沙苑子苷在製備治療肺纖維化藥物中的應用的製作方法

2023-10-17 13:00:34 1

本發明涉及中藥領域，具體涉及含黃酮苷類化合物的藥物。

背景技術：

肺纖維化是多種瀰漫性肺間質疾病的共同病理改變，臨床表現為進行性呼吸困難，肺功能為限制性通氣障礙，病情持續進展，最終因呼吸衰竭而死亡。由於發病機制複雜，該病仍無有效治療措施，因此，肺纖維化治療藥或先導化合物的發現仍具有重要意義。

青天葵為蘭科植物芋蘭屬中的毛唇芋蘭nerviliafordii(hance)schltr.的塊莖和全草，它的別名眾多，分別是天葵、磨地沙、獨葉蓮、珍珠草等，主要分布在廣西、廣東、雲南、四川等地。青天葵性味甘涼、性寒、無毒，具有清熱潤肺止咳，解毒散瘀止痛的功效，主治肺熱咳嗽，肺癆咯血，瘰癧，瘡瘍腫毒等症。在我國南方地區特別是嶺南地區為治療急慢性肺炎、氣管支氣管炎、喘息型慢性支氣管炎的常用藥，臨床應用於肺損傷疾病的治療。特別是在2003年非典期間，用於重度肺損傷疾病——急性呼吸窘迫症候群(acuterespiratorydistresssyndrome，ards)的治療取得了良好的療效，是嶺南地產「南藥」之一。現代研究表明，青天葵的主要藥效物質為黃酮類化合物，其中沙苑子苷(complanatuside)是青天葵黃酮類化合物中主要的活性成分，性狀為淡黃色結晶，其分子式為c28h32o16，分子量為624。由沙苑子苷化學結構可見，其結構中既有活潑的酚羥基，又有芳香性和一定的疏水性，具有廣泛的藥理活性，目前發現它具有抗氧化性、抗炎、鬆弛平滑肌等活性，具有較好的抗肝纖維化、降血脂等作用。

技術實現要素：

本發明的目的在於提供沙苑子苷在製藥中的新用途，即在製藥中的新應用。

現代醫學研究表明，肺纖維化是由多種細胞因子啟動和維持的膠原蛋白代謝失衡的結果，眾多促纖維化細胞因子中，轉化生長因子β1(transforminggrowthfactorβ1，tgf-β1)是公認的與肺纖維化的發生和形成最為密切的介導因子，是迄今發現的最強的對膠原合成最直接和有效的刺激劑，在肺纖維化發生發展的多個環節起作用。基於上述思想，本發明人對青天葵中的黃酮苷類化合物進行了逐一研究，發現沙苑子苷具有抗炎和抑制成纖維細胞增殖活性，除公知的抑制tnf-α、il-1β等炎症因子的過表達的抗氧化作用外，還具有抑制成纖維細胞的增殖，阻止成纖維細胞向肌成纖維細胞轉化，起到保護細胞的作用。

因此，上述在製藥中的新應用即為，沙苑子苷在製備治療肺纖維化的藥物中的應用，其中所述沙苑子苷的化學結構式如下式(ⅰ)所示：

本發明所述的沙苑子苷可以採用常規的方法從中藥青天葵或其它植物中提取得到，也可以由合成或其他方法製得。

上述應用中，所述的藥物可以是腸溶膠囊、軟膠囊、滴丸、分散片或薄膜衣片，其中沙苑子苷的含量為6.1～26.8％。

本發明所述的應用，其中體現所述用途的化合物沙苑子苷具有抗炎和抑制成纖維細胞增殖雙靶活性，一方面顯著抑制tnf-α、il-1β等炎症因子的過表達的抗氧化作用；另一方面還具有抑制成纖維細胞的增殖，阻止成纖維細胞向肌成纖維細胞轉化，從而起到保護肺細胞的作用。

下面通過實驗來證明本發明所述化合物沙苑子苷所具有的技術效果。

1、沙苑子苷對小鼠胚胎成纖維細胞增殖抑制作用及其機制的研究

採用tgf-β誘導的小鼠胚胎成纖維細胞36t-swissalbino，研究沙苑子苷對36t-swissalbino細胞培養液上清中小鼠ⅰ型膠原(col-ⅰ)分泌量、ⅲ型膠原(col-ⅲ)分泌量、炎症因子tnf-α和il-1β、超氧化物歧化酶(sod)和穀胱甘肽過氧化物酶(gsh-px)的影響，考察本發明所述化合物的抗炎和抗氧化作用，具體實驗方法如下所述。

(1)含藥培養液的配製

取下述實施例1所得到的沙苑子苷2mg，精密稱定，用pbs定容至1ml，得到2mg/ml的沙苑子苷母液，換算得到沙苑子苷母液的濃度為3200μm，倍比稀釋得到沙苑子苷系列溶液濃度為20、2、0.2μm。

(2)實驗方法

①細胞毒性實驗

cck-8法：用0.25％胰蛋白酶和2‰edta1:1混合消化單層培養細胞，停止消化後，加入pbs液，用彎頭吸管反覆吹打分散細胞，於800rpm離心5min。棄去上清，加入1mldmem高糖培養液重懸，吹打分散細胞後配成單個細胞懸液，以4×105個/ml接種於96孔培養板中，每孔體積100μl。將培養板放入37℃、5％co2的培養箱中培養24h，待細胞完全貼壁後，加入不同濃度的含藥培養液(實驗組)、正常培養液(空白對照組)，實驗組和空白對照組每組設4個復孔，藥物對照組(無細胞，僅加入不同濃度的含藥培養液)設1個復孔。各組同時培養24h，吸去含藥培養基，每孔加入含cck-8溶液的培養基100μl，繼續培養2h後在450nm下檢測od值。

在酶標儀上測各孔od值，測定波長450nm，記錄結果，計算細胞存活率和半數毒性濃度(tc50)。

細胞存活率(％)＝(od實驗組/od空白對照組)×100％

半數毒性濃度(tc50)＝antilog[logb+(50－b)的抑制百分率/(a－b)的抑制百分率×c](a≧抑制50％藥物濃度，b≦抑制50％藥物濃度，c＝log稀釋倍數)，參照reed-muench法。

②對col-ⅰ、col-ⅲ、tnf-α和il-1β的抑制實驗

酶聯免疫法：取細胞上清液，採用酶聯免疫法，用col-ⅰ、col-ⅲ、tnf-α和il-1β檢測試劑盒按說明書操作，在酶標儀上以450nm作為檢測波長測定各孔od值。計算col-ⅰ、col-ⅲ、tnf-α和il-1β的抑制率和藥物對col-ⅰ、col-ⅲ、tnf-α和il-1β的半數抑制濃度(ic50)。

沙苑子苷對col-ⅰ、col-ⅲ、tnf-α和il-1β的抑制率(％)＝(1-od實驗組/od空白對照組)×100％

沙苑子苷對col-ⅰ、col-ⅲ、tnf-α和il-1β的半數抑制濃度(ic50)＝antilog[logb+(50-b)的抑制百分率/(a-b)的抑制百分率×c](a≧抑制50％藥物濃度，b≦抑制50％藥物濃度，c＝log稀釋倍數)，參照reed-muench法。

③對sod和gsh的影響

機體的氧化與抗氧化失衡在肺纖維疾病形成過程中佔很重要的位置，而sod和gsh作為評價氧化與抗氧化的重要指標，檢測它的含量變化，能表明氧化與抗氧化是否參與肺纖維化疾病的形成。tgf-β能夠刺激小鼠胚胎成纖維細胞增殖，轉化為肌成纖維細胞，引起細胞內抗氧化性指標sod和gsh升高(p<0.05)，可以說明成纖維細胞已經受到損傷。表1的實驗結果顯示，沙苑子苷的預防幹預後能顯著抑制sod和gsh指標的升高(p<0.05)，起到保護成纖維細胞的作用。

表1沙苑子苷對細胞中sod和gsh的影響(n＝8)

④統計學分析

實驗數據以(均數±標準差)表示，統計分析採用spss17.0統計軟體。同一化合物在不同濃度組間的od值，經方差齊性檢驗後進行單因素方差分析(one-wayanova)：方差齊時採用lsd法檢驗；方差不齊時採用dunnett’st3法。顯著性水準取α＝0.05，以p<0.05時，判斷組間差異具有統計學意義。

⑤計算治療指數

對col-ⅰ、col-ⅲ、tnf-α和il-1β的分泌有明顯抑制作用，且抑制率與藥物濃度呈典型量效關係的化合物，其體外抗hbv作用治療指數(ti)評價。

治療指數(ti)＝tc50/ic50，其中ti≧2為有效低毒；1＜ti＜2為低效有毒；ti≦1為毒性。ti數值越大化合物越安全。

(3)實驗結果與討論

將實驗數據經上述統計學處理後，結果如下表2～4所示。

2、沙苑子苷對大鼠肺間質纖維化的作用效果及其機制研究

spf級雄性sd大鼠(200～220g)共70隻，隨機分為7組：①正常組；②假手術組：生理鹽水(10ml·kg-1)；③模型對照組；④陽性藥物對照組：醋酸潑尼松片(3.5mg·kg-1)；⑤本發明提取物高劑量組(72mg·kg-1)；⑥本發明提取物中劑量組(36mg·kg-1)；⑦本發明提取物低劑量組(18mg·kg-1)；。實驗每組各10隻。

各組大鼠分籠飼養於不鏽鋼金屬籠內，每籠5隻，室溫調節在(26±2)℃，溼度控制在40％～70％，自由飲食和攝水。除正常組外，其他各組均注射30mg/kg的blm(1621158)，假手術組注射適量的生理鹽水，於模後第2d給藥，連續給藥14d。14d後，大鼠腹主動脈取血，分離血清，同時取出雙肺，計算肺係數；左肺置於福馬林中，右肺一部分用於試劑盒(hyp、t-aoc和gsh等)的檢測，一部分凍於-80℃，留作後續wb和pcr實驗檢測。所得實驗數據用spss17.0軟體統計處理，用表示。

(1)肺係數(li)實驗

大鼠li是反應各組大鼠體重和肺重關係的一個指標。肺重大小可以間接反應肺組織是否發生病變以及病變程度。由下表可知，氣管內注射鹽酸博萊黴素的模型組li較正常組明顯升高(p<0.01)，說明肺組織發生病變，結合肺組織肉眼觀察結果發現模型組肺組織體積變大，支氣管附近有較大的灰色實變區域，肺表面可見肺泡囊腫以及血樣斑點。而經過14d的藥物幹預後，給藥組肺組織的li較模型組有很大的改善，更趨近於正常組(p<0.05)。肉眼觀察到各藥物組肺組織體積略微變大，支氣管附近有少量的灰色實變區域，li結果見表2。

表2各組大鼠的肺係數(li)實驗結果(n＝10)

與正常組比較，#為模型組，p<0.01；*為模型組，p<0.05。

(2)血清中hyp、mpo、t-aoc以及肺組織中hyp、gsh的含量

肺間質纖維化時，肺內主要增加的成分為膠原纖維，羥脯氨酸為膠原纖維所特有，測定羥脯氨酸的含量，可換算成膠原蛋白的含量，以反應肺纖維化的程度。本實驗通過測定血清和肺組織中羥脯氨酸的含量來初步反應肺纖維化的程度。實驗結果表明，模型組hyp的含量較正常組顯著升高(p<0.01)，說明肺組織形成纖維化。而經過14d給藥，給藥組血清和肺組織中的羥脯氨酸的含量較模型組明顯下降，且沙苑子苷高、中、低給藥組藥效呈現一定的劑量依賴性關係(p<0.05)，說明沙苑子苷藥物減輕模型的纖維化程度，幹預肺纖維化形成過程。

t-aoc、mpo和gsh是檢測機體氧化與抗氧化失衡最常用的指標。機體氧化應激水平如果遭到破壞，如t-aoc顯著降低，mpo大量出現在細胞內，體內重要的抗氧化劑gsh水平急劇下降。本實驗通過測定血清中t-aoc和mpo以及組織中gsh的含量判斷大鼠肺間質纖維化是否與大鼠體內氧化應激水平失衡有關係。結果表明，模型組大鼠血清中t-aoc與組織中gsh的含量較正常組顯著降低(p<0.01)，各給藥組較模型組有一定程度上的改善，以沙苑子苷高、中劑量組明顯(p<0.05)。而較正常組肺組織，模型組大鼠肺組織細胞內mpo大量產生(p<0.01)，經過藥物治療後，mpo含量有所下降，更接近正常組(p<0.05)，以沙苑子苷高、中劑量組明顯，具體結果見表3、4。

表3各組大鼠血清中hyp、mpo和t-aoc的含量(n＝8)

與正常組比較，#為模型組，p<0.01；*為模型組，p<0.05.

表4各組大鼠肺組織中hyp和gsh的含量(n＝8)

與正常組比較，#為模型組，p<0.01；*為模型組，p<0.05。

(3)組織中炎症因子tnf-α和il-1β的含量

肺間質纖維化發生是一個緩慢且複雜的過程。肺炎存在於肺纖維化形成過程的始末。炎症因子tnf-α和il-1β是用來評判炎症常用的指標，而且研究表明這兩個炎症因子在肺纖維化形成機制中有重要作用。本實驗通過測定肺組織中炎症因子tnf-α和il-1β含量判斷纖維化過程中是否存在肺炎(亦或是纖維化是由肺炎引起)。結果表明，與正常組比較，模型組肺組織中tnf-α和il-1β的含量較正常組顯著升高(p<0.01)，tnf-α程度更為顯著。而經過沙苑子苷藥物治療後，各給藥組肺組織中tnf-α和il-1β的含量較模型組顯著下降(p<0.05)，更趨近於正常組，由此可推測出，沙苑子苷藥物可能從肺間質纖維化形成的初期幹預較好。

表5各組大鼠肺組織中tnf-α和il-1β含量(n＝8)

與正常組比較，#為模型組，p<0.01；*為模型組，p<0.05。

(4)he染色

正常組和假手術組肺組織結構正常，未見肉芽組織增生和炎症因子的入侵，肺泡結構完整，未見充血、水腫等情況。陽性藥組肺組織部分結構破壞，可見少量的肉芽組織、成纖維細胞增生以及炎症因子的入侵，肺泡結構大體完整，未見充血、水腫等情況。沙苑子苷高、中、低劑量組可見局部肺組織結構發生改變，可見肺泡間隔增寬，有肉芽組織、成纖維細胞增生以及大量的炎症因子入侵，部分肺組織出現水腫，以低劑量較為明顯。模型組大鼠肺組織出現大面積的結構紊亂破壞，肺泡結構消失，肺泡間隔增寬，似實質化趨勢；支氣管附近可見大量的炎症因子入侵以及成纖維細胞增生，結構破壞。結果見圖2。

參照szapiel等的方法，對肺組織中肺泡炎進行計分，計分結果與病理圖片結果一致，模型組計分最高，各給藥組評分有所減少，以沙苑子苷高劑量組減少最為明顯，結果見表6。

表6各組大鼠肺組織肺泡炎症計分結果

(5)masson染色

正常組和假手術組肺組織結構正常，支氣管可見少量的膠原纖維(膠原顏色較暗)。陽性藥組肺組織部分結構破壞，可見局部肺支氣管附近膠原纖維增加，顏色變亮。沙苑子苷高、中、低劑量組可見局部肺組織結構發生改變，可見支氣管附近有膠原纖維增生，顏色較亮，區域有所擴大。模型組大鼠肺組織出現大面積的結構紊亂破壞，可見支氣管附近有成片的膠原纖維增生，膠原顏色明顯變亮，可見少量支氣管結構破壞，結果見圖3。

採用ashcroft等和hübner等的方法，對肺組織中肺纖維化程度進行計分，評分標準分八級，1級計1分，每組8個樣本分別評分，並求平均值。平均計分結果與病理圖片結果一致，模型組計分最高，各給藥組評分有所減少，以沙苑子幹高劑量組減少最為明顯，結果見表7。

表7各組肺組織中肺纖維化程度評分結果

(6)wb實驗

與對照組比較，模型組大鼠肺組織tgf-β、smad3和smad4蛋白表達明顯上調，smad7蛋白表達明顯下調。與模型組比較，沙苑子苷組能顯著抑制大鼠肺組織tgf-β、smad3和smad4蛋白的表達，誘導smad7蛋白表達增加，以沙苑子苷高劑量效果明顯(p<0.05)，見圖4。

(7)pcr實驗

與對照組比較，模型組大鼠肺組織tgf-β、smad3、smad4mrna表達顯著增加，smad7、erk1/2mrna的表達顯著減少。與模型組比較，各給藥組不同程度的抑制大鼠肺組織tgf-β、smad3、smad4mrna的表達，升高smad7、erk1/2mrna的表達，以沙苑子苷高劑量組作用明顯，結果見圖5。

附圖說明

圖1為沙苑子苷高效液相色譜圖。

圖2為各組大鼠肺組織he染色顯微圖片(×200)。

圖3為各組大鼠肺組織masson染色顯微圖片(×200)。

圖4為沙苑子苷對肺纖維化大鼠肺組織中tgf-β、smad3、smad4、smad7、erk1/2和p-erk1/2蛋白表達影響的效果圖，圖中的#表示與對照組比較，具有顯著性差異p<0.05；*表示與模型組比較，具有顯著性差異p<0.05。

圖5為沙苑子苷對肺纖維化大鼠肺組織中tgf-β、smad3、smad4、smad7和erk1/2基因表達影響的效果圖，圖中的#表示與對照組比較，具有顯著性差異p<0.05；*表示與模型組比較，具有顯著性差異p<0.05。

具體實施方式

製備沙苑子苷例

例1

取乾燥的青天葵2000g，粉碎成粗粉。

取青天葵粗粉，加入20倍量60％乙醇浸泡12小時，在常壓下加熱提取1.5小時，趁熱過濾，藥渣再加入15倍量60％乙醇，加熱提取1小時，趁熱過濾，合併兩次乙醇提取液。將乙醇提取液減壓濃縮至無醇味，在5℃下以10000rpm離心，取上清液加於已處理好的ab-8型大孔吸附樹脂(天津南開大學化工廠生產)，以2bv/h(倍柱體積每小時)的流速上大孔吸附樹脂柱，待吸附飽和後，先用水以1.0bv/h的流速洗脫樹脂柱，至水洗液無色後，再依次以20％、60％、95％乙醇以1.0bv/h的流速洗脫，各乙醇梯度間的遞增以上一梯度洗脫液至無色為依據，tlc示蹤檢測洗脫流份，收集濃度為60％和95％且tlc顯示具有沙苑子苷的乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮，乾燥即得淡黃色粗品。

稱取上述沙苑子苷粗品適量，加入95％乙醇至完全溶解，然後緩慢加入適量蒸餾水，邊加邊攪拌，使混合液中乙醇的終濃度達到20％為止，放置30min後，過濾，即得到淡黃色無定形粉末。

淡黃色無定形粉末(乙醇-水)，薄層層析後用10％硫酸-乙醇顯色，黃色加深，且365nm下螢光明顯增強，表明可能為黃酮類化合物。

1h-nmr(500mhz,dmso-d6)譜中，δh12.57(1h,s)，8.16(2h,d,j＝9.5hz)和7.17(2h,d,j＝9.5hz)，6.79(1h,d,j＝2.0hz)和6.40(1h,d,j＝2.0hz)等信號，提示與化合物鼠李檸檬素具有相同的結構母核，即a環5，7位二取代，且5位為羥基，b環為對位雙取代苯環結構。δh5.51(1h,d,j＝7.5hz)和5.04(1h,d,j＝7.5hz)進一步證明結構中存在兩個六碳糖片斷。δh3.87(3h,s)為-och3的特徵信號。13c-nmr(125mhz,dmso-d6)譜結合dept-135譜,除去與鼠李檸檬素基本一致的信號外，剩餘的信號表現出兩個葡萄糖的特徵，δh100.7和99.8為糖的端基碳的特徵信號，δc80～60之間表現出十個葡萄糖殘基的碳信號。經與文獻中complanatuosi[3]d比較，13c-nmr譜數據一致，故鑑定化合物nf-buoh-5為complanatuoside，即沙苑子苷。

精密稱取本實施例所述高純度沙苑子苷1mg，加甲醇溶解並定容至10ml。進樣前以0.22μm微孔濾膜過濾。精密吸取5μl，依選定的色譜條件進樣測定，根據標準溶液所得的回歸方程計算本發明提取物中沙苑子苷的純度為98.3％，色譜圖見圖1。

例2

取乾燥的青天葵1000g，粉碎成粗粉。

取青天葵粗粉，加入15倍量80％乙醇浸泡12小時，在常壓下加熱回流提取1.0小時，趁熱過濾，藥渣再加入12倍量80％乙醇，加熱回流提取1小時，趁熱過濾，合併兩次乙醇提取液。將乙醇提取液減壓濃縮至無醇味，在8℃下以12000rpm離心，取上清液加於已處理好的ab-8型大孔吸附樹脂(天津南開大學化工廠生產)，以1.5bv/h(倍柱體積每小時)的流速上大孔吸附樹脂柱，待吸附飽和後，先用水以1.5bv/h的流速洗脫樹脂柱，至水洗液無色後，再依次以20％、60％、95％乙醇以0.5bv/h的流速洗脫，各乙醇梯度間的遞增以上一梯度洗脫液至無色為依據，tlc示蹤檢測洗脫流份，收集濃度為60％和95％且tlc顯示具有沙苑子苷的乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮，乾燥即得沙苑子苷粗品。沙苑子苷粗品用95％乙醇完全溶解，然後緩慢加入適量蒸餾水，邊加邊攪拌，使混合液中乙醇的終濃度達到20％為止，放置30min後，過濾，即得到高純度沙苑子苷。沙苑子苷的純度為99.1％。

例3

取新鮮乾燥的青天葵1000g，粉碎成粗粉。

取青天葵粗粉，加入12倍量70％乙醇浸泡12小時，在常壓下加熱回流提取1.5小時，趁熱過濾，藥渣再加入10倍量70％乙醇，加熱回流提取1小時，趁熱過濾，合併兩次乙醇提取液。將乙醇提取液減壓濃縮至無醇味，在10℃下以8000rpm離心，取上清液加於已處理好的ab-8型大孔吸附樹脂(天津南開大學化工廠生產)，以1.5bv/h(倍柱體積每小時)的流速上大孔吸附樹脂柱，待吸附飽和後，先用水以1bv/h的流速洗脫樹脂柱，至水洗液無色後，再依次以20％、60％、95％乙醇以0.6bv/h的流速洗脫，各乙醇梯度間的遞增以上一梯度洗脫液至無色為依據，tlc示蹤檢測洗脫流份，收集濃度為60％和95％且tlc顯示具有沙苑子苷的乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮，乾燥即得沙苑子苷粗品。沙苑子苷粗品用95％乙醇完全溶解，然後緩慢加入適量蒸餾水，邊加邊攪拌，使混合液中乙醇的終濃度達到20％為止，放置60min後，過濾，即得到高純度沙苑子苷。沙苑子苷的純度為98.6％。

製備藥物製劑例

例1

將製備例1所得提取物18.3g用適量乙醇稀釋後，按照等量遞加法分別賦型劑hpmc和微粉矽膠按1：1.5：0.5的比例混合均勻，過6號篩製成顆粒，於60℃溫度下乾燥3小時。取1#空腸溶膠囊，分別填充以上乾燥顆粒，每1粒膠囊0.3g，於囊口處塗一層阿拉伯膠漿，套封膠囊，用乾燥紗布擦拭膠囊後，裝於密閉棕色瓶內，即得。該製劑的用量為每天兩次，每次2粒，口服。

例2

將製備例1所得提取物12.2g與30g花生油混合，加入10g蜂蠟及0.5g吐溫－80，再用旋轉式扎囊機壓製成500粒軟膠囊(0.3g/粒)。該製劑的用量為每天兩次，每次2粒，口服。

例3

將製備例2所得提取物11.3g與大豆油20g混合，加入5.0g蜂蠟及0.8g吐溫－80，再用旋轉式扎囊機壓製成300粒軟膠囊(0.3g/粒)。該製劑的用量為每天兩次，每次4粒，口服。

例4

將製備例3所得提取物13.6g用適量乙醇稀釋後再與澱粉100g混勻，過120目篩，於60℃下烘乾3小時，裝膠囊500粒(0.3g/粒)。該製劑的用量為每天兩次，每次3粒，口服。

例5

將製備例1提取物88.1g與40gpeg4000及200gpeg6000混合，熔融，滴入冷卻劑甲基矽油中即得滴丸(50mg/粒)。該製劑的用量為每天兩次，每次1.0g，口服。

例6

將製備例3提取物與1.5倍量的β-環糊精包合，加入60g澱粉，混合，再過80目篩2次，置攪拌機中，加入蒸餾水適量，攪拌10分鐘，制軟材，過16目篩制粒，溼粒於60℃鼓風乾燥箱中乾燥，幹粒過16目篩整粒。加入羧甲基澱粉鈉10g及硬脂酸鎂2g，混合均勻，壓片，包薄膜衣，得片劑。該製劑的用量為每天三次，每次2片，口服。

例7

將製備例2提取物10.3g與hpmc、乳糖及澱粉按1：0.9：0.9:1.2的比例混合均勻，用95％乙醇20目制粒，50℃以下乾燥1小時、16目篩整粒，再加入1％硬脂酸鎂混合均勻,壓製成片重為0.32g的片劑。即得分散片。該製劑的用量為每天2次，每次3片，溫水衝服。