調味品中大腸菌群分離富集方法
2023-09-22 10:07:45 1
專利名稱：調味品中大腸菌群分離富集方法
技術領域：
本發明涉及菌群的分離富集方法，特別涉及一種調味品中大腸菌群分離富集方 法。
背景技術：
在食品行業，大腸菌群的含量是一項重要的衛生指標。對於蠔油、黃豆醬等粘稠狀 調味品，由於蠔油、黃豆醬等調味品成分複雜，存在幹擾菌體生理狀態、影響檢測結果的物 質，因此，在檢測前需要先進行菌體分離富集，以去除幹擾物質。目前，在對調味品的大腸菌群進行檢測前，對大腸菌群的分離方法包括如下幾種 一是在營養瓊脂等培養材料上對菌體12小時培養，獲得可見單菌落，然後分離菌體，該種 方法的缺點是時間長，有些不可培養菌體難於獲得；二是採用免疫學方法分析菌體，該方法 受到食品物料性質等因素影響，對於食品中的痕量微生物難於分離，並且由於免疫學方法 本身的不足，不能分離所有菌體；其他方法如簡單的膜過濾方法易於受到食品中小顆粒物 質的影響使分離比較困難；離心沉澱方法易於受到食品中膠體類物質的幹擾，難於分離。
發明內容
本發明的目的在於，提供一種調味品中大腸菌群分離富集方法，分離速度快、分離 效果好。為解決以上技術問題，本發明的技術方案是，一種調味品中大腸菌群分離富集方 法，包括如下步驟1)取調味品樣品；2)將樣品以無菌生理鹽水稀釋5 40倍，得到稀釋溶液，加入助濾劑；3)將稀釋溶液以真空過濾法濾過28 32 μ m的一級濾膜；4)取濾後液過0. 2 0. 45 μ m的二級濾膜；5)用無菌生理鹽水多次洗滌二級濾膜，大腸菌體截留在二級濾膜上。在此技術方 案中，加入助濾劑，能夠促進過濾、去除色素；通過一級過濾，去除大顆粒渣粒，通過二級過 濾，去除幹擾物去除小分子幹擾物質，達到菌體分離富集。其中，步驟3)中，一級濾膜的材質為聚丙烯、聚氯乙烯、纖維素酯類、聚碳酸酯類、 聚四氟乙烯中的任一種。其中，步驟4)中，二級濾膜的材質為聚丙烯、聚氯乙烯、纖維素酯類、聚碳酸酯類、 聚四氟乙烯中的任一種。其中，步驟5)中，洗滌次數為2 3次。其中，步驟2)中，所述助濾劑為吐溫-60或吐溫-80，所述助濾劑佔稀釋溶液的重 量百分比為千分之0. 5 千分之2。其中，步驟2)中，將樣品利用無菌生理鹽水稀釋15 20倍。其中，步驟3)中，所述一級濾膜的孔徑為30 μ m。
其中，步驟4)中，所述二級濾膜的孔徑為0. 3 0. 4 μ m。其中，步驟5)中，所述無菌生理鹽水的用量為20 50ml。其中，所述調味品為蠔油或豆醬。
與現有技術相比，本發明的調味品中大腸菌群分離富集方法，採用分級過濾，逐級 去除幹擾物，同時添加助濾劑，對菌體友好，能夠快速分離菌體並且不會影響大腸菌群的活 性，保證蠔油、黃豆醬等調味品中大腸菌群的高效快速分離。
圖1是本發明調味品中大腸菌群分離富集方法的流程圖。
具體實施例方式本發明的基本構思是，將蠔油、黃豆醬等調味品稀釋並經多級過濾，同時添加助濾 齊U，使得大腸菌群快速富集、分離。下面結合附圖和實施例對本發明進一步描述。參見圖1，圖1是本發明調味品中大腸菌群分離富集方法的流程圖。本發明的調味品中大腸菌群分離富集方法包括如下步驟Si、取調味品樣品；S2、將樣品以無菌生理鹽水稀釋5 40倍，得到稀釋溶液，加入助濾劑；S3、將稀釋溶液以真空過濾法濾過28 32 μ m的一級濾膜；S4、取濾後液過0. 2 0. 45 μ m的二級濾膜；S5、用無菌生理鹽水多次洗滌二級濾膜，大腸菌體截留在二級濾膜上。下面，以6個具體實施例對本發明的調味品中大腸菌群分離富集方法進行說明。實施例一1)取蠔油為樣品；2)將蠔油樣品加無菌生理鹽水稀釋5倍，得到稀釋溶液，在稀釋溶液中添加吐 溫-60，添加濃度為稀釋溶液的千分之1 ；3)將稀釋溶液以真空過濾法濾過30 μ m的一級濾膜，該一級濾膜為聚丙烯濾膜；4)取濾後液過0. 2 μ m的二級濾膜，該二級濾膜為聚氯乙烯濾膜；5)用無菌生理鹽水洗滌二級濾膜兩次，大腸菌體截留在二級濾膜上。以上分離過程所需時間20分鐘，最終截留在二極濾膜上的大腸菌體中幹擾物較 少，因此，本實施例的分離速度快、分離精度高。實施例二1)取黃豆醬為樣品；2)將黃豆醬樣品加無菌生理鹽水稀釋10倍，得到稀釋溶液，在稀釋溶液中添加吐 溫-80，添加後的濃度為稀釋溶液的千分之2 ；3)將稀釋溶液以真空過濾法濾過32 μ m的一級濾膜，該一級濾膜為聚氯乙烯濾 膜；4)取濾後液過0. 3 μ m的二級濾膜，該二級濾膜為聚丙烯濾膜；5)用無菌生理鹽水洗滌二級濾膜三次，大腸菌體截留在二級濾膜上。以上分離過程所需時間15分鐘，最終截留在二極濾膜上的大腸菌體中幹擾物較少，因此，本實施例的分離速度快、分離精度高。實施例三1)取黃豆醬為樣品；
2)將黃豆醬樣品加無菌生理鹽水稀釋20倍，得到稀釋溶液；3)將稀釋溶液以真空過濾法濾過31 μ m的一級濾膜，該一級濾膜為聚氯乙烯濾 膜，在稀釋溶液中添加吐溫-60，添加後的濃度為稀釋溶液的千分之0. 5 ；4)取濾後液過0.4μπι的二級濾膜，該二級濾膜為聚四氟乙烯濾膜；5)用無菌生理鹽水洗滌二級濾膜三次，大腸菌體截留在二級濾膜上。以上分離過程所需時間14分鐘，最終截留在二極濾膜上的大腸菌體中幹擾物較 少，因此，本實施例的分離速度快、分離精度高。實施例四1)取蠔油為樣品；2)將蠔油樣品加無菌生理鹽水稀釋30倍，得到稀釋溶液，在稀釋溶液中添加吐 溫-60，添加後的濃度為稀釋溶液的千分之1 ；3)將稀釋溶液以真空過濾法濾過29 μ m的一級濾膜，該一級濾膜為聚四氟乙烯濾 膜；4)取濾後液過0. 45 μ m的二級濾膜，該二級濾膜為聚四氟乙烯濾膜；5)用無菌生理鹽水洗滌二級濾膜三次，大腸菌體截留在二級濾膜上。以上分離過程所需時間10分鐘，最終截留在二極濾膜上的大腸菌體中幹擾物較 少，因此，本實施例的分離速度快、分離精度高。實施例五1)取蠔油為樣品；2)將蠔油樣品加無菌生理鹽水稀釋40倍，得到稀釋溶液，在稀釋溶液中添加吐 溫-80，添加後的濃度為稀釋溶液的千分之1. 5 ；3)將稀釋溶液以真空過濾法濾過30 μ m的一級濾膜，該一級濾膜為聚四氟乙烯濾 膜；4)取濾後液過0.4μπι的二級濾膜，該二級濾膜為聚四氟乙烯濾膜；5)用無菌生理鹽水洗滌二級濾膜二次，大腸菌體截留在二級濾膜上。以上分離過程所需時間為20分鐘，最終截留在二極濾膜上的大腸菌體中幹擾物 較少，因此，本實施例的分離速度快、分離精度高。實施例六1)取黃豆醬為樣品；2)將蠔油樣品加無菌生理鹽水稀釋35倍，得到稀釋溶液在稀釋溶液中添加吐 溫-60，添加後的濃度為稀釋溶液的千分之2 ；3)將稀釋溶液以真空過濾法濾過28 μ m的一級濾膜，該一級濾膜為聚四氟乙烯濾 膜；4)取濾後液過0. 35 μ m的二級濾膜，該二級濾膜為聚四氟乙烯濾膜；5)用無菌生理鹽水洗滌二級濾膜三次，大腸菌體截留在二級濾膜上。以上分離過程所需時間18分鐘，最終截留在二極濾膜上的大腸菌體中幹擾物較少，因此，本實施例的分離速度快、分離精度高。 以上僅 是本發明的優選實施方式，應當指出的是，上述優選實施方式不應視為對 本發明的限制，本發明的保護範圍應當以權利要求所限定的範圍為準。對於本技術領域的 普通技術人員來說，在不脫離本發明的精神和範圍內，還可以做出若干改進和潤飾，這些改 進和潤飾也應視為本發明的保護範圍。
權利要求
一種調味品中大腸菌群分離富集方法，其特徵在於，包括如下步驟1)取調味品樣品；2)將樣品以無菌生理鹽水稀釋5～40倍，得到稀釋溶液，加入助濾劑；3)將稀釋溶液以真空過濾法濾過28～32μm的一級濾膜；4)取濾後液過0.2～0.45μm的二級濾膜；5)用無菌生理鹽水多次洗滌二級濾膜，大腸菌體截留在二級濾膜上。
2.如權利要求1的調味品中大腸菌群分離富集方法，其特徵在於，步驟3)中，一級濾膜 的材質為聚丙烯、聚氯乙烯、纖維素酯類、聚碳酸酯類、聚四氟乙烯中的任一種。
3.如權利要求1的調味品中大腸菌群分離富集方法，其特徵在於，步驟4)中，二級濾膜 的材質為聚丙烯、聚氯乙烯、纖維素酯類、聚碳酸酯類、聚四氟乙烯中的任一種。
4.如權利要求1的調味品中大腸菌群分離富集方法，其特徵在於，步驟5)中，洗滌次數 為2 3次。
5.如權利要求1的調味品中大腸菌群分離富集方法，其特徵在於，步驟2)中，所述助濾 劑為吐溫-60或吐溫-80，所述助濾劑佔稀釋溶液的重量百分比為千分之0. 5 千分之2。
6.如權利要求1的調味品中大腸菌群分離富集方法，其特徵在於，步驟2)中，將樣品利 用無菌生理鹽水稀釋15 20倍。
7.如權利要求1的調味品中大腸菌群分離富集方法，其特徵在於，步驟3)中，所述一級 濾膜的孔徑為30 μ m。
8.如權利要求1的調味品中大腸菌群分離富集方法，其特徵在於，步驟4)中，所述二級 濾膜的孔徑為0. 3 0.4 μ m。
9.如權利要求1的調味品中大腸菌群分離富集方法，其特徵在於，步驟5)中，所述無菌 生理鹽水的用量為20 50ml。
10.如權利要求1的調味品中大腸菌群分離富集方法，其特徵在於，所述調味品為蠔油 或豆醬。
全文摘要
本發明公開一種調味品中大腸菌群分離富集方法，包括如下步驟1)取調味品樣品；2)將樣品以無菌生理鹽水稀釋5～40倍，得到稀釋溶液，加入助濾劑；3)將稀釋溶液以真空過濾法濾過28～32μm的一級濾膜；4)取濾後液過0.2～0.45μm的二級濾膜；5)用無菌生理鹽水多次洗滌二級濾膜，大腸菌體截留在二級濾膜上。本發明的調味品中大腸菌群分離富集方法，採用分級過濾，同時添加助濾劑，對菌體友好，能夠快速分離菌體並且不會影響大腸菌群的活性，保證蠔油、黃豆醬等調味品中大腸菌群的高效快速分離。
文檔編號C12R1/19GK101864384SQ20101017327
公開日2010年10月20日 申請日期2010年5月11日 優先權日2010年5月11日
發明者嚴守雷, 吳俊 , 潘思軼, 繆素娜, 鄧少雅, 黃文彪 申請人:佛山市海天調味食品有限公司;佛山市海天(高明)調味食品有限公司