一種提取純化銀椴苷的方法
2023-09-27 05:37:45
專利名稱：一種提取純化銀椴苷的方法
技術領域：
本發明屬於天然植物提純製備領域，具體涉及一種提取純化銀椴苷的方法。
背景技術：
銀椴苷(Tiliroside)，又名山奈酚-3-0-i3-D_(6』，-0-反式-對羥基桂皮醯基) 吡喃葡萄糖苷，是一種黃酮苷類化合物，為黃色針晶，mp. 246 248°C，分子式C3tlH26O13，分子量594.52。研究顯示銀椴苷在植物中分布較為普遍，在結香花、地桃花、巴西甘薯葉、 蜀葵花、白頭翁地上部分等植物中均有分離得到，其中結香花中含量最高，高達1. 56%。據報導，銀椴苷具有較強的抗氧化活性、清除自由基活性和抗炎活性，對補體系統的傳統途徑顯示出非常有潛力的抗補體活性(IC5Q=5.4X1(^M)，其活性甚至比公認的補體系統抑制劑迷迭香酸活性還強。另有文獻報導銀椴苷及全乙醯化衍生物均具有一定的對白血病癌細胞的毒性作用。銀椴苷還具有強的護肝作用。筱雅研究了從義大利蠟菊Widrj^/ i tali cum {Roth) Q. Don Fil中分得的銀椴苷和鼠尾草黃素對由銅誘導的人LDL氧化改變的抑制作用，發現兩種成分能夠抑制人低密度脂蛋白氧化。銀椴苷的提取分離方法一般都採用95%乙醇回流提取、濃縮後用水混懸，分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇等非極性溶劑萃取，萃取部分反覆進行矽膠柱層析、Sephadex LH-20凝膠柱色譜等多步驟，分離得到銀椴苷，這些分離純化工藝都需經過反覆柱層析步驟，存在分離時間長、重現性差、使用大量有毒溶劑、不易工業化等缺點。中國專利(公開號 CN1733788A) 「一種從結香花中提取分離銀椴苷的方法」，採用60-100%甲醇或乙醇溶液浸提或回流提取，提取液水洗後用脂溶性溶劑回流萃取，得到的濾餅重結晶得到產品，用到毒害性有機溶劑，造成溶劑殘留，產品質量差。
發明內容
本發明的目的在於提供一種成本低、工藝簡單、易於工業化生產的銀椴苷的提取純化方法。為了實現上述目的，本發明提供了一種提取純化銀椴苷的方法，該方法包括以下步驟
(1)銀椴苷的提取
取結香花粉碎後加沸水微波提取10-60分鐘，其中料液比為1:8-15 (kg/L)，提取2-4 次，過濾，得銀椴苷提取液；
(2)銀椴苷提取液的脫色
將銀椴苷提取液加入總液量2%-6%的硅藻土，攪拌，過濾，得銀椴苷脫色液；
(3)銀椴苷的分離
將銀椴苷脫色液用大孔吸附樹脂柱以0. 5-2. OBV/h的流速吸附，然後先用水洗脫，再用體積百分比為20%-50%的乙醇溶液洗脫，採用TLC跟蹤檢測，收集銀椴苷洗脫液；
將洗脫液濃縮至無醇味，採用聚醯胺柱層析以甲醇水混合溶液進行梯度洗脫，用TLC快速定性檢測，收集相應的銀椴苷溶液； (4)結晶
將銀椴苷溶液濃縮至小體積，放置結晶，加乙醇水溶液溶解，過濾，重結晶3-5次，得到純度95%以上的銀椴苷晶體。步驟(2)中大孔吸附樹脂可選自AB-8、S-8或ZTC-I型大孔吸附樹脂中的一種或幾種。步驟(2 )中甲醇水混合溶液梯度洗脫順序依次為2-3BV30%-40%甲醇 —3-4BV50%-60%甲醇一80%-90%甲醇洗脫有效成分。步驟(4)中乙醇水溶液為60%_80%乙醇溶液。本發明的有益技術效果是本發明採用微波提取銀椴苷粗提取物，採用大孔樹脂和聚醯胺樹脂分離純化，方法簡單，適合大規模工業化生產。
具體實施例方式實施例1
取結香花1kg，加10倍量沸水微波提取30分鐘，濾出液體，再加10倍量沸水微波提取 30分鐘，合併提取液加入4%的硅藻土，攪拌，過濾，濾液加入大孔吸附樹脂柱(裝有250gS-8 大孔吸附樹脂)以1. 5BV/h流速進行吸附，先以水洗至無色，再用30%乙醇溶液洗脫，採用 TLC跟蹤檢測，收集洗脫液濃縮至無醇味，加入聚醯胺樹脂柱(裝有600g聚醯胺樹脂，)，依次用2BV30%甲醇、3BV60%甲醇和85%甲醇洗脫，TLC快速定性檢測，收集相應的銀椴苷溶液，濃縮至小體積，放置結晶，濾出結晶，用60%乙醇回流溶解，過濾，重結晶4次，濾出真空低溫乾燥即得銀椴苷晶體11.84g，經HPLC法檢測(色譜條件:C18 ；流動相甲醇水=7:3 ； 檢測波長2Mnm ；流速0. 6ml/min)其含量為96. 4%。實施例2:
取結香花1kg，加12倍量沸水微波提取50分鐘，濾出液體，再加12倍量沸水微波提取50分鐘，合併提取液加入m的硅藻土，攪拌，過濾，濾液加入大孔吸附樹脂柱(裝有 250gAB-8大孔吸附樹脂)以2. OBV/h流速進行吸附，先以水洗至無色，再用20%乙醇溶液洗脫，採用TLC跟蹤檢測，收集洗脫液濃縮至無醇味，加入聚醯胺樹脂柱(裝有600g聚醯胺樹脂)，依次用2BV30%甲醇、3BV50%甲醇和90%甲醇洗脫，TLC快速定性檢測，收集相應的銀椴苷溶液，濃縮至小體積，放置結晶，濾出結晶，用70%乙醇回流溶解，過濾，重結晶3次，濾出真空低溫乾燥即得銀椴苷晶體11. 39g，經HPLC法檢測(色譜條件C18 ；流動相甲醇水 =7:3 ；檢測波長:254nm ；流速0. 6ml/min)其含量為96. 2%。實施例3:
取結香花1. 5kg,加8倍量沸水微波提取20分鐘，濾出液體，再加8倍量沸水微波提取 20分鐘，如此反覆提取3次，合併提取液加入3%的硅藻土，攪拌，過濾，濾液加入大孔吸附樹脂柱(裝有370gZTC-l大孔吸附樹脂)以0. 5BV/h流速進行吸附，先以水洗至無色，再用 30%乙醇溶液洗脫，採用TLC跟蹤檢測，收集洗脫液濃縮至無醇味，加入聚醯胺樹脂柱(裝有 900g聚醯胺樹脂)，依次用:3BV40%甲醇、4BV60%甲醇和80%甲醇洗脫，TLC快速定性檢測， 收集相應的銀椴苷溶液，濃縮至小體積，放置結晶，濾出結晶，用75%乙醇回流溶解，過濾， 重結晶5次，濾出真空低溫乾燥即得銀椴苷晶體17. 22g，經HPLC法檢測(色譜條件C18 ；流動相甲醇水=7:3 ；檢測波長:254nm ；流速0. 6ml/min)其含量為95. 8%。實施例4:
取結香花^g，加15倍量沸水微波提取10分鐘，濾出液體，再加15倍量沸水微波提取 10分鐘，，如此反覆提取4次，合併提取液加入5%的硅藻土，攪拌，過濾，濾液加入大孔吸附樹脂柱(裝有500gS-8大孔吸附樹脂)以1.0BV/h流速進行吸附，先以水洗至無色，再用 40%乙醇溶液洗脫，採用TLC跟蹤檢測，收集洗脫液濃縮至無醇味，加入聚醯胺樹脂柱(裝有 600g聚醯胺樹脂)，依次用:3BV30%甲醇、3BV50%甲醇和80%甲醇洗脫，TLC快速定性檢測， 收集相應的銀椴苷溶液，濃縮至小體積，放置結晶，濾出結晶，用80%乙醇回流溶解，過濾， 重結晶4次，濾出真空低溫乾燥即得銀椴苷晶體22. 97g，經HPLC法檢測(色譜條件C18 ；流動相甲醇水=7:3 ；檢測波長2Mnm ；流速0. 6ml/min)其含量為96. 1%。實施例5:
取結香花2. 5kg,加9倍量沸水微波提取60分鐘，濾出液體，再加9倍量沸水微波提取 60分鐘，如此反覆提取3次，合併提取液加入6%的硅藻土，攪拌，過濾，濾液加入大孔吸附樹脂柱(裝有625gAB-8大孔吸附樹脂)以1. 5BV/h流速進行吸附，先以水洗至無色，再用50%乙醇溶液洗脫，採用TLC跟蹤檢測，收集洗脫液濃縮至無醇味，加入聚醯胺樹脂柱(裝有1. 5kg 聚醯胺樹脂)，依次用2BV40%甲醇、4BV60%甲醇和90%甲醇洗脫，TLC快速定性檢測，收集相應的銀椴苷溶液，濃縮至小體積，放置結晶，濾出結晶，用65%乙醇回流溶解，過濾，重結晶5 次，濾出真空低溫乾燥即得銀椴苷晶體29. 54g,經HPLC法檢測(色譜條件C18 ；流動相甲醇水=7:3 ；檢測波長:254nm ；流速0. 6ml/min)其含量為96. 7%。實施例6:
取結香花^g，加10倍量沸水微波提取40分鐘，濾出液體，再加10倍量沸水微波提取 40分鐘，如此反覆提取4次，合併提取液加入3%的硅藻土，攪拌，過濾，濾液加入大孔吸附樹脂柱(裝有1. 2kggZTC-l大孔吸附樹脂)以1. OBV/h流速進行吸附，先以水洗至無色，再用 40%乙醇溶液洗脫，採用TLC跟蹤檢測，收集洗脫液濃縮至無醇味，加入聚醯胺樹脂柱(裝有 3kg聚醯胺樹脂)，依次用:3BV40%甲醇、4BV55%甲醇和85%甲醇洗脫，TLC快速定性檢測，收集相應的銀椴苷溶液，濃縮至小體積，放置結晶，濾出結晶，用80%乙醇回流溶解，過濾，重結晶3次，濾出真空低溫乾燥即得銀椴苷晶體59. ^g，經HPLC法檢測(色譜條件C18 ；流動相甲醇水=7:3 ；檢測波長:254nm ；流速0. 6ml/min)其含量為96. 3%。
權利要求
1.一種提取純化銀椴苷的方法，其特徵在於(1)銀椴苷的提取取結香花粉碎後加沸水微波提取10-60分鐘，其中料液比為1:8-15 (kg/L)，提取2-4 次，過濾，得銀椴苷提取液；(2)銀椴苷提取液的脫色將銀椴苷提取液加入總液量2%-6%的硅藻土，攪拌，過濾，得銀椴苷脫色液；(3)銀椴苷的分離將銀椴苷脫色液用大孔吸附樹脂柱以0. 5-2. OBV/h的流速吸附，然後先用水洗脫，再用體積百分比為20%-50%的乙醇溶液洗脫，採用TLC跟蹤檢測，收集銀椴苷洗脫液；將洗脫液濃縮至無醇味，採用聚醯胺柱層析以甲醇水混合溶液進行梯度洗脫，用TLC 快速定性檢測，收集相應的銀椴苷溶液；(4)結晶將銀椴苷溶液濃縮至小體積，放置結晶，加乙醇水溶液溶解，過濾，重結晶3-5次，得到純度95%以上的銀椴苷晶體。
2.如權利要求1所述的提取純化銀椴苷的方法，其特徵在於所述步驟(2)中大孔吸附樹脂可選自AB-8、S-8或ZTC-I型大孔吸附樹脂中的一種或幾種。
3.如權利要求1所述的提取純化銀椴苷的方法，其特徵在於所述步驟(2)中甲醇水混合溶液梯度洗脫順序依次為2-;3BV30%-40%甲醇一3-4BV50%-60%甲醇一80%-90%甲醇洗脫有效成分。
4.如權利要求1所述的提取純化銀椴苷的方法，其特徵在於所述步驟(4)中乙醇水溶液為60%-80%乙醇溶液。
全文摘要
本發明公開了一種提取純化銀椴苷的方法，將結香花粉碎，微波提取銀椴苷，將銀椴苷提取液加硅藻土脫色，脫色液用大孔吸附樹脂柱以20-50%乙醇溶液洗脫，洗脫液濃縮至無醇味，再用聚醯胺柱層析分離，可得純度95%以上的銀椴苷產品。本發明包括結香中銀椴苷的提取、大孔樹脂和聚醯胺柱分離、結晶等工藝，該方法具有成本低、操作簡單、易於產業化等優點。
文檔編號C07H17/07GK102304161SQ20111018774
公開日2012年1月4日 申請日期2011年7月6日 優先權日2011年7月6日
發明者劉東鋒, 郭琴 申請人:南京澤朗醫藥科技有限公司