以外泌體為基礎的疏水性抗癌藥物製劑的製作方法
2023-10-19 01:37:07
專利名稱：以外泌體為基礎的疏水性抗癌藥物製劑的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種以外泌體為基礎的疏水性抗癌藥物製劑，製劑所使用的載體是來源於動物體的外泌體，可以投遞所有的疏水性藥物，具體提及到阿黴素、阿司匹林、替莫唑胺、紫杉醇等藥物的投遞。
背景技術：
目前由高通量藥物篩選而得的活性物質約有40%是疏水性的。疏水性藥物因其在水中溶解度小，藥物難以達到治療所需的最低濃度、難以被機體吸收、生物利用度低，限制了臨床應用，且難以實現劑型的多樣化。近期的新藥開發研究中，有41 %的工作量是為了提高生物利用度和水溶性。增強疏水性藥物的溶解性具有十分重要的現實意義和研究價值， 是醫藥化學亟待解決的問題。將疏水性藥物通過某些載體包裹，是對疏水性藥物進行增溶的一種行之有效的方法。現在對於疏水性藥物的包載主要應用了以下幾種載體脂質體，環糊精，表面活性劑膠束，聚合物膠束等，雖然取得了一定的效果，但是生物相容性仍舊是這幾種載體無法迴避的問題。而作為來源於生物體本身的外泌體可以很好的解決生物相容性的問題。外泌體的分泌最早是由Johnstone等在1987年研究網織紅細胞的成熟過程中發現的。在體外培養羊網織紅細胞的上清中經過IOOOOOg離心90min後，可以收集到直徑60nm 的囊性小泡，小泡中含有網織紅細胞成熟過程中放出的胞膜結構。Johnstone等將這些納米級的囊泡命名為外泌體，並認為外泌體的釋放是網織紅細胞成熟過程中釋放細胞內「多餘」膜蛋白的一種調節途徑。隨後發現有多種細胞能釋放這種納米泡，包括上皮細胞、肥大細胞、成纖維細胞、血小板、腫瘤細胞、抗原提呈細胞、肝細胞以及腸上皮細胞。外泌體的生物產成過程包括內涵體向內出芽生成多囊泡體、多囊泡體跟胞膜融合併將其釋放到胞外這兩個步驟。外泌體的研究現在主要停留在疾病監測和腫瘤疫苗上，對於其作為藥物載體的研究還很少，相關專利還沒有。
發明內容
本發明的目的在於提供一種以外泌體為基礎的疏水性抗癌藥物製劑。本發明的原理是利用外泌體的脂質雙分子層存在的疏水區來包載疏水性抗癌藥物，從而製備疏水性的抗癌藥物製劑。本發明的一種以外泌體為基礎的疏水性抗癌藥物製劑，藥物製劑所使用的載體為外泌體，其來源於動物體的唾液、血液等體液以及細胞培養液；疏水性抗癌藥物被載體所包載。所述藥物製劑的載體，從動物的體液或者細胞培養液中，通過離心法或者磁珠表面包被抗體的方法或者ExoQuick溶液分離方法，得到細胞分泌的外泌體，並將外泌體加入磷酸鹽緩衝液，磷酸鹽緩衝液為原體液或者細胞培養液的1/100-1/10，得到外泌體溶液。
採用本發明的以外泌體為基礎的疏水性抗癌藥物製劑，將疏水性抗癌藥物加入到外泌體溶液中，加入比例為1 10-1000 (g/ml)，藥物沉澱於底部，攪拌溶液孵化0. 5-24小時，取上清，得到包載藥物的外泌體溶液，再將這種包載藥物的外泌體溶液用作藥物製劑。這種以外泌體為基礎的疏水性抗癌藥物製劑，所用載體為外泌體，其來源於動物體本身；疏水性藥物被載體所包載。本發明的優點這種以外泌體為基礎的疏水性抗癌藥物製劑，其生物相容性好，動物體內血液循環時間長，大大提高藥物的生物利用率。
圖1 外泌體的掃描電鏡圖。
具體實施例方式下面通過例子對本發明進行進一步的闡述。實施例1 1.取大鼠血液ani，通過離心法製備得到細胞分泌的外泌體，並將外泌體加入 20 μ 1磷酸鹽緩衝液，磷酸鹽緩衝液的體積為原血液體積的1/100，得到外泌體溶液。2.將2yg阿黴素藥物加入外泌體溶液中，藥物與外泌體溶液比例為1 10 (mg/ ml)，藥物沉澱於底部，攪拌溶液孵化0. 5小時，取上清，得到包載藥物的外泌體溶液，再將這種包載藥物的外泌體溶液用作藥物製劑。3.將相同量的阿黴素與外泌體包載阿黴素的藥物製劑分別注射進大鼠體內，外泌體包載阿黴素的藥物製劑的血液循環時間為50小時，阿黴素的血液循環時間為4小時，外泌體包載阿黴素的藥物製劑的血液循環時間顯著高於阿黴素的血液循環時間。實施例2:1.取大鼠血液ani，通過磁珠表面包被抗體的方法製備得到細胞分泌的外泌體， 並將外泌體加入200 μ 1磷酸鹽緩衝液，磷酸鹽緩衝液的體積為原血液體積的1/10，得到外泌體溶液。2.將0.2yg阿黴素藥物加入外泌體溶液中，藥物與外泌體溶液比例為 1 1000 (mg/ml)，藥物沉澱於底部，攪拌溶液孵化M小時，取上清，得到包載藥物的外泌體溶液，再將這種包載藥物的外泌體溶液用作藥物製劑。3.將相同量的阿黴素與外泌體包載阿黴素的藥物製劑分別注射進大鼠體內，外泌體包載阿黴素的藥物製劑的血液循環時間為50小時，阿黴素的血液循環時間為4小時，外泌體包載阿黴素的藥物製劑的血液循環時間顯著高於阿黴素的血液循環時間。實施例3 1.取大鼠血液anl，通過ExoQuick溶液製備得到細胞分泌的外泌體，並將外泌體加入100 μ 1磷酸鹽緩衝液，磷酸鹽緩衝液的體積為原血液體積的1/20，得到外泌體溶液。2.將1 μ g阿黴素藥物加入外泌體溶液中，藥物與外泌體溶液比例為1 100 (mg/ ml)，藥物沉澱於底部，攪拌溶液孵化12小時，取上清，得到包載藥物的外泌體溶液，再將這種包載藥物的外泌體溶液用作藥物製劑。3.將相同量的阿黴素與外泌體包載阿黴素的藥物製劑分別注射進大鼠體內，外泌體包載阿黴素的藥物製劑的血液循環時間為50小時，阿黴素的血液循環時間為4小時，外泌體包載阿黴素的藥物製劑的血液循環時間顯著高於阿黴素的血液循環時間。實施例4 1.取大鼠血液anl，通過ExoQuick溶液製備得到細胞分泌的外泌體，並將外泌體加入100 μ 1磷酸鹽緩衝液，磷酸鹽緩衝液的體積為原血液體積的1/20，得到外泌體溶液。2.將IOyg阿司匹林藥物加入外泌體溶液中，藥物與外泌體溶液比例為 1 10 (mg/ml)，藥物沉澱於底部，攪拌溶液孵化0.5小時，取上清，得到包載藥物的外泌體溶液，再將這種包載藥物的外泌體溶液用作藥物製劑。3.將相同量的阿司匹林與外泌體包載阿司匹林的藥物製劑分別注射進大鼠體內， 外泌體包載阿司匹林的藥物製劑的血液循環時間為46小時，阿司匹林的血液循環時間為 5小時，外泌體包載阿司匹林的藥物製劑的血液循環時間顯著高於阿司匹林的血液循環時間。實施例5:1.取大鼠血液anl，通過ExoQuick溶液製備得到細胞分泌的外泌體，並將外泌體加入100 μ 1磷酸鹽緩衝液，磷酸鹽緩衝液的體積為原血液體積的1/20，得到外泌體溶液。2.將IOyg替莫唑胺藥物加入外泌體溶液中，藥物與外泌體溶液比例為 1 10 (mg/ml)，藥物沉澱於底部，攪拌溶液孵化M小時，取上清，得到包載藥物的外泌體溶液，再將這種包載藥物的外泌體溶液用作藥物製劑。3.將相同量的替莫唑胺與外泌體包載替莫唑胺的藥物製劑分別注射進大鼠體內， 外泌體包載替莫唑胺的藥物製劑的血液循環時間為40小時，替莫唑胺的血液循環時間為 6小時，外泌體包載替莫唑胺的藥物製劑的血液循環時間顯著高於替莫唑胺的血液循環時間。實施例6 1.取大鼠血液anl，通過ExoQuick溶液製備得到細胞分泌的外泌體，並將外泌體加入100 μ 1磷酸鹽緩衝液，磷酸鹽緩衝液的體積為原血液體積的1/20，得到外泌體溶液。2.將10 μ g紫杉醇藥物加入外泌體溶液中，藥物與外泌體溶液比例為1 10 (mg/ ml)，藥物沉澱於底部，攪拌溶液孵化12小時，取上清，得到包載藥物的外泌體溶液，再將這種包載藥物的外泌體溶液用作藥物製劑。3.將相同量的紫杉醇與外泌體包載紫杉醇的藥物製劑分別注射進大鼠體內，外泌體包載紫杉醇的藥物製劑的血液循環時間為42小時，紫杉醇的血液循環時間為4. 8小時， 外泌體包載紫杉醇的藥物製劑的血液循環時間顯著高於紫杉醇的血液循環時間。
權利要求
1.一種以外泌體為基礎的疏水性抗癌藥物製劑，其特徵在於藥物製劑採用載體負載藥物的形式，製劑所使用的載體為外泌體，其來源於包括動物體的唾液、血液的體液以及細胞的培養液中。
2.如權利要求1所述藥物製劑，其特徵在於所述載藥包括阿黴素、阿司匹林、替莫唑胺、紫杉醇、柔紅黴素、秋水仙鹼或長春新鹼的所有的疏水性抗癌藥物。
3.如權利要求1所述藥物製劑，其特徵在於所述載體是從動物的體液或者細胞培養液中，通過離心法或者磁珠表面包被抗體的方法或者ExoQuick溶液分離方法，得到細胞分泌的外泌體，並將外泌體加入磷酸鹽緩衝液，磷酸鹽緩衝液為原體液或者細胞培養液的 1/100-1/10，得到外泌體溶液。
4.如權利要求1或者2所述藥物製劑，其特徵在於將疏水性抗癌藥物加入到外泌體溶液中，加入比例為1 10-1000 (mg/ml)，藥物沉澱於底部，攪拌溶液孵化0.5-M小時，取上清，得到包載藥物的外泌體溶液，再將這種包載藥物的外泌體溶液用作藥物製劑。。
全文摘要
本發明涉及一種以外泌體為基礎的疏水性抗癌藥物製劑。本發明的藥物製劑所使用的載體是外泌體，其來源於動物體的唾液、血液等體液以及細胞培養液。外泌體來源於動物體本身，生物相容性毋容置疑，同時具有類似於細胞膜的脂質雙分子層，具有包載疏水性抗癌藥物的能力。本發明的藥物製劑所使用的載體，其粒徑均一，大約在100nm左右，同時來源於動物體本身，利於載體在動物體內的長循環，從而大大提高藥物的生物利用率。圖為外泌體的掃描電鏡圖片。
文檔編號A61P35/00GK102349998SQ201110321620
公開日2012年2月15日 申請日期2011年10月20日 優先權日2011年10月20日
發明者亓洪昭, 原續波, 柳朝永, 錢小敏 申請人:天津大學