新型黃皮醯胺類化合物的製備方法

2023-10-04 12:42:29 2

專利名稱：新型黃皮醯胺類化合物的製備方法
技術領域：
本發明涉及一種新型藥理活性的苯基和苄基取代的δ-丁內醯胺(在下文稱為「黃皮醯胺」)的製備，包括這類化合物從芸香科黃皮屬類植物分離，黃皮醯胺的某些衍生物及它們作為缺氧保護劑和抗健忘劑的應用，本發明還涉及含有黃皮醯胺或其衍生物的藥物組合物以及它們的製備方法。
已有報導芸香科非洲黃皮在非洲的某一地區作為草藥(I.Mester等人，Planta Medica 32(1)81，1977)。也有報導印度黃皮的粗提物對心血管有作用，並且從五葉黃皮中分離的兩個香豆素衍生物clausmarinsA和B具有解痙作用(Dhan Prakash等人，Phytochem.17，1194，1978；Aboo Shoeb等人，J.C.S.Chem.Commun.281，1978)。已從不同種屬的黃皮根、莖等中分離出了約50種組份。這些組份的大多數是香豆素、咔唑和萜烯的衍生物；據報導到目前為止僅有兩個直鏈羧酸醯胺存在於黃皮屬植物的葉中(S.R.Johns等人，Aust.J.Chem.20，2795，1967；Dhan Prakash等人，Indian J.Chem.Sect.B 19B(12)，1975)。
現已知榔色黃皮葉中含有一種具有δ-丁內醯胺結構的黃皮醯胺化合物，它含有一個苯基和一個苄基取代物，是以兩種立體異構體存在的(「黃皮醯胺」和化合物(9))榔色黃皮葉中還含有一種在結構上十分相近的二環丁內醯胺結構的黃皮醯胺化合物(化合物(0))。還發現，黃皮醯胺及其衍生物具有多種有價值的藥理性質。化學衍生法和光譜數據已證實了這些化合物的結構。
本發明提出具有下式的通式(I)化合物
式中，R為甲基；R1表示氫，或者與R3一起表示一個化學鍵；R2表示氫或者與R3一起表示氧；R3表示羥基、或與R1或R4一起表示一個化學鍵，或者與R2一起表示氧；R4是氫或與R3一起表示一個化學鍵；R5和R6各表示氫。
可以從榔色黃皮葉中分離出的上述化合物的結構式如下
「黃皮醯胺」
化合物(9) 化合物(0)(X-射線結晶衍射證實了該立體化學結構)本發明提出了分離化合物(0)的方法，該方法包括下述步驟a)用沸水浸潤榔色黃皮的葉。
b)在濃縮的水提取液中加入稀酸(例如HCl)。
c)使上清液通過陽離子交換樹脂，最好為H型的樹脂。
d)用鹼，最好是氨水來浸潤樹脂。
e)用有機溶劑，諸如醚類、三氯甲烷、二氯甲烷、C1-C6-醇的乙酸酯或C2-C6-酮，最好是用乙醚來提取該樹脂。
f)以三氯甲烷、二氯甲烷、乙醚或三氯甲烷/甲醇混合物作為洗脫劑，用二氧化矽或氧化鋁色譜法分離濃縮的提取物。
g)收集並濃縮其Rf值與化合物(0)相應的洗脫液，(矽膠為吸附劑，氯仿為洗脫劑時，Rf＝0.8)。
本發明還提出分離化合物(9)的方法，該方法由下述步驟組成a)用沸水浸潤榔色黃皮的葉。
b)蒸發提取物中的水份並在稀酸(如鹽酸)中溶解殘留物。
c)使上清液通過陽離子交換樹脂，最好是H-型的樹脂。
d)用鹼例如氨水來浸潤樹脂。
e)用有機溶劑，諸如醚類、三氯甲烷、二氯甲烷、C1-C6-醇的乙酸酯或C2-C6-酮來提取該樹脂。
f)在二氧化矽或氧化鋁上對濃縮的提取物進行色譜分離，用三氯甲烷、二氯甲烷、乙醚或三氯甲烷/甲醇混合物作洗脫劑。
g)收集並濃縮其Rf值與化合物(9)(用矽膠吸附和氯仿洗脫時，Rf＝0.2)相應的洗脫液(如通過薄層色譜監測)。
用上述分離方法得到的粗產物最好在醇(例如甲醇或乙醇)中重結晶。
本發明還涉及含有通式(I)化合物作為有效成分的藥物組合物和藥劑以及製備這些組合物的方法。
本發明還提出將通式(I)的化合物用於治療缺氧症和健忘症。
在動物試驗中，通式(I)的化合物具有顯著的保護大腦缺氧和抗健忘作用，該作用明顯強於2-吡咯烷酮乙醯胺(Piracetam)。2-吡咯烷酮乙醯胺(Piracetam)在結構上最接近在大腦的治療和nootrpics領域內的有關化合物。
2-吡咯烷酮乙醯胺(Piracetam)即使以高劑量施用於動物，它們的行為方面也不顯示任何重要改變。這種缺氧保護作用顯然不是由於一種非特異的鎮靜作用而引起的(後者因此而引起降低對氧的需求)。我們發現式(I)化合物的急性毒性是很低的。
本發明的藥物組合物可以製成油膏、膠體、糊劑、乳劑、噴霧劑(包括氣霧劑)，洗劑、乳濁液、溶液以及在水或非水稀釋劑中的乳劑活性成份、糖漿、顆粒劑或粉劑。
該組合物最好製成無菌等滲水溶液或製成含有單獨的或與稀釋劑混合的本發明的化合物的片劑、膠囊、藥丸和栓劑。
可以應用到藥物組合物(例如制粒)中的適於應形成片劑、糖衣丸、膠囊和藥丸的稀釋劑包括(a)填料，例如，澱粉、糖、矽酸；(b)粘合劑，例如，纖維素衍生物、藻酸鹽、明膠和聚乙烯吡咯烷酮；(c)保溼劑，例如，甘油；(d)崩解劑，例如，瓊脂，碳酸鈣和碳酸氫鈉；(e)吸收促進劑，例如，季銨鹽化合物；(f)表面活性劑，例如，鯨蠟醇；(g)吸附載體，例如，高嶺土和膨潤土；(h)潤滑劑，例如滑石粉，硬脂酸鈣和硬脂酸鎂和固態的聚乙烯乙二醇。
由本發明的藥用組合物製成的藥片、糖衣藥丸、膠囊和藥丸可以具有通常的包衣，包裹物和保護基質，它們可以含有遮光劑。可將這些藥劑製成其活性成份僅在或較好在腸道的特定部位釋放出來，並能持續一段時間。包衣、包裹物和保護基質可以用聚合材料和石蠟來製備。
藥物的組份也可以與一個或多個上述稀釋劑一起製成微囊的形式。
上述藥物組合物和藥劑的生產，可以通過在工藝上人們所知道的任何方法進行。例如，把有活性的組分與稀釋劑混合形成一種藥物學的組合物(例如，粒狀的)再將這個組合物做成藥劑(例如片劑)。
本發明的藥物組合物最好含總組合物重量的0.1％至99.5％的有效成分，最佳為0.5％至95％。
本發明的藥劑用於治療的最佳劑量是每天0.001毫克至0.2毫克的活性成分。
下面用實例對這個發明作一說明。
例1化合物(0)和化合物(9)的分離。
80公斤的乾燥的SKeels榔色黃皮(Lour)葉用水煮沸其方法與例1相同。濃縮該水提取液，得到18公斤的糖漿粗品。用0.06NHCl(80升)處理16公斤的該糖漿狀粗品，其上層清液通過溼的H-型的陽離子交換樹脂柱(由48公斤的Na-形式陽離子交換樹脂轉換而成)。然後用去離子水洗滌該樹脂，再用空氣乾燥，用2％氨水(32.2升)處理和最後用(60升)乙醚萃取12小時。濃縮該醚提取物的氯仿溶液至約1.5升，從中分離出白色結晶固體。除去過濾液中的溶劑而得到96.3克棕色粘性殘留物(b)並將固體(22.5克)在矽膠色譜柱(不同的比率從100∶1至20∶1)上處理用氯仿為洗脫劑並用薄層色譜監察。收集並濃縮Rf＝0.20(化合物(9))的洗脫液，得到7.22克化合物(9)再用甲醇重結晶兩次。得到3.31克的白色方形結晶，m.p.205-6℃(化合物(9))。用1.7公斤矽膠色譜處理殘留物(b)並用氯仿洗脫。將Rf＝0.80的洗脫液合併，濃縮並用甲醇洗滌而得到0.52克粗結晶並用甲醇對此粗結晶進行重結晶，得到0.18克白色稜形結晶，m.p.164-6℃(化合物(0))。產率化合物(9)0.021％；化合物(0)0.001％，(以16公斤糖漿狀粗起始物料計)。
化合物(0)[α]D24.5＝-40°(0,225在甲醇中)元素分析理論值(C18H17NO2) 試驗值C77.42 77.06H6.096.13N5.024.76
高解析度MS(M++1)＝280，1371IRγmaxKBrcm-11690(醯胺-羰基)，3080，3060，3010，1600，1500，750，730，705，700UVλmaxMeOHnm(1gε)209(4.35)，257(2.60)表11H-NMR(在氘代氯仿中)化合物(0)的化學位移和歸屬，ppm 氫2.95(s；3H) N-CH33.60(s；1H) C4-H4.09(s；1H) C5-H4.81(s；1H) C3-H5.00(s；1H) C7-H7.10-7.50(m；10H)芳香H13C-NMR的數據在表3中給出化合物(9)[α]D19＝0.00(0.29在甲醇中)元素分析理論值(C18H19NO3) 實驗值C72.7673.00H6.45 6.46N4.72 4.50高解析度MS(M++1)＝298.1453(C18H20NO3)
IRγmaxKBrcm-13440，3340(OH)，1600(醯胺-羰基)，3060，3030，1600，1490，750，770(單取代的苯)UVλmaxMeOHnm(1g ε)258(2.59)表21H-NMR(在DMSO中)；化學位移和歸屬ppm 氫2.90(s；3H) N-CH33.07(t；J＝7；1H)C4-H3.89(m；2H) C3-H；C5-H5.00(dd，J＝5.3；1H) C7-H5.53(d，J＝7；1H)C3-OH；在D2O加入後消失5.73(d，J＝5；1H)C7-OH；在D2O加入後消失6.75-6.93(m；2H) 芳香H6.95-7.33(m；8H) 芳香H13C-NMR的數據在下表9中給出表313C-NMR(在CDCl中)；「黃皮醯胺」、化合物(0)及化合物(9)的化學位移和歸屬碳 「黃皮醯胺」(0) (9)(ppm)(ppm)(ppm)2 173.6172.2172.73 68.9 80.3 69.34 49.9 50.7 46.75 65.3 70.1 68.46 30.4 27.3 28.27 71.9 82.5 77.31′136.0133.3140.52′1″140.5139.1141.8芳香的 126.3125.4125.9碳 128.9128.5128.5例2本發明的化合物對肝功能的影響在整個實驗中採用體重為18-22克的雄性昆明鼠亞種。將待試的化合物懸浮在5％吐溫80中，然後用管飼法口服給藥，將5％吐溫80溶液的載體用相同的方法給與對照組的鼠。在體外實驗中，化合物溶解在N，N-二甲基甲醯胺中，然後直接加進培養混合物中。
肝毒學(hepatotoxicity)所採用的參數包括血清氨基轉移酶(SGPT)，肝甘油三酯和肝切片的病理檢驗。肝損傷主要按發炎和壞死的程度來記分，並將其分成0至4級。
a)保護肝的作用試驗鼠分成三組，用載體餵對照組。用每個化合物分別給其它兩組服藥兩次(250毫克/公斤)每次間隔為8小時。第二次餵進化合物後24小時，按10毫升/公斤皮下注射溶解在植物油中的0.1％四氯化碳，禁食16小時，然後斷頭殺死。測定SGPT和肝脂物。將一塊用做肝切片供病理觀察。
如以下表4所示「黃皮醯胺」和化合物(0)兩者都明顯地降低了四氯化碳中毒鼠的SGPT的水平。
b)黃皮醯胺對防護四氯化碳、硫代乙醯胺和撲熱息痛的毒性的作用。
抗四氯化碳肝毒理學的實驗程序與上述過程相同。所採用的活性化合物的劑量是125毫克/公斤和250毫克/公斤。列於表5的數據表明，用125毫克/公廳和250毫克/公斤劑量的黃皮醯胺顯著地降低了由於四氯化碳引起的SGPT的升高。用250毫克/公斤的化合物治療的鼠，其肝的損傷諸如肝炎和肝壞死的嚴重性低於對照鼠，肝脂沒有降低。
在另一實驗中，首先每隔一天給鼠注射三次10毫克/公斤在植物油中的0.15％四氯化碳。第一次注射四氯化後，從第二天開始到第五天用黃皮醯胺(250毫克/公斤)每天治療鼠。在試驗的第七天進行SGPT的測定和肝切片的病理檢驗。所得結果表明該化合物有明顯的使SGPT降低的作用，但不變影響肝損傷(見表6)。
在硫代乙醯胺肝毒理學實驗中，根據第一次實驗的程序治療鼠，但使用的是硫代乙醯胺(50毫克/公斤)而不是四氯化碳。我們發現，黃皮醯胺明顯降低了SGPT水平(表7)。
用下述方法進行抗-撲熱息痛肝毒理學的實驗，第一天給鼠兩次黃皮醯胺(250毫克/公斤)接下去的第二天給與同樣劑量。最後一次給藥後6小時，按150毫克/公斤劑量給鼠皮下注射撲熱息痛。注射撲熱息痛後20小時，測定SGPT並檢測肝組織，黃皮醯胺明顯降低了SGPT的水平並減輕了肝損傷(見表8)。
c)對正常鼠的血清和肝氨基轉移酶(GPT)的影響。
分別給兩組鼠餵載體或250毫克/公斤的黃皮醯胺，每天一次，連續七天。最後一次餵藥後二十四小時，測定血清和肝GPT。如表9所示，用黃皮醯胺治療過的鼠的SGPT水平稍高於對照鼠的SGPT，但差別不明顯。對肝GPT，也得到了類似結果。
d)對肝微粒體細胞色素D-450誘導作用在異生的(Xenobitics)的解毒過程中，肝微粒體細胞色素p-450起到關鍵作用。給試驗鼠餵250毫克/公斤的黃皮醯胺，每天一次，連續3天。對照鼠則接受載體。禁食過夜殺死試驗鼠。製備肝微粒體。然後測定微粒體單氧酶。
數據示於表10。肝細胞色素p-450，細胞色素b5，NADPH-細胞色素C還原酶，氨基比林脫甲酶和苯並羥化酶活性都明顯提高。
在另外的實驗中，給試驗鼠250毫克/公斤的黃皮醯胺。服該化合物後，在服藥後1小時和24小時進行皮下注射戊巴比妥鈉(50毫克/公斤)。由記錄正常反射的消逝和恢復間隔來估計睡眠時間。數據列於表16。在注射戊巴比妥前24小時服進黃皮醯胺，鼠的睡眠時間明顯縮短，反之在戊巴比妥注射前一小時服用該化合物，鼠的睡眠時間明顯延長而不是縮短。然而，提前服該化合物並不影響由巴比妥誘導的鼠睡眠時間。因為巴比妥並不是由肝臟代謝的。這說明黃皮醯胺所致的戊巴比妥睡眠時間的延長是由抑制了肝藥物代謝酶。所以，該化合物對肝微粒體細胞色素p-450具有兩相作用，即；先抑制後誘導。
e)急性中毒實驗10隻鼠按3克/公斤黃皮醯胺的單劑量口服給藥，7天內無造成死亡。
表4四氯化碳中毒鼠在SGPT水平上的影響(每組9隻鼠)SGPT單位％ PX±SE
對照組 1678±261＜0.01化合物(0)391±94「黃皮醯胺」 617±323＜0.01表5對四氯化碳所致的試驗鼠肝中毒的防護作用組別 SGPT單位％肝類脂物肝損傷X±SE mg/g肝發炎級別 壞死級別X±SE對照物 3016±23 21.0±4.2 1.70 2.33黃皮醯胺125毫克/公斤×2 2365±245*21.6±4.4 - -250毫克/公斤×2 1900±257** 13.4±3.0 0.38 1.33每組9隻鼠*p＜0.05；**p＜0.01表6對四氯化碳所致的試驗鼠肝中毒的治療作用組別鼠的只數 SGPT單位 PX±SE對照物 82695±110黃皮醯胺(250毫克/公斤/天×4) 81718±22.4 ＜0.01
表7對硫代乙醯胺所致的試驗鼠肝中毒的保護作用組別 SGPT單位％ 肝類脂物(毫克/克)X±SE X×SE對照物1696±231 61±11.7黃皮醯胺 718±229* 39±3.9(250毫克/公斤×2)每組9隻鼠*P＜0.01表8對乙醯氨基苯(acetaminophen)所致的試驗鼠肝中毒的保護作用參數 對照物 黃皮醯胺250毫克/公斤×3SGPT單位％ 2778±270697±163**肝類脂物 79 82±17毫克/公斤肝發炎(級別) 0.5 0.1肝壞死(級別) 1.4 0每組9隻鼠**P＜0.01
表9對正常鼠的血清和肝氨基轉移酶的影響組別 SGPT單位％LGPT單位/100毫克X×SE X×SE對照物217±17.5 260±11.6黃皮醯胺 252±22.1 292±8.0*(250毫克/公斤/天×7)每組8隻鼠*P＞0.05表10對試驗鼠肝微粒體細胞色素P-450的誘導作用對照物 黃皮醯胺250毫克/公斤/天×3肝重量 克％ 4.0±0.25.4±0.2**微粒體蛋白質 6.3±0.39.1±0.6**(毫克/克肝)細胞色素P-4500.87±0.07 1.14±0.07**(毫摩爾/毫克蛋白質)NADPH-細胞色素C還原酶103±2.5117±2.5**(毫摩爾還原的色素C/分鐘/mg蛋白質)細胞色素b0.15±0.01 0.19±0.01(毫摩爾/毫克蛋白質)氨基比林脫甲基酶 81±6.3 126±5.2**
(毫摩爾甲醛/分鐘蛋白質)AHH毫摩爾/分/毫克蛋白質 2.6±0.4 5.7±0.76****P0.01表11對巴比妥酸鹽所致的試驗鼠睡眠時間的影響巴比妥酸鹽 組別 用化合物與用 睡眠時間巴比妥酸鹽之 (分鐘)間的間隔X±SE戊巴比妥 對照物71±750毫克/公斤黃皮醯胺 1h 152±15＜0.01(250毫克/公斤)黃皮醯胺 24h 46±6＜0.01(250毫克/公斤)巴比妥 對照物197±27200毫克/公斤 黃皮醯胺 1h 172±13＞0.05250毫克/公斤例3黃皮醯胺所致缺氧耐受(小鼠)的提高一群雄性小鼠(體重20克)放置在分成兩室的塑料箱內(箱的體積為15×28×40釐米，相當於其容量為每bos 1.68升)。每一室內放置20隻老鼠。箱內充入含3.5％氧氣和96.5％氮氣的混合氣體。充入的體積為4升/分鐘。在進行實驗前30分鐘，口服試驗物質和載體。
充入缺氧混合氣開始後約7分鐘，動物缺氧死亡。當左邊室(對照動物組)的三隻動物僅出現呼吸症狀時，停止實驗。打開箱子然後計算經處理後的一組動物仍然活著的個數。
根據Fisher和Yates(1963)(Thomann等人，1975)提出的X試驗評價在兩組中存活動物之間的差別。
表12劑量對照物 黃皮醯胺效用(毫克/公斤口服) (存活數/總的動物數) (％)10 9/60 19/60 19.630 9/60 31/60 41.1100 9/60 40/60 58.8P＝0.05表12表明，用黃皮醯胺可顯著提高缺氧的耐受力，僅用極少的物質(巴比妥類)口服100毫克/公斤，存活率就可以提高59％。
例4黃皮醯胺對在缺氧條件下記憶力減退(大鼠)的影響裝置(39釐米長，21釐米高，21釐米寬)由兩室組成。一間由半透明塑料製成(長29釐米)而把另一間塗黑(長10釐米)。該裝置有一金屬柵網底，柵網與能提供20秒1.6mA電流的刺激裝置連接。
兩室之間由門連接，門可以關閉。
將雄性大鼠(體重100-120克)放置在大間，然後允許大鼠查看該裝置的兩室三分鐘。
然後，將大鼠放置進小間(塗黑)，關閉連接門，進行底振蕩，之後把大鼠放進氣密室，該氣密室內充入含3.8％氧和96.2％氮的混合氣體。把動物置於此種缺氧環境中，直到表現出表明即將出現呼吸衰竭的喘息為止(最長為15分鐘)。
24小時後，再將大鼠放回裝置的亮間。觀察時間為3分鐘。
在三組15隻大鼠中進行一次實驗
A組對照組，不經受缺氧環境。
B組對照組，在第一次訓練後接受缺氧環境。
C組服藥組，在第一次訓練後接受缺氧環境。
評估動物進入暗間所需的時間用秒計算。
將兩個對照組之間的時間差看作100％(A-B＝100％)。
用百分數(C-B＝X％)計算對照組B與服藥組C之間的時間差，X為待檢驗物質抗遺忘效果的度量。
黃皮醯胺 X(毫克/公斤口服) (％)3 47106530100
權利要求
1.分離黃皮醯胺化合物(0)和/或黃皮醯胺化合物(9)方法，
化合物(0) 化合物(9)該方法包括如下的步驟a)用沸水處理榔色黃皮的葉子，b)將稀酸加到濃縮的萃取液中，c)合格的上層清液通過陽離子交換樹脂，d)用鹼、最好是氨水處理樹脂，e)用有機溶劑萃取樹脂，f)用三氯甲烷、二氯甲烷、乙醚或三氯甲烷/甲醇混合物作為洗脫劑，在二氧化矽或氧化鋁上色層分離濃縮的提取物，g)收集並濃縮分別相應於化合物(0)或化合物(9)的Rf值的洗脫物。
全文摘要
通過萃取榔色黃皮葉，經過分離提純，然後得到具有下列結構式的黃皮醯胺化合物(9)和黃皮醯胺化合物(0)。
化合物(0)化合物(9)該等化合物在治療缺氧症和健忘症方面有效。
文檔編號C07D207/273GK1049345SQ90107309
公開日1991年2月20日 申請日期1990年8月24日 優先權日1985年9月17日
發明者陳延鏞, 楊明河, 黃量, 劉耕陶, 烏爾裡克·本茲 申請人:中國醫學科學院藥物研究所, 拜爾公司