動脈放血致死。迅速打開頭顱取出基底動脈，置於4℃的Krebs-Henseleit(K-H組成(mmol/L)NaCl 120，KCl 4.8，CaCl22.5，KH2PO41.2，MgSO4.7H2O 1.4，NaHCO325.0，葡萄糖11，Na2-EDTA13.4(μmol/L)，pH 7.4)液培養皿內，清除血汙，仔細分離血管周圍組織，剪成長3或4mm動脈環段(外徑約0.3mm)，將兩根具有足夠韌性的銀絲或不鏽鋼基(直徑0.1mm)或鎢絲(直徑0.025mm)，小心穿入，做成三角環狀。隨後置於20ml K-H液浴槽內，下端連於浴槽底部固定的玻璃鉤上，上端連於敏感的力-位移換能器，持續通入95％O2+5％CO2氣泡，標本於37℃平衡60min或120min，靜息張力調至400或500mg。張力記錄於自動臺式平衡記錄儀或多道生理記錄儀。平衡期間每20-30mm用預先加溫37℃的K-H液更換一次槽內溶液。為了肯定每標本適宜的收縮活動，亦有先用40mmol/L KCl進行測定，選用活動良好者用。
空白對照試驗定體積10mL，記錄一段正常收縮值後，向浴管中按累積濃度法加入3mol.L-1的KCl溶液，至張力不再增加為止，得收縮力空白曲線。
藥物對KCl誘發的腦基底動脈收縮抑制試驗衝洗標本數次，前3次每3分鐘衝洗一次，並通入大量氣泡，後每10分鐘衝洗一次，直至標本收縮值回到基線附近。記錄一段正常收縮值後，向浴管內加入藥物(白芷香豆素類有效部位與葛根異黃酮類有效部位提取物比例為1∶1)，穩定30min後，向浴管中按累積濃度法加入3mo1.L-1的KCl溶液，至張力不再增加為止，得收縮抑制曲線。
重複操作，分別求得白芷香豆素類有效部位與葛根異黃酮類有效部位比例為2∶1(2.0mg.mL-1∶1.0mg.mL-1)，3∶1(2.25mg.mL-1∶0.75mg.mL-1)，1∶2(1.0mg.mL-1∶2.0mg.mL-1)，1∶3(0.75mg.mL-1∶2.25mg.mL-1)藥物的收縮抑制。試驗結果見附表。
附表 不同比例藥物所得抑制率(n＝4)白芷∶葛根 1∶1 2∶1 3∶1 1∶2 1∶3抑制率(％)40.5±4.9 42.5±2.8 30.8±5.4 36.7±5.2 38.9±5.6試驗結果表明，白芷香豆素類有效部位與葛根異黃酮有效部位的不同比例配伍後對KCl誘發的腦基底動脈收縮具有明顯的抑制作用，且量效關係明顯，其中配伍比例為在1∶3-2∶1時對KCl引起主動脈收縮抑制效果顯著，在1∶1-2∶1時對KCl引起主動脈收縮抑制效果更顯著，尤其是在2∶1時對KCl引起主動脈收縮抑制效果最大。
藥效學實驗採用按照實施方案得到的複方製劑(白芷香豆素類有效部位與葛根異黃酮有效部位的配伍比例為2∶1，以BG表示)完成了以下的大、小鼠實驗，證明本發明的製劑對鼠腦缺血具有保護作用。
1、對雙側頸總動脈結紮腦缺血小鼠存活時間的影響ICR小鼠分層隨機分為7組①假手術組；②模型組；③尼莫地平(30mg/kg)組；④-⑦BG 8、4、2、1g生藥/kg組。③-⑦連續灌胃5天。末次給藥1小時後，實施麻醉，假手術組僅進行手術、分離而不進行頸總動脈結紮，其餘各組小鼠均結紮兩側頸總動脈及迷走神經，立即記錄從結紮到死亡的時間即為小鼠存活時間。
結果模型組的存活時間(12.63±11.46min)明顯低於假手術組(60.0±0.0min)(p＜0.01)；與模型組相比，尼莫地平組(21.60±4.80min)與BG的8、4g生藥/kg組(27.72±19.98min，25.01±21.30min)能明顯延長結紮兩側頸總動脈小鼠的存活時間(p＜0.01，p＜0.05)；而BG 2、1g生藥/kg組(14.43±15.29min，17.16±11.67min)與模型組相比在延長小鼠的存活時間上沒有統計學意義。此實驗表明BG能顯著延長結紮頸總動脈小鼠的存活時間。
2、對KCN致腦缺氧小鼠存活時間的影響ICR小鼠分層隨機分5組①對照組；②尼莫地平(30mg/kg)組；③-⑤BG 8、4、2g生藥/kg組。各組連續灌胃5天，末次給藥1小時後各組腹腔注射KCN 0.07mg/kg，立即記錄小鼠存活時間。
結果與對照組相比(11.31±8.65min)，尼莫地平組(35.39±25.95min)與BG 8、4g生藥/kg組(35.40±25.96min，27.86±23.67min)能明顯延長小鼠的存活時間(p＜0.01，p＜0.05)；而BG 2g生藥/kg組(19.15±14.99min)與對照組相比在延長小鼠的存活時間上沒有統計學意義。表明BG能明顯改善KCN所造成的腦缺氧。
3、對腹腔注射NaNO2致腦缺氧小鼠存活時間的影響ICR小鼠分層隨機分5組①對照組；②尼莫地平(30mg/kg)組；③-⑤BG 8、4、2g生藥/kg組。各組連續灌胃給藥5天，末次給藥1小時後各組腹腔注射NaNO2400mg/kg，立即記錄小鼠存活時間。
結果與對照組相比(10.79±0.67min)，尼莫地平組(13.97±2.21min)和BG 8、4、2g生藥/kg組(12.5±1.55min，12.89±1.80min，11.99±1.82min)均能明顯延長小鼠的存活時間(p＜0.01，p＜0.05)。表明BG能明顯改善NaNO2所造成的腦缺氧。
4、對血液流變性的影響SD大鼠60隻，分層隨機分6組①正常組；②模型組；③-⑤BG 4、2、1g生藥/kg劑量組；⑥複方丹參片5g/kg組。連續灌胃給藥8天。7天時，皮下注射腎上腺素10μg/kg，2小時後置大鼠於0-4℃水中遊泳5min，再2小時後，皮下注射腎上腺素1次，製造急性血瘀模型。第8天給藥後1小時，烏拉坦麻醉，剪尾取血，測定凝血時間。然後，頸總動脈插管取血4.8ml，其中1.5ml迅速裝入肝素抗凝管中，置35℃恆溫水浴備用；1.2ml注入枸櫞酸鈉抗凝管備用；然後測定高切粘度、低切粘度、血沉、紅細胞(RBC)壓積、纖維蛋白原、還原粘度、血漿粘度；另外，1.8ml用於體外血栓測定，0.1ml用於血小板粘附率的測定。
結果(1)模型組大鼠的全血高切粘度(5.52±0.92mPa·s)、低切粘度(12.8±2.4mPa·s)、還原粘度(10.05±3.58mPa·s)和血漿粘度(4.01±0.62mPa·s)均明顯高於正常組(3.61±0.68mPa·s，8.7±0.8mPa·s，6.42±1.86mPa·s，2.74±0.45mPa·s)(p＜0.01)；BG大劑量組(3.55±0.48mPa·s，8.7±1.2mPa·s，5.82±1.24mPa·s，2.94±0.42mPa·s)及複方丹參組(3.85±0.56mPa·s，8.6±0.9mPa·s，6.76±1.52mPa·s，2.88±0.37mPa·s)的這4項指標均顯著低於模型組(p＜0.01或p＜0.05)，BG中劑量的全血高切粘度(3.91±0.63mPa·s)、還原粘度(7.37±1.09mPa·s)和血漿粘度(3.12±0.31mPa·s)均明顯低於模型組(p＜0.01或p＜0.05)，小劑量組的低切粘度(10.4±1.7mPa·s)低於模型組(p＜0.05)，並且具有明顯的劑量依賴性。表明BG能明顯降低大鼠的全血粘度和血漿粘度。
(2)模型組的血栓長度(20.74±2.24mm)、血栓溼重(77.4±8.6mg)及血栓指數(18.1±1.60)顯著高於正常組(15.2±1.7mm，56.3±8.2mg，15.1±1.2)(p＜0.01)。BG大劑量組(15.7±2.1mm，59.7±10.1mg，15.6±1.6)、中劑量組(16.3±2.1mm，63.2±7.7mg，16.1±1.5)、小劑量(17.8±2.0mm，68.4±6.4mg，17.2±1.3)及複方丹參組(15.2±1.7mm，60.5±8.5mg，15.3±1.3)的這3項指標均明顯小於模型組(p＜0.01或p＜0.05)，且有劑量依賴關係。表明BG能劑量依賴性地抑制血栓形成。
(3)模型組及BG組對RBC壓積的影響無顯著性意義(p＞0.05)；BG大劑量血沉值(1.2±0.8mm/h)與模型組(2.8±2.0mm/h)比較，對血沉有一定的降低作用(p＜0.05)；模型組大鼠的纖維蛋白原含量(3.74±0.53g/L)明顯高於正常組(2.44±0.39g/L)(p＜0.01)，BG大、中、小劑量及複方丹參組纖維蛋白原含量(分別為2.75±0.42g/L，2.68±0.62g/L，3.04±0.45g/L，2.49±0.49g/L)均顯著低於模型組(p＜0.01)；BG各劑量組及複方丹參組能降低血小板粘附率。表明BG能降低大鼠血沉、血液纖維蛋白原含量及血小板粘附率。
5、對微循環障礙的改善作用SD大鼠60隻，分層隨機分6組①對照組；②模型組；③複方丹參組(0.45g/kg)；④-⑥BG 4、2、1g生藥/kg劑量組。連續灌胃給藥5天。末次給藥1小時後麻醉，按Chambers法製備微循環標本，用Aver Ezcapture圖象分析系統，觀察微循環變化，測定細動脈口徑、血流速度、毛細血管網交點數，觀察血液流態，然後於當前視野下的腸繫膜上滴加1∶25萬腎上腺素0.05ml，1min後記錄②-⑥組上述5項指標(①組只需測兩次上述指標，間隔1分鐘)。
結果(1)細動脈管徑減少值模型組(7.6±3.0μm)明顯高於正常組(-0.5±2.0μm)(p＜0.01)；BG大劑量組(3.7±3.6μm)、中劑量組(4.4±2.2μm)可顯著抑制腎上腺素引起的細動脈管徑縮小(p＜0.05)。表明BG可抑制並改善腎上腺素引起的微循環細動脈管徑縮小。
(2)細動脈流速減少值模型組(7.2±2.6mm/s)明顯高於正常組(-0.3±2.5mm/s)(p＜0.01)。BG大劑量組(3.9±2.7mm/s)可顯著抑制腎上腺素引起的細動脈流速減慢(p＜0.05)。表明BG對腎上腺素引起的細動脈流速減慢有一定程度的抑制、改善作用。
(3)微循環網點數減少值模型組的(3.2±1.5個)明顯高於正常組(0.4±0.7個)(p＜0.01)。BG大劑量組(1.7±1.3個)可顯著抑制腎上腺素引起的網點數減少(p＜0.05)。表明BG有一定的抑制腎上腺素引起大鼠腸繫膜微循環網點數減少的作用。
(4)模型組0級流態減少例數(7)及I、II、III級增加例數(3，0，4)顯著高於正常組(1，1，0，0)(p＜0.01)；與模型組比較，BG大劑量(2，2，0，0)及複方丹參組(0，0，0，0)可顯著減少0級流態減少例數及I、II、III級流態增加例數(p＜0.05或p＜0.01)。表明BG可抑制腎上腺素引起的微循環流態改變。
6、對凝血酶原時間(PT)及活化部分凝血酶原時間(KPTT)的影響家兔烏拉坦麻醉，頸總動脈放血，製備貧血小板血漿(PPP)。實驗分5組①鹽水組；②肝素鈉組；③-⑤BG 0.4、0.2、0.1g生藥/ml組。按試劑盒要求，測定PT和KPTT。
結果可見，與正常組的PT(11.3±1.9s)比較，BG高、中濃度組的PT(77.6±16.6s，13.0±12.3s)顯著延長(p＜0.05或p＜0.01)，且高、中濃度的PT相互比較亦差異顯著(p＜0.01)，表明BG可濃度依賴性地延長PT；與正常組的KPTT(38.4±12.3s)比較，高、中、低濃度(208.1±84.8s，83.4±25.6s，50.6±12.02s)均可顯著延長KPTT(p＜0.05或p＜0.01)，且高、中、低濃度的KPTT，從大到小，也差異顯著(p＜0.01)，顯示BG對KPTT的抑制作用有顯著的濃度依賴關係。
表明BG有抑制內、外源性凝血系統的作用。
總結以上實驗結果表明BG能顯著延長結紮頸總動脈小鼠的存活時間；能明顯改善KCN和NaNO2所造成的腦缺氧；能明顯降低大鼠的全血粘度、血漿粘度、血纖維蛋白原含量、血沉及血小板粘附率，減輕血瘀大鼠血液的粘、凝狀態，抑制血栓形成；也可抑制和改善腎上腺素引起的大鼠腸繫膜微循環細動脈管徑縮小、流速減慢、毛細血管開放量減少、流態改變；可顯著延長家兔PT及KPTT。
結論BG有明顯的活血祛瘀和腦缺血保護作用。
權利要求
1.一種藥物組合物，其中含有香豆素類提取物和葛根的脂溶性提取物，所述香豆素類提取物中至少含有歐前胡素和異歐前胡素，且每克提取物中含有的總香豆素成分以歐前胡素計不少於300毫克；所述葛根的脂溶性提取物每1克中含異黃酮以葛根素計不少於300毫克，且含葛根素和大豆苷元分別不少於15毫克。
2.權利要求1所述的藥物組合物，其中，所述香豆素類提取物中每克含有歐前胡素不少於80毫克。
3.權利要求1或2所述的藥物組合物，其中，所述香豆素類提取物來自白芷原料藥中的香豆素類有效成分。
4.權利要求3所述的藥物組合物，其中，所述香豆素類提取物來自白芷原料藥的超臨界二氧化碳提取物，其具有如圖1所顯示的指紋圖譜。
5.權利要求1所述的藥物組合物，其中，所述葛根的脂溶性提取物為葛根原料藥的乙醇提取物，其具有如圖2所顯示的指紋圖譜。
6.權利要求1所述的藥物組合物，所述香豆素類提取物與葛根的脂溶性提取物的重量比例為1∶3-2∶1。
7.權利要求6所述的藥物組合物，所述香豆素類提取物與葛根的脂溶性提取物的重量比例為1∶1-2∶1。
8.權利要求7所述的藥物組合物，所述香豆素類提取物與葛根的脂溶性提取物的重量比例為2∶1。
9.權利要求6-8任一項所述的藥物組合物，其中還包括藥劑學上可接受的藥物輔劑。
10.權利要求1所述的藥物組合物用於製備治療缺血性腦血管病的藥物。
全文摘要
本發明涉及一種其有效成分來自中藥原料藥提取物的藥物組合物，尤其提供了一種含有香豆素類提取物和葛根的脂溶性提取物的藥物組合物，所述香豆素類提取物中至少含有歐前胡素和異歐前胡素，且每克提取物中含有的總香豆素成分以歐前胡素計不少於300毫克；所述葛根的脂溶性提取物每1克中含異黃酮以葛根素計不少於300毫克，且含葛根素和大豆苷元分別不少於15毫克。該藥物組合物可用於治療缺血性腦血管疾病。
文檔編號A61P9/00GK1531930SQ0312098
公開日2004年9月29日 申請日期2003年3月26日 優先權日2003年3月26日
發明者賀浪衝, 楊廣德, 梁明金, 曹永孝, 賀煒 申請人:北京同源醫藥科技有限公司