無病毒吊瓜組培苗的培養方法
2023-10-23 18:35:12
無病毒吊瓜組培苗的培養方法
【專利摘要】本發明提供了一種無病毒吊瓜組培苗的培養方法，屬於農業種植【技術領域】。解決了現有技術所存在的吊瓜組培苗未經過脫病毒處理，移植到田間後容易受病毒侵染的技術問題。它包括獲得吊瓜組培苗、將吊瓜組培苗置於光照培養箱中變溫培養8-12天、培養完成後取莖尖接種培養、轉接種培養、得到脫病毒的植株增殖步驟。本發明獲得了無病毒的吊瓜組培苗，該組培苗移植到田間後不易受病毒侵染，一致性好，組培苗生長旺盛、產量高，確保了吊瓜籽的產量和質量。
【專利說明】無病毒吊瓜組培苗的培養方法
【技術領域】
[0001]本發明屬於農業種植【技術領域】，涉及一種無病毒吊瓜組培苗的培養方法。
【背景技術】
[0002]吊瓜(Fructus Trichosanthis Kirilowii)是被子植物門(Angiospermae)、雙子葉綱(Dicotyledones)、葫蘆科(Cucurbitaceae)、瓜萎屬的多年生草本攀援植物，我國東部和長江及黃河流域等地均可栽種。吊瓜果實為白色與淺綠或深綠相間花紋，成熟後呈桔紅色。吊瓜食用性開發主要集中在吊瓜籽上。吊瓜籽佔吊瓜果實淨重三分之一以上，一般情況下吊瓜果實中含種子75~210粒，畝產瓜子75~150公斤。現代醫藥學研究證明:吊瓜籽中脂肪酸佔36.2%,其中65%為不飽和脂肪酸，蛋白質佔5.46%，並含17種以上的胺基酸，經常食用具有保健作用。吊瓜籽炒熟後味道潤綿、脆香特異、其外觀褐色豔麗、籽仁飽滿，被譽為「瓜子之王」。
[0003]食用吊瓜雌雄異株，目前主流的繁殖法有籽播苗繁殖法和生塊根切斷繁殖法兩種，用籽播苗繁殖，繁殖率低後代分離嚴重，一致性差，不結果的雄株佔總苗的70%以上，育苗成本高，且病毒病發病機率高(種傳病毒)；用塊根切斷繁殖，由於受塊根數量的限制，繁殖效率低，且費工費時，直接影響播種面積的擴大及優良品種的推廣。人們經過多年的研究後，開發了吊瓜種苗的無性繁殖技術，該技術可以達到快速繁殖的目的，如中國發明專利公開了一種吊瓜組培苗育苗方法[申請號:200610161470.1]，但用該方法得到的吊瓜組培苗未進行脫病毒處理，組培苗中會存在病毒，目前關於吊瓜病毒病研究的結果顯示:西瓜花葉病毒(Watermelon mosaic virus, WMV)和黃瓜花葉病毒(Cucumber mosaic virus, CMV)是引起吊瓜病毒病主要的主要病源。經採摘的疑似感病毒的吊瓜樣品，經檢測得出侵染吊瓜的病毒均為馬鈴薯Y病毒屬病毒(Potyvirus)，有常見的小西葫蘆黃化花葉病毒(Zucchiniyellow mosaic virus, ZYMV)、木瓜環斑病毒(Papaya ring spot virus, PRSV)和(Papayaleaf distortion mosaic virus, PLDMV)等。帶有上述這些病毒的組培苗移植到田間後容易造成病毒病流行，被病毒侵染的吊瓜在第一年症狀表現不明顯，但果實的產出不高，主要產量集中在第二年，第三年基本沒有產量。
【發明內容】
[0004]本發明的目的是針對上述問題，提供一種無病毒吊瓜組培苗的培養方法；解決了現有技術所存在的吊瓜組培苗未經過脫病毒處理，移植到田間後容易受病毒侵染的技術問題。
[0005]為達到上述目的，本發明採用了下列技術方案:一種無病毒吊瓜組培苗的培養方法，包括以下步驟:
[0006]步驟1，在實驗室培養基中獲得吊瓜組培苗；
[0007]步驟2，將吊瓜組培苗置於光照培養箱中，所述光照培養箱的溫度每隔12小時在31°C -33°C和37°C _39°C兩個溫度區間進行交替變換，培養時間為8_12天；[0008]步驟3，培養完成後，從光照培養箱中取出吊瓜組培苗，在解剖鏡下剝取0.2-0.4mm的莖尖,接種於第一培養基上,將第一培養基放入培養室中培養；
[0009]步驟4，當莖尖轉綠並膨大至1.8-2.2mm時，將莖尖轉接至第二培養基上，並繼續在培養室中培養；
[0010]步驟5，當莖尖培養成4_5cm的組培苗植株時，取組培苗植株葉子檢測植株是否脫病毒，如已脫病毒，將此植株進行增殖，得到無病毒吊瓜組培苗。
[0011 ] 在上述的無病毒吊瓜組培苗的培養方法中，在步驟3中，所述第一培養基為pH為5.6-6.0 的 MS+2.0mg.L-1BA+30.0mg.L-1 蔗糖 +0.6% 瓊脂培養基。
[0012]在上述的無病毒吊瓜組培苗的培養方法中，在步驟4中，所述第二培養基為pH為 5.6-6.0 的 MS+1.5mg.L-1BA+30.0mg.L-1 蔗糖 +0.6% 瓊脂培養基。
[0013]在上述的無病毒吊瓜組培苗的培養方法中，在步驟3中，所述培養室溫度為230C _27°C，相對溼度為60% -80%，光照強度為1800_2200Lx，光照時間為10_14h/d。
[0014]在上述的無病毒吊瓜組培苗的培養方法中，在步驟4中，所述培養室溫度為230C _27°C，相對溼度為60% -80%，光照強度為1800_2200Lx，光照時間為10_14h/d。
[0015]作為一種優選的方案，無病毒吊瓜組培苗的培養方法，包括以下步驟:
[0016]步驟1，在實驗室培養基中獲得吊瓜組培苗；
[0017]步驟2，將吊瓜組培苗置於光照培養箱中，所述光照培養箱的溫度每隔12小時在32°C和38°C兩個溫度間進行交替變換，培養時間為10天；
[0018]步驟3，培養完成後，從光照培養箱中取出吊瓜組培苗，在解剖鏡下剝取0.2-0.4mm 的莖尖，接種於 pH 為 5.8 的 MS+2.0mg.L-1BA+30.0mg.L-1 蔗糖 +0.6% 瓊脂的第一培養基上，將第一培養基放入培養室中培養，所述培養室溫度為23°C _27°C,相對溼度為60% -80%，光照強度為1800-2200LX，光照時間為10_14h/d ；
[0019]步驟4，當莖尖轉綠並膨大至2mm時，將莖尖轉接至pH為5.8的MS+1.5mg.L-1BA+30.0mg.L-1蔗糖+0.6%瓊脂的第二培養基上，並繼續在培養室中培養，所述培養室溫度為23°C -27°C，相對溼度為60% -80%，光照強度為1800-2200Lx，光照時間為 10-14h/d ；
[0020]步驟5，當莖尖培養成4_5cm的組培苗植株時，取組培苗植株葉子檢測植株是否脫病毒，如已脫病毒，將此植株進行增殖，得到無病毒吊瓜組培苗。
[0021]與現有的技術相比，本發明的優點在於:
[0022]1、熱處理結合莖尖培養結合的方法，脫除了單用莖尖培養或熱處理難以脫除的病毒，提聞了脫毒成功的機率；
[0023]2、採用變溫的熱處理脫毒法，提高了組培苗的存活率；
[0024]3、選取0.2-0.4mm的莖尖進行培養，成活率可達60%，脫毒率為100%，具有存活率聞和脫毒率完全的效果；
[0025]4、獲得了無病毒的吊瓜組培苗，利用無病毒組培苗進行組織培養，達到快速繁殖的目的，該組培苗移植到田間後不易受病毒侵染，一致性好，組培苗生長旺盛、產量高，確保了吊瓜籽的產量和質量。
【具體實施方式】[0026]一種無病毒吊瓜組培苗的培養方法，包括以下步驟:
[0027]步驟1，在實驗室培養基中獲得吊瓜組培苗；
[0028]步驟2，將吊瓜組培苗置於光照培養箱中，所述光照培養箱的溫度每隔12小時在31°C -33°C和37°C _39°C兩個溫度區間進行交替變換，培養時間為8_12天；
[0029]步驟3，培養完成後，從光照培養箱中取出吊瓜組培苗，在解剖鏡下剝取
0.2-0.4mm 的莖尖，接種於 pH 為 5.6-6.0 的 MS+2.0mg.L-1BA+30.0mg.L-1 蔗糖 +0.6%瓊脂培養基上，將培養基放入培養室中培養，所述培養室溫度為23°C -27°C，相對溼度為60% -80%，光照強度為1800-2200LX，光照時間為10_14h/d ；
[0030]步驟4，當莖尖轉綠並膨大至1.8-2.2mm時，將莖尖轉接至pH為5.6-6.0的MS+1.5mg.L-1BA+30.0mg.L-1蔗糖+0.6%瓊脂培養基上，並繼續在培養室中培養，所述培養室溫度為23°C -27°C，相對溼度為60% -80%，光照強度為1800-2200Lx，光照時間為10-14h/d ；
[0031]步驟5，當莖尖培養成4_5cm的組培苗植株時，取組培苗植株葉子檢測植株是否脫病毒，如已脫病毒，將此植株進行增殖，得到無病毒吊瓜組培苗。
[0032]作為一種優選的方案，無病毒吊瓜組培苗的培養方法，包括以下步驟:
[0033]步驟1，在實驗室培養基中獲得吊瓜組培苗；
[0034]步驟2，將吊瓜組培苗置於光照培養箱中，所述光照培養箱的溫度每隔12小時在32°C和38°C兩個溫度間進行交替變換，培養時間為10天；
[0035]步驟3，培養完成後，從光照培養箱中取出吊瓜組培苗，在解剖鏡下剝取
0.2-0.4mm 的莖尖，接種於 pH 為 5.8 的 MS+2.0mg.L-1BA+30.0mg.L-1 蔗糖 +0.6% 瓊脂培養基上，將培養基放入培養室中培養，所述培養室溫度為23°C _27°C，相對溼度為60% -80%,光照強度為1800-2200LX，光照時間為10_14h/d ；
[0036]步驟4，當莖尖轉綠並膨大至2mm時，將莖尖轉接至pH為5.8的MS+1.5mg.L-1BA+30.0mg.L-1蔗糖+0.6%瓊脂培養基上，並繼續在培養室中培養，所述培養室溫度為23°C -27°C，相對溼度為60% -80%，光照強度為1800-2200Lx，光照時間為10-14h/d ；
[0037]步驟5，當莖尖培養成4_5cm的組培苗植株時，取組培苗植株葉子檢測植株是否脫病毒，如已脫病毒，將此植株進行增殖，得到無病毒吊瓜組培苗。
[0038]下面結合試驗數據進一步說明本發明的有益效果:
[0039]表1為熱處理方法和時間對組培苗生長的影響。
[0040]表1
[0041]
【權利要求】
1.一種無病毒吊瓜組培苗的培養方法，其特徵在於，包括以下步驟: 步驟1，在實驗室培養基中獲得吊瓜組培苗； 步驟2，將吊瓜組培苗置於光照培養箱中，所述光照培養箱的溫度每隔12小時在31°C -33°C和37°C _39°C兩個溫度區間進行交替變換，培養時間為8_12天； 步驟3，培養完成後，從光照培養箱中取出吊瓜組培苗，在解剖鏡下剝取0.2-0.4mm的莖尖，接種於第一培養基上，將第一培養基放入培養室中培養； 步驟4，當莖尖轉綠並膨大至1.8-2.2mm時，將莖尖轉接至第二培養基上，並繼續在培養室中培養； 步驟5，當莖尖培養成4-5cm的組培苗植株時，取組培苗植株葉子檢測植株是否脫病毒，如已脫病毒，將此植株進行增殖，得到無病毒吊瓜組培苗。
2.根據權利要求1所述的無病毒吊瓜組培苗的培養方法，其特徵在於，在步驟3中，所述第一培養基為PH為5.6-6.0的MS+2.0mg.L-1BA+30.0mg.L-1蔗糖+0.6%瓊脂培養基。
3.根據權利要求1所述的無病毒吊瓜組培苗的培養方法，其特徵在於，在步驟4中，所述第二培養基為PH為5.6-6.0的MS+1.5mg.L-1BA+30.0mg.L-1蔗糖+0.6%瓊脂培養基。
4.根據權利要求1所述的無病毒吊瓜組培苗的培養方法，其特徵在於，在步驟3中，所述培養室溫度為23°C -27°C，相對溼度為60% -80%，光照強度為1800-2200Lx，光照時間為10-14h/d。
5.根據權利要求1`所述的無病毒吊瓜組培苗的培養方法，其特徵在於，在步驟4中，所述培養室溫度為23°C -27°C，相對溼度為60% -80%，光照強度為1800-2200Lx，光照時間為10-14h/d。
6.根據權利要求1所述的無病毒吊瓜組培苗的培養方法，其特徵在於，包括以下步驟: 步驟1，在實驗室培養基中獲得吊瓜組培苗； 步驟2，將吊瓜組培苗置於光照培養箱中，所述光照培養箱的溫度每隔12小時在32°C和38°C兩個溫度間進行交替變換，培養時間為10天； 步驟3，培養完成後，從光照培養箱中取出吊瓜組培苗，在解剖鏡下剝取0.2-0.4mm的莖尖，接種於pH為5.8的MS+2.0mg -L-1BA+30.0mg-L-1蔗糖+0.6%瓊脂的第一培養基上，將第一培養基放入培養室中培養，所述培養室溫度為23°C _27°C，相對溼度為60% -80%,光照強度為1800-2200LX，光照時間為10_14h/d ； 步驟4，當莖尖轉綠並膨大至2mm時，將莖尖轉接至pH為5.8的MS+1.5mg.L-1BA+30.0mg.L-1蔗糖+0.6%瓊脂的第二培養基上，並繼續在培養室中培養，所述培養室溫度為23°C -27°C，相對溼度為60% -80%，光照強度為1800-2200Lx，光照時間為 10-14h/d ； 步驟5，當莖尖培養成4-5cm的組培苗植株時，取組培苗植株葉子檢測植株是否脫病毒，如已脫病毒，將此植株進行增殖，得到無病毒吊瓜組培苗。
【文檔編號】A01H4/00GK103598097SQ201310579558
【公開日】2014年2月26日 申請日期:2013年11月18日 優先權日:2013年11月18日
【發明者】孫葉芳, 鄭琪, 羊安興, 邢海, 趙虎, 黃嶽夫 申請人:紹興市農業科學研究院