一種粉紅粘帚黴與枯草芽孢桿菌復配的可溼性粉劑的製作方法
2023-10-04 17:50:54
本發明屬於微生物技術領域，具體涉及一種具有防治真菌性病害的粘帚黴(Gliocladium roseum)真菌孢子粉和具有防治細菌性病害的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)細菌芽孢粉復配的可溼性粉劑的方法。
背景技術：
由於長期使用化學肥料、化學農藥，以及高強度複種、連作生產的耕作方式，導致我國農業生產過程中出現了諸如病蟲害抗性增強，土壤持續生產能力和肥料利用率降低，耕地質量遭到破壞、有機質不足、土壤板結、肥力下降，土傳病害和連作障礙頻發，農產品質量安全問題日益嚴重等一系列制約我國農業發展的問題。而由具有生防功能的微生物菌種通過生物發酵技術和製劑加工技術製備的微生物肥料和微生物農藥，由於具有防病、促生、修復土壤微生態、改良土壤結構、解磷解鉀、提高肥料利用率等功能，可以有效的解決上述制約我國農業發展的問題。
隨著生物發酵技術和製劑加工技術的發展，我國微生物肥料產業和微生物農藥產業也得到了迅猛發展，尤其是在最近的二三十年裡，微生物肥料和微生物農藥的產品種類、年生產量和生產企業數量都有大幅提高，在這兩個產業快速發展的時，也存在防治病害相對單一、防治譜相對較窄、防病效果有待提高、菌種易退化、環境依賴性強等問題，目前在農業部微生物肥料中心和農業部農藥檢定所登記的微生物肥料和微生物農藥中單一菌種、單一功能的產品佔比超過80％，而本發明的可溼性粉劑由兩種不同防治機理的菌劑與潤溼劑、分散劑、紫外保護劑、載體加工而成，具有較好的懸浮分散性能和水溶性，既可以防治葉部病害也可以防治土壤中的病害，施用方法靈活多樣，可採用根部滴灌、衝施、灌根和地上部噴霧、噴淋等施用方法，對多種真菌和細菌病害均具有很好的防治效果。
技術實現要素：
本發明提供了一種具有防治灰黴病、紋枯病、根腐病、真菌性葉斑病、菌核病等真菌性病害的粘帚黴真菌孢子粉和具有防治青枯病、軟腐病、潰瘍病、細菌性斑點病、細菌性角斑病等細菌性病害的枯草芽孢桿菌細菌芽孢粉復配的可溼性粉劑及其製備方法。
上述可溼性粉劑是由粘帚黴真菌孢子粉、枯草芽孢桿菌細菌芽孢粉、硅藻土、十二烷基苯磺酸鈉、木質素磺酸鈉、羧甲基纖維素鈉、抗壞血酸混合加工而成，按重量份數計，各組分分別為：50-100份粘帚黴真菌孢子粉、50-100份枯草芽孢桿菌細菌芽孢粉、800-850份硅藻土、10-20份十二烷基苯磺酸鈉、10-50份木質素磺酸鈉、10-50份羧甲基纖維素鈉、5-10份抗壞血酸。
所述可溼性粉劑的製備方法為：
步驟一、將濃度為5-10億cfu/克的粘帚黴真菌孢子粉(純度大於90％，含水量小於10％，厚垣孢子比例大於30％)、濃度為200-300億cfu/克的枯草芽孢桿菌細菌芽孢粉(純度大於90％，含水量小於10％)與硅藻土依次加入混合機中，混合0.5～1h後，再依次加入十二烷基苯磺酸鈉、木質素磺酸鈉、羧甲基纖維素鈉、抗壞血酸，混合0.5～1h後得到均勻的混合物；
步驟二、將上一步的混合物轉入低溫氣流粉碎機，粉碎溫度控制在20℃以下，粉碎後過300目篩，即製得分散性和懸浮性良好的可溼性粉劑。
上述粉紅粘帚黴菌株(Gliocladium roseum)，編號為QGSS-C16，分離自山東壽光市東斟灌村番茄大棚土壤。該菌株已於2016年04月25日保藏於中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(北京市朝陽區北辰西路1號院3號)，保藏登記號為CGMCC No.12243。菌株適合生長的培養基為PDA培養基，適合生長的pH為6.0～6.8，適合生長的溫度為25～28℃。
上述枯草芽孢桿菌菌株(Bacillus subtilis)，編號為QGSS-05，分離自山東壽光三元朱村。該菌株已於2015年10月30日保藏於中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(北京市朝陽區北辰西路1號院3號)，保藏登記號為CGMCC No.11563。菌株適合生長的培養基為NA培養基，適合生長的pH為7.0～7.2，適合生長的溫度為28～30℃。
本發明提供的具有防病促生的可溼性粉劑能快速、均勻的懸浮分散於水中，本發明的可溼性粉劑具有的特點及優勢為：
(1)將互不拮抗的生防真菌與細菌復配，起到很好的增效作用，擴大了對病害的防治範圍，解決了單一生防因子防病譜窄的問題，保證了對不同類型病害的防治效果；
(2)施用方法靈活多樣，可採用根部滴灌、衝施、灌根和地上部噴霧、噴淋等施用方法；
(3)添加的粉紅粘帚黴和枯草芽孢桿菌均是從土壤中分離得到的具有較高生防活性的生防菌株，具有抗逆性強、營養要求簡單、易於在植物根際和葉面定殖、對多種作物的細菌性和真菌性病害具有較好防治效果等優點；
(4)粘帚黴孢子粉中厚垣孢子的比例大於30％，大大提高了真菌孢子的存活時間，延長了貨架期；
(5)所用菌株均來源於土壤中，對作物、施用人員、環境安全性高。
具體實施方式
實施例1
步驟一、將濃度為10億cfu/克的粘帚黴真菌孢子粉100份、濃度為300億cfu/克的枯草芽孢桿菌細菌芽孢粉50份與硅藻土815份依次加入混合機中，混合0.5～1h後，再依次加入十二烷基苯磺酸鈉10份、木質素磺酸鈉10份、羧甲基纖維素鈉10份、抗壞血酸5份，混合0.5～1h後得到均勻的混合物；
步驟二、將上一步的混合物轉入低溫氣流粉碎機，粉碎溫度控制在20℃以下，粉碎後過300目篩，即製得分散性和懸浮性良好的可溼性粉劑。
懸浮率按照農藥懸浮率測定方法GB/T 14825-2006中的4.1進行測定，潤溼時間按照農藥可溼性粉劑潤溼性測定方法GB/T 5451-2001進行測定，細度按照農藥粉劑、可溼性粉劑細度測定方法GB/T 16150-1995中的2.2溼篩法進行測定，水分按照農藥水分測定方法GB/T 1600-2001中2.2共沸蒸餾法進行測定，pH值按照農藥pH值的測定方法GB/T 1601-1993進行測定。經檢測該可溼性粉劑的懸浮率為78％，潤溼時間為83s，細度99％通過48μm篩，水分6.3％，pH6.9。
實施例2
步驟一、將濃度為10億cfu/克的粘帚黴真菌孢子粉50份、濃度為300億cfu/克的枯草芽孢桿菌細菌芽孢粉50份與硅藻土835份依次加入混合機中，混合0.5～1h後，再依次加入十二烷基苯磺酸鈉15份、木質素磺酸鈉15份、羧甲基纖維素鈉25份、抗壞血酸10份，混合0.5～1h後得到均勻的混合物；
步驟二、將上一步的混合物轉入低溫氣流粉碎機，粉碎溫度控制在20℃以下，粉碎後過300目篩，即製得分散性和懸浮性良好的可溼性粉劑。
懸浮率按照農藥懸浮率測定方法GB/T 14825-2006中的4.1進行測定，潤溼時間按照農藥可溼性粉劑潤溼性測定方法GB/T 5451-2001進行測定，細度按照農藥粉劑、可溼性粉劑細度測定方法GB/T 16150-1995中的2.2溼篩法進行測定，水分按照農藥水分測定方法GB/T 1600-2001中2.2共沸蒸餾法進行測定，pH值按照農藥pH值的測定方法GB/T 1601-1993進行測定。經檢測該可溼性粉劑的懸浮率為75％，潤溼時間為80s，細度99％通過48μm篩，水分6.8％，pH6.7。
實施例3
步驟一、將濃度為5億cfu/克的粘帚黴真菌孢子粉100份、濃度為200億cfu/克的枯草芽孢桿菌細菌芽孢粉100份與硅藻土815份依次加入混合機中，混合0.5～1h後，再依次加入十二烷基苯磺酸鈉20重量份、木質素磺酸鈉20重量份、羧甲基纖維素鈉50重量份、抗壞血酸10重量份，混合0.5～1h後得到均勻的混合物；
步驟二、將上一步的混合物轉入低溫氣流粉碎機，粉碎溫度控制在20℃以下，粉碎後過300目篩，即製得分散性和懸浮性良好的可溼性粉劑。
懸浮率按照農藥懸浮率測定方法GB/T 14825-2006中的4.1進行測定，潤溼時間按照農藥可溼性粉劑潤溼性測定方法GB/T 5451-2001進行測定，細度按照農藥粉劑、可溼性粉劑細度測定方法GB/T 16150-1995中的2.2溼篩法進行測定，水分按照農藥水分測定方法GB/T 1600-2001中2.2共沸蒸餾法進行測定，pH值按照農藥pH值的測定方法GB/T 1601-1993進行測定。經檢測該可溼性粉劑的懸浮率為80％，潤溼時間為75s，細度99％通過48μm篩，水分6.1％，pH6.5。
實施例4
可溼性粉劑防治番茄灰黴病的田間實驗：
2015年4月2日北京昌平百善鎮獅子營村日光溫室大棚，試驗地前茬種植番茄，有灰黴病的發生。該實驗的目的是防治番茄灰黴病的發生。將實施例1、2、3中製備的可溼性粉劑500倍液進行葉面噴施作為實驗處理，噴施化學農藥50％異菌脲可溼性粉劑1000倍液作陽性對照，噴施清水作空白對照，每個處理設3次重複，每重複的小區面積為30平方米，在番茄開花後開始噴施，每隔7天噴施1次，連續噴施3次，最後1次噴施後間隔7天調查發病情況。按生產常規管理方式進行田間管理，在發病前對將要調查的植株用系紅繩的方法做好標記，每重複調查20株，調查番茄灰黴病病情指數，記錄番茄的總葉數、各級病葉數，計算病情指數和防治效果。每次採果後記錄各小區產量，在番茄收穫末期，計算各小區總產量並折合為畝產量。
病情指數分級標準：0級，無病斑；
1級，病斑面積佔整個葉面積的5％以下；
3級，病斑面積佔整個葉面積的6％-10％；
5級，病斑面積佔整個葉面積的11％-25％；
7級，病斑面積佔整個葉面積的26％-50％；
9級，病斑面積佔整個葉面積的50％以上。
病情指數(％)＝∑(各級病葉數×相對級數值)/(調查總葉數×最高病級值)×100。
防治效果(％)＝(空白對照區病情指數-處理區病情指數)/空白對照區病情指數×100。
表1可溼性粉劑對灰黴病的防治效果及對番茄產量的影響
實施例5
可溼性粉劑防治辣椒青枯病的田間實驗：
2015年3月22日河北廊坊廣陽區炊莊村日光溫室大棚，試驗地塊連續三茬種植相同品種辣椒，有青枯病發生，存在連作障礙問題。
該實驗的目的是防治辣椒青枯病的發生。將實施例1、2、3中製備的可溼性粉劑500倍液進行灌根作為實驗處理，3％中生菌素溼性粉劑600倍液灌根作陽性對照，灌清水作空白對照，每個處理設3次重複，每重複的小區面積為30平方米，在青枯病發病前用藥，每隔7天灌根1次，連續灌4次，最後1次灌根後間隔7天調查發病情況。按生產常規管理方式進行田間管理，在發病前對將要調查的植株用系紅繩的方法做好標記，每重複調查40株，調查辣椒死亡株數，計算死亡率和防治效果，每次採果後記錄各小區產量，在辣椒收穫末期，計算各小區總產量並折合為畝產量。
表2可溼性粉劑對辣椒青枯病的防治效果及對辣椒產量的影響
從溫室試驗實施例4、5可以看出，本發明製備的可溼性粉劑對灰黴病真菌性病害和青枯病細菌性病害均具有很好的防治效果，並且植株長勢比常規化學藥劑對照明顯旺盛，可使番茄最低增產14.36％，辣椒最低增產11.95％。